bài giảng các phương pháp cô lập hợp chất thiên nhiên

NỘI DUNG • PHÂN TÍCH SƠ BỘ HÓA THỰC VẬT • CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ CÁC PHƯƠNG PHÁP CƠ LẬP HỢP CHẤT TỰ NHIÊN 104/26/15 PHÂN TÍCH SƠ BỘ HOÁ THỰC VẬT CỦA CAO TRÍCH Mg/HCl đđ FLAVONOID ACID BÉO ANTHRAGLYCOSID TINH DẦU PHYTOSTEROL CAROTENOID ALCALOID SAPONIN ANTHOCYANIN ĐƯỜNG ALCALOID ACID HỮU CƠ TANIN FLAVONOID ANTHRAGLYCOSID STEROID H/C URONIC TANIN ĐƯỜNG ALCALOID SAPONIN Chi t ế b ng etherằ Chi t ế b ng c nằ ồ Vết trên giấy lọc +KOH 10% Cặn có mùi thơm Liebermann + H 2 SO 4 đđ TT Mayer, Bouchardat Dragendorff , Liebermann KOH, HCl TT Fehling A, B TT Mayer, Bouchardat Na 2 CO 3 Na Acetat + FeCl 3 3% Mg/HCl đđ KOH 10% Liebermann Cồn cao độ FeCl 3 TT Fehling A, B TT Mayer, Bouchardat Tạo bọt KOH 10% H 2 SO 4 10% H 2 SO 4 10% NGUYEÂN LI UỆ Baõ nguyeân li uệ L p ki mớ ề Baõ nguyeân li uệ D ch chi t c nị ế ồ Baõ nguyên li uệ D ch acidị D ch c nị ồ L p etherớ D ch etherị D ch acidị D ch etherị 204/26/15 Cân 5g bột nguyên liệu cho vào bình nón nút mài 250ml, lắc với 30 ml ether ethylic trong 5 phút. Làm như vậy 3 lần cho tới khi dịch ether không còn màu. Tập trung dịch lọc trong một bình lắng gạn, lắc với 60ml KOH (20ml x 3 lần) sẽ tách ra 2 lớp: lớp kiềm và lớp ether. Xác định các chất tan trong dịch ether ethylic 304/26/15 Xác định các chất tan trong dịch ether ethylic Phân tích dung dịch kiềm Dung dịch kiềm được cho vào becher và được trung hòa bằng HCl 25% để trung tính, lọc. Tủa trên phểu lọc hòa với 5ml cồn 90o, chia làm 3 ống nghiệm. Ống 1: nhỏ vài giọt KOH 10% nếu có màu đỏ, sơ bộ nhận định có hợp chất ANTHRAGLYCOSID. Ống 2: acid hóa với HCl đậm đặc, sau đó cho một ít bột Mg kim loại, nếu có màu đỏ, sơ bộ nhận định có FLAVONOID Ống 3: nhỏ một giọt lên giấy lọc khô, hơ khô, nếu trên giấy lọc có vết mờ thì sơ bộ nhận định có ACID BÉO. 404/26/15 Phân tích dung dịch ether Lớp dung dịch ether được rửa 3 lần với nước cất (20ml x 3 lần), sau đó lắc 3 lần với dung dịch H2SO4 2% (5ml x 3 lần) Các dịch acid được góp lại để làm phản ứng định tính alcaloid với: Thuốc thử Mayer: Tủa vàng nhạt. Thuốc thử Dragendorff: Tủa Cam Thuốc thử Bouchardat: Tủa nâu 504/26/15 Phân tích dung dịch ether Dịch ether chia làm 3 phần cho vào 3 chén sứ, bốc hơi đến cạn Chén 1: nếu có mùi thơm thì có TINH DẦU Chén 2: nhỏ vài giọt H2SO4 đđ, nếu có màu xanh thì có CAROTENOID Chén 3: Hóa cắn với 10 giọt anhydrid acetic cho vào ống nghiệm, nhỏ từ từ vài giọt H2SO4 đđ theo thành ống nghiệm. Nếu chổ giáp giới có màu vàng lục hay lục đỏ thì sơ bộ nhận định có hợp chất PHYTOSTEROL. 604/26/15 Bã nguyên liệu sau khi chiết bằng ether đem chiết nóng với cồn 90 o (30ml x 3 lần) trên bếp cách thủy, lọc. Tập trung dịch lọc vào bình nón, chia làm 6 phần. Phần 1: Pha loãng dung dịch cồn với 4 thể tích nước cất, kiềm hóa bằng dung dịch NH 4 OH đđ, lọc: Tủa trên phễu hòa với 1 ml CHCl 3 , hứng vào ống nghiệm. Sau đó cho vào 1ml anhydrid acetic và nhỏ từ từ vài giọt H 2 SO 4 đđ. Nếu dung dịch có màu xanh thì có nhân STEROID. Xác định các chất tan trong dịch cồn 704/26/15 Dịch lọc được acid hóa bằng HCl, lọc. Tủa trên phểu hòa với 3-4 ml cồn 90 o chia làm 2 ống nghiệm Ống 1: Cho vài giọt KOH, nếu có màu đỏ thì có hợp chất ANTHRAGLYCODID Ống 2: cho vào ít bột Mg kim loại và vài giọt HCL nếu có màu đỏ thì có hợp chất FLAVONOID . Xác định các chất tan trong dịch cồn 804/26/15 Phần thứ 2: Pha loãng dịch cồn với một thể tích nước cất rồi chia làm 2 phần: Ống 1: Trung hòa với natri acetat, thêm vài giọt FeCl 3 2%, nếu có màu xanh đen thì có TANIN. Ống 2: cho vào vài tinh thể Na 2 CO 3 , nếu có sủi bọt thì có acid hữu cơ. Xác định các chất tan trong dịch cồn 904/26/15 Phần thứ 3: Dịch cồn được bóc hơi cách thủy trong chen sứ đến cạn, hòa cắn với 4-5 ml H 2 SO 4 2%, lọc. Chia dịch lọc ra làm 3 phần để làm phản ứng định tính alcaloid. Ống 1: + thuốc thử Mayer. Ống 2: + thuốc thử Dragendorff. Ống 3: + thuốc thử Bouchardat. Phần thứ 4: Bốc hơi dịch cồn trong chén sứ cho đến cạn, hòa cắn với 3ml nước cất đun nóng. Lọc, cho thêm vào nước lọc 4-5 giọt thuốc thử Fehling A và 4-5 giọt thuốc thử Fehling B, đun cách thủy, nếu có tủa gạch thì có ĐƯỜNG KHỬ. Xác định các chất tan trong dịch cồn 1004/26/15 [...]... 15 CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ Kỹ thuật sắc ký đã được sử dụng nhiều từ lâu Phương pháp được phát triển nhanh chóng từ những năm 1930-1940 Sắc ký là quá trình tách liên tục từng vi phân hỗn hợp các chất do sự phân bố không đồng đều của chúng giữa những pha tĩnh và pha động khi cho pha động đi xuyên qua pha tĩnh Trong những năm 1930, một loạt các nhà hóa học được nhận giải thưởng Nobel về Hóa học các hợp chất. .. Đối với dung môi phải thỏa mãn các điều kiện sau: + Hòa tan tương đối tốt tất cả các cấu tử trong hỗn hợp cần phân tích + Bị hấp phụ ít nhất đối với pha tĩnh + Không phản ứng hóa học đối với các chất cần phân tích cũng như chất hấp phụ + Phải tinh khiết + Đối với chất phân tích (chất bị hấp phụ), cấu trúc hóa học có ảnh hưởng trực tiếp lên độ hấp phụ của chúng + Các hợp chất hydrocarbon bão hòa có độ... không trộn lẫn vào nhau (hoặc giữa chất lỏng và chất khí) khi cho chất lỏng thứ 2 (pha động) di chuyển qua chất lỏng thứ nhất (pha tĩnh) Thông thường pha tĩnh được hấp thụ trên bề mặt của một chất rắn gọi là chất mang hoặc liên kết hóa học với chất mang Các phương pháp sắc ký dựa trên nguyên tắc phân bố: - Sắc ký cột - Sắc ký giấy - Sắc ký khí 04/26/15 25 Phân loại các kỹ thuật sắc ký Loại pha tĩnh... TISLIUS (Thụy điển) được giải thưởng Nobel về kỹ thuật điện di và sắc ký hấp phụ 04/26/15 17 Phương pháp sắc ký ra đời đã cung cấp cho hóa học một công cụ tách chiết hiệu quả và nhanh chóng, mở ra một giai đoạn phát triển rực rỡ của ngành hóa học, đặc biệt là hóa học các hợp chất thiên nhiên Một đặc điểm của phương pháp sắc ký là tính đa dạng, cho phép ta ứng dụng nó ở bất cứ mọi hoàn cảnh, mọi điều kiện…... phụ - Hấp phụ là sự tích tụ một hợp chất ở trạng thái khí hoặc lỏng lên bề mặt một chất rắn Hay nói cách khác là sự tích tụ ở ranh giới giữa 2 pha: khí-rắn, lỏng-rắn -Trong sắc ký hấp phụ lỏng, pha tĩnh là chất rắn mịn và xốp, pha động là chất lỏng - Dựa trên tính hấp phụ khác nhau của các cấu tử trong hỗn hợp cần tách đối với chất hấp phụ (pha tĩnh), dùng dung môi thích hợp (pha động) qua pha tĩnh để... dịnh các chất tan trong dịch acid Phần thứ 3: Cho tác dụng với thuốc thử Fehling, nếu có tủa đỏ gạch thì có ĐƯỜNG KHỬ Phần 4: trung tính hóa với natri acetat, sau đó thêm vài giọt FeCl 3 10% , nếu có tủa xanh nâu thì có TANIN Phần 5: Pha dịch với 2 thể tích cồn 90o, nếu có tủa nhiều thì có hợp chất URONIC 04/26/15 14 Tóm tắt sự hiện diện của các hợp chất tự nhiên có trong cao trích Cao trích bởi các. .. riêng được từng phần các cấu tử trong hỗn hợp 04/26/15 20 Sắc ký hấp phụ Yếu tố quan trọng trong sắc ký hấp phụ là lựa chọn chất hấp phụ và dung môi Chất hấp phụ cần phải thỏa mãn các tính chất sau: - Không tương tác với cấu tử cần phân tách: không tạo phản ứng phụ - Phải có tính chọn lọc - Độ mịn của hạt phải thích hợp - Chất hấp phụ phải ổn định và được tiêu chuẩn hóa để kết quả trùng lập 04/26/15 21... chúng giữa những pha tĩnh và pha động khi cho pha động đi xuyên qua pha tĩnh Trong những năm 1930, một loạt các nhà hóa học được nhận giải thưởng Nobel về Hóa học các hợp chất thiên nhiên nhờ ứng dụng thành công phương pháp cô lập bằng sắc ký cột hấp phụ 04/26/15 16 1937, P KARRER (Thụy sĩ) về hóa học Carotenoid, đặc biệt là vitamin A và B 1938, R KURN (Đức) hóa học Carotenoid và Vitamin 1939, L.RIZICKA... sắc ký cột hấp phụ cổ điển với những dụng cụ phương tiện đơn giản mà bất cứ ở một cơ sở nghiên cứu nào cũng có thể sắm được Ngay cả ở những nước tiên tiến, bên cạnh những máy hiện đại, sắc ký lớp mỏng, sắc ký cột vẫn là công cụ đắc lực trong công tác nghiên cứu hằng ngày 04/26/15 18 Có nhiều phương pháp để phân loại sắc ký: Nếu dựa theo trạng thái liên hợp của pha động thì có sắc ký lỏng và sắc ký...Xác định các chất tan trong dịch cồn Phần thứ 5: Dịch cồn được pha loãng với một thể tích nước cất, chia làm 2 ống nghiệm: Ống 1: acid hóa (màu đỏ) Ống 2: Kiềm hóa (màu lục) Thì có ANTHOCYNANOSID 04/26/15 11 Xác định các chất tan trong dịch cồn Phần thứ 6: Chia dịch cồn làm 2 phần, bóc hơi cách thủy trong chén sứ Chén 1: hòa với 5 ml nước cất, lắc mạnh . NỘI DUNG • PHÂN TÍCH SƠ BỘ HÓA THỰC VẬT • CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ CÁC PHƯƠNG PHÁP CƠ LẬP HỢP CHẤT TỰ NHIÊN 104/26/15 PHÂN TÍCH SƠ BỘ HOÁ THỰC VẬT CỦA CAO TRÍCH Mg/HCl. thì có hợp chất URONIC. 1404/26/15 Cao trích bởi các dung môi Thuốc thử Phản ứng màu Hợp chất thiên nhiên Ether ethyl Ethanol 90% Acid 1% + + - KOH 10% Màu đỏ nhạt Antraglycoside + - - Nhỏ. tủa màu Alcaloid - - Lắc mạnh dung dịch Không có bọt Saponin ++ + FeCl 5% Màu lục đen Tanin - +++ - Fehling Tủa màu đỏ gạch Đường khử Tóm tắt sự hiện diện của các hợp chất tự nhiên có trong cao