các phương pháp định danh và định lượng trong HPLC

CAÙC PHÖÔNG PHAÙP ÑÒNH DANH ☯ SAÉC KYÙ NGUYEÂN THUÛY CHÆ LAØ PHÖÔNG PHAÙP TAÙCH, NOÙ KHOÂNG GIUÙP CHUÙNG TA NHAÄN DANH CUÏ THEÅ TÖØNG CHAÁT. ☯ TUY NHIEÂN KHI KEÁT NOÁI VÔÙI CAÙC ÑAÀU DOØ THÍCH HÔÏP NOÙ CHO PHEÙP CHUÙNG TA ÑO TÍN HIEÄU CUÛA MOÄT CHAÁT ÑI RA KHOÛI COÄT TAÙCH ☯THOÂNG QUA VIEÄC GHI NHAÄN TÍN HIEÄU GIUÙP CHUÙNG TA COÙ THEÅ NHAÄN DANH MOÄT HÔÏP CHAÁT NAØO ÑOÙ CAÙC PHÖÔNG PHAÙP ÑÒNH DANH ☯ NHÖ VAÄY VEÀ CAÊN BAÛN QUAÙ TRÌNH NHAÄN DANH CHUÛ YEÁU DÖÏA TREÂN 2 YEÁU TOÁ : ) THÔØI GIAN LÖU : DO MOÃI CHAÁT ÑEÀU COÙ TÖÔNG TAÙC KHAÙC NHAU GIÖÕA PHA TÓNH VAØ PHA ÑOÄNG NEÂN THÔØI GIAN LÖU CUÛA MOÃI HÔÏP CHAÁT SEÕ KHAÙC NHAU ÍT HAY NHIEÀU. ) ÑOÄ CHOÏN LOÏC CUÛA DETECTOR : COÙ NHÖÕNG LOAÏI DETECTOR ÍT CHOÏN LOÏC NHÖ FID, TCD NHÖNG CUÕNG COÙ NHÖÕNG DETECTOR COÙ ÑOÄ CHOÏN LOÏC CAO CHO NHÖÕNG NHOÙM CHAÁT NHAÁT ÑÒNH NHÖ FPD, ECD …. DÖÏA TREÂN TÍNH CHAÁT NAØY CHUÙNG TA COÙ THEÅ XAÙC ÑÒNH CHOÏN LOÏC VAØ CHÍNH XAÙC HÔN NHÖÕNG HÔÏP CHAÁT COÙ THÔØI GIAN LÖU TRUØNG NHAU

CAC PHệễNG PHAP ẹềNH DANH VAỉ ẹềNH LệễẽNG TRONG SAẫC KY KH TS NGUYEN BA HOAỉI ANH CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH DANH ☯SẮC KÝ NGUYÊN THỦY CHỈ LÀ PHƯƠNG PHÁP TÁCH, NÓ KHÔNG GIÚP CHÚNG TA NHẬN DANH CỤ THỂ TỪNG CHẤT. ☯TUY NHIÊN KHI KẾT NỐI VỚI CÁC ĐẦU DÒ THÍCH HP NÓ CHO PHÉP CHÚNG TA ĐO TÍN HIỆU CỦA MỘT CHẤT ĐI RA KHỎI CỘT TÁCH ☯THÔNG QUA VIỆC GHI NHẬN TÍN HIỆU GIÚP CHÚNG TA CÓ THỂ NHẬN DANH MỘT HP CHẤT NÀO ĐÓ CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH DANH ☯NHƯ VẬY VỀ CĂN BẢN QUÁ TRÌNH NHẬN DANH CHỦ YẾU DỰA TRÊN 2 YẾU TỐ :  THỜI GIAN LƯU : DO MỖI CHẤT ĐỀU CÓ TƯƠNG TÁC KHÁC NHAU GIỮA PHA TĨNH VÀ PHA ĐỘNG NÊN THỜI GIAN LƯU CỦA MỖI HP CHẤT SẼ KHÁC NHAU ÍT HAY NHIỀU. ĐỘ CHỌN LỌC CỦA DETECTOR : CÓ NHỮNG LOẠI DETECTOR ÍT CHỌN LỌC NHƯ FID, TCD NHƯNG CŨNG CÓ NHỮNG DETECTOR CÓ ĐỘ CHỌN LỌC CAO CHO NHỮNG NHÓM CHẤT NHẤT ĐỊNH NHƯ FPD, ECD …. DỰA TRÊN TÍNH CHẤT NÀY CHÚNG TA CÓ THỂ XÁC ĐỊNH CHỌN LỌC VÀ CHÍNH XÁC HƠN NHỮNG HP CHẤT CÓ THỜI GIAN LƯU TRÙNG NHAU CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH DANH MỘT SỐ DETECTOR CÓ ĐỘ CHỌN LỌC RẤT CAO NHƯ AAS, ĐIỆN HÓA CHO PHÉP XÁC ĐỊNH RẤT CHỌN LỌC CÁC HP CHẤT NHƯ CÁC HP CHẤT ORGANO KIM LOẠI … NHƯNG LẠI BỊ GIỚI HẠN BỞI SỐ LƯNG CÁC HP CHẤT. CÁC DETECTOR CHO BIẾT CẤU TRÚC CỦA HP CHẤT NHƯ MS, NMR RẤT HỮU HIỆU TRONG VIỆC ĐỊNH DANH CŨNG NHƯ XÁC NHẬN LẠI CÁC HP CHẤT. THƯỜNG CÁC DETECTOR NÀY CÓ ĐỘ CHÍNH XÁC CAO NHẤT TRONG VIỆC ĐỊNH DANH TUY NHIÊN CÁC DETECTOR NÀY RẤT ĐẮT TIỀN VÀ CŨNG RẤT DỄ BỊ NHIỄM BẨN CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH DANH ĐỂ ĐỊNH DANH VỚI CÁC ĐẦU DÒ THÔNG THƯỜNG TRƯỚC HẾT CẦN TÁCH HP CHẤT CẦN XÁC ĐỊNH RA KHỎI CÁC CHẤT KHÁC (DỰA VÀO THỜI GIAN LƯU). SAU ĐÓ CẦN XÁC NHẬN LẠI THỜI GIAN LƯU VỚI CHẤT CHUẨN. THỜI GIAN LƯU CỦA MẪU VÀ CHUẨN PHẢI GIỐNG NHAU KHI THAY ĐỔI: -CHIỀU DÀI CỘT SẮC KÝ -THÀNH PHẦN PHA TĨNH CỦA CỘT (TỪ RẤT PHÂN CỰC ĐẾN RẤT KHÔNG PHÂN CỰC) -NẾU THÀNH PHẦN MẪU QUÁ PHỨC TẠP CẦN XÁC NHẬN LẠI BẰNG CÁC ĐẦU DÒ CHO BIẾT THÔNG TIN CẤU TRÚC NHƯ MS TRƯỜNG HP SỬ DỤNG CÁC ĐẦU DÒ CÓ ĐỘ CHỌN LỌC CAO CÓ THỂ GIẢM THIỂU SAI SỐ DO ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC CHẤT KHÁC CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH DANH ☯ VẤN ĐỀ THƯỜNG GẶP PHẢI TRONG VIỆC ĐỊNH DANH LÀ CÁC HP CHẤT CÓ THỜI GIAN LƯU TRÙNG NHAU DẪN ĐẾN KHÔNG PHÂN BIỆT ĐƯC CÁC CHẤT. ☯CÁCH GIẢI QUYẾT : THAY ĐỔI CHƯƠNG TRÌNH CHẠY BAO GỒM: - THAY ĐỔI CHƯƠNG TRÌNH NHIỆT ĐỘ : LÒ CỘT, INJECTOR - THAY ĐỔI CHƯƠNG TRÌNH TỐC ĐỘ KHÍ : TỪ ĐẲNG DÒNG QUA CHƯƠNG TRÌNH HÓA TỐC ĐỘ DÒNG … THAY ĐỔI CỘT : - ĐỔI SANG CỘT CÓ KÍCH THƯỚC DÀI HƠN (CÙNG PHA TĨNH) - ĐỔI SANG CỘT CÓ ĐỘ PHÂN CỰC KHÁC CỘT HIỆN DÙNG - ĐỔI SANG CỘT CÓ CƠ CHẾ KHÁC (HẤP PHỤ …) 24.50 25.00 25.50 26.00 26.50 27.00 27.50 28.00 28.50 29.00 29.50 Time 0 100 % 0 100 % u03d1401 Voltage SIR 6 Channels EI+ 321.8936 2.04e8 u03j0101 Voltage SIR 6 Channels EI+ 321.8936 6.30e8 2,3,7,8- T 4 CDD 2,3,7,8- T 4 CDD DB-5 column Rtx-Dioxin column CAÙC PHÖÔNG PHAÙP ÑÒNH DANH CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH DANH THAY ĐỔI CỘT (TT) : - NỐI HAI HOẶC NHIỀU CỘT CÓ ĐỘ PHÂN CỰC KHÁC NHAU ĐỂ TĂNG KHẢ NĂNG TÁCH XỬ LÝ MẪU TRƯỚC KHI PHÂN TÍCH : - XỬ LÝ MẪU BẰNG PHƯƠNG PHÁP THÍCH HP ĐỂ LOẠI BỎ CÁC TẠP CHẤT ẢNH HƯỞNG : + CHIẾT LỎNG LỎNG + CHIẾT RẮN LỎNG (SPE) + VI CHIẾT PHA RẮN (SMPE) - DỰA VÀO TÍNH CHẤT HÓA LÝ CỦA CHẤT CẦN PHÂN TÍCH ĐỂ TẠO DẪN XUẤT THÀNH NHỮNG HP CHẤT CÓ NHIỆT ĐỘ SÔI, ĐỘ PHÂN CỰC … KHÁC NHƯ SILAN HÓA, CHLOR HÓA … Isothermal col ~ 0.8 m x 0.1mm x 0.1μm Temperatur programmed col ~ 25m x 0.25mm x 0.25 μm Moving Cold trap typ 4 Hz (ZOEX patented) Trappola 4 sec Conventional col unpolar Fast short column polar CAÙC PHÖÔNG PHAÙP ÑÒNH DANH Components in moving cooled trap Components released [...]... TRỌNG TRONG VIỆC THU ĐƯC PHỔ RÕ RÀNG VÀ GIÚP ĐỊNH DANH CHÍNH XÁC -TRONG NHỮNG TRƯỜNG HP NGHI NGỜ CÓ THỂ DÙNG MS NHIỀU LẦN ĐỂ XÁC NHẬN LẠI CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH DANH ☯ VIỆC ĐỊNH DANH MỘT CHẤT TRÊN PHẦN MỀM ĐƯC THỰC HIỆN BẰNG CÁCH NHẬP THỜI GIAN LƯU CỦA CHẤT CHUẨN VÀO PHƯƠNG PHÁP CHẠY ☯THỜI GIAN LƯU NÀY CHỈ CÓ Ý NGHĨA VỚI MỘT ĐIỀU KIỆN CHẠY MẪU NHẤT ĐỊNH (CỘT, CHƯƠNG TRÌNH NHIỆT ĐỘ, TỐC ĐỘ DÒNG…) NẾU CÁC... ÍT DÙNG TRONG PHÂN TÍCH ĐỊNH LƯNG CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯNG PHƯƠNG PHÁP TÍNH TỈ LỆ PHẦN TRĂM CÓ HIỆU CHUẨN (CORRECTED AREA NORMALIZATION) : -ĐÂY LÀ PHƯƠNG PHÁP BIẾN THỂ CỦA PHƯƠNG PHÁP TÍNH TỈ LỆ PHẦN TRĂM CÁC CHẤT -CHO PHÉP CHÚNG TA XÁC ĐỊNH TỈ LỆ PHẦN TRĂM CỦA MỘT NHÓM CHẤT QUAN TÂM -PHẢI DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN CHO CÁC CHẤT QUAN TÂM NHƯNG ĐƠN VỊ CỦA NỒNG ĐỘ LÀ TỈ LỆ PHẦN TRĂM CÁC CHẤT -PHƯƠNG PHÁP HỮU... DẪN ĐẾN NHẬN DANH SAI ☯CÁC THÔNG SỐ SỬ DỤNG ĐỂ NHẬN BIẾT 1 PEAK NHƯ WIDTH, SLOPE … CŨNG ẢNH HƯỞNG ĐẾN VIỆC XÁC NHẬN TÍN HIỆU LÀ NHIỄU NỀN HAY LÀ PEAK ☯NGOÀI RA DO THỜI GIAN LƯU GIỮA CÁC LẦN CHẠY SẼ KHÁC NHAU CHÚT ÍT NÊN CŨNG CẦN THÔNG BÁO CHO CHƯƠNG TRÌNH XỬ LÝ VỀ KHOẢNG BIẾN ĐỘNG CHO PHÉP CỦA THỜI GIAN LƯU CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH DANH CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯNG ☯CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯNG CHÍNH TRONG SẮC... DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN THAY CHO CHẤT PHÂN TÍCH CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯNG VÍ DỤ VỀ SẮC KÝ ĐỒ VÀ ĐƯỜNG CHUẨN CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯNG PHƯƠNG PHÁP NGOẠI CHUẨN (EXTERNAL STANDARD) (TT): -NHƯC ĐIỂM CỦA PHƯƠNG PHÁP LÀ KHI TIÊM MẪU BẰNG TAY, THỂ TÍCH TIÊM MẪU GIỮA CÁC LẦN SẼ KHÁC NHAU NHIỀU -THÔNG THƯỜNG GIỮA CÁC LẦN TIÊM MẪU BẰNG TAY, GIÁ TRỊ CÓ THỂ KHÁC NHAU TỪ VÀI CHỤC ĐẾN VÀI TRĂM % -ĐIỀU NÀY LÀM CHO ĐƯỜNG CHUẨN... TỈ LỆ CÁC ĐỒNG PHÂN, CÁC HYDROCACBON GẦN GIỐNG NHAU -TRONG THỰC TẾ HAY SỬ DỤNG TRONG DẦU KHÍ ĐỂ TÍNH THÀNH PHẦN % CỦA CÁC KHÍ ĐỐT NHƯ ETHAN, PROPAN, NBUTAN, ISO-BUTAN … CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯNG PHƯƠNG PHÁP NGOẠI CHUẨN (EXTERNAL STANDARD) : -ĐÂY LÀ PHƯƠNG PHÁP CHO PHÉP XÁC ĐỊNH CHÍNH XÁC NỒNG ĐỘ CỦA CHẤT QUAN TÂM -ĐƠN VỊ CỦA NỒNG ĐỘ CÓ THỂ LÀ mg/L, ug/l, ppm, ppb … -PHẢI LẬP ĐƯỜNG CHUẨN CHO CÁC CHẤT... DỤNG BỘ TIÊM MẪU TỰ ĐỘNG KHI DÙNG PHƯƠNG PHÁP NGOẠI CHUẨN -SAI SỐ VỚI BỘ TIÊM MẪU TỰ ĐỘNG NHỎ HƠN 5% VÀ THƯỜNG TRONG KHOẢNG 2- 3% -TUY NHIÊN KHÔNG PHẢI MÁY GC NÀO CŨNG ĐƯC TRANG BỊ BỘ TIÊM MẪU TỰ ĐỘNG NÊN ĐỂ KHẮC PHỤC NHƯC ĐIỂM TRÊN, PHƯƠNG PHÁP NỘI CHUẨN ĐÃ ĐƯC ỨNG DỤNG CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯNG PHƯƠNG PHÁP NỘI CHUẨN (INTERNAL STANDARD) : -ĐÂY LÀ PHƯƠNG PHÁP CHO PHÉP XÁC ĐỊNH CHÍNH XÁC NỒNG ĐỘ CỦA CHẤT... CAO) VÀ TRỤC HOÀNH LÀ C THÊM CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯNG STANDARD ADDITION METHOD PEAK - AREA 15000 10000 5000 0 -1 -0.5 0 0.5 C THEM 1 1.5 2 2.5 CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯNG PHƯƠNG PHÁP THÊM CHUẨN (STANDARD ADDITION) (TT): + SAU KHI CÓ PHƯƠNG TRÌNH ĐƯỜNG CHUẨN NGƯỜI TA TÍNH GIÁ TRỊ C THÊM TẠI ĐIỂM ĐƯỜNG CHUẨN CẮT TRỤC HOÀNH (TRỤC TUNG = 0), GỌI LÀ C XÁC ĐỊNH + GIÁ TRỊ NỒNG ĐỘ MẪU SẼ LÀ C MẪU = - C XÁC ĐỊNH... KHÔNG KHÁC NHAU QUÁ NHIỀU + TỈ LỆ NÀY VẪN NẰM TRONG KHOẢNG THAY ĐỔI TUYẾN TÍNH CỦA DIỆN TÍCH HOẶC CHIỀU CAO CỦA CHẤT PHÂN TÍCH VÀ CHẤT NỘI CHUẨN THEO NỒNG ĐỘ -ĐỂ NÂNG CAO ĐỘ ĐÚNG VÀ CHÍNH XÁC, NGAY CẢ KHI DÙNG PHƯƠNG PHÁP NỘI CHUẨN NGƯỜI TA VẪN CÓ KHUYNH HƯỚNG DÙNG BỘ TIÊM MẪU TỰ ĐỘNG CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯNG PHƯƠNG PHÁP THÊM CHUẨN (STANDARD ADDITION) : -TRONG THỰC TẾ NỀN CỦA MẪU RẤT PHỨC TẠP THÀNH... MẪU GIỮA CÁC LẦN TIÊM -ĐƠN VỊ CỦA NỒNG ĐỘ CÓ THỂ LÀ mg/L, ug/l, ppm, ppb … -ĐỂ THỰC HIỆN CẦN TÌM MỘT CHẤT CÓ TÍNH CHẤT HÓA LÝ VÀ CẤU TRÚC TƯƠNG TỰ VỚI CÁC CHẤT CẦN XÁC ĐỊNH, TRONG NHIỀU TRƯỜNG HP SỬ DỤNG ĐỒNG VỊ DETERIUM CỦA HYDRO THAY THẾ CHO CÁC NGUYÊN TỬ HYDRO TRONG PHÂN TỬ CHẤT CẦN XÁC ĐỊNH (KHI CẦN CÓ TÍNH CHẤT RẤT GẦN NHAU) -CHẤT NÀY ĐƯC GỌI LÀ CHẤT NỘI CHUẨN VÀ ĐƯC THÊM VÀO TẤT CẢ CÁC DUNG... SỬ DỤNG CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯNG PHƯƠNG PHÁP NỘI CHUẨN (INTERNAL STANDARD) (TT) : -TRƯỜNG HP PHÂN TÍCH NHIỀU HP CHẤT CÓ TÍNH CHẤT KHÁC NHAU TRONG CÙNG MỘT LẦN TIÊM MẪU CÓ THỂ SỬ DỤNG NHIỀU CHẤT NỘI CHUẨN KHÁC NHAU -DO CHẤT NỘI CHUẨN THƯỜNG CÓ NỒNG ĐỘ CỐ ĐỊNH NÊN TỈ LỆ NỒNG ĐỘ TRONG DÃY CHUẨN TỪ DUNG DỊCH THẤP NHẤT ĐẾN CAO NHẤT CẦN TÍNH TOÁN LÀM SAO ĐỂ : + TỈ LỆ NỒNG ĐỘ GIỮA CHẤT XÁC ĐỊNH VÀ NỘI CHUẨN . PHAÙP ÑÒNH DANH CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯNG ☯CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯNG CHÍNH TRONG SẮC KÝ BAO GỒM : PHƯƠNG PHÁP TÍNH TỈ LỆ PHẦN TRĂM CÁC CHẤT (AREA NORMALIZATION) : -ĐÂY LÀ PHƯƠNG PHÁP TÍNH THÀNH. QUAN TRỌNG TRONG VIỆC THU ĐƯC PHỔ RÕ RÀNG VÀ GIÚP ĐỊNH DANH CHÍNH XÁC. -TRONG NHỮNG TRƯỜNG HP NGHI NGỜ CÓ THỂ DÙNG MS NHIỀU LẦN ĐỂ XÁC NHẬN LẠI CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH DANH ☯ VIỆC ĐỊNH DANH MỘT CHẤT. MS TRƯỜNG HP SỬ DỤNG CÁC ĐẦU DÒ CÓ ĐỘ CHỌN LỌC CAO CÓ THỂ GIẢM THIỂU SAI SỐ DO ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC CHẤT KHÁC CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH DANH ☯ VẤN ĐỀ THƯỜNG GẶP PHẢI TRONG VIỆC ĐỊNH DANH LÀ CÁC HP CHẤT CÓ