Nghiên cứu những bệnh thường gặp trên ếch (rana tigerina) nhập từ Thái Lan nuôi ở vùng ven đô thành TP.HCM

- Thử nghiệm sự nhạy cảm của vi khuẩn phân lập được từ ếch bệnh đối với một số loại kháng sinh chuyên dùng.. Qua đó, xác định tác nhân gây bệnh, tình hình sử dụng kháng sinh, hóa chất tr

ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM BỘ GIÁO DỤC & ĐÀO TẠO

SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM

BÁO CÁO NGHIỆM THU

NGHIÊN CỨU NHỮNG BỆNH THƯỜNG GẶP TRÊN

ẾCH (RANA TIGERINA) NHẬP TỪ THÁI LAN NUÔI Ở

VÙNG VEN ĐÔ TP HỒ CHÍ MINH

CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI: ThS LƯU THỊ THANH TRÚC

BÁO CÁO NGHIỆM THU

Tên đề tài: Nghiên cứu những bệnh thường gặp trên ếch (Rana

tigerina) nhập từ Thái Lan nuôi tại vùng ven đô thành phố Hồ Chí Minh

Chủ nhiệm đề tài: ThS Lưu Thị Thanh Trúc

Cơ quan chủ trì: Khoa Thủy Sản – Đại Học Nông Lâm TP.HCM

Thời gian thực hiện đề tài: 12/2006 – 12/2008

Kinh phí được duyệt: 298.000.000 đồng

Kinh phí đã cấp: 170.000.000 đồng theo TB số: 233 TB-SKHCN ngày

04/12/2006

Mục tiêu: Nắm được sự phân bố và chu kỳ bùng phát dịch của

một số bệnh phổ biến trên ếch (R tigerina) nhập từ

Thái Lan và tình hình sử dụng kháng sinh, hóa chất phòng trị bệnh ếch trong điều kiện nuôi tại vùng ven

đô

Xác định tác nhân gây bệnh của các bệnh thường gặp trên ếch trong quá trình nuôi thương phẩm Nội dung:

- Khảo sát tình hình lưu hành bệnh trên ếch (R tigerina) nhập từ Thái Lan trong

điều kiện nuôi tại vùng ven đô

- Khảo sát tình hình sử dụng kháng sinh, hóa chất phòng trị bệnh ếch trong điều kiện nuôi tại vùng ven đô

- Xác định loại ký sinh trùng gây bệnh trên nòng nọc và ếch trưởng thành trong

điều kiện nuôi tại vùng ven đô

- Xác định loại vi khuẩn gây bệnh lở loét, sình bụng và mù mắt trên ếch

- Thử nghiệm sự nhạy cảm của vi khuẩn phân lập được từ ếch bệnh đối với một

số loại kháng sinh chuyên dùng

- Nghiên cứu bệnh tích vi thể mô ếch bệnh trong điều kiện nuôi tại vùng ven đô

Sản phẩm đề tài:

- Bảng báo cáo tổng kết về tình hình dịch bệnh xảy ra trên ếch nuôi và sự kháng

kháng sinh của vi khuẩn phân lập được từ ếch (Rana tigerina)

DANH SÁCH CÁ NHÂN THAM GIA THỰC HIỆN ĐỀ TÀI

T

T Họ và tên

Học vị/chức danh KH

Ngành chuyên môn Đơn vị công tác

1 Nguyễn Hữu Thịnh Tiến Sĩ Bệnh học thủy sản Khoa Thủy Sản, ĐH

Nông Lâm TPHCM

2 Nguyễn Hoàng Nam Kha Thạc Sĩ Khoa học và CN

thực phẩm

Khoa Thủy Sản, ĐH Nông Lâm TPHCM

3 Trần Hồng Thủy Kỹ Sư Nuôi trồng thủy sản Khoa Thủy Sản, ĐH

TÓM TẮT

Ếch (Rana tigerina) được nhập vào Việt Nam năm 2003 để nuôi thử nghiệm và

đạt hiệu quả kinh tế cao Từ đó, ếch Thái Lan trở thành đối tượng nuôi phổ biến đáp ứng nhu cầu chuyển đổi cơ cấu nông nghiệp tại vùng ven đô TPHCM và các tỉnh lân cận Tuy nhiên, trong quá trình nuôi người dân gặp đã phải những khó khăn như tình trạng dịch bệnh, trình độ kỹ thuật, con giống, thị trường tiêu thụ…trong đó vấn đề dịch bệnh và chất lượng con giống ảnh hưởng lớn nhất đến doanh thu của họ

Đề tài tiến hành nhằm nghiên cứu sự phân bố và bùng phát những bệnh thường gặp trên ếch Qua đó, xác định tác nhân gây bệnh, tình hình sử dụng kháng sinh, hóa chất trong việc phòng trị bệnh trên ếch cũng như sự kháng kháng sinh của hệ vi khuẩn phân lập từ ếch nuôi tại vùng ven đô TPHCM

Kết quả khảo sát cho thấy ếch bị quẹo cổ chiếm tỷ lệ cao nhất 77,08%, kế đến

là hiện tượng ếch bị mù mắt chiếm 72,92%, bệnh lở loét chiếm 64,58% và sình bụng chiếm 64,58% Dịch bệnh xảy ra ở tất cả các kích cỡ của ếch nuôi và thời điểm ếch mắc bệnh cao nhất là lúc giao mùa chiếm 45,83%, mùa mưa chiếm 35,42%

Người dân đã sử dụng rất nhiều loại thuốc sát trùng như: Iodine, KMnO4, CuSO4, vôi để vệ sinh bể Hơn 50% hộ nuôi sử dụng kháng sinh để trị bệnh cho ếch và không theo quy định của Bộ Thủy Sản Mặc dù gặp khó khăn do dịch bệnh nhưng chỉ

có 1/3 số hộ nuôi (31,25%) dự định chuyển sang đối tượng nuôi khác

Thành phần ký sinh trùng tìm thấy trên ếch gồm trùng quả dưa

(Ichthyophthyrius), trùng bánh xe (Trichodina), Balantidium và Opalina nhưng không

bùng phát thành dịch bệnh và không gây thiệt hại cho người nuôi

Theo kết quả định danh bằng bộ test IDS 14GNR: số chủng vi khuẩn định danh

từ ếch bệnh với biểu hiện lở loét chiếm tỷ lệ cao nhất là 50,22%, từ ếch bị lở loét + vẹo

cổ + mù mắt chiếm 19,91%, vẹo cổ + mù mắt chiếm 16,45%, lở loét + sình bụng/lồi ruột chiếm 6,49%, sình bụng/lồi ruột chiếm 2,6%, vẹo cổ + mù mắt + sình bụng/lồi

ruột chiếm 3,9%, xuất huyết da chiếm 0,43% Chỉ có một chủng A hydrophila từ ếch bệnh (0,43%) Sự hiện diện của Pseudomonas cepacia trên ếch bệnh thu từ Củ Chi,

Hóc Môn, Quận 9 và Thủ Đức cao nhất với tỷ lệ lần lượt là 14,72%, 9,63%, 2,16% và

3,46% Xanthomonas maltophilia thu từ ếch bệnh ở Củ Chi là 6,49%, Quận 9 là 0,43%

và Thủ Đức là 1,30% Vibrio metschnikovii hiện diện trên ếch bệnh ở Củ Chi, Hóc

Môn và Quận 9 với tỷ lệ là 3,03%, 0,86% và 2,60%

Theo kết quả định danh bằng bộ test API-20E: số chủng vi khuẩn phân lập từ ếch bệnh với biểu hiện lở loét chiếm cao nhất với tỷ lệ 47,86%, kế đến là biểu hiện lở loét + vẹo cổ + mù mắt chiếm 19,19%, vẹo cổ + mù mắt chiếm 17,14%, vẹo cổ + mù mắt + sình bụng/lồi ruột chiếm 7,14%, lở loét + sình bụng/lồi ruột chiếm 5%, sình

bụng/lồi ruột chiếm 2,86% và xuất huyết chiếm 0,71% A hydrophila là loài vi khuẩn

được phân lập nhiều nhất chiếm tỷ lệ 27,24%, trong đó 3,57% phân lập được từ ếch

bệnh thu ở Hóc Môn và 23,57% từ ếch bệnh thu ở Quận 9 Không có sự hiện diện của

vi khuẩn này trong kết quả phân lập từ các mẫu ếch bệnh ở Củ Chi và Thủ Đức

Kết quả gây bệnh thực nghiệm:

+ V metschnikovii, P cepacia, X malthophila không gây bệnh trên ếch (Rana tigerina) kích cỡ với các nồng độ thí nghiệm 102 cfu/mL, 104 cfu/mL, 106 cfu/mL

+ Gây bệnh thực nghiệm bằng A hydrophila, tỷ lệ sống của ếch ở nghiệm thức

đối chứng cao nhất đạt 86,67%, kế đến là ếch ở nghiệm thức 9x106 cfu/mL đạt 43,33%, nghiệm thức 9x107 cfu/mL đạt 10% và 0% ở nghiệm thức 9x108 cfu/mL Vi

khuẩn A hydrophila là tác nhân gây bệnh cho ếch ở nồng độ 9x106 cfu/mL với triệu chứng lở loét, nội tạng bị mủ và lồi ruột

Kết quả thử nghiệm kháng sinh đồ:

+ Có 22/24 chủng vi khuẩn phân lập từ ếch bệnh tại Củ Chi kháng với Ampicillin, 23/24 chủng kháng với Amoxyline, 4/24 chủng kháng với Neomycin, 1/24 chủng kháng với Bactrime, 17/24 chủng kháng với Streptomycin, và 4/24 chủng kháng với Norfloxacine

+ Ở Hóc Môn có 100% vi khuẩn (15/15 chủng) kháng với Ampicillin và Amoxyline, 5/15 chủng kháng với Bactrime, 1/15 chủng kháng với Streptomycin, 100% vi khuẩn mẫn cảm với Neomycin và Norfloxacin Sự nhạy cảm với kháng sinh

của Aeromonas hydrophila khá cao đối thể hiện qua đường kính vòng vô khuẩn với

Neomycin (18,5 ± 3,28mm), Bactrime (20,25 ± 9,42mm), Streptomycin (18,56 ± 3,31mm) và Norfloxacin (25,63 ± 3,68mm)

+ Ở Quận 9 có 68/69 chủng kháng với Ampicillin và Amoxyline, 63/69 chủng kháng với Neomycin, 47/69 chủng kháng với Bactrime, 59/69 chủng kháng với Streptomycin, và 1/69 chủng kháng với Norfloxacin

+ Đối với 3 chủng vi khuẩn Enterobacter phân lập từ ếch bệnh tại Thủ Đức đều

kháng đối với Ampicillin và Amoxyline Đối với Neomycin, Bactrime, Streptomycin

và Norfloxacin thì đường kính vòng kháng khuẩn lần lượt là 13,83 ± 1,89mm, 25,17

± 1,26mm, 13,33 ± 0,76mm và 25,67 ± 0,29mm

+ Mức độ kháng đối với hai 2 loại kháng sinh Ampicillin và Amoxyline của vi khuẩn khá cao 93,69% và 90,99%, kế đến là Bactrime 44,14%, Streptomycine

40,54%, Neomycin 24,32% và Norfloxacin 10,81% 100% chủng A hydrophila thể

hiện tính kháng đối với Ampicillin và Amoxyline

+ Có 2/111 (1,80%) chủng vi khuẩn thể hiện tính kháng với sáu loại kháng sinh

sử dụng, 14/111 (12,61%) chủng vi khuẩn kháng với 5 loại kháng sinh, trong đó 4/111

vi khuẩn kháng với 3 loại kháng sinh thử nghiệm là cao nhất chiếm 39,63% (44/111 chủng), 31,55% chủng vi khuẩn kháng với 2 loại kháng sinh thử nghiệm (35/111)

Bệnh tích vi thể mô ếch bệnh lở loét và cơ quan nội tạng bị mủ trên ếch thu ngoài thực địa gồm những biểu hiện như: gan, thận, tỳ tạng sưng to, mềm nhũn có hiện tượng sung huyết hay xuất huyết cùng với sự xuất hiện của những đốm trắng với nhiều

kích cỡ khác nhau Tương tự như biểu hiện của ếch khi gây bệnh thực nghiệm bằng A hydrophila như sung huyết và xuất huyết tại vết tiêm và lan rộng ra khu vực chung quanh và quan sát thấy hiện tượng sung huyết, xuất huyết, thoái hóa và hoại tử trong các cơ quan nội tạng Ếch bị bệnh do vi khuẩn gây ra thì các cơ quan nội tạng như gan, thận, lách là nơi bị tổn thương sớm nhất so với mô cơ, tim, dạ dày

ABSTRACT

Thai frog (Rana tigerina) was firstly introduced into Vietnam in 2003 Due to

its short-term production cycle and fast growth with minimal costs, this species has being preferred as a suitable culture species Currently, the number of frog farms increased rapidly However, with the inexperience in culturing, it has led to significant economic losses due to disease The main purpose of this study was to assess the current status of Thai frog disease in the peri-urban area of Ho Chi Minh City, Vietnam

Four main diseases were recommended by farmers as follow paralysis (77.08%), dull eyes (72.92%), ulcerative (64.58%) and indigestion (64.58%) The interview farmers found that difficulty to culture frog during the cold season because

as it be too hard of disease controlling

Many medicines or chemicals have to apply for therapy and controlling were as follow: Iodine, KMnO4, CuSO4, Oxytetracyline, Neomycin, Sulphadiazine, Enrofloxacine, …

The internal and external parasites on frog were Balantidium, Opalina, Ichthyophthyrius, and Trichodina The parasite does not seem to be responsible for the

economic losses

The overall isolates (n=231) from diseased frog were collected and identified

by IDS 14GRN Among these isolates, Pseudomonas cepacia, Xanthomonas maltophilia, and Vibrio metschnikovii isolates were found to be dominant

In 140 colonies isolated from diseased frog and identified by API-20E,

Aeromonas hydrophila isolates were found to be dominant A hydrophila were

dominant in percentage of colonies which isolated from ulcerative syndrome

Challenge of culture frog with A hydrophila that were isolated from diseased

frog with signs of ulcerative syndrome was carried out Experimental frogs were injected on the vetral left thigh with a variety of bacterial concentrations Average 18-25g sized frog were stocked at 10 frogs/tank There were four treatments with triplicate each: control (injected with sterile saline solution), 9x106 cfu/mL, 9x107cfu/mL, and 9x108 cfu/mL for bacterial injection challenges The survival rates of control, 9x106 cfu/mL, 9x107 cfu/mL, and 9x108 cfu/mL were 86.67%, 43.33%, 10% and 0%, respectively No bacteria were isolated from frogs in the control at the end of experiment Signs of moribund frogs included light-reddish fluid in the body cavity

and haemorrhage on the skin of abdomen and thigh A hydrophila were isolated from

diseased frog in bacterial injection challenges treatments Those results point out the

The sensitivity of bacteria isolated from frog to different commonly used antibiotic agents was tested using the agar diffusion method Antibiotic discs used were Ampicillin (10µg), Amoxyline (10µg), Bactrime Sulfamethoxazone/Trimethoprim) (23.75/1.25µg), Neomycine (30µg), Streptomycin

(10µg) và Norfloxacin (10µg) Most of the A hydrophila strains showed resistance to

Ampicillin, Amoxyline, and sensitive to Neomycin, Bactrime, Streptomycin and Norfloxacin

The study used histological method to detect ulcerative syndrome in frog Fifty samples collected in farm culture at Cu Chi, Hoc Mon, Thu Duc, District 9, and experimental tanks were used in this study Moribund and normal frogs were fixed in Bouin solution, embedding and sectioned at 5µm prior to staining with haematoxyline and eosin (H&E) Histopahtological changes of experimentally infected frogs revealed inflammatory exudates, congestion and haemorrhages in liver, kidney, spleen, heart, and muscle

MỤC LỤC

CHƯƠNG I: GIỚI THIỆU 1

1.1 Đặt Vấn Đề 1

1.2 Mục Tiêu Đề Tài 1

1.3 Nội Dung Nghiên Cứu 2

CHƯƠNG II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1 Các Tác Nhân Gây Bệnh Trên Ếch 3

2.1.1 Bệnh do vi khuẩn 3

2.1.2 Bệnh do ký sinh trùng 5

2.1.3 Bệnh do virus 5

2.2 Một Số Công Trình Nghiên Cứu Về Việc Phòng Và Trị Bệnh Trên Ếch 7

2.3 Sự Nhạy Cảm Của Vi Khuẩn Đối Với Các Loại Kháng Sinh 7

2.3.1 Các loại kháng sinh thông dụng nhất trong nuôi trồng thủy sản 7

2.3.2 Hiện tượng kháng thuốc của một số loài vi khuẩn gây bệnh ở động vật thủy sản 8

CHƯƠNG III: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 10

3.1 Thời Gian Và Địa Điểm 10

3.2 Dụng Cụ, Thiết Bị Và Hóa Chất 10

3.2.1 Dụng cụ và hóa chất để phân lập, định danh vi khuẩn và nghiên cứu ký sinh trùng 10

3.2.2 Dụng cụ và hóa chất để nghiên cứu mô học 11

3.2.2.1 Dụng cụ và thiết bị 11

3.2.2.2 Hóa chất 11

3.3 Phương Pháp Nghiên Cứu 11

3.3.1 Nội dung 1: Khảo sát các bệnh thường gặp trên ếch (R tigerina) nhập từ Thái Lan nuôi tại vùng ven đô Tp.HCM và tình hình sử dụng thuốc, hóa chất trong việc phòng, trị bệnh 11 3.3.3 Nội dung 3: Xác định loại vi khuẩn gây bệnh lở loét, sình bụng và mù mắt trên ếch (R tigerina) nhập từ Thái Lan trong điều kiện nuôi tại vùng ven đô 13

3.3.4 Nội dung 4: Thử nghiệm sự nhạy cảm của vi khuẩn phân lập được từ ếch bệnh đối với một số loại kháng sinh chuyên dùng 18

3.3.5 Nội dung 5: Nghiên cứu bệnh tích vi thể mô ếch bệnh 20

3.4 Phương Pháp Xử Lý Số Liệu 21

CHƯƠNG IV: KẾT QUẢ & THẢO LUẬN 22

4.1 Nội Dung 1: Khảo Sát Các Bệnh Thường Gặp Trên Ếch (R tigerina) Nhập Từ Thái Lan Nuôi Tại Vùng Ven Đô Tp.HCM Và Tình Hình Sử Dụng Thuốc, Hóa Chất Trong Việc Phòng, Trị Bệnh 22

4.1.1 Hoạt động nuôi ếch ở vùng ven đô Tp.HCM 22

4.1.2 Tình hình dịch bệnh 30

4.2 Nội dung 2: Xác định loại ký sinh trùng gây bệnh trên nòng nọc và ếch trưởng thành trong đ iều kiện nuôi tại vùng ven đô 35

4.2.1 Trùng quả dưa (Ichthyophthyrius) 35

4.2.2 Trùng bánh xe (Trichodina) 37

4.2.3 Balantidium 38

4.2.4 Opalina 40

4.3 Nội Dung 3: Xác Định Loại Vi Khuẩn Gây Bệnh Lở Loét, Sình Bụng Và Mù Mắt Trên Ếch (R tigerina) Nhập Từ Thái Lan Trong Điều Kiện Nuôi Tại Vùng Ven Đô 42

4.3.1 Phân lập và định danh vi khuẩn từ ếch bệnh tại các hộ nuôi ở vùng ven đô Tp.HCM 42

4.4 Nội dung 4: Thử Nghiệm Sự Nhạy Cảm Của Vi Khuẩn Phân Lập Được Từ Ếch Bệnh Đối

Với Một Số Loại Kháng Sinh Chuyên Dùng 61

4.5 Nội Dung 5: Nghiên Cứu Bệnh Tích Vi Thể Mô Ếch Bệnh 69

4.5.1 Thận 70

4.5.2 Tỳ tạng 73

4.5.3 Cơ 77

4.5.4 Gan 80

4.5.5 Tim 83

4.5.6 Dạ dày 85

CHƯƠNG V: KẾT LUẬN & ĐỀ NGHỊ 88

5.1 Kết Luận 88

5.1.1 Hoạt động nuôi ếch ở vùng ven đô thành phố Hồ Chí Minh 88

5.1.2 Tình hình dịch bệnh 88

5.1.3 Ký sinh trùng gây bệnh trên nòng nọc và ếch trưởng thành 88

5.1.4 Kết quả phân lập, định danh vi khuẩn trên ếch bệnh 88

5.1.5 Kết quả gây bệnh thực nghiệm 89

5.1.6 Sự nhạy cảm của vi khuẩn đối với một số loại kháng sinh 89

5.1.7 Bệnh tích vi thể mô ếch bệnh 89

5.2 Đề Nghị 90

TÀI LIỆU THAM KHẢO 91

PHỤ LỤC 94

DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT

AAHRI : Aquatic Animal Health Research Institute

LD50 : Lethal Dose 50

EPC : Epithelioma Papulosum Cyprini

TFIV : Tiger Frog Iridovirus

FEV : Frog Erythrocytic Virus

LTHV : Lucké Tumor Herpesvirus

RaHV-1 : Rana Herpesvirus 1

BHIA : Brain Heart Infusion Agar

NA : Nutrient Agar

TSA : Tryptone Soya Agar

PCA : Plate Count Agar

MC : MacConkey

MHA : Mueller Hinton Agar

NB : Nutrient Broth

IDS 14GNR : Identification System with 14 biochemical reaction for identification of

non-fastidious Gram-Negative Rods API - 20E : Identification system for Enterobacteriaceae and other non-fastidious

Gram-Negative Rods CĐCN : Cường độ cảm nhiễm

DANH SÁCH CÁC BẢNG

Bảng 2.1: Liều gây chết LD 50 do Aeromonas spp được tiêm vào màng bụng của ếch Thái Lan.

4

Bảng 4.1: Vị trí địa lý của các hộ điều tra 23

Bảng 4.2: Sự phân bố lao động nữ trong hoạt động nuôi ếch 23

Bảng 4.3: Hình thức sở hữu đất 24

Bảng 4.4: Lý do nuôi ếch 24

Bảng 4.5: Thông tin về nuôi ếch (n=48) 25

Bảng 4.6: Nguồn nước sử dụng trong trại (n=48) 25

Bảng 4.7: Hình thức nuôi (N=48) 25

Bảng 4.8: Thông tin chung (n=48) 26

Bảng 4.9: Chuẩn bị bể trước khi thả giống 26

Bảng 4.10: Các loại hóa chất sử dụng để vệ sinh bể trước khi thả nuôi 27

Bảng 4.11: Người hướng dẫn cách cho ăn (n=48) 28

Bảng 4.12: Phương pháp thu hoạch 29

Bảng 4.13: Những khó khăn mà người nuôi ếch gặp phải (n = 48) 30

Bảng 4.14: Điều kiện môi trường nước lúc xảy ra dịch bệnh 31

Bảng 4.15: Tỷ lệ chết của ếch bệnh trong quá trình nuôi 31

Bảng 4.16: Kích cỡ ếch bị bệnh 32

Bảng 4.17: Mùa vụ xảy ra dịch bệnh 33

Bảng 4.19: Người tư vấn việc phòng, trị bệnh trên ếch 34

Bảng 4.20: Số lượng mẫu thu để quan sát ký sinh trùng 35

Bảng 4.21: Tỷ lệ cảm nhiễm (%) Balantidium trong ruột ếch 39

Bảng 4.22: Tỷ lệ cảm nhiễm (%) Opalina trong ruột ếch 40

Bảng 4.23: Kết quả phân lập và định danh vi khuẩn từ ếch bệnh nuôi tại huyện Củ Chi (bằng bộ test IDS 14 GNR) 45

Bảng 4.24: Kết quả phân lập và định danh vi khuẩn từ môi trường nước trong bể nuôi ếch tại huyện Củ Chi (bằng bộ test IDS 14 GNR) 45

Bảng 4.25: Kết quả phân lập và định danh vi khuẩn từ ếch bệnh nuôi tại huyện Hóc Môn (bằng bộ test IDS 14 GNR) 46

Bảng 4.26: Kết quả phân lập và định danh vi khuẩn từ môi trường nước trong bể nuôi ếch tại huyện Hóc Môn (bằng bộ test IDS 14 GNR) 46

Bảng 4.27: Kết quả phân lập và định danh vi khuẩn từ ếch bệnh nuôi tại Quận Thủ Đức (bằng bộ test IDS 14 GNR) 46

Bảng 4.28: Kết quả phân lập và định danh vi khuẩn từ môi trường nước trong bể nuôi ếch tại Quận Thủ Đức (bằng bộ test IDS 14 GNR) 47

Bảng 4.29: Kết quả phân lập và định danh vi khuẩn từ ếch bệnh nuôi tại Quận 9 (bằng bộ test IDS 14 GNR) 47

Bảng 4.30: Kết quả phân lập và định danh vi khuẩn từ môi trường nước trong bể nuôi ếch tại Quận 9 (bằng bộ test IDS 14 GNR) 48

Bảng 4.31: Kết quả phân lập và định danh vi khuẩn từ ếch bệnh nuôi tại huyện Củ Chi (bằng bộ test API-20E) 49

Bảng 4.32: Kết quả phân lập và định danh vi khuẩn từ ếch bệnh nuôi tại huyện Hóc Môn (bằng bộ test API-20E) 50

Bảng 4.33: Kết quả phân lập và định danh vi khuẩn từ ếch bệnh nuôi tại Quận Thủ Đức (bằng bộ test API-20E) 50

Bảng 4.34: Kết quả phân lập và định danh vi khuẩn từ ếch bệnh nuôi tại Quận 9 (bằng bộ test API-20E) 51

Bảng 4.35: Tỉ lệ sống của ếch gây bệnh thực nghiệm bằng V metschnikovii 52 Bảng 4.36: Kết quả gây bệnh thực nghiệm bằng vi khuẩn V metschnikovii 53 Bảng 4.37: Kết quả quan sát biểu hiện của ếch sau khi gây bệnh thực nghiệm bằng A

hydrophila 58

Bảng 4.38: Kết quả phân lập, định danh vi khuẩn sau khi gây bệnh thực nghiệm bằng A

hydrophila ở nghiệm thức 9x106 cfu/mL 59

Bảng 4.39: Kết quả phân lập, định danh vi khuẩn sau khi gây bệnh thực nghiệm bằng A

hydrophila ở nghiệm thức 9x107 cfu/mL 59

Bảng 4.40: Kết quả phân lập, định danh vi khuẩn sau khi gây bệnh thực nghiệm bằng A

hydrophila ở nghiệm thức 9x108 cfu/mL 60

Bảng 4.41: Tỉ lệ sống của ếch gây bệnh thực nghiệm bằng A hydrophila 60

Bảng 4.42: Tiêu chuẩn đường kính vòng vô khuẩn 61 Bảng 4.43: Kết quả kháng sinh đồ của một số loài vi khuẩn phân lập trên ếch bệnh nuôi tại huyện Củ Chi 64 Bảng 4.44: Kết quả kháng sinh đồ của một số loài vi khuẩn phân lập trên ếch bệnh nuôi tại huyện Hóc Môn 65 Bảng 4.45: Kết quả kháng sinh đồ của một số loài vi khuẩn phân lập trên ếch bệnh nuôi tại Quận 9 66 Bảng 4.47: Tính đa kháng kháng sinh của các chủng vi khuẩn phân lập được từ ếch bệnh trong quá trình điều tra (n=111) 67

DANH SÁCH CÁC HÌNH ẢNH

Hình 3.1: Mổ và quan sát nội tạng của ếch 14

Hình 3.2: Sơ đồ phân lập và định danh vi khuẩn từ ếch bệnh 15

Hình 3.3: Khuẩn lạc của A hydrophila trên môi trường TSA 16

Hình 3.3: Sơ đồ gây bệnh thực nghiệm trên ếch 17

Hình 3.4: Bể bố trí thí nghiệm gây bệnh thực nghiệm 18

Hình 4.1: Khu vực điều tra tình hình dịch bệnh trên ếch 22

Hình 4.2: Các mô hình nuôi ếch ở vùng ven đô Tp.HCM 26

Hình 4.3: Một số biểu hiện bệnh của ếch nuôi 32

Hình 4.4: Các loại ký sinh trùng tìm thấy trên ếch nuôi tại vùng ven đô Tp.HCM 42

Hình 4.5: Kết quả định danh bằng test IDS 14GRN của công ty Nam Khoa 47

Hình 4.6: Kết quả định danh vi khuẩn A hydrophila bằng test API-20E 50

Hình 4.7: Ếch có biểu hiện xuất huyết sau khi tiêm vi khuẩn A hydrophila 54

Hình 4.8: Ếch thí nghiệm có biểu hiện lở loét tại vết tiêm sau 3 ngày tiêm A hydrophila 55

Hình 4.9: Ếch bị lồi ruột trong nghiệm thức tiêm A hydrophila 56

Hình 4.10: Ếch có biểu hiện gan, thận bị mủ ở ngày thứ 6 sau khi tiêm A hydrophila 56

Hình 4.11: Phân lập và tái định danh vi khuẩn từ ếch trong thí nghiệm gây bệnh thực nghiệm bằng A hydrophila 57

Hình 4.12: Kết quả làm kháng sinh đồ trên các chủng vi khuẩn phân lập từ ếch bệnh 68

Hình 4.13: Mô thận ếch khỏe thu ở Quận 9 (H&E, X100) 70

Hình 4.14: Những biểu hiện mô bệnh học trên thận ếch (H&E, X100) 72

Hình 4.15: Mô thận ếch bị mủ ở nghiệm thức tiêm A hydrophila (H&E, X100) 73

Hình 4.16: Mô tỳ tạng ếch khỏe thu tại Thủ Đức (H&E, X100) 74

Hình 4.17: Những biểu hiện mô bệnh học trên tỳ tạng ếch (H&E, X100) 76

Hình 4.18: Mô cơ ếch khỏe (H&E, X100) 77

Hình 4.19: Những biểu hiện mô bệnh học trên cơ ếch (H&E, X100) 79

Hình 4.20: Mô gan ếch khỏe thu ở Thủ Đức (H&E, X100 80

Hình 4.21: Những biểu hiện mô bệnh học trên gan ếch (H&E, X100) 82

Hình 4.23: Những biểu hiện mô bệnh học trên tim ếch (H&E, X100) 85

Hình 4.24: Mô dạ dày ếch khỏe (H&E, X100) 86

Hình 4.25: Những biểu hiện mô bệnh học trên dạ dày ếch (H&E, X100) 87

DANH SÁCH CÁC BIỂU ĐỒ

Biểu đồ 4.1: Trình độ học vấn của các hộ nuôi 23

Biểu đồ 4.2: Số năm kinh nghiệm nuôi ếch của người dân 24

Biểu đồ 4.3: Loại thức ăn sử dụng cho ếch trong quá trình nuôi 28

Biểu đồ 4.4: Tỉ lệ sống của ếch khi thu hoạch 29

Biểu đồ 4.5: Tình hình bệnh ếch trong quá trình nuôi tại vùng ven đô Tp.HCM 31

Biểu đồ 4.6: Tỷ lệ cảm nhiễm trùng quả dưa (Ichthyophthyrius) trên da ếch nuôi 36

Biểu đồ 4.7: Cường độ cảm nhiễm trùng quả dưa (Ichthyophthyrius) trên da ếch 37

Biểu đồ 4.8: Tỷ lệ cảm nhiễm trùng bánh xe (Trichodina) trên da ếch nuôi 38

Biểu đồ 4.9: Cường độ cảm nhiễm trùng bánh xe (Trichodina) trên da ếch 38

Biểu đồ 4.10: Cường độ cảm nhiễm Balantidium trong ruột ếch 39

Biểu đồ 4.11: Cường độ cảm nhiễm Opalina trong ruột ếch 41

Biểu đồ 4.12: Hình thái của vi khuẩn phân lập từ ếch bệnh Đợt 1 (n=237) 43

Biểu đồ 4.13: Kết quả phân lập, định danh vi khuẩn từ ếch bệnh (bằng bộ test IDS 14 GNR, n=231) – Đợt 1 44

Biểu đồ 4.14: Kết quả phân lập vi khuẩn từ ếch (bằng bộ test API-20E, n=140) – Đợt 2 48

Biểu đồ 4.15: Phần trăm vi khuẩn kháng với mỗi loại kháng sinh 62

Biểu đồ 4.16: Phần trăm về tính đa kháng kháng sinh của vi khuẩn (n = 111) 69

CHƯƠNG I: GIỚI THIỆU

1.1 Đặt Vấn Đề

Những năm gần đây do sự suy giảm về số lượng ếch tự nhiên nên ếch Thái Lan

(Rana tigerina) đã trở thành đối tượng nuôi phổ biến tại Đài Loan, Brazil và một số

nước Đông Nam Á nhằm đáp ứng nhu cầu tiêu thụ nội địa và xuất khẩu Số lượng trại nuôi ếch đã gia tăng rất nhanh ở một số nước như Đài Loan, Brazil, Thái Lan và Indonesia trong hai thập kỷ qua Trong năm 1995, Thái Lan đã có trên 300 trại nuôi ếch với qui mô công nghiệp Ếch được nuôi trong bể xi măng với diện tích mỗi bể là 3x4x1,2m, mật độ nuôi 60 – 80 con/m2 (Lê Thanh Hùng, 2005) Theo Putsatee và ctv (1995), ếch Thái Lan có thể đạt trọng lượng 300 – 400g/con sau bốn đến năm tháng nuôi

Ếch Thái Lan được nhập vào Việt Nam để nuôi thử nghiệm tại Hóc Môn và Củ Chi vào năm 2003 và đạt hiệu quả kinh tế cao Với nhu cầu chuyển đổi cơ cấu nông nghiệp và đa dạng hóa đối tượng nuôi nên số lượng trại giống và nuôi thương phẩm đã tăng rất nhanh trong hai năm trở lại đây Tuy nhiên, do thiếu kinh nghiệm trong việc phòng và trị bệnh dẫn đến tình trạng ếch chết hàng loạt khi dịch bệnh xảy ra Theo kết quả điều tra của Khoa Thủy Sản – Đại Học Nông Lâm Tp.HCM (tháng 12/2005) tiến hành khảo sát trên 33 hộ nuôi ếch, 78,8% số hộ cho rằng sự hao hụt trong quá trình nuôi là do dịch bệnh, trong khi đó 21,2% số hộ cho rằng sự ăn nhau của ếch đã ảnh hưởng đến sản lượng ếch nuôi Các bệnh thường gặp là đỏ chân, lở loét, hoại tử ruột,

mù mắt và liệt Chúng được gọi tên dựa vào biểu hiện bên ngoài của ếch bệnh Hiện nay, chưa có nhiều tài liệu nghiên cứu về lĩnh vực này tại Việt Nam Vì thế chúng tôi

mong muốn thực hiện đề tài: “NGHIÊN CỨU NHỮNG BỆNH THƯỜNG GẶP

TRÊN ẾCH (RANA TIGERINA) NHẬP TỪ THÁI LAN NUÔI Ở VÙNG VEN

ĐÔ TP.HCM” với mục đích hiểu rõ sự ảnh hưởng của vi khuẩn và ký sinh trùng gây

bệnh trên ếch Thái Lan trong điều kiện nuôi tại vùng ven đô Tp.HCM Ngoài ra chúng tôi cũng sẽ khảo sát tình hình sử dụng kháng sinh trong việc trị bệnh đối với ếch nuôi

Sự thành công của đề tài sẽ góp phần giải quyết những khó khăn mà người dân đang gặp phải nhằm nâng cao năng suất sản xuất cũng như hạn chế những rủi ro có thể ảnh hưởng đến sức khỏe người tiêu dùng do việc sử dụng kháng sinh một cách phổ biến và

sự thiếu hiểu biết của người dân trong việc phòng và trị bệnh cho ếch

1.2 Mục Tiêu Đề Tài

Đề tài tập trung nghiên cứu những bệnh thường gặp trên ếch (R tigerina) nhập

từ Thái Lan được nuôi tại vùng ven đô Tp.HCM và sự kháng kháng sinh của vi khuẩn

đối với các loại kháng sinh chuyên dùng nhằm giúp người dân có thể kiểm soát được tình hình dịch bệnh, nâng cao năng suất trong quá trình nuôi Do đó, đề tài được tiến hành với những mục tiêu cụ thể như sau:

- Nắm được sự phân bố và chu kỳ bùng phát dịch của một số bệnh phổ biến trên ếch nhập từ Thái Lan và tình hình sử dụng kháng sinh, hóa chất phòng và trị bệnh ếch trong điều kiện nuôi tại vùng ven đô

- Xác định tác nhân gây bệnh của những bệnh thường gặp trên ếch trong quá trình nuôi thương phẩm

1.3 Nội Dung Nghiên Cứu

1 Khảo sát tình hình lưu hành bệnh trên ếch nhập từ Thái Lan trong điều kiện nuôi tại vùng ven đô

2 Khảo sát tình hình sử dụng kháng sinh, hóa chất phòng trị bệnh ếch trong điều kiện nuôi tại vùng ven đô

3 Xác định loại ký sinh trùng gây bệnh trên nòng nọc và ếch trưởng thành trong

điều kiện nuôi tại vùng ven đô

4 Xác định loại vi khuẩn gây bệnh lở loét, sình bụng và mù mắt trên ếch trong

điều kiện nuôi tại vùng ven đô

5 Thử nghiệm sự nhạy cảm của vi khuẩn phân lập được từ ếch bệnh đối với một

số loại kháng sinh chuyên dùng

6 Nghiên cứu bệnh tích vi thể mô ếch bệnh trong điều kiện nuôi tại vùng ven đô

CHƯƠNG II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1 Các Tác Nhân Gây Bệnh Trên Ếch

Virus, vi khuẩn, nấm và ký sinh trùng là những tác nhân gây bệnh trên ếch Trong đó vi khuẩn được xem là vấn đề nghiêm trọng nhất dẫn đến sự thiệt hại nặng về mặt tài chính cho người nuôi

2.1.1 Bệnh do vi khuẩn

Bệnh do vi khuẩn gây ra là một vấn đề nghiêm trọng đối với các trại sản xuất giống và nuôi ếch thương phẩm đặc biệt là ở các nước Ðông Nam Á Mặc dù các trại sản xuất giống và nuôi thương phẩm đã áp dụng rất nhiều phương pháp phòng và trị bệnh nhưng sự thiệt hại vẫn rất lớn Khi có dịch bệnh do nhiễm khuẩn xảy ra thì tỉ lệ chết của ếch có thể là 100% Có nhiều tài liệu nghiên cứu về tình hình bệnh ếch Thái

Lan (Rana tigerina) (Phanwichiaen và Chinabut, 1996, Pearson và ctv., 1997, Somsiri,

1997) Theo báo cáo của Viện Nghiên Cứu Sức Khỏe Ðộng Vật Thủy Sản - Thái Lan (AAHRI) năm 1997, 120 chủng vi khuẩn được phân lập từ ếch bình thường và ếch bệnh ở các trại ếch thuộc 8 tỉnh của Thái Lan Những loài vi khuẩn đã được xác định

chủ yếu là vi khuẩn Gram âm (-): Aeromonas hydrophila, A sobria, Flexibacter columnaris , Pseudomonas sp., Proteus sp., Serratia sp., Citrobacte sp., Achromobacter sp và Dipplococcus (Gram dương (+)) Một số bệnh thường xảy ra ở

ếch như lở loét, đỏ chân, liệt, quẹo cổ, mù mắt và hoại tử ruột

Bệnh đỏ chân

Khi ếch bị bệnh đỏ chân thì dấu hiệu lâm sàng cho thấy ếch giảm ăn, di chuyển chậm chạp, có những nốt đỏ trên thân, chân bị sưng và bị tụ huyết ở gốc đùi Dấu hiệu bên trong là xuất huyết ở hầu hết các nội tạng Máu và dịch vàng thường được tìm thấy trong khoang bụng

Aeromonas hydrophila được xem như nguyên nhân gây nên triệu chứng lở loét

và tỉ lệ chết rất cao đối với ếch trong điều kiện phòng thí nghiệm (Gibbs, 1973)

Nyman (1986) cũng phân lập được A hydrophila và A sobria từ những ếch bị đỏ

chân Theo nghiên cứu của Pearson và ctv (1997), khi bùng phát bệnh đỏ chân thì tỷ lệ chết của nòng nọc và ếch có thể lên đến 80 – 90% Theo kết quả thí nghiệm của

Somsiri và ctv (1997), khi gây cảm nhiễm ngược trên ếch R tigerina trong điều kiện nuôi tại Thái Lan với A hydrophila và A sobria thì triệu chứng lâm sàng trên ếch phù

hợp với biểu hiện bệnh ban đầu khi phân lập 2 loài vi khuẩn này Sự bộc phát nhiễm

trùng Aeromonas được kết hợp với nhiều yếu tố khác nhau: nhiệt độ thấp, cơ thể bị

thương, mật độ nuôi dày và do stress (Schotts và ctv, 1972) Theo kết quả thí nghiệm của Somsiri và ctv (1997), cũng cho thấy độ tuổi của nòng nọc hoặc ếch và nhiệt độ nước được xem là những yếu tố quan trọng quyết định mức độ nghiêm trọng của hội chứng đỏ chân

Chinabut và Phanwichien (1995b) xác định được LC37 96 giờ của vi khuẩn A

hydrophila gây bệnh trên ếch R tigerina là 2,54x106 tế bào/ml

Somsiri và ctv (1997) dùng A hydrophila và A sobria gây cảm nhiễm ngược

bằng phương pháp ngâm đối với nòng nọc ở giai đoạn 5, 10, 15, 20, 25 và 30 ngày tuổi trong 4 ngày Kết quả cho thấy nòng nọc bộc phát bệnh đối với các nồng độ vi khuẩn 1x106, 1x108, và 1x1010cfu/ml nhưng không chết

Somsiri cũng làm thí nghiệm đối với ếch trưởng thành ở 2 nhóm trọng lượng 25 – 30g và 120 – 150g Ðối với những ếch được gây vết thương nhân tạo trước khi thử nghiệm bằng phương pháp ngâm bị nhiễm bệnh và chết đối với nồng độ vi khuẩn 1x102 và 1x104 cfu/ml ở 20oC Trong khi nhóm ếch không gây vết thương nhân tạo thì

có biểu hiện bệnh đối với 2 nồng độ vi khuẩn trên nhưng không xảy ra hiện tượng chết

Bảng 2.1: Liều gây chết LD50 do Aeromonas spp được tiêm vào màng bụng của ếch

Thái Lan

LD50 (số vi khuẩn/ml) Loại vi khuẩn Kích cỡ ếch thí

Trong thí nghiệm xác định liều LD50 này thì 12 giờ sau khi tiêm vi khuẩn vào

cơ thể ếch bộc lộ những dấu hiệu bệnh và chết Những ếch sống sót sau 96 giờ thí nghiệm có dấu hiệu phục hồi

Ðiều trị: Giảm khẩu phần thức ăn, trộn oxytetracyline vào thức ăn cho ếch ăn liên tục trong 7 – 14 ngày với liều dùng 3 – 5g/kg thức ăn/ngày (Somsiri, 1994)

Ðiều trị: Dùng thuốc tổ hợp vitamin B đa chủng loại (vitamin B complex) trộn với thức ăn cho ăn trong vòng 1 – 2 tuần với liều dùng 1g/kg thức ăn/ngày

Bệnh hoại tử ruột

Ở ếch bệnh thì bụng bị trương phồng, giảm ăn và thiếu vận động Ruột phình

to, chứa nhiều dịch lỏng và thức ăn không tiêu hóa được, ruột sau lồi ra ngoài (Chinabut và ctv, 1995a) Nguyên nhân gây bệnh vẫn chưa xác định được

Ðiều trị: ngưng cho ăn trong vòng 3 – 5 ngày, thay nước Dùng oxytetracycline trộn vào thức ăn với tỷ lệ 3 – 5g/kg thức ăn/ngày cho ăn liên tục trong vòng 7 ngày

Khi nòng nọc bị nhiễm trùng bánh xe thì trên cơ thể xuất hiện lớp màng nhầy

mờ đục và có nhiều điểm xuất huyết Trong trường hợp bệnh nặng nòng nọc có hiện tượng hoại tử ở mang và vây Nếu không có biện pháp chữa trị thích hợp thì tỉ lệ chết

là 100% trong vòng 5 – 7 ngày

Ðiều trị: dùng formalin với nồng độ 25 – 30ppm liên tục trong 3 ngày

Bệnh do trùng lông tơ và trùng lông roi

Khi ếch bị nhiễm bệnh thường có triệu chứng kém ăn, ống tiêu hóa phình to

Nhóm trùng lông tơ (Opalina sp., Protoopalina sp., Balantidium sp., Tritrichomonas sp., Nyctotherus cordiformis) thường được tìm thấy trong ống tiêu hóa của nòng nọc

và ếch bệnh Sự thiệt hại do bệnh này không đáng kể

Nòng nọc bị nhiễm trùng lông roi (Oodinium sp., Amyloodinium sp.) thường có

biểu hiện xoay tròn, bơi nghiêng một bên Tỉ lệ chết có thể lên đến 80% trong vòng 24 giờ kể từ lúc nhiễm bệnh

2.1.3 Bệnh do virus

Bệnh lở loét

Ðối với bệnh lở loét, ếch bị lở loét trên thân và chân Bệnh được quan sát thấy lần đầu tiên vào năm 1998 trên ếch nuôi ở các trại tại Bangkok (tháng giêng), Nonthaburi (tháng bảy), Pathumthani (tháng bảy), Ayuthaya (tháng tám), Singburi (tháng tám), Nakonnayok (tháng mười) và tỉnh Angthong (tháng mười một) Vết loét

có thể ăn sâu và làm mất đi vùng miệng, mũi của một số ếch bệnh Tỷ lệ chết được ghi

nhận từ 20 – 50% trong các ao nuôi xảy ra dịch bệnh (Kanchanakhan, 1998) Không

có bất kỳ loại vi khuẩn nào được phân lập từ thận, lách và gan trong suốt thời kỳ đầu của bệnh Nếu bệnh xảy ra một thời gian dài và vết loét bị nhiễm bởi các vi khuẩn thông thường thì tỷ lệ chết có thể lên đến 95% 37 chủng virus phân lập được từ 60 ếch bệnh bằng phương pháp sử dụng tế bào EPC (Epithelioma Papulosum Cyprini) 1 lớp của cá Virus được tìm thấy thuộc họ Iridoviridae Theo Somkiat Kanchanakhan (1998), đây là virus đầu tiên được phân lập từ ếch bệnh tại Thái Lan và được đặt tên Tiger Frog Iridovirus (TFIV) Trước đó, virus này cũng được tìm thấy trên ếch bệnh và ếch bình thường tại Anh Quốc (Cunningham và ctv, 1993); tại Bắc Mỹ (Granoff và ctv, 1965; Wolf và ctv, 1968); tại Croatia (Fijan và ctv, 1991); tại Venezuela (Zupanovic và ctv, 1998) Ðây là loại virus có độc tính thấp và khó gây bệnh thực nghiệm trong điều kiện thí nghiệm

Ranavirus

Ranavirus là một giống thuộc họ virus Iridoviridae Theo Speare và ctv (2001), virus này có khả năng gây chết hàng loạt trên ếch Hầu hết Ranavirus gây ra hoại tử các mô và được phân lập dưới phần da bị lở loét (Hyatt và ctv 2000)

Virus gây bệnh trên ếch Erythrocytic

Frog Erythrocytic Virus (FEV) được phát hiện ở những loài ếch hoang dã Rana spp ở Algonquin Park, Ontario Canada (Gruia-Gray và Desser, 1992) Ðây là loài virus thuộc họ Iridoviridae và thường hiện diện trong các tế bào máu Ruồi, muỗi là ký chủ trung gian truyền bệnh cho ếch Virus này không không truyền qua môi trường nước, đường thức ăn cũng như đĩa Khi ếch bị nhiễm FEV các tế bào máu sẽ bị thay

đổi hình dạng từ bầu dục chuyển sang hình cầu, da tái xanh và thiếu máu

Virus gây bệnh mụn giộp Lucké

Theo McKinnell và Carlson (1997) Lucké tumor herpesvirus (LTHV) chỉ tìm

thấy trên loài ếch da beo Rana pipiens, ở Mỹ Theo nghiên cứu gần đây của Davison

và ctv (1999) thì LTHV cũng được xem như là Rana herpesvirus 1 (RaHV-1)

RaHV được xem là thành viên của họ virus Herpesviridae Nghiên cứu gen nhận thấy rằng RaHV-1 thuộc giống virus thường gây ra bệnh mụn giộp trên cá Virus

này kích thích hoạt động tuyến trên thận của loài R pipiens ở Mỹ Bệnh được mô tả

vào năm 1934 (Lucké, 1934) và lan truyền trong tự nhiên, được công nhận vào năm

1938 (Lucké, 1938a, 1938b)

Dấu hiệu biểu hiện của bệnh là da bị mụn giộp, hôn mê và chết Bệnh xảy khi quan sát thấy những khối u lớn lên và di căn (Anver và Pond, 1984) Những u trắng nhỏ ít hoặc nhiều xuất hiện trên thận và phát triển thành những khối lớn

Virus Herpes (Loại virus gây bệnh trên da giống loại Herpes)

Ở Italia, có trên 80% loài R dalmatina hoang dã bị giộp lớp biểu bì kết hợp với virus tương tự như virus gây bệnh herpes nhưng không gây chết ếch (Bennati và ctv., 1994)

Virus Leucocyte (virus gây bệnh trên bạch cầu)

Là loại virus có DNA hình đa diện nằm trong tế bào chất Virus này được tìm

thấy trong tế bào chất của tế bào máu trắng của ếch bệnh R catesbiana Khi bị nhiễm

bệnh, ếch thường có dấu hiệu hôn mê, vết thương nhỏ bị rỉ dịch (Briggs và Burton, 1973)

2.2 Một Số Công Trình Nghiên Cứu Về Việc Phòng Và Trị Bệnh Trên Ếch

Viện Nghiên Cứu Sức Khỏe Ðộng Vật Thủy Sản (AAHRI), Thái Lan đã phối hợp với Viện Nuôi Trồng Thủy Sản - Trường Ðại Học Stirling, Anh Quốc thực hiện nhiều nghiên cứu về lĩnh vực này Trong nghiên cứu của Somsiri và ctv (1995), cho

thấy Oxytetracycline có sức kháng khuẩn cao đối với vi khuẩn Aeromonas sp Somsiri

và ctv (1997) cũng đã tiến hành nghiên cứu sự ảnh hưởng của Oxytetracycline lên ếch Thái Lan Kết quả cho thấy nếu sử dụng Oxytetracycline để trị bệnh cho ếch trong thời gian dài sẽ ảnh hưởng đến sự thay đổi cấu trúc mô bào của nòng nọc và ếch trưởng thành

2.3 Sự Nhạy Cảm Của Vi Khuẩn Đối Với Các Loại Kháng Sinh

Trong nuôi trồng thủy sản, người dân đã áp dụng nhiều hình thức nuôi thâm canh, tận dụng nguồn tài nguyên một cách triệt để dẫn đến tình trạng ô nhiễm và dịch bệnh không thể kiểm soát được Nhằm nâng cao năng suất và đạt hiệu quả kinh tế cao người dân đã sử dụng thuốc kháng sinh một cách bừa bãi trong việc phòng và trị bệnh

do vi khuẩn gây ra trên vật nuôi Do việc sử dụng không đúng cách và kết hợp nhiều loại kháng sinh nên đã dẫn đến hiện tượng vi khuẩn kháng thuốc và tích tụ dư lượng kháng sinh trong thịt của động vật thủy sản Ðiều này có thể dẫn đến tình trạng gây

độc, biến đổi hệ vi khuẩn của người và làm cho người tiêu thụ bị kháng thuốc thông qua chuỗi thức ăn

2.3.1 Các loại kháng sinh thông dụng nhất trong nuôi trồng thủy sản

a/ Nhóm Sulfonamid:

Bao gồm các tác nhân kháng khuẩn có tác dụng kìm hãm hoạt động của axit folic và có thể hình thành hiện tượng hiệp trợ Các kháng sinh nhóm Sulfonamid kết hợp với trimethoprim được sử dụng rộng rãi trong nuôi trồng thủy sản

b/ Nhóm Oxytetracycline:

Có phổ kháng khuẩn rộng giống Aureomycin

o Ở nồng độ thấp có khả năng kìm hãm vi khuẩn có trong tự nhiên, nhưng dùng nồng độ cao có thể diệt khuẩn Oxytetracycline hấp thu vào cơ thể nhanh Kháng sinh này làm ảnh hưởng đến quá trình tổng hợp protein trong vi khuẩn Gram âm (-) và

vi khuẩn Gram dương (+)

o Oxytetracycline được dùng để phòng trị các bệnh nhiễm khuẩn Vibrio như bệnh phát sáng, bệnh đỏ dọc thân của ấu trùng, bệnh đỏ thân, bệnh ăn mòn vỏ kitin, bệnh đốm nâu của tôm càng xanh, bệnh đường ruột, bệnh hoại tử phụ bộ của tôm sú , bệnh nhiễm trùng máu và xuất huyết của cá tra, basa, cá trắm cỏ

c/ Nhóm Erythromycin:

Có 6 dẫn xuất: Erythromycin Base, Erythromycin Estolate, Erythromycin Ethylsuccinate, Erythromycin Gluceptate, Erythromycin Lactobionate, Erythromycin Stearate

o Erythromycin là kháng sinh phổ rộng, ngăn cản sự tổng hợp protein ở Riboxom trong tế bào vi khuẩn Erythromycin có phổ như Penicillin, tác dụng mạnh với vi khuẩn Gram dương, một số vi khuẩn Gram âm cũng có tác dụng, ngoài ra còn tác dụng với nhóm vi sinh vật Clamidia

o Trong nuôi thủy sản, Erythromycin có thể được dùng để trị bệnh phát sáng, bệnh đỏ dọc thân của ấu trùng tôm sú, bệnh đỏ thân, bệnh ăn mòn vỏ kitin, bệnh đốm nâu ở tôm càng xanh do vi khuẩn gây ra

Trên thị trường thuốc thú y thủy sản, còn có nhiều loài thuốc kháng sinh khác nhau thường là hỗn hợp của 2 – 3 loại kháng sinh với các tỷ lệ phối hợp khác nhau tạo nên các loại thuốc có tên thương mại mới

2.3.2 Hiện tượng kháng thuốc của một số loài vi khuẩn gây bệnh ở động vật thủy sản

Năm 1995, Somsiri tiến hành nghiên cứu sự nhạy cảm đối với kháng sinh của vi

khuẩn trên cá trê lai (Clarias macrocephalus x Clarias gariepinus), cá lóc (Channa striata ), ếch (Rana tigerina) và tôm (Penaeus monodon) ở Thái Lan cho thấy hầu hết các dòng vi khuẩn A hyphophila đều có biểu hiện kháng với kháng sinh Oxytetracycline, Erythromycine và Sulphadiazine, còn vi khuẩn Vibrio spp lại kháng

với các loại kháng sinh Oxytetracycline, Erythromycine và Bactrime (Trimethoprim + Sulfamethoxazole)

Việt Nam (Pangasius hypophthalamus) với 18 loại kháng sinh của Zilong Tan và Võ

Hoàng Nguyên (2004) cho kết quả như sau:

+ Có 12/14 chủng vi khuẩn nhạy cảm với Neomycin, Amoxicyline, Gentamycin, Kanamycin, Pefloxacin, Nofloxacin, Rifampicine; 12/14 chủng nhạy cảm với Flumequine; 11/14 chủng nhạy cảm với Ampicillin và 11/14 chủng nhạy cảm với Tetracyclin

+ 13/14 chủng vi khuẩn kháng với Penicillin G, Erythomycin, Oxacilline, 13/14 chủng kháng với Lincomycin, 12/14 chủng kháng với Trimethoprim + Sulfamethoxazole, Oxytetracycline và Sulphadimethoxine-ormetoprim

Theo kết quả nghiên cứu của Nguyễn Hoàng Nam Kha và ctv (2005) phần lớn

vi khuẩn trên cá tra nuôi tại An Giang và Ðồng Tháp kháng với phần lớn kháng sinh thử nghiệm như Ampicilline, Chloramphenicol, Nitrofuranes, Tetracycline, Trimethoprim + Sulfamethoxazole, Nalidicic axit, Streptomycine, Oxolinic axit, Flumequine và trên 60% vi khuẩn thể hiện tính đa kháng, kháng ít nhất với cả 2 loại kháng sinh, trong đó có một số trường hợp vi khuẩn thể hiện tính kháng với cả 11 loại kháng sinh thử nghiệm

CHƯƠNG III: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 Thời Gian Và Địa Điểm

- Thời gian: Đề tài được thực hiện từ tháng 01/2007 đến tháng 06/2008

- Địa điểm:

o Đề tài được tiến hành điều tra trên địa bàn huyện Hóc Môn, Củ Chi, Quận 9

và Quận Thủ Đức để thu thập thông tin và số liệu về các bệnh phổ biến trên ếch nuôi cũng như tình hình sử dụng thuốc, hóa chất trong việc phòng trị bệnh ếch tại các hộ nuôi

o Trại Thực Nghiệm và phòng thí nghiệm Bệnh Học Thủy Sản, Khoa Thủy Sản, Đại Học Nông Lâm Tp.HCM

Đĩa petri, ống nghiệm, ống giữ giống, cốc đong, lam kính, lamel, kính hiển vi,

bể kính, kính hiển vi…

3.2.1.2 Hóa chất

Môi trường tăng sinh: BHIA (Brain Heart Infusion Agar), NA (Nutrient Agar), TSA (Tryptone Soya Agar)

Môi trường đếm vi khuẩn hiếu khí: PCA (Plate Count Agar)

Môi trường nuôi cấy chuyên biệt: MC (MacConkey)

Môi trường thử nghiệm kháng sinh đồ: MHA (Mueller Hinton Agar)

Môi trường dinh dưỡng để giữ giống: NB (Nutrient Broth)

Môi trường test sinh hóa: bộ test IDS 14GNR, bộ test API-20E, thuốc thử test sinh hóa, cồn, H2O2, đĩa giấy oxydase, đĩa giấy tẩm kháng sinh, thuốc nhuộm Gram (Crystal violet, Iodine, Acetone, Fushin)…

Nước muối sinh lý, dung dịch H2SO4 1% và BaCl2 1%

Hóa chất nhuộm ký sinh trùng: Carmine (Merck Kga – Germany)

3.2.2 Dụng cụ và hóa chất để nghiên cứu mô học

3.2.2.2 Hóa chất

Dung dịch Bouin, Chloroform, Paraffin, Xylen, thuốc nhuộm Hematoxylin, Eosin, keo dán (Baume Canada), dung dịch 3% PAF + 4% GA trong Cacodylate 0,2M, dung dịch Paraformaldehyde 15%, acid Tannic 1% Thuốc nhuộm Uranyl Acetate (analyticalgrade) 5%, Plomb Nitrate

3.3 Phương Pháp Nghiên Cứu

3.3.1 Nội dung 1: Khảo sát các bệnh thường gặp trên ếch (R tigerina) nhập từ

Thái Lan nuôi tại vùng ven đô Tp.HCM và tình hình sử dụng thuốc, hóa chất trong việc phòng, trị bệnh

3.3.1.1 Phương pháp thu thập thông tin và số liệu

- Số liệu thứ cấp: Các số liệu được thu thập từ các cơ quan có liên quan như:

Sở Nông nghiệp và Phát Triển Nông Thôn, Chi Cục Bảo Vệ Nguồn Lợi Thủy Sản, Cục Thống Kê, Trung Tâm Khuyến Nông để xác định số lượng và vị trí của các hộ nuôi ếch tại khu vực điều tra

- Số liệu sơ cấp: được thu thập bằng phương pháp điều tra phỏng vấn trực tiếp

và có sử dụng bảng điều tra với 48 hộ sản xuất giống ếch và nuôi thương phẩm tại Quận 9, Củ Chi, Hóc Môn, Thủ Ðức Nội dung chính của bảng câu hỏi bao gồm: Các

đặc điểm chung của nghề nuôi tại nông hộ; Loại thức ăn sử dụng và cách thức cho ăn; Nguồn nước và cách xử lý nguồn nước; Các dịch bệnh thường xảy ra trong quá trình nuôi (tập trung chủ yếu vào các bệnh: lở loét, đỏ chân, hoại tử ruột, mù mắt và quẹo cổ); Mùa vụ xảy ra dịch bệnh, kích cỡ ếch dễ bị nhiễm bệnh; Tình trạng chết của ếch

khi dịch bệnh xảy ra; Thuốc và phương pháp phòng trị bệnh của trại sản xuất; Hiệu quả của các loại thuốc đang được sử dụng; và các thông tin khác cũng cần được thu thập đầy đủ

3.3.1.2 Phương pháp phân tích và đánh giá

Các thông tin thu thập sau quá trình điều tra được phân tích và xử lý bằng phần mềm MS Excel Từ đó, phân tích các yếu tố ảnh hưởng đến năng suất ếch nuôi tại các nông hộ ở vùng ven đô Tp.HCM

3.3.2 Nội dung 2: Xác định loại ký sinh trùng gây bệnh trên nòng nọc và ếch

trưởng thành trong điều kiện nuôi tại vùng ven đô

3.3.2.1 Thu mẫu ếch

Mẫu nòng nọc, ếch có trọng lượng 3 – 30g, 30 – 80g, >80g được thu ngẫu nhiên tại các trại nuôi ếch trong vùng nghiên cứu để xác định các nhóm ký sinh trùng gây bệnh trên ếch như trùng bánh xe, nhóm trùng lông tơ và lông roi Mẫu thu phải còn sống

3.3.2.2 Thu mẫu ký sinh trùng

Đặt ếch lên khay inox, quan sát hình thái bên ngoài, quan sát các biểu hiện bên ngoài như xuất huyết, lở loét hay có đốm trắng để chẩn đoán sơ bộ bệnh của ếch Tiến hành hủy não ếch

Dùng dao cạo lớp mỏng trên các vết thương Sau đó dùng lamelle gạt nhẹ lớp nhớt, nhầy vừa lấy được lên lame, nhỏ từ 1 đến 2 giọt nước muối sinh lý lên, dùng lamelle dàn mỏng lớp nhớt, nhầy đó đều khắp lame, quan sát dưới kính hiển vi để tìm

ký sinh trùng

Dùng pipette Pasteur hút ký sinh trùng sang một lame khác có chứa nước muối sinh lý, thao tác này được lặp lại nhiều lần cho đến khi ký sinh trùng sạch nhớt Sau đó

đặt lammelle lên và quan sát dưới kính hiển vi ở độ phóng đại 10X, 40X

3.3.2.3 Phương pháp cố định mẫu soi tươi

Nhỏ ammonia 1% lên ký sinh trùng sống đã được làm sạch để trùng duỗi ra,

đậy lammelle lên và quan sát hình thái dưới kính hiển vi

3.3.2.4 Nhuộm mẫu ký sinh trùng bằng Carmine

Nước trên lame có chứa ký sinh trùng được rút bớt ra, dùng lammelle ép nhẹ để

ký sinh trùng duỗi thẳng Nhuộm Carmine đến khi thấy ký sinh trùng có sự bắt màu rõ

Nhỏ Gelatin – Glycerin lên lame để giữ mẫu, đậy lammelle và gắn bằng Baume Canada

- Cường độ cảm nhiễm: số lượng ký sinh trùng/lame

3.3.3 Nội dung 3: Xác định loại vi khuẩn gây bệnh lở loét, sình bụng và mù mắt

trên ếch (R tigerina) nhập từ Thái Lan trong điều kiện nuôi tại vùng ven đô 3.3.3.1 Phân lập và định danh vi khuẩn từ ếch bệnh tại các hộ nuôi ở vùng ven đô

Tp.HCM

Thu mẫu: Mẫu ếch bệnh lở loét, sình bụng, mù mắt và mẫu nước được thu từ các trại sản xuất trong phạm vi nghiên cứu Triệu chứng ếch bệnh và điều kiện môi trường nước được ghi nhận một cách đầy đủ trong khi thu mẫu

Sau khi kiểm tra hình thái bên ngoài của ếch thì tiến hành mổ và quan sát bên trong cơ thể ếch:

- Trước khi giải phẫu ếch phải tiến hành khử trùng bề mặt da ếch bằng cồn 70o

- Sau đó thực hiện các thao tác giải phẫu: Đầu tiên hủy tủy sống ếch bằng cách dùng kim đâm vào giữa khớp xương sọ và cột sống Dùng kéo cắt một chỗ nhỏ tiếp giáp 2 chân sau, luồn kéo cắt thẳng tới cổ, sau đó cắt ra 2 chi trước và 2 chi sau Tháo

da ra 2 bên sẽ thấy cơ ngực và cơ bụng có hình tam giác Cắt cơ theo chu vi hình tam giác này, cắt ngang khớp giữa xương cánh tay và đai vai, nối 2 đường cắt này

- Quan sát trạng thái của các nội quan xem có biểu hiện khác thường so với ếch khỏe không

Hình 3.1: Mổ và quan sát nội tạng của ếch Phương pháp xác định vi khuẩn gây bệnh:

- Lấy mẫu vi khuẩn từ da, vết lở loét, mắt, máu tim, thận, gan, lách và ruột từ ếch bệnh thu được tại các trại sản xuất giống và nuôi thương phẩm;

- Tiến hành định danh vi khuẩn dựa trên các phản ứng sinh hóa bằng bộ test IDS 14GNR của công ty Nam Khoa đối với các chủng vi khuẩn thu Đợt 1 và bộ kit API-20E (BioMerieux, Pháp) đối với các chủng vi khuẩn thu Đợt 2 và theo khóa phân loại của Bergey So sánh với kết quả nghiên cứu của Thái Lan

Giữ giống trong môi trường NB (Nutrient Broth) có bổ sung 50% glycerol ở nhiệt độ -20oC

Hình 3.2: Sơ đồ phân lập và định danh vi khuẩn từ ếch bệnh

3.3.3.2 Gây bệnh thực nghiệm trên ếch bằng Vibrio metschnikovii, Pseudomonas

cepacia, Xanthomonas malthophila, Aeromonas hydrophila phân lập từ ếch bệnh lở loét

Những dịng vi khuẩn được chọn để gây bệnh thực nghiệm vì chúng cĩ tần suất xuất hiện khá cao trong quá trình phân lập vi khuẩn từ ếch bệnh nuơi ở vùng ven đơ Tp.HCM

a/ Gây cảm nhiễm bằng phương pháp tiêm với dịng vi khuẩn V metschnikovii, P cepacia, X malthophila phân lập từ ếch bị lở loét:

- Ếch giống khỏe mạnh cĩ trọng lượng trung bình từ 25 – 35g Ếch được bố trí trong bể kính cĩ thể tích 40x30x35cm với mật độ 10 con/bể Ếch được cho ăn bằng thức ăn viên cĩ 30% đạm với lượng thỏa mãn

- Nguồn nước thí nghiệm là nước máy đã được xử lý bằng chlorine

- Vi khuẩn thí nghiệm: Phân lập cho thí nghiệm là 3 dịng vi khuẩn V metschnikovii, P cepacia, X malthophila từ ếch bị lở loét cơ quan nội tạng (gan, thận,

tỳ tạng) bị đốm mủ màu trắng Các vi khuẩn này được định danh bằng bộ định danh IDS 14GNR của cơng ty Nam Khoa

- Thời gian thí nghiệm là 14 ngày

Vị trí lấy mẫu

bệnh Phân lập, làm thuần

Nhuộm Gram

- Đối với mỗi loại vi khuẩn thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên với 4 nghiệm thức và 3 lần lặp lại:

+ Nghiệm thức 1: Đối chứng tiêm nước muối sinh lý + Nghiệm thức 2: 1x102 cfu/ml

+ Nghiệm thức 3: 1x104 cfu/ml + Nghiệm thức 4: 1x106 cfu/ml Gây bệnh bằng cách tiêm vào đùi ếch với thể tích huyền dịch vi khuẩn không quá 0,2ml/cá thể Lô đối chứng: ếch được tiêm nước muối sinh lý với thể tích tương ứng Mỗi ngày tiến hành kiểm tra và ghi nhận những biểu hiện bất thường như ếch bỏ

ăn, xuất hiện dấu hiệu bệnh tích, số lượng ếch bệnh và chết Phân lập, tái định danh vi khuẩn từ ếch bệnh và toàn bộ ếch sau thời gian kết thúc thí nghiệm

b/ Gây cảm nhiễm bằng phương pháp tiêm với dòng vi khuẩn A hydrophila phân lập

từ ếch bị lở loét:

- Ếch giống khỏe mạnh có trọng lượng trung bình từ 18 - 25g Ếch được bố trí trong bể kính có thể tích 40x30x35cm với mật độ 10 con/bể Ếch được cho ăn bằng thức ăn viên có 30% đạm với lượng thỏa mãn

- Nguồn nước thí nghiệm là nước máy đã được xử lý bằng chlorine

- Thời gian thí nghiệm là 14 ngày

- Vi khuẩn thí nghiệm: Phân lập cho thí nghiệm là dòng vi khuẩn A hydrophila

từ ếch bị lở loét và cơ quan nội tạng (gan, thận, tỳ tạng) bị đốm mủ màu trắng Vi khuẩn này được định danh bằng bộ định danh API-20E (BioMerieux, Pháp)

- Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên với 4 nghiệm thức và 3 lần lặp lại:

+ Nghiệm thức 1: Đối chứng tiêm nước muối sinh lý + Nghiệm thức 2: 9x106 cfu/ml

+ Nghiệm thức 3: 9x107 cfu/ml + Nghiệm thức 4: 9x108 cfu/ml

Gây bệnh bằng cách tiêm vào đùi ếch với thể tích huyền dịch vi khuẩn không quá 0,2ml/cá thể Lô đối chứng: ếch được tiêm nước muối sinh lý với thể tích tương ứng Mỗi ngày tiến hành kiểm tra và ghi nhận triệu chứng, số lượng ếch bệnh và chết Phân lập, tái định danh vi khuẩn từ ếch bệnh và toàn bộ ếch sau thời gian kết thúc thí nghiệm

Hình 3.3: Sơ đồ gây bệnh thực nghiệm trên ếch

Hình 3.4: Bể bố trí thí nghiệm gây bệnh thực nghiệm

3.3.4 Nội dung 4: Thử nghiệm sự nhạy cảm của vi khuẩn phân lập được từ ếch bệnh đối với một số loại kháng sinh chuyên dùng

Việc thử nghiệm được áp dụng theo phương pháp đĩa giấy Kirby – Bauer hay còn gọi là phương pháp khuếch tán kháng sinh trên thạch Các loại kháng sinh được sử dụng bao gồm: Ampicillin (Am), Amoxyline (Ax), Bactrime (Sulfamethoxazone/Trimethoprim) (Bt), Neomycin (Neo), Streptomycin (Sm), Norfloxacin (Nr) dựa trên kết quả điều tra tình hình sử dụng kháng sinh trong việc phòng trị bệnh trên ếch của người dân tại vùng ven đô mà chúng tôi sẽ thực hiện ở phần đầu tiên trong quá trình nghiên cứu

+ Sơ đồ thực hiện kháng sinh đồ (Nguồn: Trần Mai Hải Yến, 2005)

đem lắc đều Mật độ vi khuẩn trong huyền dịch phải có độ đục tương đương với độ

đục của ống chuẩn McFarland 0,5 (108 cfu/mL) tương đương với mật độ quang (OD) 0,125 ở bước sóng λ = 550 nm

4mL nước muối sinh lý

Môi trường

Mueller-Hinton

2 mL

Ủ 30 o C, 20 – 24 giờ Lắc đều

2mL

Huyền dịch vi khuẩn tiếp tục được pha loãng 100 lần và cho vào 2 đĩa môi môi trường Mueller-Hinton (MH) với lượng 2mL/đĩa Sau khi cho huyền dịch vi khuẩn vào tráng đều vi khuẩn trong đĩa, đổ bỏ huyền dịch còn dư và tiến hành gắn đĩa kháng sinh

Ủ trong tủ ấm ở nhiệt độ 30oC trong vòng 20-24 giờ

Tiến hành đo đường kính vòng kháng khuẩn (mm), kết luận tính kháng, trung gian hay nhạy cảm của vi khuẩn đối với các loại kháng sinh sử dụng

3.3.5 Nội dung 5: Nghiên cứu bệnh tích vi thể mô ếch bệnh

Thí nghiệm nhằm so sánh sự biến đổi cấu trúc mô giữa ếch khỏe và ếch bệnh Mẫu mô được thực hiện trên ếch khỏe và ếch bệnh thu từ các trại nuôi ở vùng ven đô Tp.HCM Bên cạnh đó, chúng tôi cũng tiến hành thu mẫu ếch ở thí nghiệm gây bệnh

thực nghiệm bằng vi khuẩn A hydrophila để theo dõi sự biến đổi cấu trúc mô sau khi

tiêm vi khuẩn và so sánh với mẫu mô ếch bệnh thu ngoài thực địa

Mẫu được lấy ở các cơ quan: mắt, tim, gan, thận, tỳ tạng, ruột, da và cơ thịt ếch Khi thu mẫu ghi rõ địa điểm, thời gian, bệnh tích, biểu hiện lâm sàng và kích cỡ của ếch được thu Cách lấy mẫu như sau:

- Mắt, tỳ tạng, tim: dùng kéo cắt và lấy nguyên tỳ tạng

- Gan, thận, cơ thịt : dùng dao bén cắt dứt khoát lưỡi dao thẳng góc với bề mặt

cơ quan, diện tích mẫu cắt khoảng 2cm2, độ dày 1cm

Mẫu ếch thu phải còn sống và được cố định trong dung dịch Bouin, qua các giai

đoạn xử lý, đúc mẫu trong paraffin, sau đó cắt bằng máy microtome, lát cắt dày khoảng 5 µm, dán lên lame và tiến hành nhuộm H&E Sau khi nhuộm, dán lamelle và tiến hành đọc tiêu bản dưới kính hiển vi

+ Quy trình loại nước, tẩm xylen và paraffin:

+ Quy trình nhuộm mẫu (Harris’s Haematoxylin & Eosin)

3.4 Phương Pháp Xử Lý Số Liệu

Số liệu về tỷ lệ sống được thu thập và phân tích thống kê theo trắc nghiệm DUNCAN với độ tin cậy 95% để tìm sự khác biệt có ý nghĩa thống kê giữa các nghiệm thức

5 phút

Haematoxylin

1 phút Rửa nước5 phút , Cồn 70

o ,

o ,

o ,

5 phút

Xylen 2 ,

5 phút Dán keo Canada

CHƯƠNG IV: KẾT QUẢ & THẢO LUẬN

4.1 Nội Dung 1: Khảo Sát Các Bệnh Thường Gặp Trên Ếch (R tigerina) Nhập

Từ Thái Lan Nuôi Tại Vùng Ven Đô Tp.HCM Và Tình Hình Sử Dụng Thuốc, Hóa Chất Trong Việc Phòng, Trị Bệnh

4.1.1 Hoạt động nuôi ếch ở vùng ven đô Tp.HCM

Kết quả điều tra cho thấy số hộ nuôi ếch tại huyện Củ Chi năm 2007 chiếm 66,67% (32 hộ) số hộ được phỏng vấn (Bảng 4.1), kế đến là Hóc Môn (10 hộ) chiếm 20,83%, Quận 9 (6 hộ) chiếm 12,50% So với số liệu của Trung Tâm Khuyến Nông Tp.HCM năm 2005 thì số hộ nuôi trên địa bàn huyện Củ Chi đã giảm đi rất nhiều từ

89 hộ xuống còn 32 hộ tại thời điểm điều tra Các hộ nuôi cho biết tình hình ếch bệnh gây thiệt hại về mặt kinh tế là nguyên nhân chính dẫn đến việc tạm ngưng hoạt động Bên cạnh đó, người nuôi cũng không tìm thấy được thị trường tiêu thụ tốt cho đàn ếch nuôi

Hình 4.1: Khu vực điều tra tình hình dịch bệnh trên ếch

Bảng 4.1: Vị trí địa lý của các hộ điều tra

so với 83,33% là nam giới (Bảng 4.2) Đây có thể xem là hoạt động giúp người phụ nữ kiếm thêm thu nhập mà vẫn thực hiện tốt vai trò nội trợ trong gia đình

Bảng 4.2: Sự phân bố lao động nữ trong hoạt động nuôi ếch

10,42

52,08 25,00

2,08

10,42

Cấp 1 Cấp 2 Cấp 3 Trung cấp

Đại học

Tỷ lệ (% )

Biểu đồ 4.1: Trình độ học vấn của các hộ nuôi

Trong 48 hộ điều tra đa số các hộ nuôi đều là chủ sở hữu đất chiếm 93,75% còn lại là đất thuê chiếm 6,25% (Bảng 4.3) Đối với những hộ thuê đất là do mở rộng quy

mô sản xuất kết hợp với việc hình thành trại sản xuất giống cung cấp con giống cho các hộ nuôi trong vùng cũng như một số tỉnh miền tây

hộ chọn nghề nuôi ếch vì lý do muốn tăng thêm thu nhập, 6,25% số hộ chuyển đổi cơ cấu nông nghiệp sau những lần thiệt hại do dịch cúm gia cầm, chỉ có 4,17% số hộ điều tra nuôi ếch để làm thực phẩm cho gia đình

2,08

87,51

8,33

2,08 0

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tỷ lệ (% )

< 1 năm 1-3 năm 4-5 năm > 5 năm

Biểu đồ 4.2: Số năm kinh nghiệm nuôi ếch của người dân Bảng 4.4: Lý do nuôi ếch

Để tiến hành nuôi loại ếch này người dân cũng tìm tòi, học hỏi qua rất nhiều nguồn thông tin khác nhau Khoảng 31,25% số hộ được phỏng vấn biết được thông tin

về nuôi ếch thông qua những người trong gia đình và bạn bè, 18,75% số hộ học hỏi từ những người nuôi trước, 43,75% số hộ tiếp nhận thông tin qua cán bộ khuyến nông địa phương và 20,83% số hộ nuôi tiếp nhận thông tin từ các phương tiện thông tin đại chúng (Bảng 4.5) Những năm gần đây vai trò của cán bộ khuyến nông trong việc truyền đạt thông tin khoa học kỹ thuật đến với người dân ngày càng được nâng cao Bảng 4.5: Thông tin về nuôi ếch (n=48)

Tại khu vực điều tra cho thấy diện tích trại nuôi từ 4 – 6.880m2 tùy theo điều kiện kinh tế gia đình mà diện tích nuôi có thể thay đổi Diện tích trung bình của trại nuôi khoảng 496,79 ± 1.254,00m2 Đa số các hộ nuôi ở quy mô nhỏ với diện tích < 100m2 Qua điều tra chúng tôi nhận thấy phần lớn các hộ nuôi sử dụng nước giếng khoan để nuôi ếch chiếm 81,25%, số hộ sử dụng nước sông chiếm 20,83%, và khoảng 8,33% số hộ sử dụng nước máy (Bảng 4.6)

Bảng 4.6: Nguồn nước sử dụng trong trại (n=48)

dĩ chọn hệ thống nuôi bể ximăng thấp có lót bạt do chi phí thấp Còn một số hộ sử dụng bể ximăng nuôi ếch cho rằng nuôi trong bể ximăng rất thuận tiện trong việc quản

lý và cho ăn nhưng chi phí cao hơn so với các mô hình khác