Công nghệ sản xuất Thu nhận enzime ficin từ trái sung

GVHD: Th.S Nguyễn Thò Thu Sang SINH VIÊN: Thái Quốc Hiền Em Huỳnh Văn Hiệu Lại Thò Thuỳ Dương Phạm Thò Ngọc Lan Trần Thò Liệu ĐẶC ĐIỂM CỦA ENZIME FICIN Ficin (ficain) là một protease được tìm thấy trong nh a củacây thuộc họ ficus (sung, vả), ự thuộc họ Moraceae, bộ Urticales. Cây sung có xuất sứ từ vùng Tây Á và phân bố ở các vùng nhiệt đới, cận nhiệt đới và ôn đới. Ở Việt Nam, có nhiều loài sung khác nhau: sung (Ficus racemosa L.); sung trổ (Ficus variegata); sung ba thuỳ ( Ficus hirta); sung thằn lằn (ficus pumila L.); vả (Ficus auriculata lour) 1.Lòch söû nghieân cöùu : • N m 1930 B.H.Robins nh n th y trong nh a ă ậ ấ ự c a cây thu c h sung m t lo i enzym có kh ủ ộ ọ ộ ạ ả n ng tiêu di t c giun tròn Ascaris.ă ệ đượ • N m 1943 , Caldwel th y nh a này c ng có ă ấ ự ũ th tiêu di t c các loài sán dây Trichuris ể ệ đượ Trichura • N m 1939 Walti là ng i u tiên thu nh n ă ườ đầ ậ c enzym nàyđượ • Đặc điểm nguồn thu nhận ficin: Cây sung ngọt  có kích thước vùa hoặc nhỏ, cây cao từ 3-9m.  Cây có nhiều nhựa màu trắng đục.  Lá đơn, màu xanh sáng  Hoa nhỏ.  Quả dài từ 2,5-10 cm, màu sắc quả thay đổi từ vàng xanh đến đỏ đồng hay màu đỏ tía sậm.  Hạt có thể to, vừa hoặc nhỏ, [...]... iodoacetamide kết hôp với trung tâm hoạt động của ficin thì enzime sẽ bò bất hoạt o Các chất kìm hãm hoạt động của các protease động vật khi liên kết với gốc cystein của enzime ficin cũng có thể làm bất hoạt ficin o Trong lòng trắng trứng có một loại protein có một loại protein có khả năng kìm hãm hoạt động của ficin Tính bền vững: • Bền vững với nhiệt độ: Cohen nhận thấy chúng có thể giữ nguyên hoạt tính... của enzime ficin đạt đến mức cực đại -pH hẹp dao động quanh pH 8 thì nó lại có tính bền vững ở mức tối thiểu -Cơ chế xúc tác của enzyme: Cơ chế thu giải này gồm có hai giai đoạn: Giai đoạn 1: giai đoạn “acyl hoá” Giai đoạn 2: giai đoạn “deacyl hoá” có sự tham gia của phân tử nước Một số yếu tố khác ảnh hưởng lên khả năng thu phân protein của ficin: • Nhiệt độ: Hoạt động thu giải protein của enzime. .. giải protein của enzime ficin chòu ảnh hưởng rất nhiều bởi nhiệt độ • Độ pH: – Tác động vào trạng thái ion hoá của phân tử enzime – Tác động vào trạng thái ion hoá của cơ chất – Tác động vào độ bền của phân tử enzime – Tác động vào sự kết hợp giữa phần protein và phi protein của phân tử enzime Dòch nhựa sung Pha nước cất Khuấy trộn Ly tâm Thu dòch bên trên Tủa bằng ethanol Thu lấy các phân đoạn Chế... và glycerin Tính chất vật lý của ficin ở các nguồn thu nhận khác nhau được trình bày ở bảng sau: Nguồn thu nhận Phương pháp tinh sạch Hệ số sa lắng (So) F Tủa glabrat muối sắc a ký trên CMcellulose, pH 7 F glabrat a Tủa muối Trọng lượng phân tử 25.50 0± 750 23.80 0± 700 2.56 26.00 0 Điể m đẳng điện Hệ số tinh sạch A280A260 Hệ số tắt 1.95 21.1 Bước Tác giả sóng hấp thu λc(nm) 267 Englu nd Bernh ard... cất Khuấy trộn Ly tâm Thu dòch bên trên Tủa bằng ethanol Thu lấy các phân đoạn Chế phẩm enzyme thơ Loại bỏ tủa Từ nhựa thân Từ lá và quả xanh Dòch nhựa sung Pha nước cất Khuấy trộn Ly tâm Thu dòch bên trên Tủa bằng ethanol Thu lấy các phân đoạn Chế phẩm enzyme thơ Loại bỏ tủa Enzyme thơ lọc gel Thu phân đoạn enzyme Độn với tinh bột (tỉ lệ 1:1) Xấc định hoạt tính cac phan đoạn Sấy khô Chế phẩm enzyme Máy... ký trên CMcellulose, Ph 4.4 F carica var Kado ta Các hợp phần có hoạt tính được tách từ nhựa sung bằng phương pháp sắc ký trên CMcellulose, pH 7 F Tủa muối anthe lmitic a 2.61 S >9 6 26.00 0 1.88 20.2 Kram er và Whita ker Marin i Bettol o Tính chất hoá học • pH hoạt động tối thích của ficin rộng: 4-9.5 (dòch nhựa sung có pH 5), • gelatin: pHopt = 5; • casein: pHopt = 9.5; • hemoglobin: pHopt = 7 •... hippuryl methylester thì pHopt = 6.5  Các yếu tố ảnh hưởng đến sự hoạt động của ficin Các yếu tố hoạt hoá: o Nhân tố khử như: cyanide, cysteine, 1,2dimercaptopropandol hoặc mercaptoethanol o Cysteine hoặc 1,2- dimercaptopropandol nồng độ 0.005-0.05M HCN 0.075M làm tăng hoạt tính của ficin cao nhất o Mặt khác, hoạt tính của ficin còn tăng hơn nữa khi phối hợp giữa HCN với cystein • Các yếu tố kìm hãm: . GVHD: Th.S Nguyễn Thò Thu Sang SINH VIÊN: Thái Quốc Hiền Em Huỳnh Văn Hiệu Lại Thò Thuỳ Dương Phạm Thò Ngọc Lan Trần Thò