Tìm hiểu đặc tính phân tử salmonella enterica serovar typhi

LOGO BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM GVHD: PHAN THỊ KIM LIÊN SVTH: Lớp 02DHLTP4 NGUYỄN THỊ KIM LIÊN: 2205112012 LÝ MINH TUẤN: 2205112205 VÕ MINH QUỐC: 2205112212 TẠ THỊ VUI: 2205112214 TỔNG QUAN VẬT LIỆU&PHƯƠNG PHÁP 3G KẾT QUẢ BÀN LUẬN 5 KẾT LUẬN TỔNG QUAN  MỤC ĐÍCH +Salmonella enterica serovar Typhi nguyên nhân gián tiếp gây bệnh sốt thương hàn cho loài người phạm vi toàn cầu +Công việc nghiên cứu thực nhằm khám phá đặc điểm phân tử Salmonella enterica serovar Typhi phân lập từ người sốt thương hàn phương pháp hóa sinh, sinh học phát gien độc hại dựa vào kỹ thuật phản ứng chuỗi polymerase (PCR) TỔNG QUAN +Việc phân lập chuyên sâu khám phá loại thuốc kháng sinh nhạy với khuôn tiêu chuẩn để đánh giá việc quản lý TỔNG QUAN  PHƯƠNG PHÁP & KẾT QUẢ +Có tổng số 16 mẫu bệnh phẩm thu nhận từ số người bệnh (7 nam nữ) từ quận Coimbatore, Erode, Salem Tamil Nadu xử lý cách cho S.enterica serovar Typhi phát triển môi trường via dể nhận diện phân lập +Các nghiên cứu vi sinh hóa sinh phát diện S.Typhi từ 16 mẫu bệnh phẩm TỔNG QUAN +Các biotype mẫu phân lập cho thấy tất thuộc biotype IV +Phân tích PCR xác nhận có mặt invA (gien xâm chiếm, 244bp), tyv (gien đồng tâm lập thể, 615bp), fliC-d (gien tiên mao thực khuẩn sinh kháng thể d, 750bp) viaB (gien kháng thể Vi, 439bp) tất 16 mẫu bệnh phẩm TỔNG QUAN +Việc thử nghiệm thuốc kháng sinh nhạy cảm tiến hành tương phản riêng biệt 12 tác nhân chống vi khuẩn, cho thấy 100% ampicillin có sức đề kháng tốt nhất, 100% carbenicillin, chloramphenicol, clindamycin, gentamycin, kanamycin tetracycline có độ nhạy tốt TỔNG QUAN  KẾT LUẬN, Ý NGHĨA VÀ TÁC ĐỘNG CỦA NGHIÊN CỨU +Việc nghiên cứu xác nhận có liên hệ giống S enterica serovar Typhi từ bệnh sốt thương hàn với người cho phương pháp chẩn đoán PCR mang lại nhiều lợi ích việc nhận diện nhanh mẫu phân lập S.Typhi +Nghiên cứu nhấn mạnh việc sử dụng thuốc kháng sinh chloramphenicol kết hợp loại thuốc kháng sinh khác mang lại hiệu việc chế ngự S.Typhi VẬT LIỆU&PHƯƠNG PHÁP THU THẬP MẪU +16 mẫu máu bệnh nhân (7 nam nữ từ bệnh viện phòng khám khác quận Coimbatore, Erode, Salem Tamil Nadu, Ấn Độ) thu thập trong suốt tháng tháng phải vô trùng trước điều trị kháng sinh +Các mẫu máu vận chuyển thùng đá lạnh xử lý để nghiên cứu +Các liệu bệnh nhân gửi Hình 3: Phát gen độc từ S.Typhi phương pháp PCR Phát gen invA (244bp) PCR Phát gen tyv (615bp), fliCd (750bp) viaB (439bp) mPCR Cột N: đối chứng âm (A.hydrophila MTCC 646) Cột 1÷5: khu vực dương tính với gien độc Cột M: dãy DNA gốc KẾT QUẢ  Thử nghiêm tính nhạy cảm kháng sinh +Trong nghiên cứu này, tất 16 mẫu (100%) kháng với ampillicin, nhạy vừa phải với acid nalidixic, nitrofurantoin, carbenicillin, chloramphenicol, clindamycin, gentamycin, kanamycin tetracycline +13 mẫu (81,25%) kháng cefuroxime, mẫu (18,75%) nhạy vừa phải với cefuroxime +11 mẫu (68,75%) kháng penicillin-G cephalothin, mẫu lại (31,25%) nhạy vừa phải với penicillin-G cephalothin Hình 4: Độ nhạy kháng sinh S.Typhi C: Chloramphenicol (30µg), Cu: Cefuroxime (30µg), A: Ampillicin (10µg), Na: Nalidixic acid (30µg), Ch: Cephalothin (30µg), T: Tetracycline (30µg), Cb: Carbenicillin (100µg), Cd: Clindamycin (10µg), G: Gentamycin (10µg), Nf: Nitrofurantoin (100µg), P: Penicillin-G (2 Units), K: Kanamycin (30µg) Nhạy Kháng NHẠY CẢM KHÁNG vừa Nhạy 100 NHẠY CẢM VỪA 100 60 80 40 60 C Cu P A Na T G Nf K Cd Cb Ch Hình 5: Kết thử nghiệm tính nhạy kháng sinh S enterica serovar 20 Typhi C: Chloramphenicol (30µg), Cu: Cefuroxime (30µg), A: Ampillicin (10µg), Na: Nalidixic acid (30µg), Ch: Cephalothin (30µg), T: Tetracycline (30µg), Cb: Carbenicillin (100µg), Cd: Clindamycin (10µg), G: Gentamycin (10µg), Nf: Nitrofurantoin (100µg), P: Penicillin-G (2 Units), K: Kanamycin (30µg) BÀN LUẬN +Trong nghiên cứu này, mẫu máu thu thập từ 16 bệnh nhân tuổi từ 12 đến 50 từ quận Coimbatore, Erode, Salem Tamil Nadu, Ấn Độ +Tất mẫu bệnh phẩm thu thập suốt tháng 1, tháng cuối mùa khô, xem mùa cao điểm sốt thương hàn + Các nguồn gốc gây bệnh ảnh hưởng tới sức khỏe gồm chữ F: food (thực phẩm), fingers (các ngón tay), flies (ruồi), fomites (mầm bệnh), faeces (phân) đóng vai trị quan trọng việc lây bệnh BÀN LUẬN +Tất 16 bệnh nhân chẩn đốn dương tính với bệnh thương hàn bắt đầu bệnh từ đến ngày, có 14 mẫu (87,5%) bị cơng cao gồm người 30 tuổi +Tương tự với báo cáo trường hợp tần số xảy bệnh thương hàn cao bệnh nhân 30 tuổi phát trước báo cáo Tamil Nadu BÀN LUẬN +Tất mẫu vi sinh vật phân lập tạo vùng màu hồng tâm đen đĩa XLD cho kết dương tính lên men mannitol, L-arabinose, sorbitol, glucose, thử nghiệm methyl red, thử nghiệm indol, thử nghiệm sinh khí H2S, khả sử dụng citrate, thử nghiệm oxy, thử nghiệm tính di động thử nghiệm urease +Nghiên cứu vi sinh xác nhận việc phân lập để thăm dò S.Typhi từ trường hợp bệnh thương hàn người bệnh có trước báo cáo BÀN LUẬN +Tất 16 mẫu xếp vào biotype IV lên men L-arabinose không lên men xylose +Biotype thêm vào liệu nghiên cứu bệnh dịch dựa vào hệ thống xếp theo khả lên men đường dựa thuộc tính hóa sinh khác +Trong PCR gien invA, tyv, fliC viaB xem mục tiêu cho gien độc, từ làm sở cho việc nhận dạng S.Typhi, bộc lộ 100% điều cần khám phá gien độc mẫu bệnh phẩm phân lập từ người bệnh thương hàn BÀN LUẬN +Mặc dù Salmonella gây bệnh gián tiếp yếu tố độc, vai trò gien invA có ý nghĩa gien giúp S.Typhi tham gia vào việc xâm chiếm mô tế bào chủ chốt +Nghiên cứu chứng minh gien invA chiếm ưu so với gien lại phân lập S.Typhi, gien sử dụng gien bật để phát nhanh S.Typhi bất chấp mẫu có nhiều loại vi sinh vật khác BÀN LUẬN +Tương tự 100% tần số phát gien inv giống S enterica Typhi, Virchow, Enteritidis, Typhimurium, Senftenberg, Strasbourg Infantis bắt nguồn từ sản phẩm gia cầm, nước thải, người báo cáo từ nhiều quốc gia khác nhau, gồm Ấn Độ +Trong nghiên cứu mPCR, kháng nguyên O mã hóa gien tyv, kháng nguyên H mã hóa fliC-d, kháng nguyên Vi mã hóa gien độc viaB sử dụng làm tảng cho việc nhận dạng S.Typhi từ trường hợp người bệnh thương hàn BÀN LUẬN +Kết mPCR mô tả thí nghiệm thiết lập loại gien có tính bảo tồn cao mẫu phân lập S.Typhi trở thành gien trọng điểm để phát nhanh S.Typhi phân lập +Kết thử nghiệm kháng sinh nhạy cảm bộc lộ S.Typhi phân lập kháng ampicillin (100%), cefuroxime (81,25%), penicillin-G (68,75%), cephalothin (68,75%) +Kết cho thấy rõ xu hướng S.Typhi phân lập kháng nhiều loại thuốc BÀN LUẬN +Nhìn chung, nhà nghiên cứu miền Nam Việt Nam báo cáo 90% S.Typhi phân lập kháng nhiều loại kháng sinh ampicillin, chloramphenicol co-trimoxazole +Ở Ấn Độ, báo cáo S.Typhi kháng lại 29,47% ampicillin 28,42% chloramphenicol +Mặc dù nhà nghiên cứu nhiều lần báo cáo chloramphenicol chất kháng S.Typhi nghiên cứu lại cho thấy 100% chloramphenicol với kanamycin, clindamycin, carbenicillin, gentamycin, tetracycline nhạy với S.Typhi phân lập BÀN LUẬN +Trong thích hợp, 100% tính nhạy cảm S.Typhi phân lập chống lại chloramphenicol, gentamycin, tetracycline phát sớm +Trong nghiên cứu chúng ta, acid nalidixic nitrofurantoin thấy nhạy vừa đủ +Gần nhất, 76% mẫu máu cấy vào S.Typhi báo cáo kháng acid nalidixic KẾT LUẬN +Nghiên cứu khẳng định liên hệ giống S.Typhi độc hại với kiện sốt thương hàn Tamil Nadu +Nghiên cứu kỹ thuật PCR cơng cụ có ích việc chuẩn đoán nhanh với số lượng lớn S.Typhi phịng thí nghiệm phịng khám bệnh +Dù chloramphenicol thuốc kháng sinh khác cho thấy 100% đạt độ nhạy, cần có đánh giá độ nhạy – độ kháng S.Typhi cần thiết cho việc sử dụng thuốc kháng sinh mức vừa phải việc quản lý sốt thương hàn tương lai CẢM ƠN CÔ VÀ CÁC BẠN ĐÃ LẮNG NGHE… LOGO THE END ... +Salmonella enterica serovar Typhi nguyên nhân gián tiếp gây bệnh sốt thương hàn cho lồi người phạm vi tồn cầu +Cơng việc nghiên cứu thực nhằm khám phá đặc điểm phân tử Salmonella enterica serovar. .. cách cho S .enterica serovar Typhi phát triển môi trường via dể nhận diện phân lập +Các nghiên cứu vi sinh hóa sinh phát diện S .Typhi từ 16 mẫu bệnh phẩm TỔNG QUAN +Các biotype mẫu phân lập cho... S .Typhi từ trường hợp người bệnh thương hàn BÀN LUẬN +Kết mPCR mơ tả thí nghiệm thiết lập loại gien có tính bảo tồn cao mẫu phân lập S .Typhi trở thành gien trọng điểm để phát nhanh S .Typhi phân