LUẬN VĂN THẠC SĨ HOÁ HỮU CƠ (NATURAL PRODUCTS)

Chuyên ngành: Hoá Hữu cơ Mã số: 60.44.27 Đà Nẵng, 06/2011 NỘI DUNG MỞ ĐẦU CHƯƠNG I – TỔNG QUAN CHƯƠNG II – CÁC NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM CHƯƠNG III – KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 2 1. Lí do chọn đề tài Những năm gần đây xu hướng tìm kiếm các hoạt chất trong các loài thảo mộc có tác dụng chữa bệnh ngày một tăng, thu hút các nhà khoa học trong nước và khắp nơi trên thế giới tìm tòi, nghiên cứu. Chi Livistona (Cọ) ở Việt Nam, có nhiều loài có giá trị sử dụng cao, được dùng làm thuốc chữa nhiều bệnh. Tuy nhiên, việc nghiên cứu thành phần hoá học và hoạt tính sinh học của các loài Livistona này ở Việt Nam và trên thế giới chưa đầy đủ, thậm chí có loài hầu như chưa được nghiên cứu. Vì vậy, chúng tôi chọn đề tài “Nghiên cứu thành phần hoá học và hoạt tính sinh học của cây Kè Bắc bộ (Livistona tonkinensis) và cây Cọ Xẻ (Livistona chinensis) thuộc họ Cau của Việt Nam”. 3 2. Mục tiêu nghiên cứu ☺ Thăm dò hoạt tính sinh học của các dịch chiết từ các bộ phận của cây. ☺ Nghiên cứu thành phần hóa học của các dịch chiết thu được. 3. Đối tượng và phạm vi nghiên cứu ☺ Điều tra sơ bộ, thu thập, xử lý nguyên liệu là các bộ phận từ hai loài Livistona nói trên. ☺ Chiết các mẫu thực vật bằng các dung môi có độ phân cực khác nhau. ☺ Thử hoạt tính sinh học của các dịch chiết thu được. ☺ Nghiên cứu phân lập, tinh chế các hợp chất từ các dịch chiết. ☺ Xác định cấu trúc hóa học các hợp chất phân lập được. Qua quá trình nghiên cứu sàng lọc sơ bộ ban đầu của hai loài Livistona tonkinensis và Livistona chinensis, với mục đích ưu tiên nghiên cứu cây đã có nhiều ứng dụng rộng rãi trong các bài thuốc dân gian và trong cuộc sống; mặt khác, do thời gian thực hiện đề tài có hạn nên chúng tôi quyết định chọn hướng nghiên cứu thành phần hoá học và hoạt tính sinh học của loài Cọ Xẻ (Livistona chinensis) 4 4. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài – Những kết quả về thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của cây Livistona chinensis sẽ đóng góp vào kho tàng các hợp chất thiên nhiên của Việt Nam và thế giới. – Tìm hiểu những đặc trưng cấu trúc nổi bật của các hợp chất có hoạt tính và khả năng biến đổi cấu trúc để có hoạt tính tốt hơn. – Góp phần định hướng sử dụng và khai thác hợp lí cây Cọ Xẻ ở Việt Nam. – Tạo cơ sở khoa học cho việc sử dụng nguồn thực vật của Việt Nam một cách hiệu quả. 5 6 CHƯƠNG I – TỔNG QUAN 1.1. Đặc điểm thực vật cây Cọ Xẻ Livistona chinensis (Jacq.) R. Br. Cây mọc đơn độc, cao 8 – 15 m, đường kính 20 – 30 cm, hình trụ. Lá hình quạt, xẻ thuỳ hình chân vịt. Bẹ lá có sợi, mép lá có gai. Cụm hoa phân nhánh 2 – 3 lần. Hoa thành nhóm 4 – 5 hoa đính trên mấu lồi. Quả hình bầu dục có màu xanh lục. Hạt 1, hình bầu dục [1]. Cây có hoa tháng 4, có quả tháng 5 – 6. Mọc rải rác trong rừng nhiệt đới [28]. Cây trồng khắp nơi ở nước ta. Còn có ở Ấn Độ, Trung Quốc. Livistona chinensis: Cây và Quả 7 CHƯƠNG I – TỔNG QUAN 1.2. Tình hình nghiên cứu trong chi Cọ Chi Cọ ở Việt Nam có 4 loài, đến nay chỉ có 2 loài là Cọ xẻ (Livistona chinensis) và Cọ Hạ Long (Livistona halongensis) được nghiên cứu thành phần hoá học và hoạt tính sinh học. Nhóm tác giả Trần Văn Lộc và cộng sự [7] đã tách và xác định được cấu trúc của 6 chất từ dịch chiết hexan của vỏ thân cây Cọ Hạ Long. Về hoạt tính sinh học, chỉ có dịch chiết hexan và dịch chiết MeOH từ vỏ thân cây này có hoạt tính ức chế hoạt động của enzym peroxydaza ở mức độ trung bình. Cây Cọ xẻ đã được nghiên cứu các hoạt tính sinh học từ các bộ phận như rễ và quả. Qua đó cho thấy nhiều hoạt tính sinh học đáng quan tâm. Về thành phần hoá học, cho đến nay đã có một số công trình công bố, đa số các hợp chất tách được từ Cọ xẻ thuộc loại flavonoit. Mới đây nhất, từ quả Cọ xẻ, nhóm tác giả Xiaobin Zeng và cộng sự [31] đã tách được 11 hợp chất flavonoit trong đó có 3 chất mới. CHƯƠNG II – NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU • Nguyên liệu nghiên cứu là quả Cọ Xẻ được thu hái tại Hải Phòng vào tháng 12/2009 được Tiến sĩ Trần Thị Phương Anh và Thạc sĩ Nguyễn Thế Anh xác định tên khoa học thuộc loài Livistona chinensis. • Mẫu tiêu bản LC01–2009 được lưu giữ tại phòng tổng hợp hữu cơ, Viện Hoá học – Viện KHCN Việt Nam. 2.1. Nguyên liệu 8 1. Phơi khô, xay nhỏ 2. Chiết ngâm với hexan 3. Cất loại dung môi 1. Chiết ngâm với EtOAc 2. Cất loại dung môi 1. Chiết ngâm với MeOH 2. Cất loại dung môi Phần cặn Phần cặn Cao Hexan (35,59 gam) Cao EtOAc (7,72 gam) Cao MeOH (62,79 gam) Phần còn lại bỏ QUẢ CỌ XẺ (2 kg) Hình 2.1. Sơ đồ chiết mẫu 2.2. Chiết mẫu 9 CHƯƠNG II – NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.3. Chạy cột sắc kí phần cao EtOAc 10 Cao EtOAc (6,4936 gam) Sắc kí cột hệ dung môi hexan - EtOAc LC1.13 (0,2831 gam) LC1.13kt (117,6 mg) Đo phổ MS, IR và NMR để xác định cấu trúc 1. Lọc, rửa kết tinh 2. Kết tinh lại trong hệ EtOAc/MeOH Hình 2.2. Sơ đồ tách chất LC1.13kt CHƯƠNG II – NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU [...]... chế chọn lọc vi khuẩn Staphylococcus aureus là một loài vi khuẩn lên mủ xanh khó điều trị Đây là một kết quả lí 12 thú CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 KẾT QUẢ THỬ HOẠT TÍNH SINH HỌC 3.1.2 Hoạt tính chống oxi hoá Bảng 3.2 Kết quả thử hoạt tính chống oxi hoá % ức chế hoạt động của enzym Nồng độ chất thử (µg/ml) LCQ.N LCQ.E LCQ.M 128 8 7 82 32 0 4 36 8 0 0 23 2 0 0 9 0,5 0 0 0 IC50 (µg/ml) > 128 >... CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.2 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC CHẤT TÁCH ĐƯỢC Kết hợp với dữ liệu phổ trong [15] và [18] có thể kết luận chất (3) là salicin [2– (hydroxy–methyl) phenyl–D–glucopyranoside] (3) Salicin Salicin đã được phân lập trước đây từ vỏ cây Bạch dương và vỏ thân cây Liễu Chất này có hoạt tính hạ sốt, chống viêm khớp, giảm đau 25 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.2 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC... III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.2 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC CHẤT TÁCH ĐƯỢC Trong DMSO–d6 hai tín hiệu nhóm CH2OH của fructose trùng nhau (δ = 62,28) nhưng trong D2O chúng tách ra rõ rệt (δ = 61,443 và 62,389) Hình 3.10 Phổ DEPT và 13C-NMR (D2O, 125MHz) chất LC2.10 28 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.2 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC CHẤT TÁCH ĐƯỢC Từ phổ 1H và 13C–NMR (DMSO–d6 và D2O) cho phép kết luận chất (4) là saccharose... trị IC50 lần lượt là 68,04; 88,30 và 101,25 μg/ml Đây là lần đầu tiên các hoạt tính sinh học này của các dịch chiết hexan, EtOAc và MeOH từ quả Cọ Xẻ được nghiên cứu • 30 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN • • • • • •  Thành phần hoá học Từ dịch chiết EtOAc và dịch chiết MeOH của quả Cọ xẻ (Livistona chinensis), bằng các phương pháp sắc kí cột silicagel, sắc kí cột sephadex LH – 20 kết hợp với sắc kí lớp... được phân lập từ quả Cọ xẻ (Livistona chinensis) thuộc họ Cau ở Việt Nam 10/26/14 31 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KIẾN NGHỊ Tiếp tục phân lập các phân đoạn còn lại của dịch chiết MeOH và dịch chiết hexan để xác định thành phần hoá học Đồng thời thử hoạt tính sinh học của các chất tách được để có cái nhìn tổng thể về hoá thực vật cũng như hoạt tính sinh học của quả Cọ xẻ, góp phần làm tăng giá trị sử dụng... thử nghiệm hoạt tính sinh học ta thấy dịch chiết MeOH từ quả Cọ Xẻ có hoạt tính gây độc tế bào tương đối tốt Đồng thời, nó cũng có hoạt tính kháng oxi hoá và kháng khuẩn Bởi vậy rất đáng quan tâm nghiên cứu kĩ dịch chiết này 14 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.2 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC CHẤT TÁCH ĐƯỢC 3.2.1.Chất LC 1.13kt (1): Là tinh thể hình kim, màu vàng, đnc 290 – 291oC Phổ IR có đỉnh hấp thụ của nhóm... kết C–O–C (1172,88 và 1116,63 cm-1) Hình 3.1 Phổ IR của chất LC1.13kt 15 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.2 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC CHẤT TÁCH ĐƯỢC Phổ MS (EI) có pic ion âm với m/z [M–H]- = 329 → M = 330 phù hợp với CTPT C17H14O7 Hình 3.2 Phổ MS (EI) chất LC1.13kt 16 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.2 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC CHẤT TÁCH ĐƯỢC Phổ 1H–NMR có một singlet của 6H tại δ = 3,884 ppm Vùng... chất LC2.10 28 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.2 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC CHẤT TÁCH ĐƯỢC Từ phổ 1H và 13C–NMR (DMSO–d6 và D2O) cho phép kết luận chất (4) là saccharose (4) Saccharose 29 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN •  Thăm dò hoạt tính sinh học Các dịch chiết hexan (LCQ.N) và MeOH (LCQ.M) có hoạt tính ức chế sinh trưởng đối với vi khuẩn Gram (+) Staphylococcus aureus với nồng độ IC50 lần lượt là... tính ức chế sự phát triển của tế bào ung thư ruột kết (với IC 50 = 16μM) và tế bào ung thư vú (với IC50 = 0,6μM) [17], hoạt tính kháng histamin [24], hoạt tính kháng oxi hoá với IC 50 = 88 µg/ml [32] 20 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.2 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC CHẤT TÁCH ĐƯỢC 3.2.2 Chất LC 2.4 (2): là chất bột vô định hình, màu trắng, hiện thuốc thử Vanilin màu tím, có Rf trùng với stigmasterol glucosid... 5,32 – 5,33 (1H; m; H–6) Hình 3.5 Phổ 1H-NMR (DMSO, 500MHz) chất LC2.4 21 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.2 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC CHẤT TÁCH ĐƯỢC Vậy chất LC2.4 chính là Stigmast–5, 22–dien–3β –O-β-D-glucopyranosid (2) Stigmast–5, 22–dien–3β–O-β-D-glucopyranosid 22 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.2 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC CHẤT TÁCH ĐƯỢC 3.2.3 Chất LC 2.6 (3): Tinh thể hình kim, không màu Phổ 13C–NMR . được Tiến sĩ Trần Thị Phương Anh và Thạc sĩ Nguyễn Thế Anh xác định tên khoa học thuộc loài Livistona chinensis. • Mẫu tiêu bản LC01–2009 được lưu giữ tại phòng tổng hợp hữu cơ, Viện Hoá học. Chuyên ngành: Hoá Hữu cơ Mã số: 60.44.27 Đà Nẵng, 06/2011 NỘI DUNG MỞ ĐẦU CHƯƠNG I – TỔNG QUAN CHƯƠNG II – CÁC NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM CHƯƠNG III – KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 2 1. Lí do chọn. QUẢ THỬ HOẠT TÍNH SINH HỌC 12 CHƯƠNG III. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1.2. Hoạt tính chống oxi hoá Bảng 3.2. Kết quả thử hoạt tính chống oxi hoá. ☺ Chỉ có dịch chiết quả Cọ xẻ trong MeOH (LCQ.M) có