Bài giảng này dành cho học sinh khối ngành y khoa. bài giảng rất hiệu quả bổ ích và tích hợp đầy đủ kiến thức chuyên ngành cần có cho các bạn, biên soạn theo ppt, hình ảnh minh họa rõ ràng và rành mạch
KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM TIÊU FIBRIN TIÊU FIBRIN I. ĐỊNH LƯỢNG FIBRINOGEN I. ĐỊNH LƯỢNG FIBRINOGEN (phương pháp (phương pháp Clauss) Clauss) 1. Nguyên lý 1. Nguyên lý Tốc độ biến đổi fibrinogen thành fibrin phụ thuộc Tốc độ biến đổi fibrinogen thành fibrin phụ thuộc vào chức năng và nồng độ fibrinogen và vào vào chức năng và nồng độ fibrinogen và vào lượng thrombin thêm vào hệ thống xét nghiệm. lượng thrombin thêm vào hệ thống xét nghiệm. Với sự có mặt một lượng thừa thrombin, thời Với sự có mặt một lượng thừa thrombin, thời gian đông của mẫu huyết tương pha loãng sẽ gian đông của mẫu huyết tương pha loãng sẽ tương quan trực tiếp với nồng độ fibrinogen. tương quan trực tiếp với nồng độ fibrinogen. 2. Dụng cụ và thuốc thử 2. Dụng cụ và thuốc thử - Dụng cụ lấy máu tĩnh mạch, Ống nghiệm, Nồi - Dụng cụ lấy máu tĩnh mạch, Ống nghiệm, Nồi chưng cách thuỷ 370C, Pipet, Đồng hồ bấm giây, chưng cách thuỷ 370C, Pipet, Đồng hồ bấm giây, Móc bằng dây platin có cán dài, Móc bằng dây platin có cán dài, Dung dịch citrat Dung dịch citrat 3,8%, Dung dịch đệm Owren-Koller, pH 7,35 3,8%, Dung dịch đệm Owren-Koller, pH 7,35 - Thuốc thử sử dụng là thrombin - Thuốc thử sử dụng là thrombin 3. Phương pháp thực hiện 3. Phương pháp thực hiện Máu tĩnh mạch chống đông với sodium citrat 3,8% Máu tĩnh mạch chống đông với sodium citrat 3,8% tỷ lệ 1/10, ly tâm, tách huyết tương tỷ lệ 1/10, ly tâm, tách huyết tương - Pha loãng huyết tương 1/10: 50 - Pha loãng huyết tương 1/10: 50 µ µ l huyết tương l huyết tương + 450 + 450 µ µ l dung dịch đệm Owren-Koller l dung dịch đệm Owren-Koller - 0,2 ml huyết tương pha loãng, cho vào nồi chưng - 0,2 ml huyết tương pha loãng, cho vào nồi chưng cách thuỷ, chờ 1-2 phút cách thuỷ, chờ 1-2 phút - Cho rất nhanh 0,2 ml Fibri Prest (thrombin) đã ủ - Cho rất nhanh 0,2 ml Fibri Prest (thrombin) đã ủ trước ở 370C vào trước ở 370C vào - Bấm đồng hồ cùng lúc. - Bấm đồng hồ cùng lúc. - Xác định chính xác thời điểm xuất hiện những sợi - Xác định chính xác thời điểm xuất hiện những sợi fibrin đầu tiên, bấm đồng hồ, ghi thời gian đông. fibrin đầu tiên, bấm đồng hồ, ghi thời gian đông. - Tiến hành đo 2 lần, kết quả không được chênh - Tiến hành đo 2 lần, kết quả không được chênh lệch quá 1 giây. lệch quá 1 giây. - Khi thời gian đông quá ngắn hay dài phải làm lại - Khi thời gian đông quá ngắn hay dài phải làm lại XN và huyết tương được pha loãng 1/20, 1/5 XN và huyết tương được pha loãng 1/20, 1/5 4. Kết quả 4. Kết quả Tính nồng độ Fibrinogen dựa vào biểu đồ mẫu tự Tính nồng độ Fibrinogen dựa vào biểu đồ mẫu tự làm với huyết tương bình thường hoặc dựa vào làm với huyết tương bình thường hoặc dựa vào biểu đồ chuẩn được cung cấp kèm theo lô thuốc biểu đồ chuẩn được cung cấp kèm theo lô thuốc thử. thử. Nồng độ Fibrinogen bình thường: 200 - 400 mg/lít Nồng độ Fibrinogen bình thường: 200 - 400 mg/lít 5. Giải thích kết quả 5. Giải thích kết quả - Nồng độ Fibrinogen tăng trong các trường hợp - Nồng độ Fibrinogen tăng trong các trường hợp bệnh tiểu đường, các hội chứng viêm, tình trạng bệnh tiểu đường, các hội chứng viêm, tình trạng béo phì. béo phì. - Nồng độ Fibrinogen giảm trong các hội chứng - Nồng độ Fibrinogen giảm trong các hội chứng đông máu nội mạch rải rác, hội chứng tiêu sợi đông máu nội mạch rải rác, hội chứng tiêu sợi huyết. huyết. II. TIÊU CỤC ĐÔNG CỦA MÁU TOÀN PHẦN II. TIÊU CỤC ĐÔNG CỦA MÁU TOÀN PHẦN 1. Nguyên lý 1. Nguyên lý Đo thời gian tan của cục máu đông toàn phần là Đo thời gian tan của cục máu đông toàn phần là phương pháp đơn giản nhất để đo hoạt tính tiêu phương pháp đơn giản nhất để đo hoạt tính tiêu fibrin tổng quát. fibrin tổng quát. 2. Dụng cụ và thuốc thử 2. Dụng cụ và thuốc thử - Bơm tiêm, kim, ống nghiệm, Nồi chưng cách thuỷ - Bơm tiêm, kim, ống nghiệm, Nồi chưng cách thuỷ 3. Phương pháp thực hiện 3. Phương pháp thực hiện - 2ml máu tĩnh mạch không chống đông cho vào 2 - 2ml máu tĩnh mạch không chống đông cho vào 2 ống nghiệm ống nghiệm - Nút kín ống nghiệm, cho vào nồi chưng cách thuỷ - Nút kín ống nghiệm, cho vào nồi chưng cách thuỷ 370C và thường xuyên theo dõi ống nghiệm để 370C và thường xuyên theo dõi ống nghiệm để ghi thời gian tan. ghi thời gian tan. 4. Kết quả 4. Kết quả Bình thường cục đông của máu toàn phần tan hoàn Bình thường cục đông của máu toàn phần tan hoàn toàn trên 72 giờ. Trong trường hợp tiêu fibrin toàn trên 72 giờ. Trong trường hợp tiêu fibrin cấp, thời gian này dưới 1 giờ, có khi máu không cấp, thời gian này dưới 1 giờ, có khi máu không đông. đông. 5. Nguyên nhân sai lầm 5. Nguyên nhân sai lầm - Khi cục máu co, thường xuất hiện 1 lớp hồng cầu - Khi cục máu co, thường xuất hiện 1 lớp hồng cầu đọng ở đáy ống nghiệm. Đây là 1 hiện tượng đọng ở đáy ống nghiệm. Đây là 1 hiện tượng trầm lắng bình thường có mức độ thay đổi và trầm lắng bình thường có mức độ thay đổi và không được nhầm với hiện tượng tiêu fibrin. không được nhầm với hiện tượng tiêu fibrin. Trong 1 vài trường hợp, sự lắng này tăng nhiều Trong 1 vài trường hợp, sự lắng này tăng nhiều có thể khiến nhầm là cục đông bị tan. có thể khiến nhầm là cục đông bị tan. - Bị nhiễm khuẩn in vitro có thể làm cục đông tan - Bị nhiễm khuẩn in vitro có thể làm cục đông tan giả tạo. giả tạo. - XN này ít nhạy, không thể phát hiện 1 hoạt tính - XN này ít nhạy, không thể phát hiện 1 hoạt tính tiêu fibrin thoáng qua. tiêu fibrin thoáng qua. III. TIÊU CụC HUYếT TƯƠNG III. TIÊU CụC HUYếT TƯƠNG 1. Nguyên lý 1. Nguyên lý Thời gian tiêu cục đông của huyết tương đã phục Thời gian tiêu cục đông của huyết tương đã phục hồi canxi là một phương pháp phần nào nhạy hồi canxi là một phương pháp phần nào nhạy hơn xét nghiệm tiêu cục đông của máu toàn hơn xét nghiệm tiêu cục đông của máu toàn phần khi nghiên cứu hoạt tính tiêu fibrin tổng phần khi nghiên cứu hoạt tính tiêu fibrin tổng quát. Trên thực tế, việc pha loãng huyết tương quát. Trên thực tế, việc pha loãng huyết tương bằng dung dịch phục hồi canxi đủ làm dễ hiện bằng dung dịch phục hồi canxi đủ làm dễ hiện tượng tiêu fibrin. tượng tiêu fibrin. 2. Dụng cụ và thuốc thử 2. Dụng cụ và thuốc thử - Huyết tương giàu tiểu cầu - Huyết tương giàu tiểu cầu - CaCl2 0,025M - CaCl2 0,025M - Ống nghiệm, pipet, nồi chưng cách thuỷ 370C - Ống nghiệm, pipet, nồi chưng cách thuỷ 370C 3. Kỹ thuật 3. Kỹ thuật Trong ống nghiệm chưng cách thuỷ , lần lượt cho Trong ống nghiệm chưng cách thuỷ , lần lượt cho vào 0,5ml huyết tương và 0,5ml CaCl2. Nút kín vào 0,5ml huyết tương và 0,5ml CaCl2. Nút kín ống nghiệm, chưng cách thuỷ 37 C. Quan sát, ống nghiệm, chưng cách thuỷ 37 C. Quan sát, theo dõi tình trạng cục đông cho đến khi tan theo dõi tình trạng cục đông cho đến khi tan 4. Kết quả 4. Kết quả Bình thường, trên 48 giờ. Dưới 1 giờ trong tiêu Bình thường, trên 48 giờ. Dưới 1 giờ trong tiêu fibrin cấp, 24 giờ trong tiêu fibrin bán cấp. fibrin cấp, 24 giờ trong tiêu fibrin bán cấp. 5. Nguyên nhân sai lầm 5. Nguyên nhân sai lầm - Nhiễm khuẩn in vitro làm tan cục đông giả tạo - Nhiễm khuẩn in vitro làm tan cục đông giả tạo - Xét nghiệm ít nhạy, không phát hiện được tình - Xét nghiệm ít nhạy, không phát hiện được tình trạng tiêu fibrin thoáng qua trạng tiêu fibrin thoáng qua - Trong tiêu fibrin cấp, huyết tương không đông do - Trong tiêu fibrin cấp, huyết tương không đông do không có fibrinogen. không có fibrinogen. [...]... và trước khi mổ tim) - Theo dõi điều trị tiêu huyết khối XIII NGHIỆM PHÁP RƯỢU (nghiệm pháp Ethanol) 1 Nguyên lý Các monomer của fibrin là những sản phẩm trung gian giữa fibrinogen và fibrin, nó là kết quả tác động phân huỷ của thrombin Khi lượng thrombin thấp thì các monomer không đủ để trùng hợp tạo nên cục fibrin Các fibrin monomer, fibrinogen và các sản phẩm thoái giáng tạo thành phức hợp hoà tan,... thành fibrin phụ thuộc vào chức năng và nồng độ fibrinogen và vào lượng thrombin thêm vào hệ thống xét nghiệm Với sự có mặt một lượng thừa thrombin, thời gian đông của mẫu huyết tương pha loãng sẽ tương quan trực tiếp với nồng độ fibrinogen 2 Kết quả Tính nồng độ Fibrinogen dựa vào biểu đồ mẫu tự làm với huyết tương bình thường hoặc dựa vào biểu đồ chuẩn được cung cấp kèm theo lô thuốc thử Nồng độ Fibrinogen... fibrin: hoạt động tiêu protein của thrombin và polymer hoá, nhưng không phụ thuộc yếu tố XIII Thời gian thrombin nhạy cảm với heparin và những chất ức chế thrombin 2 Giải thích kết quả Thời gian thrombin kéo dài - Do điều trị heparin - Giảm hoặc không có fibrinogen - Rối loạn fibrinogen - Hội chứng viêm, tăng fibrinogen máu X ĐỊNH LƯỢNG FIBRINOGEN (phương pháp Clauss) 1 Nguyên lý Tốc độ biến đổi fibrinogen... mg/lít 3 Giải thích kết quả - Nồng độ Fibrinogen tăng trong các trường hợp bệnh tiểu đường, các hội chứng viêm, tình trạng béo phì - Nồng độ Fibrinogen giảm trong các hội chứng đông máu nội mạch rải rác, hội chứng tiêu sợi huyết XI TIÊU CỤC ĐÔNG CỦA MÁU TOÀN PHẦN 1 Nguyên lý Đo thời gian tan của cục máu đông toàn phần là phương pháp đơn giản nhất để đo hoạt tính tiêu fibrin tổng quát 2 Kết quả Bình thường... cục máu co nhưng nhanh chóng bị tan ra - Sự co cục máu phụ thuộc vào số lượng tiểu cầu, lượng fibrinogen và thể tích khối hồng cầu (Hct) Tăng fibrinogen máu và đa hồng cầu rất khó làm co cục máu V THỜI GIAN MÁU ĐÔNG 1 Phương pháp Milian 1.1 Nguyên lý Xác định thời gian đông của máu toàn phần căn cứ vào sự xuất hiện những sợi fibrin trong giọt máu đặt trên phiến kính 1.2 Kết quả Thời gian máu đông là... đông VII XÉT NGHIỆM ĐÁNH GIÁ SINH THROMBOPLASTIN NGOẠI SINH Thời gian prothrombin- thời gian quick (prothrombin time - PT) 1 Nguyên lý Khi huyết tương đông trước sự hiện diện của thromboplastin tổ chức toàn phần hoạt động và 1 nồng độ ion calci tối ưu, thời gian đông sẽ chỉ phụ thuộc vào nồng độ yếu tố II (prothrombin) và các yếu tố biến đổi prothrombin: V, VII và X, với điều kiện là lượng fibrinogen... lý - Biểu hiện tiêu fibrin khi thời gian tiêu euglobulin xảy ra trong vòng 1 giờ đầu, tuỳ mức độ: + 0 - 15 phút: Tiêu sợi huyết cấp + 15 - 30 phút: Tiêu sợi huyết trung bình (vừa) + 30 - 45 phút: Tiêu sợi huyết nhẹ + 45 - 60 phút: Tiêu sợi huyết thoáng qua 3 Ý nghĩa Đây là một XN cần thiết để: - Chẩn đoán tình trạng tiêu fibrin tiên phát hoặc thứ phát và phát hiện tình trạng tiêu fibrin tiềm tàng (nhất... Thiếu fibrinogen - Điều trị heparin (nếu thuốc thử không có chất ức chế heparin) VIII XÉT NGHIỆM ĐÁNH GIÁ SINH THROMBOPLASTIN NỘI SINH Thời gian thromboplastin từng phần hoạt hoá (activated Partial Thromboplastin Time - aPTT) 1 Nguyên lý Phục hồi calci cho huyết tương trước sự hiện diện của 1 chất thế yếu tố 3 tiểu cầu (cephalin) sau khi đã hoạt hoá huyết tương này bằng kaolin, thời gian đông của... gel hóa dưới tác dụng của rượu ethanol 2 Kết quả Chất keo xuất hiện (kết quả dương tính) chứng tỏ có các phức hợp hoà tan trong mẫu nghiệm, bằng chứng của 1 tình trạng đông máu nội mạch rải rác (DIC) Tuy nhiên kết quả âm tính không loại trừ được chẩn đoán này XIV XÉT NGHIỆM D-DIMER 1 PP ngưng kết hạt latex 1.1 Nguyên lý Đây là phương pháp bán định lượng D-Dimer bởi ngưng kết hạt latex đã mẫn cảm kháng... phương pháp đơn giản nhất để đo hoạt tính tiêu fibrin tổng quát 2 Kết quả Bình thường cục đông của máu toàn phần tan hoàn toàn trên 72 giờ Trong trường hợp tiêu fibrin cấp, thời gian này dưới 1 giờ, có khi máu không đông XII THỜI GIAN TIÊU EUGLOBULIN (NGHIỆM PHÁP VON - KAULLA) 1 Nguyên lý Huyết tương được pha loãng rồi toan hoá nhằm tách euglobulin, đồng thời loại bỏ tất cả thành phần ức chế quá trình tiêu . KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM TIÊU FIBRIN TIÊU FIBRIN I. ĐỊNH LƯỢNG FIBRINOGEN I. ĐỊNH LƯỢNG FIBRINOGEN (phương pháp (phương pháp. pipet, nồi chưng cách thuỷ 370C - Ống nghiệm, pipet, nồi chưng cách thuỷ 370C 3. Kỹ thuật 3. Kỹ thuật Trong ống nghiệm chưng cách thuỷ , lần lượt cho Trong ống nghiệm chưng cách thuỷ , lần lượt. đông giả tạo - Xét nghiệm ít nhạy, không phát hiện được tình - Xét nghiệm ít nhạy, không phát hiện được tình trạng tiêu fibrin thoáng qua trạng tiêu fibrin thoáng qua - Trong tiêu fibrin cấp,