Trồng hàng loạt MÔN: CÔNG NGHỆ TẾ BÀO THỰC VẬT SVTH: Đoàn Ngọc Sinh, Lớp: 10SH Cắt viền xung quanh lá: tăng bề mặt tiếp xúc mẫu và môi trường Chất khử trùng chính, độc nên thao tác cẩn thận, thời gian khử trùng tính từ lúc đổ HgCl 2 vào đến lúc đổ HgCl 2 ra. Cồn 70 0 : - Lâu bay hơi hơn cồn 90 0 → khử trùng tốt hơn - Làm sạch, diệt 1 số vi khuẩn, không diệt được nấm - Tăng sức căng bề mặt của tế bào, giúp mẫu tiếp xúc với chất khử trùng chính Pha cồn 70 0 : 140ml cồn 90 0 + 60ml nước cất Tránh ra vào trong khu vực khi đang bật đèn Chuẩn bị - Bộ dao, kéo, kẹp: cắt mẫu - Bình tam giác: đựng mẫu trong quá trình xử lý mẫu - Đĩa petri: đựng mẫu trong quá trình cắt - Bình đựng MT, nước cất → lau qua thành bình bằng cồn 70 0 - Ống nghiệm đựng cồn 90 0 để trong bình tam giác - Đèn cồn Chuẩn bị Lắc đều Mẫu lá cây đồng tiền BÁO CÁO THỰC HÀNH Cây phát triển sau đem trồng hàng loạt Đậy nắp bằng giấy nilon , buộc kín Tái sinh cây từ callus Giá thể nuôi mẫu CHUẨN BỊ VÀO MẪU Hấp khử trùng 121 0 C, 1 atm, 20 phút Rửa tay bằng xà phòng Rửa cồn 70 0 Khử trùng dao, kéo, kẹp: nhúng vào cồn và đốt trên ngọn lửa đèn cồn Cây hoàn chỉnh Phôi vô tính Định mức 250 ml bằng nước cất 2 lần - Đường sucrose: 10 g - MS1: 10 ml - MS2, MS3, MS4, MS5: 5 ml - 2,4 – D: 750 µl = 0,75 ml Môi trường (MT) dinh dưỡng 500 ml CHUẨN BỊ MÔI TRƯỜNG 15 phút VÀO MẪU -Cường độ ánh sáng: 2000-3000 lux -Thời gian: 8-10 giờ/ ngày -Nhiệt độ: 25 ± 2 0 C -Bề mặt dưới của lá tiếp xúc với môi trường -Khoảng cách giữa các mẫu đều nhau: 4 mẫu/bình Khử trùng HgCl 2 0,1%/5 phút Khử trùng cồn 70 0 /30 giây Bề dày MT: 2-2,5 cm Rửa dưới vòi nước Đo pH = 5,8 trên máy khuấy từ Cho vào trong tủ Cho vào trong tủ Hình thành callus Nuôi mẫu Cắt mẫu (5 × 5 cm) trên đĩa petri Rửa bằng nước cất: 1’ → 3’ → 3’ → 5’ Gạn nước vào → lắc → đổ nước ra theo thứ tự: 1 phút, 2 phút… Tráng lại bằng nước cất Lá đồng tiền Rửa xà phòng Rửa nước cất Bật UV Để nguội Khử trùng kèm 3 bình nước cất (đậy kín như bình chứa MT) → phục vụ thao tác vào mẫu Chiết rót vào bình nước biển 500 ml Nấu bằng lò vi sóng (≈5 phút khuấy agar 1 lần để agar tan đều) Đo pH = 5,8 trên máy khuấy từ Agar: 4 g + 250 ml nước cất 2 lần Khử trùng tủ cấy: sử dụng cồn 70 0 ( lau từ trên xuống duới, từ trong ra ngoài)