CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT ppsx

LOGO CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT Là các phương pháp để xác định số lượng vi sinh vật ở trong mẫu Hàm lượng vi sinh vật trong mẫu là bao nhiêu?? LOGO CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT Phương pháp xác định khối lượng khô 1 Phương pháp đo độ đục 2 Phương pháp đếm trực tiếp 3 Phương pháp đếm khuẩn lạc 4 5 Phương pháp MPN MNP/g Tế bào/ml Tế bào/g MPN/ml CFU/ml CFU/g ĐƠN VỊ Đơn vị định lượng Vi sinh vật PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH KHỐI LƯỢNG KHÔ  Định lượng nồng độ tế bào nấm men  Được coi là một phương pháp tiêu chuẩn  Có thể chuyển đổi kết quả sang các phương pháp khác một cách dễ dàng. Phase 1 Phase 1 Phase 2 Phase 2 Phase 3 Phase 3 LY TÂM LY TÂM RỬA RỬA SẤY SẤY Thu hồi nấm men trong dịch Rửa bằng dd xút để tách bỏ các chất hữu cơ bám trên bề mặt Sấy đến trọng lượng không đổi PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH KHỐI LƯỢNG KHÔ NGUYÊN TẮC RỬA SẤY LY TÂM - Mẫu cho vào ống ly tâm tốc độ 2000 vòng/ phút, 15 phút - Gạn bỏ nước trong - Cho NH 3 và nước cất khuấy đều  Ly tâm - Gạn bỏ nước trong - Chuyển toàn bộ phần lắng đáy vào đĩa sấy bằng cồn - Cho bay bớt hơi nước trên nồi đun cách thủy - Nhiệt độ 1050C, 24 giờ. - Làm nguội trong bình hút ẩm - Cân PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH KHỐI LƯỢNG KHÔ Huyền phù Huyền phù Trong nước Trong nước Máy so màu Máy so màu LY TÂM HÒA TAN ĐO ĐỘ ĐỤC PHƯƠNG PHÁP ĐO ĐỘ ĐỤC PHƯƠNG PHÁP ĐẾM TRỰC TIẾP SỐ LƯỢNG TẾ BÀO BUỒNG ĐẾM ĐẾM SỐ LƯỢNG NHUỘM XANH METYLEN [...]... mẫu Đếm các tế bào Biểu thị số lượng TB sống theo % so với tổng TB có trong mẫu PHƯƠNG PHÁP ĐẾM KHUẨN LẠC Phương pháp nuôi cấy trên/ trong môi trường thạch Phương pháp nuôi cấy trên màng lọc Nuôi cấy trong/trên môi trường thạch Nuôi cấy Trên môi trường Trong môi trường Nuôi cấy trong/trên môi trường thạch - Phát hiện những tế bào VSV còn sống trong mẫu - Phương pháp chuẩn để định lượng vi sinh vật Nuôi... bào sống Định lượng chọn lọc VSV Phương pháp đếm khuẩn lạc Phương pháp cấy trong môi trường thạch Ưu điểm - Cấy được thể tích mẫu lớn (1ml) - Xđ được các VSV cần dung dịch tiếp xúc từ nhiều phía - Cho phép đếm được mật độ VSV cao Nhược điểm - Không định lượng được những VSV quá nhạy với nhiệt độ - Không xác định đựoc hình dạng khuẩn lạc nhất định - Khó làm thuần một dòng vi sinh vật Phương pháp cấy trên... ở điều kiện thích hợp Đặt màng lọc lên MT dinh dưỡng Tăng sinh VSV trên màng lọc KÍCH THƯƠC LỖ LỌC PHẢI NHỎ HƠN KÍCH THƯỚC CỦA VI SINH VẬT CẦN PHÁT HIỆN Hình: Thiết bị lọc vi sinh vật với 3 vị trí đặt màng lọc PHƯƠNG PHÁP ĐẾM SỐ CÓ XÁC SUẤT LỚN NHẤT (MPN) - Most Probable Number - Định lượng trên kết quả định tính - Đánh giá số lượng VSV theo lượng VSV có xác suất lớn nhất hiện diện trong một đơn vị... tiếp bằng buồng đếm hồng cầu ƯU ĐIỂM - Cho biết được số lượng VSV NHƯỢC ĐIỂM - Dễ nhầm lẫn - Độ chính xác không cao - Không thích hợp cho huyền phù có mật độ thấp Các chất nhuộm phát huỳnh quang Acridin cam 4,6-dianidino2phenyl-indol AODC DAPI FITC Fluorescein isothiocyanate Loại bỏ sai số do các tạp chất Kết quả phản ánh đúng sinh khối Phương pháp xanh metylen Xác định số TB VSV sống – chết trong mẫu... Phương pháp cấy trên môi trường thạch Ưu điểm - Định lượng được các VSV nhạy với nhiệt độ - Có thể nhận dạng được khuẩn lạc đặc trưng - Dễ làm thuần chủng dòng VSV mục tiêu Nhược điểm - Chỉ cấy được thể tích mẫu nhỏ - Cho phép đếm được số lượng khuẩn lạc thấp Hình: Thiết bị hỗ trợ việc đếm khuẩn lạc Nuôi cấy trên màng lọc Kiểm tra nhanh Số lượng VSV Chất lượng VSV Thể tích dịch lớn Nuôi cấy trên màng lọc... số TB VSV sống – chết trong mẫu Nhuộm xanh metylen NGUYÊN TẮC – NHUỘM XANH METYLEN - Các tế bào sống có chứa enzyme có khả năng chuyển xanh metylen thành chất không màu Dd xanh metylen đi qua màng tế bào và enzyme của tế bào sống - mất màu xanh Các tế bào chết thì enzyme không hoạt động  không làm mất màu xanh  các tế bào bị nhuộm màu xanh Diagram Nhuộm xanh metylen Mất màu xanh Nhuộm màu xanh TẾ... vào khe hở giữa buồng đếm và lá kính - Đếm số lượng tế bào dưới kính hiển vi - Áp dụng chủ yếu đối với nấm men Vì sao? Đếm trực tiếp ĐẾM BUỒNG ĐẾM HỒNG CẦU ĐẾM TRỰC TIẾP BẰNG KÍNH HIỂN VI HUỲNH QUANG NGUYÊN TẮC - BUỒNG ĐẾM Pha loãng mẫu Mẫu cần xác định ngay, không quá 30 phút từ khi lấy mẫu A Cho mẫu lên buồng đếm B C Quan sát dưới kính hiển vi Đếm số lượng tế bào D Đếm trực tiếp ĐẾM BUỒNG ĐẾM HỒNG . LOGO CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT Là các phương pháp để xác định số lượng vi sinh vật ở trong mẫu Hàm lượng vi sinh vật trong. nhiêu?? LOGO CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT Phương pháp xác định khối lượng khô 1 Phương pháp đo độ đục 2 Phương pháp đếm trực tiếp 3 Phương pháp đếm khuẩn lạc 4 5 Phương pháp MPN MNP/g Tế. vị định lượng Vi sinh vật PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH KHỐI LƯỢNG KHÔ  Định lượng nồng độ tế bào nấm men  Được coi là một phương pháp tiêu chuẩn  Có thể chuyển đổi kết quả sang các phương pháp khác