CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT ppsx

Phase 1 LY TÂM Phase 2 RỬA Phase 3 SẤYThu hồi nấm men trong dịch Rửa bằng dd xút để tách bỏ các chất hữu cơ bám trên bề mặt Sấy đến trọng lượng không đổi PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH KHỐI LƯ

CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG

VI SINH VẬT

CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG

VI SINH VẬT

nhiêu??

LOGO CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG

PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH KHỐI LƯỢNG KHÔ

 Được coi là một phương pháp tiêu chuẩn

 Có thể chuyển đổi kết quả sang các

phương pháp khác một cách dễ dàng.

Phase 1 LY TÂM Phase 2 RỬA Phase 3 SẤY

Thu hồi nấm men

trong dịch

Rửa bằng

dd xút để tách bỏ các chất hữu cơ bám trên

bề mặt

Sấy đến trọng lượng không đổi

PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH KHỐI LƯỢNG KHÔ

NGUYÊN TẮC

- Cho bay bớt hơi

nước trên nồi

Huyền phù Trong nước Máy so màu

PHƯƠNG PHÁP ĐO ĐỘ ĐỤC

Đếm trực tiếp

ĐẾM TRỰC TIẾP BẰNG KÍNH HIỂN VI HUỲNH

QUANG

BUỒNG ĐẾM

HỒNG CẦU

ĐẾM

B

C

A

Pha loãng mẫu

Cho mẫu lên buồng đếm

Quan sát dưới kính hiển vi

Đếm số lượng tế bào

Mẫu cần xác định ngay, không quá

30 phút từ khi lấy mẫu.

NGUYÊN TẮC - BUỒNG

ĐẾM

Đếm trực tiếp

ĐẾM TRỰC TIẾP BẰNG KÍNH HIỂN VI HUỲNH

QUANG

BUỒNG ĐẾM

HỒNG CẦU

ĐẾM

- Không thích hợp cho huyền phù có mật độ thấp

Đếm trực tiếp bằng buồng đếm hồng cầu

4,6-dianidino-Fluorescein isothiocyanate

Loại bỏ sai

số do các tạp chất

Các chất nhuộm phát huỳnh quang

Kết quả phản ánh đúng sinh khối

Nhuộm xanh metylen

Phương pháp xanh metylen

Xác định số TB VSV sống – chết trong mẫu

NGUYÊN TẮC – NHUỘM XANH METYLEN

- Các tế bào sống có chứa enzyme có

khả năng chuyển xanh metylen

thành chất không màu

Dd xanh metylen đi qua màng tế

bào và enzyme của tế bào sống -

mất màu xanh

Các tế bào chết thì enzyme không

hoạt động  không làm mất màu

xanh  các tế bào bị nhuộm màu

xanh

Nhuộm màu xanh

Mất màu xanh

Nhuộm xanh metylen

Nhuộm xanh metylen

Trộn đều dd xanh metylen

với mẫuPha loãng mẫu

Đếm các tế bào

Biểu thị số lượng TB sống theo % so với tổng TB có trong mẫu

PHƯƠNG PHÁP ĐẾM KHUẨN LẠC

Nuôi cấy trong/trên môi trường thạch

Trong môi

trường

Trên môi trường

Nuôi cấy

Nuôi cấy trong/trên môi trường thạch

- Phát hiện những tế bào VSV

còn sống trong mẫu

- Phương pháp chuẩn để định

lượng vi sinh vật

Nuôi cấy trên/trong môi trường

Nuôi cấy trên/trong môi trường

Đĩa petri vô

Ủ 30 o C/3 ngày

Phương pháp đếm khuẩn lạc

Cho phép xác định sô

tế bào sống Định lượng chọn lọc VSV

- Không xác định đựoc hình dạng khuẩn lạc nhất định

Phương pháp cấy trong môi trường thạch

- Cho phép đếm được số lượng khuẩn lạc thấp

Phương pháp cấy trên môi trường thạch

Nuôi cấy trên màng lọc

Số lượng VSV

Chất lượng VSV

Kiểm tra nhanh

Nuôi cấy trên màng lọc

Đếm khuẩn lạc mọc trên màng lọc

Nuôi ủ ở điều kiện thích hợp

Đặt màng lọc lên MT dinh dưỡng

PHƯƠNG PHÁP ĐẾM SỐ CÓ XÁC SUẤT

LỚN NHẤT (MPN)

- Most Probable Number

- Định lượng trên kết quả định

PHƯƠNG PHÁP MPN

Pha loãng - 3 độ pha loãng liên tiếp

Cấy - 3 hoặc 5 lần lặp lại cho mỗi nồng độ mẫu pha loãng

Nuôi ủ - Tùy thuộc vào từng loại VSV

Hình 4: Thiết bị đồng nhất mẫu (Stomacher)