Luận văn : Khuếch đại vùng gen ITS1 - 5,8 S - ITS2 các nguồn nấm Beauveria basiana có tính độc cao part 6 potx

46 4.5.2.2. RN-LA-10 Dựa trên tín hiệu đọc được với primer ITS5 tìm đựơc vùng trình tự đáng tin cậy của RN-LA-10 thể hiện dưới đây: ATCGTTGCTT CGGCGGACTC GCCCCAGCCC GGACGCGGAC TGGACCAGCG 50 GCCCGCCGGG GACCTCAAAC TCTTGTATTC CAGCATCTTC TGAATACGCC 100 GCAAGGCAAA ACAAATGAAT CAAAACTTTC AACAACGGAT CTCTTGGCTC 150 TGGCATCGAT GAAGAACGCA GCGAAACGCG ATAAGTAATG TGAATTGCAG 200 AATCCAGTGA ATCATCGAAT CTTTGAACGC ACATTGCGCC CGCCAGCATT 250 CTGGCGGGCA TGCCTGTTCG AGCGTCATTT CAACCCTCGA CCTCCCCTTG 300 GGGAGGTCGG CGTTGGGGAC CGGCAGCACA CCGCCGGCCC TGAAATGGAG 350 TGGCGGCCCG TCCGCGGCGA CCTCTGCGCA GTAATACAGC TCGCACCGGG 400 ACCCCGACGC G 411 4.5.3. So sánh trình tự vùng ITS1 - 5,8 S - ITS2 của PUL-Q2-4 và RN-LA-10 So sánh trình tự 2 nguồn nấm trên bằng phần mềm Clustal, kết quả thể hiện như sau: PUL_Q2_4 ATCGTTGCTTCGGCGGACTCGCCCCAGCCCGGACGCGGACTGGACCAGCGGCCCGCCGGG 60 RN-LA-10 ATCGTTGCTTCGGCGGACTCGCCCCAGCCCGGACGCGGACTGGACCAGCGGCCCGCCGGG ************************************************************ PUL_Q2_4 GACCTCAAACTCTTGTATTCCAGCATCTTCTGAATACGCCGCAAGGCAAAACAAATGAAT 120 RN-LA-10 GACCTCAAACTCTTGTATTCCAGCATCTTCTGAATACGCCGCAAGGCAAAACAAATGAAT ************************************************************ PUL_Q2_4 CAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAACGCG 180 RN-LA-10 CAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAACGCG ************************************************************ PUL_Q2_4 ATAAGTAATGTGAATTGCAGAATCCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCC 240 RN-LA-10 ATAAGTAATGTGAATTGCAGAATCCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCC ************************************************************ PUL_Q2_4 CGCCAGCATTCTGGCGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCGACCTCCCCTTG 300 RN-LA-10 CGCCAGCATTCTGGCGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCGACCTCCCCTTG ************************************************************ 5.8S 5.8S 5,8 S 5,8 S 47 PUL_Q2_4 GGGAGGTCGGCGTTGGGGACCGGCAGCACACCGCCGGCCCTGAAATGGAGTGGCGGCCCG 360 RN-LA-10 GGGAGGTCGGCGTTGGGGACCGGCAGCACACCGCCGGCCCTGAAATGGAGTGGCGGCCCG ************************************************************ PUL_Q2_4 TCCGCGGCGACCTCTGCGCAGTAATACAGCTCGCACCGGGACCCCGACGCG 411 RN-LA-10 TCCGCGGCGACCTCTGCGCAGTAATACAGCTCGCACCGGGACCCCGACGCG *************************************************** Ghi chú: Dấu * thể hiện sự tương đồng. Nhận xét: Trình tự vùng ITS1 - 5,8 S - ITS2 của 2 nguồn nấm PUL-Q2-4 và RN-LA-10 hoàn toàn giống nhau. Vùng gen 5,8 S có kích thước 158 nu nằm ở vị trí từ nu thứ 123 đến nu thứ 280. Kết quả này cũng giống với kết quả của nấm Metarhizium anisopliae (Yazawa và Shimizu, 2001). Kích thước vùng ITS1 và ITS2 lần lượt là 122 nu và 131 nu. Tỷ lệ G+C của vùng ITS1 là 58,2 %, của vùng ITS2 là 68,7 %, của vùng 5,8 S là 48,7 %. Tỷ lệ G+C trên toàn vùng trình tự đọc được là 57,9 %. Trình tự vùng ITS1 - 5,8 S - ITS2 đọc được là 411 nu, so với kích thước vùng ITS từ cơ sở dữ liệu là 541 nu, phần trình tự chưa đọc được là 130 nu nằm trong vùng ITS1 và ITS2, nên việc so sánh sự biến đổi trong trình tự hai vùng ITS1 và ITS2 chỉ là tương đối. 4.5.4. So sánh trình tự vùng ITS1 - 5,8 S - ITS2 với các nguồn nấm Beauveria bassiana từ cơ sở dữ liệu NCBI PUL_Q2_4 ATCGTTGCTTCGGCGGACTCGCCCCAGCCCGGACGCGGACTGGACCAGCGGCCCGCCGGG 60 RN-LA-10 ATCGTTGCTTCGGCGGACTCGCCCCAGCCCGGACGCGGACTGGACCAGCGGCCCGCCGGG AF322927 ATCGTTGCTTCGGCGGACTCGCCCCAGCCCGGACGCGGACTGGACCAGCGGCCCGCCGGG AF322928 ATCGTTGCTTCGGCGGACTCGCCCCAGCCCGGACGCGGACTGGACCAGCGGCCCGCCGGG AF322930 ATCGTTGCTTCGGCGGACTCGCCCCAGCCCGGACGCGGACTGGACCAGCGGCCCGCCGGG AF322929 ATCGTTGCTTCGGCGGACTCGCCCCAGCCCGGACGCGGACTGGACCAGCGGCCCGCCGGG AF322924 ATCGTTGCTTCGGCGGACTCGCCCCAGCC-GGACGCGGACTGGACCAGCGGCC-GCCGGG AF322932 ATCGTTGCTTCGGCGGACTCGCCCCAGCC-GGACGCGGACTGGACCAGCGGCC-GCCGGG ***************************** *********************** ****** 48 PUL_Q2_4 GACC-TCAAACTCTTGTATT-CCAGCATCTTCTGAATACGCCGCAAGGCAAAACAAATGA 122 RN-LA-10 GACC-TCAAACTCTTGTATT-CCAGCATCTTCTGAATACGCCGCAAGGCAAAACAAATGA AF322927 GACC-TCAAACTCTTGTATT-CCAGCATCTTCTGAATACGCCGAAAGGCAAAACAAATGA AF322928 GACC-TCAAACTCTTGTATT-CCAGCATCTTCTGAATACGCCGCAAGGCAAAACAAATGA AF322930 GACC-TCAAACTCTTGTATT-CCAGCATCTTCTGAATACGCCGCAAGGCAAAACAAATGA AF322929 GACC-TCAAACTCCTGTATT-CCAGCATCTTCTGAATACGCCGCAAGGCAAAACAAATGA AF322924 GACCATCAAACTCTTGTATTATCAGCATCTTCTGAATACGCCGCAAGGCAAAACAAATAA AF322932 GACCATCAAACTCTTGTATTATCAGCATCTTCTGAATACGCCGCAAGGCAAAACAAATAA **** ******** ****** ********************* ************** * PUL_Q2_4 ATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAACG 182 RN-LA-10 ATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAACG AF322927 ATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAACG AF322928 ATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAACG AF322930 ATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATG AF322929 ATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATG AF322924 ATTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATG AF322932 ATTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATG ** ******************************************************* * PUL_Q2_4 CGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATCCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCG 242 RN-LA-10 CGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATCCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCG AF322927 CGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATCCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCG AF322928 CGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATCCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCG AF322930 CGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATCCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCG AF322929 CGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATCCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCG AF322924 CGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATCCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCG AF322932 CGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATCCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCG ************************************************************ PUL_Q2_4 CCCGCCAGCATTCTGGCGGGCATGCCTGTT-CGAGCGTCATTTCAACCCTCGACCTCCCC 303 RN-LA-10 CCCGCCAGCATTCTGGCGGGCATGCCTGTT-CGAGCGTCATTTCAACCCTCGACCTCCCC AF322927 CCCGCCAGCATTCTGGCGGGCATGCCTGTT-CGAGGGTCATTTCAACCCTCGACCTCCCC AF322928 CCCGCCAGCATTCTGGCGGGCATGCCTGTT-CGAGCGTCATTTCAACCCTCGACCTCCCC AF322930 CCCGCCAGCATTCTGGCGGGCATGCCTGTT-CGAGCGTCATTTCAACCCTCGACCTCCCC AF322929 CCCGCCAGCATTCTGGCGGGCATGCCTGTT-CGAGCGTCATTTCAACCCTCGACCTCCCC AF322924 CCCGCCAGCATTCTGGCGGGCATGCCTGTT-CGAGCGTCATTTCAACCCTCGACCTCCCT AF322932 CCCGCCAGCATTCTGGCGGGCATGCCTGTTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCGACCTCCCT ****************************** **** *********************** 49 PUL_Q2_4 TTGGGGAGGTCGGCGTTGGGGACCGGCAGCACACCGCCGGCCCTGAAATGGAGTGGCGGC 363 RN-LA-10 TTGGGGAGGTCGGCGTTGGGGACCGGCAGCACACCGCCGGCCCTGAAATGGAGTGGCGGC AF322927 TTGGGGAGGTCGGCGTTGGGGACCGGCAGCACACCGCCGGCCCTGAAATGGAGTGGCGGC AF322928 TTGGGGAGGTCGGCGTTGGGGACCGGCAGCACACCGCCGGCCCTGAAATGGAGTGGCGGC AF322930 TGGGGGAGGTCGGCGTTGGGGACCGGCAGCACACCGCCGGCCCTGAAATGGAGTGGCGGC AF322929 TTGGGGAGGTGCCCGTTGGGGACCGGCAGCACACCGCCGGCCCTGAAATGGAGTGGCGGC AF322924 TTGGGGAAGTCGGCGTTGGGGACCGGCAGCACACCGCCGGCCCTGAAATGGAGTGGCGGC AF322932 TTGGGGAAGTCGGCGTTGGGGACCGGCAGCACACCGCCGGCCCTGAAATGGAGTGGCGGC * ***** ** *********************************************** PUL_Q2_4 CCGTCCGCGGCGACCTCTGCGCAGTAATACAGCTCGCACCGGGACCCCGACGCG 414 RN-LA-10 CCGTCCGCGGCGACCTCTGCGCAGTAATACAGCTCGCACCGGGACCCCGACGCG AF322927 CCGTCCGCGGCGACCTCTGCGCAGTAATACAGCTCGCACCGGGACCCCGACGCG AF322928 CCGTCCGCGGCGACCTCTGCGCAGTAATACAGCTCGCACCGGGACCCCGACGCG AF322930 CCGTCCGCGGCGACCTCTGCGTAGTAATACAGCTCGCACCGGAACCCCGACGCG AF322929 CCGTCCGCGGCGACCTCTGCGTAGTAATACAGCTCGCACCGGAACCCCGACGCG AF322924 CCGTCCGCGGCGACCTCTGCGTAGTAAACCAACTCGCACCGGAACCCCGACGTG AF322932 CCGTCCGCGGCGACCTCTGCGTAGTAAACCAACTTGCACCGGAACCCCGACGTG ********************* ***** ** ** ******* ********* * Ghi chú: Dấu * thể hiện sự tương đồng, vùng in đậm là gen 5,8 S. Nhận xét: Tỷ lệ tương đồng chung cho 8 nguồn là 94,4 %. Kết quả so sánh vùng ITS1, 5,8 S và ITS2 cho thấy: Vùng ITS1 có 8 nu không giống nhau giữa các nguồn, chiếm 6,5 %. Vùng ITS2 có 12 nu không giống nhau giữa các nguồn, chiếm 9,16 %. Vùng gen 5,8 S có 3 nu không giống nhau giữa các nguồn, chiếm 0,019 %. So sánh trên toàn bộ trình tự cho thấy tỷ lệ khác biệt giữa các nguồn là 5,6 %. Nhận xét chung: Các sai biệt chiếm 5,6 % trình tự, kết quả này không phù hợp với kết quả nghiên cứu của Talaei - hassanloui và cộng sự (2002) với sự khác biệt trong toàn vùng ITS1 - 5,8 S - ITS2 của các dòng Beauveria bassiana là 1,16 - 1,77 %. Nguyên nhân là do vùng ITS1 và ITS2 chưa đọc được toàn bộ trình tự nên kết quả so sánh không mang tính đại diện. 50 Tỷ lệ trình tự tương đồng ở 3 vùng ITS1, 5,8 S và ITS2 lần lượt là 93,5 %, 99,9 % và 90,1 % so với kết quả của Shih HL và cộng sự (2002) thì sự tương đồng chiếm lần lượt là 96 %, 98 %, 100 %. Tỷ lệ tương đồng của vùng 5,8 S cao hơn tỷ lệ tương đồng trong 2 vùng ITS1 và ITS2, kết quả này cũng phù hợp với kết quả của Shih HL và cộng sự (2002). 4.4.5 Biểu đồ phân nhánh Từ kết quả so sánh trình tự vùng ITS - rDNA, dùng phần mềm Treeview vẽ cây phân nhánh 8 nguồn nấm, kết quả thể hiện như sau: Biểu đồ 4.1: Biểu đồ phân nhánh dựa trên trình tự vùng ITS – rDNA Ghi chú: Vị trí dấu * gồm 3 nguồn nấm PUL-Q2-4, RN-LA-10, AF322928. Nhận xét: 8 nguồn nấm so sánh có thể chia thành 4 nhánh: Nhánh 1: AF322924, AF322932 Nhánh 2: AF322929 Nhánh 3: AF322930 Nhánh 4: AF322928, AF322927, PUL-Q2-4, RN-LA-10 Dựa trên việc so sánh trình tự vùng ITS cho thấy 2 nguồn nấm PUL-Q2-4 và RN-LA-10 có quan hệ di truyền gần với nguồn nấm AF322927 nhất. 51 Phần V. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1. Kết luận Đã phân lập được nguồn nấm SCL-KG từ mẫu sâu nhiễm nấm thu thập từ Kiên Giang. Tiến hành khuếch đại vùng gen rDNA-ITS với cặp primer ITS4 và ITS5 đã thu được sản phẩm khuếch đại kích thước khoảng 580 bp của 19 nguồn nấm có hiệu quả phòng trừ gâ hại cao: SCL-KG-37, RM-TD-11, SCL-LA-5, SX-DL-9, PUL-BC-4, DTB-5, PUL-Q2-4, PUL-BC-6, BH-BD-11, SCL-LA-8, BH-BD-13, RN-LA-10, DTB-9, SCL-LA-6, CC-TD-4, SCL-KG-3, BXD-Q9-8, SN-PT-9, BH-BD-12. Đọc được trình tự vùng ITS1 - 5,8 S - ITS2 của 2 nguồn nấm PUL-Q2-4 và RN-LA-10. Kết quả so sánh cho thấy trình tự vùng ITS của 2 nguồn nấm trên hoàn toàn giống nhau, đoạn trình tự đọc được có kích thước 411 bp trong đó vùng gen 5,8 S có kích thước 158 bp. So sánh trình tự đọc được với trình tự tương ứng của 6 nguồn nấm Beauveria bassiana chọn ngẫu nhiên trong cơ sở dữ liệu của NCBI cho thấy: Tỷ lệ tương đồng chung trên toàn vùng là 94,4 %. Tỷ lệ tương đồng của 3 vùng ITS1, 5,8 S, ITS2 lần lượt 93,5 %, 99,9 % và 90,1 %. Tỷ lệ tương đồng của vùng gen 5,8 S cao hơn tỷ lệ tương đồng của 2 vùng ITS1 và ITS2. Dựa trên biểu đồ phân nhánh có thể chia 8 nguồn nấm so sánh thành 4 nhánh: Nhánh 1: AF322924, AF322932. Nhánh 2: AF322929 Nhánh 3: AF322930 Nhánh 4: AF322928, AF322927, PUL-Q2-4, RN-LA-10 5.2. Đề nghị Tiếp tục thu thập, phân lập và khảo sát tính độc của nhiều nguồn nấm Beauveria bassiana. Tiếp tục đọc trình tự vùng ITS1 - 5,8 S - ITS2 của những nguồn nấm có tính độc cao làm cơ sở xác định mối tương quan di truyền của các nguồn nấm thu thập 52 được và quan hệ giữa tính độc của nấm với những biến đổi trên vùng ITS1 - 5,8 S - ITS2. 5.3. Giới hạn đề tài Trình tự vùng ITS – rDNA chưa hoàn chỉnh vì hai lý do: một là, các tín hiệu đọc trình tự thường bị nhiễu ở 60 nu đầu tiên; hai là, trình tự không được đọc tới các nu cuối cùng mà thường mất tín hiệu trước đó. Chưa tìm ra được mối liên hệ giữa khả năng gây bệnh của nấm với những thay đổi trong trình tự vùng ITS. 53 Phần VI. TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT 1. Bùi Chí Bửu-Nguyễn Thị Lang, 1999. Di truyền phân tử - Những nguyên tắc cơ bản trong chọn giống cây trồng. Nhà xuất bản Nông nghiệp. TP.Hồ Chí Minh. Trang 195 – 236. 2. Hồ Huỳnh Thùy Dương, 1998. Sinh học phân tử. Nhà xuất bản giáo dục. 3. Nguyễn Thị Bích Lập, 2005. Khảo sát một số đặc điểm về sinh trưởng, phát triển vá khả năng gây bệnh của nấm Metarrhizium anisopliae (METCH.) SOROKIN kí sinh trên côn trùng gây hại. Luận văn tốt nghiệp kỹ sư Nông học. Đại học Nông Lâm. TP.Hồ Chí Minh. Trang 11-12. 4. Nguyễn Xuân Niệm, 2003. Hiệu lực phòng trừ bọ cánh cứng hại dừa (Brontispa spp.) của các chế phẩm sinh học tại tỉnh Kiên Giang. Thông tin khoa học Công nghệ và Môi trường Kiên Giang. 5. Phan Đặng Thái Phương. 2005. Khảo sát đặc điểm sinh trưởng. phát triển của nấm Beauveria bassiana Vuillemin trên côn trùng gây hại: I. Ảnh hưởng của nhiệt độ đến sinh trưởng. phát triển của nấm Beauveria bassiana; II. Bước đầu thiết lập phương pháp rDNA-PCR nghiên cứu cấu trúc di truyền của nấm Beauveria bassiana. Luận văn tốt nghiệp kỹ sư Nông học. Đại học Nông Lâm. TP.Hồ Chí Minh. 67 trang. 6. Khuất Bửu Thanh. 2003. Cơ sở di truyền phân tử và kỹ thuật gen. NXB khoa học và kỹ thuật. Trang 138 – 147. 7. Lê Thị Kim Thoa, 2004. Thu thập và đánh giá hiệu quả của nấm Beauveria bassiana Vuillemin ký sinh trên côn trùng gây hại. Luận văn tốt nghiệp kỹ sư Nông học. Đại học Nông Lâm. TP. Hồ Chí Minh. 53 trang. 8. Phan Thị Thùy, Đồng Thị Thanh, Nguyễn Thị Bắc, Trần Thanh Tháp, Hoàng Công Điền, Nguyễn Đậu Toàn. 1991-1995. Nghiên cứu công nghệ sản xuất và ứng dụng chế phẩm nấm Beauveria và Metarhizium để phòng trừ một số sâu hại cây trồng. Tuyển tập công trình nghiên cứu Bảo vệ thực vật 1990-1995. Viện bảo vệ thực vật. Nhà xuất bản Nông nghiệp. Hà Nội. Trang 189 – 201. 9. Nguyễn Ngọc Tú-Nguyễn Cửu Thị Hương Giang, 1997. Bảo vệ cây trồng bằng các chế phẩm từ vi nấm. Nhà xuất bản Nông nghiệp. TP.Hồ Chí Minh. 158 trang. 54 10. Lê Kiều Khánh Vân, 2005. Khảo sát đặc điểm sinh trưởng phát triển và khả năng gây bệnh của nguồn nấm Beauveria bassiana Vuillemin. ký sinh trên côn trùng gây hại. Luận văn tốt nghiệp kỹ sư Nông học. Đại học Nông Lâm. TP.Hồ Chí Minh. 11. Bùi Trang Việt, 2002. Sinh học phân tử. Đại học Nông Lâm TP.HCM. 12. Viện lúa Đồng bằng sông Cửu Long, 2004. Sử dụng gen kháng sâu trong công nghệ chuyển gen tạo cây kháng sâu hại. Bộ môn Bảo vệ thực vật. TIẾNG NƢỚC NGOÀI 13. Applied Biosystem, 2002. BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit. 14. Baldwin, B. G., Sanderson M. J., Porter J. M., Wojciechowski M. F., Campbell C. S., and Donoghue M. J., 1995. The ITS region of nuclear ribosomal DNA: a valuable source of evidence on angiosperm phylogeny. Annals of the Missouri Botanical Garden 82: 247–277. 15. Barns, S. M., Lane D. J., Sogin M. J., Bibeau C., and Weisburg W. G., 1991. Evolutionary relationships among pathogenic Candida species and relatives. J. Bacteriol. 173:2250-2255. 16. Berbee, M. L., Yoshimura A., Sugiyama J., and Taylor J. W., 1995. Is Penicillium monophyletic an evaluation of phylogeny in the family Trichocomaceae from 18S, 5.8S and ITS ribosomal sequence data. Mycologia 87: 210-222. 17. Bruns, T. D., White T. J. and Taylor J. W., 1991. Fungal molecular systematics. Annu. Rev. Ecol. Syst. 22:525-564. 18. Bruns, T. D., Vilgalys R., Barns S. M., Gonzalez D., Hibbett D. S., Lane D. J., Simo L., Stickel S., Szaro T. M., Weisburg W. G., and Sogin M. L., 1992. Evolutionary relationships within the fungi: analyses of small subunit ribosomal DNA sequences. Appl. Environ. Microbiol. 61:681-689. 19. Chilton, N.B., Hoste, H., Newton, L.A., Beveridge I. and Gasser, R.B., 1998. Common secondary structures for the second internal transcribed spacer pre-rRNA of two subfamilies of trichostrongylid nematodes. Int. J. Parasitol., 28, 1765–1773. 20. Coastes Brat S., Hellmich Richard L. and Lerwis Leslie C., 2002. Beauveria bassiana halotype determination based on nuclear rDNA internal transcribed spacer PCR – RFLP. Mycol. Res. 106(1): 40-50. 21. Colette A. Côté and Brenda A. Peculis, 2001. Role of the ITS2-proximal stem and evidence for indirect recognition of processing sites in pre-rRNA processing in yeast. Nucleic Acids Research, 2001, Vol. 29, No. 10 2106-2116. . nguồn nấm có hiệu quả phòng trừ gâ hại cao: SCL-KG-37, RM-TD-11, SCL-LA-5, SX-DL-9, PUL-BC-4, DTB-5, PUL-Q 2-4 , PUL-BC -6 , BH-BD-11, SCL-LA-8, BH-BD-13, RN-LA-10, DTB-9, SCL-LA -6 , CC-TD-4, SCL-KG-3,. trong vùng ITS1 và ITS2, nên việc so s nh s biến đổi trong trình tự hai vùng ITS1 và ITS2 chỉ là tương đối. 4.5.4. So s nh trình tự vùng ITS1 - 5,8 S - ITS2 với các nguồn nấm Beauveria bassiana. CC-TD-4, SCL-KG-3, BXD-Q 9-8 , SN-PT-9, BH-BD-12. Đọc được trình tự vùng ITS1 - 5,8 S - ITS2 của 2 nguồn nấm PUL-Q 2-4 và RN-LA-10. Kết quả so s nh cho thấy trình tự vùng ITS của 2 nguồn nấm trên