Luận văn : XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH DANH VI KHUẨN GÂY BỆNH LOÉT TRÊN CÂY BƯỞI BẰNG PHƯƠNG PHÁP SINH HỌC PHÂN TỬ part 1 doc

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  TRẦN THỊ MINH TÚ XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH DANH VI KHUẨN GÂY BỆNH LOÉT TRÊN CÂY BƢỞI BẰNG PHƢƠNG PHÁP SINH HỌC PHÂN TỬ LUẬN VĂN KỸ SƢ CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2006 i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH DANH VI KHUẨN GÂY BỆNH LOÉT TRÊN CÂY BƢỞI BẰNG PHƢƠNG PHÁP SINH HỌC PHÂN TỬ LUẬN VĂN KỸ SƢ CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giáo viên hƣớng dẫn TS LÊ ĐÌNH ĐƠN Sinh viên thực TRẦN THỊ MINH TÚ KHÓA: 2002 - 2006 Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2006 ii MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING NONG LAM UNIVERSITY, HCMC FACULTY OF BIOTECHNOLOGY  AMPLIFICATION MOLECULAR ENGINEERING TO IDENTY CITRUS CANKER BACTERIA GRADUATION THESIS MAJOR: BIOTECHNOLOGY Professor Dr LE DINH DON Student TRAN THI MINH TU TERM: 2002 - 2006 HCMC, 09/2006 iii LỜI CẢM ƠN Xin chân thành cảm ơn: - Ban Giám Hiệu trƣờng Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh tạo điều kiện cho suốt thời gian học tập trƣờng - Các thầy cô Bộ môn Công nghệ sinh học thầy trực tiếp giảng dạy ln tận tình hƣớng dẫn, giảng dạy, giúp đỡ động viên suốt bốn năm qua - TS Lê Đình Đơn tận tình hƣớng dẫn động viên tơi thời gian thực đề tài tốt nghiệp - TS Bùi Minh Trí anh Nguyễn Văn Lẫm anh chị phụ trách phịng Hóa Sinh thuộc Trung tâm Phân Tích Thí Nghiệm Đại học Nơng Lâm Tp HCM tận tình giúp đỡ tơi thời gian làm đề tài - Toàn thể lớp CNSH 28 hỗ trợ, giúp đỡ động viên suốt thời gian làm đề tài Thành kính ghi ơn ơng bà, cha mẹ nuôi nấng, dạy bảo đƣợc nhƣ ngày hôm nay, ngƣời thân gia đình ln tạo điều kiện động viên suốt trình học tập trƣờng Chân thành cảm ơn Tp HCM, tháng 08 năm 2006 Sinh viên Trần Thị Minh Tú iii TÓM TẮT TRẦN THỊ MINH TÚ, Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh Tháng 8/2006 “XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH DANH VI KHUẨN GÂY BỆNH LOÉT TRÊN CÂY BƢỞI BẰNG PHƢƠNG PHÁP SINH HỌC PHÂN TỬ” Giáo viên hƣớng dẫn: TS LÊ ĐÌNH ĐƠN Đề tài đƣợc thực đối tƣợng vi khuẩn Xanthomonas spp Đây vi khẩn có khả gây bệnh nhiều trồng khác nhau, ảnh hƣởng lớn đến suất trồng Chúng sử dụng kỹ thuật nông học, phƣơng pháp sinh học phân tử nhằm định danh dòng Xanthomonas sp gây bệnh loét bƣởi mục tiêu hiểu rõ chất sinh học dòng gây bệnh, để dễ dàng cho việc đƣa biện pháp phòng trừ bệnh vi khuẩn gây Đề tài đƣợc thực phòng thực tập Bệnh khoa Nông Học Trung tâm Phân Tích Thí Nghiệm trƣờng Đại học Nơng Lâm, Tp Hồ Chí Minh, từ 06/02/06 đến 06/08/06 Nội dung nghiên cứu: Phân lập, nuôi cấy, xác định gram, quan sát hình thái mơi trƣờng PGA, YDC Chủng bệnh nhân tạo để kiểm tra lại triệu chứng gây bệnh dòng vi khuẩn phân lập đƣợc Thực sắc ký mỏng dựa vào sắc tố đặc trƣng để nhận Xanthomonas sp Tiến hành nhân sinh khối, ly trích DNA tổng số Thực phản ứng PCR 16s-23s rDNA ITS với cặp primer Xan1330 Xan332 Thực phản ứng PCR vùng hrpW gen với cặp mồi chuyên biệt XACR XACF cho phép xác định nhanh Xanthomonas axonopodis pv citri iv Kết đạt đƣợc: Phân lập đƣợc dịng vi khuẩn, tất gram âm, mơi trƣờng YDC phân thành nhóm vàng sữa vàng chanh Tất dòng phân lập đƣợc tạo vết thƣơng sau chủng bệnh nhân tạo, triệu chứng bệnh có khác Kết sắc ký có dịng (XBDL1) có sắc tố phát sáng rõ sau chụp UV Thực thành công phản ứng PCR 16s-23s rDNA ITS với cặp primer Xan1330 Xan332 cho sản phẩm 1,1 kb Không thực đƣợc phản ứng PCR vùng hrpW gen với cặp mồi chuyên biệt XACR XACF v MỤC LỤC TRANG Trang bìa Trang tựa Lời cảm ơn .iii Tóm tắt iv Mục lục v Danh sách hình viii Danh sách bảng .ix Danh sách chữ viết tắt .xi Phần GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích 1.3 Yêu cầu 1.4 Giới hạn đề tài Phần TỔNG QUAN 2.1 Sơ lƣợc nhóm có múi giới nƣớc .3 2.1.1 Nguồn gốc phân loại bƣởi 2.1.2 Giá trị ăn có múi giới nƣớc 2.1.3 Tình hình sản xuất cam quýt Việt Nam 2.1.4 Tình hình sản xuất cam quýt giới 2.2 Bệnh loét cam Xanthomonas citri (Hasse-Dowson) .5 2.2.1 Triệu chứng bệnh .5 2.2.2 Đặc điểm gây bệnh chủng vi sinh vật gây bệnh (X a pv citri) 2.3 Sơ lƣợc vùng rDNA-ITS vi 2.3.1 Giới thiệu vùng rDNA 2.3.2 Vùng rDNA-ITS Xanthomonas ssp .9 2.4 Sơ lƣợc hrpW gen .9 2.5 Những cứu bệnh loét cam quýt Thế Giới Việt Nam 11 2.5.1 Trên Thế Giới .11 2.5.2 Tại Việt Nam .12 2.6 Quy trình định danh Xanthomona sp 12 2.6.1 Quy trình định danh Xanthomonas sp theo phƣơng pháp ni cấy, thực phản ứng sinh hóa 12 2.6.2 Quy trình định danh theo phƣơng pháp phân tử 13 2.7 Phƣơng pháp PCR 13 Phần VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP .16 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 16 3.2 Nội dung nghiên cứu .16 3.3 Vật liệu nghiên cứu 16 3.4 Phƣơng pháp tiến hành 17 3.4.1 Phân lập, nuôi cấy môi trƣờng PGA YDC, xác định Gram âm hay Gram dƣơng dòng vi khuẩn gây bệnh loét bƣởi 17 3.4.2 Chủng bệnh nhân tạo 18 3.4.3 Thực sắc ký mỏng định danh vi khuẩn 18 3.4.4 Phƣơng pháp ly trích DNA tổng số vi khuẩn 20 3.4.5 Khuếch đại vùng 16s-23s rDNA ITS vùng hrpW gen 21 3.4.5.1 Khuếch đại vùng 16s-23s rDNA ITS dòng vi khuẩn phân lập với cặp mồi Xan1330 Xan332 22 3.4.5.2 Khuếch đại đoạn hrpW gen dòng vi khuẩn phân lập với cặp mồi XACF XACR 23 3.5.6 Điện di kiểm tra sản phẩm ly trích sản phẩm PCR 23 vii Phần KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .25 4.1 Phân lập, xác định gram vi khuẩn gây bệnh loét bƣởi da láng bƣởi đƣờng cam 25 4.2 Kết nuôi cấy vi khuẩn gây bệnh loét môi trƣờng PGA YDC 25 4.2 Chủng bệnh bệnh nhân tạo 26 4.3 Sắc ký định danh vi khuẩn gây bệnh 28 4.4 Ly trích DNA tổng số 28 4.5 Thực PCR với cặp mồi Xan1330 Xan 332 vùng ITS 29 4.6 Thực PCR với cặp mồi XACR XACF hrpW gen 29 Phần KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 32 5.1 Kết luận 32 5.2 Đề nghị 32 Phần 6.TÀI LIỆU THAM KHẢO 33 Phần PHỤ LỤC .35 viii DANH SÁCH CÁC HÌNH Hình Trang Hình 2.1 Triệu chứng bệnh lt bƣởi Da Láng Hình 2.2 Triệu chứng bệnh loét trái bƣởi Da Láng Hình 2.3 Triệu chứng bệnh loét cành bƣởi Da Láng Hình 2.4 Cấu trúc vùng 16s-23s rDNA ITS Xanthomonas ssp 10 Hình 2.5 Sơ đồ hình thể mối tƣơng quan dòng Xanthomonas ssp dựa vùng 16s-23s rDNA ITS 10 Hình 3.1(a) Tấm sắc ký vừa nhỏ dung dịch sắc tố 19 Hình 3.1(b) Tấm sắc ký ngâm methanol bình hút ẩm 19 Hình 4.1 Sự phát triển dịng vi khuẩn phân lập đƣợc mơi trƣờng PGA nhiệt độ 28oC 25 Hình 4.2 Sự phát triển dòng vi khuẩn phân lập đƣợc môi trƣờng YDC nhiệt độ 28oC 26 Hình 4.3 Các triệu chứng bệnh sau chủng bốn dòng phân lập đƣợc non bƣởi Da Láng quan sát dƣới kính hiển vi độ phóng đai 4x10 lần 27 Hình 4.4 Kết sắc ký trƣớc 28 Hình 4.5 DNA tổng số ly trích theo quy trình 3.2.4.4 29 Hình 4.6 Kết diện di sản phẩm PCR đoạn 16s-23s rDNA ITS với cặp mồi Xan1330 Xan332 29 Hình 4.7 Sơ đồ bƣớc định danh vi khuẩn gây bệnh loét bƣởi theo phƣơng pháp sinh học phân tử 31 ix DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng Trang Bảng 2.1 Môi trƣờng phân lập số loài X campestis 14 Bảng 2.2 Đặc tính sinh hóa Xanthomonas sp 14 Bảng 3.3.Thành phần dung dịch đệm TE 20 Bảng 3.2 Thành phần phản ứng PCR với cặp mồiXan1330 Xan332 22 Bảng 3.3 Chu trình nhiệt phản ứng PCR với cặp mồi Xan1330 Xan332 22 Bảng 3.4 Thành phần phản ứng PCR với cặp mồi XACF XACR 23 Bảng 3.5 Chu trình nhiệt phản ứng với cặp mồi XACF XACR 23 Bảng 4.2 Hình thái vi khuẩn đƣợc phân lập từ bƣởi Da Láng bƣởi Đƣờng Cam 25 Bảng 4.3 Khả nhiễm bệnh dòng XBDL1, XBDL2, XBDL3, XBĐC3 27 x DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT ITS : Internal Transcribed Spacer – vùng dịch mã nhân DNA : Deoxyribonucleotide Acid rDNA : ribosome DNA PCR : Polymerase chain reaction – phản ứng chuỗi Polymerase PGA : Potato Glucose Agar STT : Số thứ tự ng : nano gram µM : micro mol TE : Tris EDTA µg : micro gram µl : micro lit TAE : Tris Acetic EDTA bp : base pair dNTP : deoxyribonucleotide triphosphate ISGs : intraspecific groups SDS : sodium dodecyl sulfate EDTA : ethylenediamine – tetraacetic acid IGS : intergenic spacer xi Phần GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề Nƣớc ta nằm vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa thuận lợi cho nhiều loại nhiệt đới phát triển Đặc biệt loại ăn đa dạng phong phú chủng loại Trong bƣởi (Citrus grandis L Rutaceae) loại ăn thuộc nhóm có múi đƣợc trồng phổ biến lâu đời vùng đông Nam Bộ với vùng trồng bƣởi lâu đời tiếng nhƣ Vĩnh Cửu (Đồng Nai), Tân Un (Bình Dƣơng) Cây bƣởi có tuổi thọ lâu loại có múi khác, thời gian bảo quản lâu Bƣởi loại giàu vitamin đƣợc thị trƣờng nƣớc nhƣ nƣớc ƣa chuộng hƣơng vị nhƣ dinh dƣỡng nên ngƣời trồng bƣởi có thu nhập cao ổn định so với loại nơng nghiệp khác Vì vậy, bƣởi góp phần cải thiện nâng cao đời sống ngƣời dân Tuy nhiên diện tích trồng bƣởi khơng tăng Mặt khác, giống bƣởi suất phẩm chất tốt Bƣởi Đƣờng Da Láng lại giảm rõ rệt Nguyên nhân bị nhiễm bệnh nghiêm trọng vi khuẩn Xanthomonas sp gây nên Vi khuẩn không ảnh hƣởng nhiều đến chất lƣợng nhƣng gây nên vết sần sùi mặt trái làm vẻ thẩm mỹ nên khó tiêu thụ thị trƣờng Ngồi ra, vi khuẩn gây bệnh cành, làm ảnh hƣởng đến sinh trƣởng phát triển Không gây hại bƣởi mà vi khuẩn Xanthomonas sp gây hại hầu hết loại có múi từ mức độ nhẹ đến nặng Để xác định rõ dịng vi khuẩn gây bệnh chúng tơi thực đề tài “Xây dựng quy trình định danh vi khuẩn gây bệnh loét bƣởi phƣơng pháp sinh học phân tử” Từ đó, chúng tơi tìm phƣơng pháp phòng trị bệnh đạt hiệu nhằm khôi phục lại giống bƣởi Đƣờng Da Láng mang lại hiệu kinh tế cao 1.2 Mục đích - Xây dựng quy trình định danh vi khuẩn gây bệnh loét có muối (cây bƣởi) - Phân loại tính độc chủng gây bệnh 2 1.3 Yêu cầu - Thành thạo thao tác phân lập, nuôi cấy, chủng bệnh nhân tạo phịng thí nghiệm - Thực đƣợc phƣơng pháp sắc ký mỏng định danh vi khuẩn - Thành thạo phƣơng pháp ly trích DNA vi khuẩn - Tính tốn, thiết lập đƣợc phản ứng PCR, hạn chế tối đa tạp nhiễm 1.4 Giới hạn đề tài - Chỉ xác định đƣợc chủng vi khuẩn gây bệnh loét bƣởi Da Láng, bƣởi Đƣờng Cam Xanthomonas sp - Chƣa giải đƣợc trình tự sản phẩm PCR đoạn 16s-23s rDNA ITS, chƣa thực đƣợc phản ứng PCR hrpW để định danh xác chủng vi khuẩn gây bệnh mức độ loài 3 Phần TỔNG QUAN 2.1 Sơ lƣợc nhóm có múi giới nƣớc 2.1.1 Nguồn gốc phân loại bƣởi Cây có múi trồng nhiều nƣớc giới có nguồn gốc từ nƣớc vùng nhiệt đới cận nhiệt đới Đông Nam Á Đƣờng ranh giới vùng xuất xứ ăn có múi nằm dãy chân núi Himalaya, phía đơng Ấn Độ qua miền nam Trung Quốc, phía nam đƣờng ranh giới vùng qua Australia (theo Taraka, 1971) Lịch sử trồng có múi nƣớc ta xuất từ lâu đời cách 3000-4000 năm (Đƣờng Hồng Dật) Ngày nay, có múi đƣợc trồng khắp đất nƣớc ta từ Lào Cai đến Cà Mau, từ Quảng Ninh đến Lai Châu Đặt biệt bƣởi với nhiều giống đƣợc trồng nƣớc ta: bƣởi Da Láng, bƣởi Năm Roi, bƣởi Lơng Cổ Cị, bƣởi Đƣờng Cam, bƣởi Da Xanh, bƣởi Lông Hồng.Các vùng trồng bƣởi tiếng nƣớc ta nhƣ Đồng Nai tỉnh Đồng Bằng Sơng Cửu Long 2.1.2 Giá trị ăn có múi giới nƣớc Cây ăn có múi nhƣ cam, quýt, bƣởi loại cao cấp đƣợc nhiều ngƣời ƣa chuộng đƣợc sản xuất nhiều nƣớc giới Giá trị dinh dƣỡng ăn có múi cao Trong thành phần thịt có chứa 6-12% đƣờng, chủ yếu sacaroza Hàm lƣợng vitamin C 40-90% mg/100g tƣơi Các loại axit hữu chứa thịt 0,4-1,2%, có nhiều axit có hoạt tính sinh học cao Trong cịn chứa chất khoáng dầu thơm Tinh dầu đƣợc cất từ vỏ quả, lá, hoa đƣợc dùng công nghiệp thực phẩm Đặc biệt chanh yên, đạt đƣợc 67 lít tinh dầu, tinh dầu ca quýt có giá trị cao thị trƣờng quốc tế Ở nhiều nƣớc giới, từ thời xa xƣa, ngƣời ta biết dùng thuộc chi Citrus làm thuốc chữa bệnh Ở kỷ thứ XVI, thầy thuốc Trung Quốc, Ấn Độ dùng cam quýt để phòng ngừa bệnh dịch hạch, chữa trị bệnh phổi bệnh chảy máu dƣới da Ở nƣớc ta ngƣời dân dùng cây, lá, hoa, loại ăn có múi để phịng chữa bệnh từ thời xa xƣa Lê Quý Đôn vết sách “ Vân đài loại ngữ” “Quýt vàng thƣợng phẩm, quýt đỏ, quýt vá, quýt cát hạ phẩn, vỏ qt có tính khoan trung hạ khí”, vỏ qt có tên dƣợc liệu “ trần bì” đƣợc sử dụng nhiều số thuốc y học cổ truyền Giá trị kinh tế, ăn có múi lâu năm chóng cho thu hoạch, cam quýt sống chóng cho thu hoạch vòng 25-30 năm cho suất cao, đạt từ 100-250 kg quả/1cây vụ.(Đƣờng Hồng Dật, 2000) 2.1.3 Tình hình sản xuất cam quýt Việt Nam Theo thống kê ngành nơng nghiệp đến năm 1993 diện tích trồng cam quýt nƣớc ta 27.640 ha, tăng năm 1989 năm 10.000 (năm 198917.205ha) Những năm gần diện tích trồng cam quýt số nơi, số tỉnh ĐBSCL tăng nhiều, số tỉnh miền trung nhƣ Nghệ An, Hà Tỉnh, Quảng Bình, diện tích trồng cam quýt bị giảm xuống, năm 1999 nƣớc có vào khoảng dƣới 30.000 Sản lƣợng cam quýt nƣớc ta năm 1993 đƣợc thống kê 163.778 tấn, tăng khoảng 63.000 so với năm 1989 (100.998 tấn) Năm 1999 ƣớc tính sản lƣợng có múi nƣớc 300.000 Điều kiện đất đai khí hậu nƣớc ta phù hợp cho phát triển ăn có múi Tuy nhiên, trình tăng chậm trình phát triển ăn có múi diễn biến thất thƣờng vùng sản xuất Ở số vùng trồng cam tiếng trƣớc nhƣ vùng cam Bố Hạ (Bắc Giang), vùng cam Xã Đồi (Nghệ An), khơng diện tích khơng tăng lên mà giảm xuống (theo Đƣờng Hồng Dật, 2000) Năm 1995, diện tích trồng ăn nƣớc 346.400 ĐBSCL 175.000 (50,7%), trung du miền núi Bắc Bộ 47.600 (13,7%), ĐBSH 33.800 (9,8%), miền Đông Nam Bộ 32.700 (9,5%), khu IV cũ 27.400 (7,9%), duyên hải miền Trung 20.600 (6,9%), Tây Nguyên 8.600 (2,5%) Theo Tổng cục thống kê năm 1996, vùng ĐBSCL đứng đầu sản lƣợng đứng hàng đầu chiếm tỷ trọng 49, 05% (Trần Thế Tục, 1998) 2.1.4 Tình hình sản xuất cam quýt giới Trong năm nửa sau kỷ XX, sản xuất cam quýt giới tăng nhanh Theo tài liệu Tổ chức lƣơng thực nông nghiệp Liên hợp quốc (FAO) vòng 20 năm (từ năm 1975 đến năm 1995), sản lƣợng cam quýt giới tăng từ 22 triệu lên đến 48 triệu tấn, tăng cao cam, quýt đỏ đến chanh yên, bƣởi chùm chanh Trong vịng 15 năm tính từ năm 1970 đến năm 1984, sản lƣợng cam tăng bình quân 51%, quýt 7,5%, chanh 4,7%, bƣởi chùm 4,3%/ năm Tổng sản lƣợng cam quýt giới thập niên 90 kỷ XX bình quân hàng năm 60-70 triệu với tổng diện tích 2,5 triệu ha, tập trung nƣớc có khí hậu nhiệt đới phần nhiệt đới vĩ độ cao 20-22oC bắc nam bán cầu Hiện có 75 nƣớc trồng cam quýt giới đƣợc chia thành khu vực : Châu Mỹ, nƣớc Địa Trung Hải, nƣớc Châu Phi nƣớc Châu Á Những nƣớc trồng nhiều cam quýt Mỹ 9,6 triệu /năm, Braxin 7,2 triệu tấn/ năm, Tây Ban Nha 1,7 triệu / năm Nhật Bản cung cấp10% sản lƣợng cam quýt giới với 2,7 triệu vào năm 20 kỷ XX, chủ yếu quýt Unshiu, loại quýt chiếm 49,2% tổng sản lƣợng cam quýt Nhật (Đƣờng Hồng Dật, 2000) Thống kê năm 1967 FAO cho biết tổng sản lƣợng trái có múi 28.902.000 tấn, cam quýt chiếm 23.434.000 tức 81% bƣởi (cộng với bƣởi chùm ) có 2.286.000 tức 7,9% chƣa 1/10 cam, quýt Dẫn chứng Mỹ sản xuất bƣởi chùm (Citrus paradis ), không sản xuất bƣởi (Citrus grandis) chiếm tới 1.161.000 tức 70,7% tổng số bƣởi bƣởi chùm Trong châu Á có hai nƣớc lớn Ấn Độ Philippin, bƣởi bƣởi chùm sản xuất 59.000 tức 2,6% Hiện nay, sản lƣợng trái có múi giới vƣợt 50 triệu tấn, gần gấp đôi năm 1967, song tỷ lệ khơng thay đổi nhiều phần bƣởi cịn thấp nữa.(Vũ Công Hậu, 1996) 2.2 Bệnh loét cam Xanthomonas citri (Hasse-Dowson) 2.2.1 Triệu chứng bệnh Bệnh loét hại cam quýt tất phận mặt đất, làm rụng lá, quả, cằn cọc chóng bị tàn Ở vƣờn ƣơm, bị bệnh nặng dễ chết Quả bị bệnh có phẩm chất xuất cất trữ đƣợc Nhiều nƣớc trồng cam, quýt giới cấm nhập cây, mắt ghép, bị bệnh Bệnh phá hoại ... TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH DANH VI KHUẨN GÂY BỆNH LOÉT TRÊN CÂY BƢỞI BẰNG PHƢƠNG PHÁP SINH HỌC PHÂN TỬ LUẬN VĂN KỸ SƢ... DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH DANH VI KHUẨN GÂY BỆNH LOÉT TRÊN CÂY BƢỞI BẰNG PHƢƠNG PHÁP SINH HỌC PHÂN TỬ” Giáo vi? ?n hƣớng dẫn: TS LÊ ĐÌNH ĐÔN Đề tài đƣợc thực đối tƣợng vi khuẩn Xanthomonas spp Đây vi khẩn... Những cứu bệnh loét cam quýt Thế Giới Vi? ??t Nam 11 2.5 .1 Trên Thế Giới .11 2.5.2 Tại Vi? ??t Nam .12 2.6 Quy trình định danh Xanthomona sp 12 2.6 .1 Quy trình định danh