CHUYÊN ĐỀ: SẮC KÝ (CƠ SỞ LÝ THUYẾT VÀ ỨNG DỤNG) part 7 potx

Đặc điểm của HPLCPha tĩnh được nhồi trong cột Pha động ở trạng thái lỏng: Các dung môi, hỗn hợp dung môi hoặc nước Phân loại HPLC dựa vào vật liệu nhồi  Pha thông thường Normal phase: v

Đặc điểm của HPLC

Pha tĩnh được nhồi trong cột Pha động ở trạng thái lỏng: Các dung môi, hỗn hợp dung môi hoặc nước

Phân loại HPLC dựa vào vật liệu nhồi

 Pha thông thường (Normal phase): vật liệu nhồi là silica đơn giản

 Trao đổi ion: silica biến tính (mdified silica)

 Pha đảo (reverse-phase): silica biến tính

Phần lớn các HPLC là pha đảo

 Chất phân tích được giữ trên pha tĩnh

phân cực nhỏ hơn cho đến khi bị rữa trôi bởi pha động phân cực đủ lớn

 Thao tác đơn giản

 Hiệu quả cao

 Cột làm việc ổn định

Có thể phân tích cho cả hai loại cấu tử có

đặc tính tương tự hoặc khác xa nhau

Mặc dầu có nhiều lý thuyết nghiên cứu về việc sử dụng pha đảo nhưng phần

lớn các chương trình HPLC pha đảo đều thu được từ phương pháp thử và

sai (by trial and error).

 Gốc R là C8 (n-octyl), C12 (n-octyl)

hoặc C18 (n-octyldecyl).

 Pha động là H2O + dung môi hòa tan

(acetonitrile, methanol, ethanol,

isopropanol).

 Các cấu tử phân cực sẽ bị rửa ra

nhanh nhất, tăng độ phân cực của pha

động sẽ làm tăng thời gian chạy mẫu

Pha tĩnh-Pha đảo

(Stationary Phases for Reversed-Phase LC)

Pha tĩnh bình thường của LC

(Stationary Phases for Normal LC)

 Pha động tương đối không phân cực:

Hexane, Isopropyl eter, toluene…

 Các cấu tử không phân cực sẽ bị rửa

ra nhanh nhất, tăng độ phân cực của pha động sẽ giảm thời gian chạy mẫu

Ảnh hưởng của bản chất pha tĩnh đến chất lượng tách

Pha đảo

Sơ đồ nguyên lý của HPLC

Các yêu cầu đối với dung môi

 Áp suất bơm: vài trăm atm (6000psi), lưu lượng 0,1 – 10 ml.min-1 với E<0,5%

 Vật liệu bơm bền ăn mòn đối với nhiều loại dung môi khác nhau

 Chế độ bơm piston

 Cỡ hạt trong cột sắc ký: 3 - 10m

 Một hoặc nhiều bình chứa dung môi (500 ml)

 Loại bỏ hoàn toàn khí hòa tan và cặn trong dung môi giảm độ rộng của peak (band spreading) và ảnh hưởng đến chất lượng detector

 Đuổi khí hòa tan trong dung môi bằng khí trơ (sparger)

 Lựa chọn chế độ tách rửa (elution) cho dung môi

 Trang bị các loại valves tỷ lệ (proportionating valves) cho phép đưa dung môi từ hai bình chứa với các lưu lượng thay đổi liên tục

Hiệu quả tách bằng phương pháp gradient elution

 Sử dụng một dung môi đơn giản có thành

phần không đổi: isocratic

 Sử dụng hai hay nhiều hơn các hệ dung

môi có độ phân cực (polarity) khác nhau

nhiều: gradient elution

 Tỷ lệ các loại dung môi được chương trình

hóa liên tục hoặc theo từng bậc

 Gradient elution: tăng chất lượng của quá

trình tách (improve seperation efficiency)

Quá trình tách rửa (Elution)

Polar Solvents

Water > Methanol > Acetonitrile > Ethanol > Oxydipropionitrile

Non-polar Solvents

N-Decane > N-Hexane > N-Pentane > Cyclohexane

Độ phân cực của một số dung môi sử dụng trong HPLC

Lựa chọn pha động và pha tĩnh

Chủ yếu dựa vào sự phân cực của cấu tử phân tích, pha động, pha tĩnh

Quy tắc chung: độ phân cực (polarity) của cấu tử cần phân tích và pha tĩnh là tương đương còn pha động có độ phân cực sai biệt

Khi độ phân cực của cấu tử và pha tĩnh quá giống nhau: thương tác mạnh giữa cấu tử cần phân tích và pha tĩnh  thời gian phân tích kéo dài

Tính chất một số loại dung môi sử dụng trong HPLC