tài liệu tham khảo cảm quan thực phẩm

tài liệu tham khảo cảm quan thực phẩm

Tài liệu: Docs.vn Hỗ trợ : Y!M minhu888 LỜI MỞ ĐẦU VÀ NHIỆM VỤ ĐỀ TÀI Trên giới, tiên phong thành công việc triển khai sản xuất thuốc chống ung thư từ ancaloid Dừa cạn phải kể đến công ty như: công ty Eli Lilly Mỹ với sản phẩm thuốc tiêm VELBAN® từ vinblastin sunfat định điều trị bệnh Hodgkin, ung thư máu, ung thư biểu mơ tinh hồn, u Kaposi, ung thư con; công ty Pharmacia Corporation Kalamazoo - Mỹ với sản phẩm thuốc tiêm VINCASAR PSF từ vinblastin sunfat vincristin sunfat định đặc hiệu điều trị bệnh bạch cầu ác tính; cơng ty Pierre Fabre - Cộng hòa Pháp với sản phẩm thuốc tiêm viên nén NAVELBINE® từ vinorelbin tartrat bán tổng hợp từ vindolin catharanthin, định đặc hiệu điều trị ung thư vú ung thư phổi, sử dụng độc lập phối hợp điều trị với cisplatin; v.v Ngày quốc gia vùng lãnh thổ trồng Dừa cạn chủ động nghiên cứu triển khai sản xuất vinblastin dẫn xuất Trung Quốc, Ấn Độ, Pakistan, Hàn Quốc, Nhật Bản nước Trung Á, Bắc Phi, v.v Có thể nêu vài số theo thống kê vào năm 2002 FAO làm ví dụ: Madagasca xuất 1000 (khơ) hoa Dừa cạn hàng năm; Ở Hungari, suất hoa Dừa cạn đạt tới 1,5 - khơ/ha/năm; Ở Ấn Độ, riêng tập đồn Cipla hàng năm sản xuất khoảng 15 - 25 kg vinblastin sunfat vincristin sunfat; Chúng ta biết, độc tính cao, nên vincristin sử dụng điều trị ung thư máu nhiều so với vinblastin, mà khu vực Bắc Mỹ châu Âu, tính riêng lượng tiêu thụ vincristin sunfat đạt tới 40 triệu USD hàng năm Ở Việt Nam, Dừa cạn mọc tự nhiên suốt từ Bắc vào Nam trồng làm cảnh cho hoa đẹp Đây giống có khả chịu hạn cao có thời gian canh tác ngắn Các kết thử nghiệm Trung tâm Nghiên cứu trồng chế biến thuốc Đà Lạt cho thấy Dừa cạn Catharanthus roseus L phát triển tốt đất cát khô hạn ven biển tỉnh miền Trung, sau tháng trưởng thành tích lũy đủ hàm lượng ancaloid đạt tiêu chuẩn xuất Từ năm 1980, có nhiều đề tài nghiên cứu ancaloid từ Dừa cạn thực hiện, việc nghiên cứu hồn thiện cơng nghệ chiết xuất bán tổng hợp vinblastin vincristin chưa tổ chức triển khai nghiêm túc để đưa vào sản xuất Việt Nam Với nguồn nguyên liệu Dừa cạn đạt vượt tiêu chuẩn châu Âu tổ chức canh tác quy mô, sản lượng xuất sang thị trường Pháp châu Âu đạt hàng trăm năm, mà bệnh nhân ung thư máu phải sử dụng Tài liệu: Docs.vn Hỗ trợ : Y!M minhu888 vinblastin sunfat nhập từ hãng Eli Lilly - Mỹ, Geoden Richer - Hungari, Pierre Fabre - Cộng hòa Pháp với giá 240.000 VND lọ 10 mg Theo số liệu Vimedimex II BV Pharma, hàng năm công ty nhập khoảng triệu USD thuốc tiêm vinblastin sunfat, vincristin sunfat để cung cấp cho thị trường tỉnh phía Nam Từ kết khảo sát sơ trình nghiên cứu Viện Hóa học cơng nghiệp, kết hợp so sánh tham khảo cơng nghệ nước ngồi, chúng tơi nhận thấy với công nghệ chiết xuất đại, giống Dừa cạn tốt (có hàm lượng Vinblastin 0,01 % khơ - tương đương với Madagasca), chi phí tối thiểu để phân lập g vinblastin lớn 250 USD, đó, giá xuất xưởng Eli Lilly, Geoden Richer Cipla dao động khoảng 120 - 135 USD/1 g vinblastin (FAO/UNDP - 2002) Như vậy, túy dựa vào chiết tách, thuốc chống ung thư máu từ hoa Dừa cạn Việt Nam không cạnh tranh thị trường nước Trong lại khơng tận dụng tiền chất có sẵn Dừa cạn để bán tổng hợp thuốc Xuất phát từ thực tế nêu trên, hỗ trợ Tổng Cơng ty Hóa chất Việt Nam, đề xuất thực đề tài “Nghiên cứu hồn thiện thử nghiệm cơng nghệ điều chế vindolin, catharanthin vinblastin từ Dừa cạn Việt nam làm nguyên liệu sản xuất thuốc chống ung thư” nhằm đạt mục tiêu: Có quy trình cơng nghệ chiết tách ancaloid Vindolin Catharanthin từ Dừa cạn Việt Nam làm nguyên liệu tổng hợp Vinblastin Đề xuất quy trình cơng nghệ bán tổng hợp vinblastin từ vindolin catharanthin phù hợp điều kiện Việt Nam Tài liệu: Docs.vn Hỗ trợ : Y!M minhu888 Chương I TỔNG THUẬT TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRÊN THẾ GIỚI VÀ TRONG NƯỚC 1.1 Các nghiên cứu công nghệ chiết xuất bán tổng hợp giới 1.1.1 Vài nét Dừa cạn Vinca ancaloid Cây Dừa cạn Vinca rosea L (Catharanthus roseus (L.) G Donn.) thuộc họ Trúc đào (Apocynaceae) phân bố rộng rãi nhiều nước nhiệt đới, đặc biệt Việt Nam Madagasca, nước phương Tây thường biết đến tên gọi Madagascan periwinkle Trong dân gian, cao sắc nước hoa Dừa cạn sử dụng để chữa mắt, tiêu viêm, cầm máu làm dịu vết đốt côn trùng Đặc biệt, theo y học cổ truyền Ấn Độ, Madagasca Việt Nam, thầy lang dùng Dừa cạn để trị bệnh tiểu đường [1, 2] Năm 1952, nghiên cứu tác dụng ancaloid từ Dừa cạn lên chuột , R Noble C Noble phát hợp chất có khả làm giảm số lượng bạch huyết cầu máu chuột Từ đó, theo định hướng nghiên cứu chất gây độc tế bào gây ức chế phân bào bạch cầu ác tính, Vinca ancaloid có hoạt tính vinblastin, vincristin, vindesin vinorelbin phát bán tổng hợp để ứng dụng điều trị ung thư, đặc biệt bệnh Hodgkin bệnh ung thư máu Năm 1958, lần Noble Beer phân lập vinblastin - gọi vincaleukoblastin từ Dừa cạn; năm 1959 đến 1962, Johnson Svoboda tìm vincristin - ancaloid hàm lượng thấp Dừa cạn Hợp chất muối sunfat vinblastin vincristin áp dụng rộng rãi trị liệu hóa học chữa ung thư máu, ung thư mơ bào bạch huyết, ung thư tinh hồn ung thư vú [3, 4] Các nghiên cứu tổng hợp vinblastin chuyển hóa thành dẫn xuất áp dụng hóa trị liệu ung thư đẩy mạnh: Năm 1978, Barnett cộng phản ứng hidrazin hóa hidro hóa chuyển hóa vinblastin thành vindesin, chất áp dụng hóa trị liệu bệnh ung thư vú ung thư phổi tên biệt dược Eldisine®; dấu mốc quan trọng mở hướng cho việc sản xuất vinblastin dẫn xuất từ Dừa cạn thành công Mangeney cộng vào năm 1979, cải tiến phản ứng Polonovski để tổng hợp vinblastin vincristin từ ancaloid chủ yếu Vinca rosea L vindolin catharanthin [1, 2, 4, 5] Tài liệu: Docs.vn Hỗ trợ : Y!M minhu888 Dưới cấu trúc số Vinca ancaloid ứng dụng để điều chế thuốc chống ung thư số bệnh khác y học Cho đến nay, vinblastin dẫn xuất sử dụng làm thuốc chống ung thư giới sản xuất chủ yếu theo hai đường: - Chiết xuất từ Dừa cạn, - Bán tổng hợp từ vindolin catharanthin theo phương pháp hóa học theo phương pháp sử dụng xúc tác enzym (Mc Lauchlan cộng sự) [6] Với kết nghiên cứu chế gây bệnh ung thư điều trị y học lâm sàng đại lĩnh vực sinh học phân tử, vinblastin, vincristin dẫn xuất lại khẳng định lần hoạt chất có tác dụng chống ung thư thực thụ, khơng với vai trị tác nhân gây độc tế bào (cytotoxicity) biết, mà cịn đóng vai trị chất ức chế hoạt tính tác nhân nhân (nuclear factor), đặc biệt ức chế hoạt tính NF-κB (nuclear factor κB) - tác nhân nhân chủ yếu trình gây bệnh viêm phát sinh tế bào ung thư [4, - 14] 1.1.2 Một số nét tiêu biểu công nghệ phân lập Vinca ancaloid Vinblastin vincristin ancaloid dimeric indol-indolin, tích tụ hoa Dừa cạn với hàm lượng thấp (10-5 - 10-4 %), việc phân lập tinh khiết chất thường phức tạp địi hỏi kỹ thuật chiết tách trình độ cao Mặc dầu vậy, Tài liệu: Docs.vn Hỗ trợ : Y!M minhu888 quy trình cơng nghệ chiết Dừa cạn xây dựng dựa theo phương pháp chung chiết xuất ancaloid, sử dụng kỹ thuật chiết phân bố dung môi hữu khác với việc thay đổi pH phù hợp với giai đoạn cụ thể Hình 1.1 nêu sơ đồ tóm tắt số phương pháp chiết tách truyền thống đại áp dụng nghiên cứu sản xuất Vinca ancaloid [4, 5, 11 - 17]: Hình 1.1: Sơ đồ tóm tắt quy trình chiết phân lập ancaloid Theo Noble cộng sự, Vinca rosea L chiết hỗn hợp etanol với axít axetic theo tỷ lệ thích hợp Cao dịch chiết thu sau cất loại dung mơi hịa vào dung dịch HCl % lọc loại tạp chất không tan Dịch lọc điều chỉnh tới pH chiết rửa benzen để loại bỏ tạp chất màu chất phân cực khơng có tính kiềm Dịch nước axít cịn lại trung hòa NH4OH đem chiết lấy hỗn hợp “ancaloid tổng số” (Total alkaloids) benzen clorofoc [3] “Ancaloid tổng số” phân tách sắc ký cột chất hấp phụ nhôm ôxit hoạt độ - (Woehlem Al2O3 grade IV-V) với hệ dung môi benzen - diclometan rửa giải theo cách gradient Các phân đoạn sắc ký sàng lọc cách kiểm tra hoạt tính gây độc tế bào xác định thành phần vinblastin sắc ký lớp mỏng Các phân đoạn sắc ký chứa vinblastin kiệt, sau hịa vào dung dịch axít sunfuric/etanol để kết tinh vinblastin sunfat [3, 4, 5] Svoboda cộng (1959) đóng góp vào quy trình Noble số cải tiến có ý nghĩa Ở giai đoạn đầu, nguyên liệu thực vật chiết trực tiếp với dung mơi phân Tài liệu: Docs.vn Hỗ trợ : Y!M minhu888 cực n-hexan để rửa chất màu ancol béo mạch dài trước chiết với dung mơi axít tartric/etanol Ở giai đoạn sau, dung môi độc hại benzen thay clorofoc, dicloetan diclometan “Ancaloid tổng số” phân tách sắc ký cột ôxit nhôm Phương pháp áp dụng từ năm 1960 để sản xuất vinblastin sunfat vincristin sunfat công ty Eli Lylli, Mỹ [4, 5, 13] Trong dung môi ancol/nước phối hợp với đệm axít, Vinca ancaloid có giá trị pKa khác nhau, gợi ý để phân tách hợp chất sắc ký phân bố lỏng - lỏng với pha dung mơi có pH khác Năm 1999, CNRS - Cộng hòa Pháp, Renault cộng công bố kết nghiên cứu phân lập Vinca ancaloid sắc ký phân bố ly tâm (CPC) với hai pha dung mơi có pH biến đổi (gradient) “Ancaloid tổng số” Dừa cạn phân tách cột tách HPCPC Sanki series 1000 với pH pha gradient từ - 9; pha cịn lại có pH gradient từ 10 - Độ tinh khiết ancaloid vindolin, catharanthin, vinblastin vindolinin phân tách từ hỗn hợp đạt tới 80 - 90 % Tuy nhiên, suất phân tách thấp so với phương pháp sắc ký khác nên kỹ thuật CPC áp dụng hạn chế nghiên cứu thí nghiệm [14] Cũng dựa vào khác biệt số pKa Vinca ancaloid dung dịch nước/axít, Guanasekera cộng phát triển phương pháp chiết phân bố dung môi dẫn xuất clo pH khác Theo đó, dịch chiết nước/axít Dừa cạn điều chỉnh môi trường NH4OH tới giá trị pH xác định chiết với diclometan, dicloetan clorofoc để thu nhận phần chiết ancaloid tương ứng Với phương pháp chiết này, tổng cộng lượng ancaloid phần chiết thu thấp so với phương pháp truyền thống; tập trung nhóm Vinca ancaloid vào phần chiết xác định từ tiết kiệm chi phí phân lập tinh khiết ancaloid mong muốn [15, 16, 17] Nhìn chung, phương pháp chiết xuất phân tách ancaloid áp dụng để nghiên cứu phân lập ancaloid từ Dừa cạn thực pilot phịng thí nghiệm Hóa Dược, Hóa Hữu Hóa Hợp chất thiên nhiên Nhưng phương pháp có nhược điểm chung phân chia thành nhiều giai đoạn thực phức tạp, khó kiểm soát, dễ gây thất thoát sản phẩm, điều mang ý nghĩa tiêu cực việc triển khai quy mô công nghiệp chiết xuất hoạt chất có hàm lượng thấp Vinca ancaloid [4 - 17] Do vậy, để đưa cơng nghệ sản xuất, quy trình chiết phân tách nên xây dựng thành chu trình cơng nghệ hồn chỉnh khép kín; thay dung mơi độc hại benzen dung mơi tương đương độc ảnh hưởng mơi trường; Tài liệu: Docs.vn Hỗ trợ : Y!M minhu888 tối ưu hóa đại hóa phép đo kiểm sốt q trình chiết tách sắc ký 1.1.3 Bán tổng hợp Vinblastin dẫn xuất Vinblastin dẫn xuất ancaloid dimeric có hàm lượng thấp (~ 0,01 % Dừa cạn khô), ancaloid chủ yếu Dừa cạn vindolin - hai phần monomer cấu thành vinblastin - có hàm lượng Dừa cạn lớn đến lần so với vinblastin Trong trình phân tách “ancaloid tổng số” Dừa cạn sắc ký hấp phụ, thông thường vindolin catharanthin rửa giải trước so với vinblastin Để hạ giá thành thuốc, tận dụng phụ phẩm vindolin, catharanthin Vinca ancaloid khác, nghiên cứu bán tổng hợp vinblastin dẫn xuất từ vindolin catharanthin phát triển mạnh mẽ đưa vào áp dụng giới từ cuối năm 1970 [18 - 25] Năm 1978, Barnett cộng phản ứng hidrazin hóa hidro hóa chuyển hóa vinblastin thành vindesin, chất áp dụng hóa trị liệu bệnh ung thư vú ung thư phổi tên biệt dược Eldisine ® [13]; dấu mốc quan trọng mở hướng cho việc sản xuất vinblastin dẫn xuất từ Dừa cạn thành công Mangeney cộng vào năm 1979, cải tiến phản ứng Potier-Polonovski để bán tổng hợp vinblastin vincristin từ ancaloid chủ yếu C roseus vindolin catharanthin [18, 19, 21] Năm 1974, CNRS - Pháp, Potier cộng nghiên cứu điều chế dimeric ancaloid kiểu vinblastin dựa sở ơxy hóa catharanthin thành Nb-oxidcatharanthin ghép đơi với vindolin theo phản ứng Potier-Polonovski Theo hướng này, Mageney với nhóm nghiên cứu Potier điều chế thành công 5’-noranhydovinblastin (vinorelbin), vinblastin, leurosidin, leurosin vincristin [18, 19, 21] Các chất có hoạt tính tốt quy trình bán tổng hợp áp dụng công ty Pierre Fabre để sản xuất thuốc chống ung thư vào năm 1979 Theo quy trình sử dụng vào thời kỳ đó, hiệu suất tạo thành vinblastin đồng phân 20’-epimer leurosidin thấp (~ %), chi phí chất phản ứng cao, công ty Pierre Fabre điều chế đến 5’-nor-anhydrovinblastin để sản xuất vinorelbin tartrat đăng ký độc quyền sản phẩm làm thuốc tiêm viên nén NAVELBINE® [21] Từ phát kiến Potier Mageney, nghiên cứu nhằm nâng cao hiệu suất điều chế vinblastin, tổng hợp chọn lọc lập thể vinblastin dẫn xuất đẩy mạnh CNRS nhóm nghiên cứu khác giới (Xem Sơ đồ 1) Năm 1979, Langlois cộng nghiên cứu phản ứng sử dụng ơxy khơng khí làm tác nhân ơxy hóa Dạng enamin khử hydro với xúc tác Pd/C Tài liệu: Docs.vn Hỗ trợ : Y!M minhu888 NaBH4 Sau này, Kutney (1981) công bố quy trình one-pot điều chế vinblastin leurosidin với phản ứng ơxy hóa sử dụng peroxid, ơxy khơng khí FeCl3; tác nhân khử dẫn xuất dihydronicotinamid Với tỷ lệ nồng độ chất phản ứng phù hợp, hiệu suất vinblastin đạt tới 40 % (Sơ đồ 1) [20] Tài liệu: Docs.vn Hỗ trợ : Y!M minhu888 Sơ đồ 1: Tóm tắt phương pháp điều chế Vinblastin tiừ Vindolin Catharanthin 3’,4’-Anhydrovinblastin (AVLB) tạo 18 % trình one-pot tổng hợp vinblastin từ catharanthin vindolin Trong đó, chọn lọc thực phản ứng khử - 1,2 hợp chất trung gian hoạt động iminium tác nhân NaBH 4, hiệu suất tạo thành 3’,4’-anhydrovinblastin đạt tới 80 % (Sơ đồ 1) Do nghiên cứu bán tổng hợp vinblastin từ AVLB đẩy mạnh nhằm tận dụng sản phẩm nâng cao suất VLB [23] Sakamoto cộng (1990) phát triển phương pháp ơxy hóa AVLB FeCl3/amoni oxalat phương pháp áp dụng Công ty Công nghệ Hóa dầu Mitsui để sản xuất vinblastin Hiệu suất chuyển hóa AVLB ~ 90 %, hiệu suất tạo thành vinblastin đạt tới 40 % [23] Theo hướng sử dụng xúc tác nguồn gốc sinh học làm tác nhân chiral, năm 2006, Tatsuya cộng công bố kết sử dụng kháng thể monoclon anti-vinblastin MAb-10-A9 làm xúc tác, oxy khơng khí NaBH3CN sử dụng làm tác nhân oxy hóa - khử hóa; sau 24 giờ, hiệu suất chuyển hóa 3’,4’-anhydrovinblastin tạo thành vinblastin đạt tới 82,2 %, sản phẩm hoàn toàn khơng có mặt 20’-epi-vinblastin (leurosidin) Tuy nhiên, việc tổ hợp MAb-10-A9 động vật giai đoạn nghiên cứu phát triển cho tương lai [6] 1.2 Tình hình nghiên cứu triển khai nước Ở Việt Nam, Dừa cạn mọc tự nhiên suốt từ Bắc vào Nam trồng làm cảnh cho hoa đẹp Đây giống có khả chịu hạn cao có thời gian canh tác ngắn Các kết thử nghiệm Trung tâm Nghiên cứu giống chế biến thuốc Đà Lạt cho thấy Dừa cạn Vinca rosea L phát triển tốt đất cát khô hạn, sau tháng trưởng thành tích lũy đủ hàm lượng ancaloid đạt tiêu chuẩn xuất Công ty Vimedimex II kết hợp với Trung tâm Nghiên cứu giống chế biến thuốc Đà Lạt thử nghiệm canh tác Dừa cạn vùng đất cát ven biển tỉnh miền Trung để thu hoạch rễ phục vụ xuất với sản lượng hàng trăm năm Từ năm 1980 - 1990, Đại học Dược Hà Nội, Viện Dược liệu Xí nghiệp Dược phẩm Trung Ương II thuộc Bộ Y tế thực đề tài nghiên cứu chiết xuất vinblastin ancaloid khác từ Dừa cạn Việt Nam để phục vụ sản xuất thuốc chống Tài liệu: Docs.vn Hỗ trợ : Y!M minhu888 ung thư thuốc hỗ trợ tuần hoàn não Các tác giả nghiên cứu chiết ancaloid mơ theo quy trình Noble Svoboda Cụ thể sau: Nguyên liệu chiết cồn 90o, cao dịch chiết sau loại dung môi chuyển sang dạng muối ancaloid cách hịa vào dung dịch axít sunfuric % cho tan tối đa, pH điều chỉnh giữ khoảng pH 2, sau lọc loại cặn khơng tan Dịch lọc chiết rửa nhiều lần với tricloetylen để loại chất lipophin Dịch axít cịn lại kiềm hóa NH4OH tới khoảng pH 9,5 - 10, sau chiết lấy “ancaloid tổng số” từ dung dịch kiềm tricloetylen “Ancaloid tổng số” phân tách cột sắc ký nhôm ôxit với hệ dung môi rửa giải benzen số dung môi hữu khác Các phân đoạn sắc ký kiểm tra định tính sắc ký lớp mỏng Sản phẩm kết tinh trực tiếp từ phân đoạn sắc ký dạng muối sunfat sau cô loại bớt dung mơi Ngồi vinblastin sunfat, tác giả thu ancaloid chủ yếu Dừa cạn vindolin, catharanthin ajmalicin Nhược điểm phương pháp vinca ancaloid khơng trích ly cách triệt để khỏi mô thực vật chúng khó tan dung mơi cồn nước Một nét cải tiến trình chiết so với Noble sử dụng axít sunfuric để đẩy vinca ancaloid cao dịch chiết thành dạng muối sunfat tan nước Đây dạng muối bền không tan cồn tuyệt đối, dễ dàng chiết rửa loại tạp chất lipophin dịch chiết tricloetylen Nhưng bộc lộ nhược điểm muối khơng hồn ngun trở lại ancaloid hồn tồn sử dụng amoniac để kiềm hóa dịch axít, nên hỗn hợp “ancaloid tổng số” chiết từ có mặt muối phân ly nước ancaloid Các thành phần không loại bỏ trước sắc ký trao đổi ion ảnh hưởng mạnh tới độ chọn lọc trình tách sắc ký “ancaloid tổng số” cột nhơm ôxit Từ sản phẩm vinblastin vinblastin sunfat không làm giàu tới mức độ cần thiết để tinh chế cách kết tinh mà buộc phải điều chế dạng đông khô, dễ hút ẩm bị phân hủy Trong nỗ lực tổng hợp toàn phần Vinca ancaloid, năm 1990, tác giả Phan Đình Châu (Đại học Dược Hà Nội), Csaba Szántay (Đại học kỹ thuật Budapest - Hungary) cộng điều chế thành công dẫn xuất Vinca ancaloid monomeric vincadifformin, (+/-)-3-oxominovine tabersonin Tuy nhiên, tabersonin thể hoạt tính làm giảm nhẹ huyết áp (khoảng 25 % so sánh với reserpin), chất chưa tìm ứng dụng điều trị lâm sàng Cũng năm 1990, tác giả Mai Ngọc Tâm (Viện Khoa học Công 10 Tài liệu: Docs.vn Hỗ trợ : Y!M minhu888 nghệ Việt Nam), Bogomil Pyuskyulev (Viện Hàn lâm khoa học Bungari) cộng sử dụng sắc ký lỏng hiệu lực cao phân tích xác định biến đổi hàm lượng vindolin, catharanthin vinblastin Dừa cạn vào thời kỳ sinh trưởng khác Đóng góp vào hiểu biết bán tổng hợp, chuyển hóa cấu trúc Vinca ancaloid kiểu vinblastin, tác giả Mai Ngọc Tâm cộng thực biến cải hóa học vị trí C-16, C-17 C-20’ vinblastin tạo dẫn xuất ∆15(16)-17-deaxetoxy-20’-deoxy-vinblastin dẫn xuất tri-O-axetylguanosin C-17 hợp chất Cho tới nay, việc tiếp thu kỹ thuật phân lập đại nghiên cứu hồn thiện cơng nghệ điều chế vinblastin từ Dừa cạn Vinca rosea L Việt Nam chưa quan tâm mức chưa tổ chức triển khai nghiêm túc Với nguồn nguyên liệu Dừa cạn đạt vượt tiêu chuẩn châu Âu tổ chức canh tác quy mô, sản lượng xuất sang thị trường Pháp châu Âu đạt hàng trăm năm, mà phải nhập vinblastin sunfat từ hãng Eli Lilly - Mỹ, Geoden Richer Hungary, Pierre Fabre - Cộng hòa Pháp với giá khoảng 15,5 USD/10 mg 1.3 Lựa chọn phương án công nghệ Xuất phát từ tổng quan cơng nghệ có giới kết trước nghiên cứu nước điều chế Vinca ancaloid, tập trung nghiên cứu hồn thiện cơng nghệ chiết tách vindolin, catharanthin bán tổng hợp vinblastin theo phương pháp sau đây: 1.3.1 Chiết, tách Vinca ancaloid a/ Chiết xuất “Ancaloid tổng số” từ Dừa cạn Cơng nghệ chiết Lá Dừa cạn nghiên cứu hồn thiện từ quy trình Noble cộng [3] cải tiến theo Doepke cộng [36] - Trong quy trình này, axít axetic có tác dụng tạo muối với ancaloid - làm tăng khả tan hợp chất dung môi ancol - nước Thêm vào đó, axít axetic phân ly tạo anion axetat, đồng dạng với nhóm este Vinca ancaloid, nên không làm thủy phân hợp chất đun nóng để dịch chiết - Cồn 90o dung mơi chiết có khả hòa tan tốt hoạt chất cần quan tâm từ nguyên liệu thực vật Đồng thời, sau trình chiết, lượng nước tan cồn (10 % theo thể tích) chiếm chỗ mơ thực vật, nằm lại hoàn toàn bã nguyên liệu tạo điều kiện để thu hồi cồn dễ dàng b/ Phân tách Vinca ancaloid 11 Tài liệu: Docs.vn Hỗ trợ : Y!M minhu888 Vindolin, catharanthin vinblastin phân tách từ ancaloid tổng số theo phương pháp sắc ký hấp phụ silica gel với hệ dung mơi CHCl3/CH3OH thích hợp, phương pháp có độ chọn lọc cao phân tách Vinca ancaloid Ancaloid bazơ, bị lưu giữ mạnh pha tĩnh silica gel (có tính axít yếu) Do đó, để giảm thời gian phân tách tăng tuổi thọ sử dụng cột tách - giảm tiêu hao vật tư sắc ký, theo phương pháp [13, 16, 17, 24], chúng tơi khử hoạt tính silica gel NH4OH/CH2Cl2/CH3OH (pH ~ - 8,5) Với cột tách nạp loại silica gel này, cân tách sắc ký thiết lập hồn tồn theo chế hấp phụ/giải hấp, có thời gian tách nhanh dễ điều khiển 1.3.2 Bán tổng hợp vinblastin từ vindolin catharanthin Công nghệ bán tổng hợp vinblastin nghiên cứu dựa quy trình Sakamoto [23] hiệu chỉnh rút ngắn lại theo Verma cộng [26] Mặc dù khơng phải quy trình cho hiệu suất cao (~ 30 %, phương pháp Sakamoto đạt hiệu suất 40 %), dễ triển khai điều kiện Việt Nam Từ hai giai đoạn, trình tổng hợp rút ngắn thành phản ứng nồi (one-pot), tác nhân Ơxy hóa - H2O2, FeCl3 NaOCl, Khử hóa - NaBH4 xúc tác Axít citric hóa chất thơng dụng thị trường Thêm vào đó, quy trình thực với hỗn hợp chất đầu, không cần tinh khiết, yếu tố quan trọng cơng nghệ để giảm chi phí tinh chế tiền chất hợp chất trung gian 12 ... Nội, Viện Dược liệu Xí nghiệp Dược phẩm Trung Ương II thuộc Bộ Y tế thực đề tài nghiên cứu chiết xuất vinblastin ancaloid khác từ Dừa cạn Việt Nam để phục vụ sản xuất thuốc chống Tài liệu: Docs.vn... tan tốt hoạt chất cần quan tâm từ nguyên liệu thực vật Đồng thời, sau trình chiết, lượng nước tan cồn (10 % theo thể tích) chiếm chỗ mơ thực vật, nằm lại hoàn toàn bã nguyên liệu tạo điều kiện để... góp vào quy trình Noble số cải tiến có ý nghĩa Ở giai đoạn đầu, nguyên liệu thực vật chiết trực tiếp với dung mơi phân Tài liệu: Docs.vn Hỗ trợ : Y!M minhu888 cực n-hexan để rửa chất màu ancol