Khóa luận tốt nghiệp Công nghệ sinh học: Đánh giá khảnăng ức chế của một số chủng vi sinh vật có lợi đối với vi khuẩn gây bệnh xuất huyết trên cá tra (Pangasianodon hypophthalmus)

XÁC NHAN VA CAM DOANTôi xin cam đoan các số liệu và kết qua nghiên cứu trong khóa luận tốt nghiệp “Đánh giá khả năng ức chế của một số chúng vi sinh vật có lợi đối với vi khuẩn gâybệnh x

; BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀOTẠOTRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC

KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP

DANH GIÁ KHẢ NANG ỨC CHE CUA MOT SO CHUNG VI SINH

VAT CO LỢI ĐÓI VƠI VI KHUAN GAY BỆNH XUẤT HUYET

TREN CA TRA (Pangasianodon hypophthalmus)

Nganh hoc : CONG NGHỆ SINH HỌCSinh viên thực hiện =: NGUYEN THI THU DIEM

Mã số sinh viên : 18126023

Niên khóa : 2018 - 2023

TP Thi Đức, 08/2023

; BỘ GIAODUCVADAOTAOTRUONG DAI HỌC NONG LAM THÀNH PHO HO CHÍ MINH

KHOA KHOA HOC SINH HOC

KHOA LUAN TOT NGHIEP

ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG UC CHE CUA MOT SO CHUNG VI SINH

VAT CÓ LOI DOI VỚI VI KHUAN GAY BỆNH XUAT HUYET TREN

CATRA (Pangasianodon hypophthalmus)

Hướng dẫn khoa học Sinh viên thực hiện

TS LÊ THỊ ANH HONG NGUYEN THỊ THU DIEM

Thủ Đức, 08/2023

LỜI CẢM ƠN

Lời đầu tiên, em xin chân thành cảm ơn đến Ban giám hiệu Trường Đại học NôngLâm Thành phố Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm Khoa Khoa học Sinh học cùng tất cả quýthầy cô đã tận tình truyền đạt kiến thức và kinh nghiệm cho em trong suốt quá trình họctập tại trường.

Em xin cảm ơn Viện Sinh học Nhiệt đới đã hỗ trợ máy móc, trang thiết bị để em

có thê hoàn thành tốt đề tài nghiên cứu

Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến TS Lê Thị Ánh Hồng đã trực tiếp hướng dẫn,nhận xét, truyền đạt kiến thức và kinh nghiệm cho em trong suốt quá trình thực hiện đềtài Kính chúc cô nhiều sức khỏe và thành công trên con đường sự nghiệp nghiên cứukhoa học cũng như trong cuộc sống

Đặt biệt, con xin cảm ơn đến gia đình, ba mẹ đã nuôi dạy, động viên, là chỗ dựatỉnh thần lớn nhất cho con trong suốt thời gian qua

Một lần nữa, em xin cảm ơn quý thầy cô, anh chị và những người bạn đã luôn nhiệttình hỗ trợ, giúp đỡ em trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu

XÁC NHAN VA CAM DOAN

Tôi xin cam đoan các số liệu và kết qua nghiên cứu trong khóa luận tốt nghiệp

“Đánh giá khả năng ức chế của một số chúng vi sinh vật có lợi đối với vi khuẩn gâybệnh xuất huyết trên cá tra (Pangasianodon hypophthalmus)” là do chính tôi thực

hiện, dưới sự hướng dẫn khoa học và hỗ trợ về mặt kinh phí của TS Lê Thị Ánh Hồng,

không có bất kì sự sao chép hoặc sử dụng kết quả của đề tài nghiên cứu nào tương tự.Ngoài ra, trong khóa luận tốt nghiệp có sử dụng một sé nguồn tài liệu tham khảo đãđược trích dẫn nguồn va chú thích rõ ràng Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm khoa vànhà trường vê sự cam đoan này.

Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 08, năm 2023

Nguyễn Thị Thu Diễm

TÓM TẮT

Trong nghiên cứu này, nhằm phân lập các chủng vi sinh vật có lợi từ các trại nuôi

cá tra ở xã Tân Thuận Đông, huyện Cao Lãnh, tỉnh Đồng Tháp và khu vực Cồn Látthuộc xã Tân Thiéng, huyện Chợ Lach, tỉnh Bến Tre, sau đó tuyển chọn và định danhcác chủng có hiệu quả kháng với vi khuẩn gây bệnh xuất huyết trên cá tra, làm cơ sởcho việc ứng dụng sản xuất chế phẩm vi sinh trong nuôi trồng thủy sản Kết quả nghiêncứu đã phân lập được 14 chủng vi sinh vật từ các mẫu cá tra khỏe và mẫu bùn Tiếnhành khảo sát khả năng ức chế của các chủng vi khuẩn phân lập được đối với vi khuẩnxuất huyết trên cá tra bằng phương pháp khuếch tán giếng thạch, thu được 8 chủng vikhuẩn phân lập có đường kính vòng kháng khuẩn từ 1,75 — 10,88 mm Trong đó chủngCL2.1 và A2A được phân lập được lần lượt từ mẫu bùn và mẫu ruột cá tại Cồn Lat cókhả năng ức chế tốt với vi khuan gây bệnh xuất huyết trên cá tra với đường kính vòngkháng khuẩn lần lượt là: 10,88 mm và 10,50 mm trong thời gian 24 giờ Các chủng đượctuyển chọn đề định danh là T1, CL2.1 và A2A Trong đó chủng T1 là tác nhân gây bệnhxuất huyết trên cá tra, CL2.1 và A2A là 2 chủng có khả năng ức chế tốt nhất đối với vikhuẩn gây bệnh xuất huyết trên cá tra Các chủng tuyển chọn được định danh bằng côngnghệ khối phô protein MALDI TOF (Matrix - Assisted Laser Descraction / Ionization -Time of Flight) tại Viện Sinh Học Nhiệt Doi Cac chủng T1, A2A và CL2.1 lần lượt

được xác định là Kurthia gibsonii, Bacillus velezensis va Bacillus subtilis với độ tương

đồng 56%, 59% và 56% Vì vậy, các chủng tuyên chọn được kiến nghị cần định danhbằng sinh học phân tử dựa trên trình tự 16 rRNA dé đưa ra kết quả chính xác

Từ khóa: bệnh xuất huyết, khuếch tan giếng thạch, cá tra, probiotic, ức chế,MALDI TOF.

The study involved an “Evaluation of the inhibitory ability of some beneficial microorganisms against bacteria causing hemorrhagic disease 1n catfish (Pangasianodon hypophthalmus)y’ This study will provide a foundation for the

application of manufacturing biological products After isolation, 14 microbial strains

from healthy catfish samples and mud samples in Tan Thuan Dong, Cao Lanh, Dong Thap, and in Con Lat, Tan Thieng, Cho Lach, Ben Tre The agar well diffusion method was used to determine the resistance of bacterial strains isolated against bacteria causing hemorrhagic disease in catfish, through the process of investigating the resistance, obtained 8 strains with 1.75 mm — 10.55 mm of inhibition zone diameter The bacterial (CL2.1 and A2A) isolate that was isolated from the intestine of strong catfish and mud samples at Con Lat showed the antagonistic properties with a pathogenic strain of bacteria causing hemorrhagic disease on catfish with 10,88 mm and 10,50 mm inhibition was stable up to 24 hours After that, proceed to choose 3 strains T1, A2A, and CL2.1 which Tl being the causative agent of hemorrhagic disease in pangasius, CL2.1 and A2A being the two strains with the best inhibitory ability against bacteria causing hemorrhagic disease on catfish by MALDI TOF (Matrix-Assisted Laser Description/Ionization- Time of Flight) protein mass spectrometry technology at the Institute of Tropical Biology These bacteria were identified as Kurthia gibsonii, Bacillus velezensis, and Bacillus subtilis with 56%, 59%, and 56% similarity Therefore,

it is recommended that selected strains be identified by molecular biology based on 16 rRNA sequences to provide accurate results.

Keywords: hemorrhagic disease, agar well diffusion, probiotic, catfish, inhibition,

MALDI TOF.

BI NH RA ey BITETT eecsneeeecerneeemnereenioeneeemenermmnenmanmennaend ixIAT HE RICE (RA IN eendzeeekebnerbndoroiefksmioidnsnckodoiogciugillorglenektrimGiigirgroiElkkdmoeinỶ x

es oe || | | |In?) ca n 11.2 Mục tiêu đề tai eeccccccceccccecsececsesececeesecsesecevssecsvsucevsesecevsucevsusevevssevsvsesavseseseesesevseeees 21:3, Nội dung thực HIỆT siiicceennsisniii1110108143401411301385355E1333439553551333338363567911015019138 78 2CHUGNG 7 TÔNG QUAN TÃI LIỄU, eceeeeeeineeinnirsierierrodnorrebker 32.1 Thực trạng nuôi trồng va tiêu thụ cá tra tại Việt Nam cc-c-ccc-cse 32.2 Téng quan Ve CA 8n -})ỆÙỢỪỖỪỘỪ“i114 32: Poll; HẠNH, [Oa sĩsgg:5g9E501018082006613608950080589880800090808988516-GBHIBSEDESGINEEOEEDIGESRINASEERISQHESIEPBNNSEHHESSNSOI

ee 4

2.2.4 Đặc điểm dinh dưỡng - 2-22 ©2222222EE22EE222122712271127112711221122122 2E tre 52.2.4 Đặc điểm sinh trưởng -2-22-522222212222221221221271211221 7112212212112 xe 5

2.3 Tổng quan về bệnh xuất huyéte 0.ccccccccecscseessesssesseesessesseseeseesessiseeeeseeseeeseessees 62.3.1 Bệnh do vi khuẩn Aeromonas hydrophila 2 2+©22©22+2522++2s+2zzzvzzxscsez i2.4.2 Bệnh do vi khuẩn Psendomonds Sp .-:.-:0-s00-ve-seesvesseeveessesseessecsessessessessessesees 8DAA, BỆnh:do vĩ khuẩn PHO ke c2 0n mcnsensceasegacorcenemaacreneeaensoumnemsce 82.4.5 Bệnh do vi khuẩn Streptococcus scsscessessesssessessessesssessesssessessesssessesssesseesseeses 92.4.6 Bệnh do vi khuan Edwardsiella ictaluri c.c.cccccccscecsscecsseecssesveseseeseseseseeeeseseeees 102.5 Các biện pháp kiểm soát bệnh xuất huyết - - 2-22 22©z+2+++2z+zzx+zrsrzex ll

2.5.12 SỬ dụng kHán SINH wives ccesnessnemrmnmaramsannames 6388134111055881188004543E13013 43348396138 11

5,5,0, SU CUS VAC CLG báo se ssssensphbdtsSiES84860102800380-g30003310:95338310335880i303453901018E05G3891515813B30850030g4 12

2.5.3 Str dung probiotic, probiotic 11 13

2.5.4 Tham canh hop ly 15

CHUONG 3 VAT LIEU VA PHƯƠNG PHAP -. -22©22©5225+2z+2z+zzz>z 163.1 Tid gian vã đĩa điểm mghiồn: 0H isecccrcocneecrsernecarseranrrsetorernonnnmarenummiceanioreais l6đun V Ot ISU HỆTHGTitố [To snsieonaosoingtotbboiitiGGIAAG13409016013043SE0HIGGSSS03.30/R2NGHGIS2/SS8G/10E8058100000-300/26 163.2.1 Đối tượng nghiên cứu 2-2 2s+2S+SE+SE2E92E2212112312112112112112112112112112121 2x2 l63.2.2 Dụng cụ, thiết bị, 2-2-5221 2E 2122121211212121121211211212121212121212121 xe l63.2.3 Môi trường và hóa chất sử dụng nghiên cứu 2- 2 2z+22++2z++2z+zzzzz l6.3;.P hương php nghiiển.GỨN:‹ ::-: -.-ese cszzsrxcszirsenosrksrdsszr-iig2/ZDmmlEr.EmiisgigEu S06 dghố-RHED2422 17

3.3.1 Thu mẫu - (SE S3 SE S113 S3 1111531111111 11 11151111111 1101 1111111110101 1 1101011111101 11 1E n nước 17

3.3.2 Phương pháp phân lập vi khuẩn 2-2 522E+SE22E+SE+EEZEZEZEzEzzzxrze, 173.3.3 Khảo sát đặc tính sinh lý, sinh hóa của vi khuẩn -z52255z+: 183.3.4 Phuong pháp gây cảm nhiễm xác định vi khuẩn gây bệnh 203.3.5 Khảo sát khả năng ức chế của vi khuẩn có lợi đối với vi khuẩn gây bệnh xuất

In 8ö CA tra coe ẽ 5 203.3.6 Phương pháp định danh vi khuẩn 2-22 2 222222++2E2E+£EE2E+zz+zzz+zzxzex 225.3.7, Phương phấp xứ lý số HIỆM co co 0 2106 00 táng kg H0 100 00100608604 c6cgg 23CHƯƠNG 4 KET QUA VÀ THẢO LUẬN - 2+ 22 ©2+E+2E2£E2£E£EezEzrrrere, 244.1 Kết quả xác định vi khuẩn gây bệnh xuất huyết trên cá tra từ các chủng vi khuẩngay bệnh cá được nhận từ Phòng Biến đổi Sinh học 2-22 522222S+2£22E22222522 244.1.1 Đặc điểm, hình thái khuẩn lạc của các chủng vi khuẩn gây bệnh 244.1.2 Đặc điểm tế bào của các chủng vi khuẩn gây bệnh -2- 2222222222522 254.2 Kết quả cảm nhiễm xác định vi khuẩn gây bệnh xuất huyết trên cá tra 26

AS, Kết quả phân lập vi khuẩn có Tigi nc ccrrnecreernensnsnnsennennesnecneariensaannenconnnsnesnseniennncss 294.4 Kết quả đối kháng với vi khuẩn gây bệnh - 2: 22©22222+2E22EE22E222zzzEzzzxzzev 314.4.1 Phương pháp vạch thắng vuông góc -2- 2 22 22 2S+2E+SE+2E+£EzEzEzxzxzzsez 314.4.2 Phương pháp khuếch tán giếng thạch - 2 2-©2222222222EE2EE2EE2EEzEEzzrrrev 314.4, Kết quả định danh vi khuẩn 6< 1121112111122 00100 81101202100150201060176 32CHƯƠNG 5 KET LUẬN VÀ DE NGHỊ 22 22S+2E2EE22E2EE22E2222221222222xee 355.1 Kết luận - ¿2+ Ss2S221E212121221211211121121112112111211111112112111211211121112121 12 re 35

| sen gỹngu go hot hG000EGIGHINGGGURUGEGDDINGTGINGNGADISSIG04G1GH1GGNG38H120010.80330 35

TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

vii

DANH SÁCH CAC CHỮ VIET TAT

BHIA : Brain heart infusion agar

CFU : Clony formung unit

DBSCL : Đồng bang sông Cửu Long

THBA : Todd hewitt broth agar

TSA : Trypticase soy agar

USD : United States dollar

VASEP : Vietnam Association of Seafood Exporters and ProducersVKK : Vòng khang khuan

viii

DANH SÁCH BANG BIEU

TrangBang 4.1 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc của các vi khuẩn gây bệnh 22Bảng 4.2 Hình dang và kích thước tế bao của 3 chủng vi khuan gây bénh 23Bang 4.3 Kết quả thử nghiệm phán ứng sinh hóa của các chủng vi khuẩn bệnh 24Bảng 4.4 Bảng khảo sát sinh hóa so sánh giữa chủng vi khuẩn T1 và chủng vi khuẩn

8918012111157 ÖÖÖÖÖ ÖÖ 26Bảng 4.5 Đặc điểm khuẩn lạc của 14 chung vi khuẩn có lợi phân lập được 28Bang 4.6 Kết quả khảo sát khả năng đối kháng vi khuẩn bệnh của các chủng vi khuẩn

00581000 30

DANH SÁCH CÁC HÌNH

Trang Hinh 2.1 Cá tra nuôi (P hypojpphhihÌW148) - - sc-ccc+c>tSEt+texeterrrertrrrrrrrrrrrrrrrrerrrrei 4Hình 2.2 Cá tra nuôi bị xuất huyết (P ypophilalimu$) -5-©22-55252225sc55z22sz 6Hình 4.1 Đặc điểm, hình thái khuẩn lạc của 3 chủng vi khuẩn gây bệnh trên

Tôi trường NA được Ú trong 24 BHỜ: is c61666151210 62 k5181814 8314141541115 5405 6016325060 84 22

Hình 4.2 Kết quả nhuộm Gram 3 chủng vi khuan gây bệnh ở độ phóng đại 100X 22Hình 4.3 Tỷ lệ cá chết sau 11 ngày quan sát của 3 NT cảm nhiễm 3 chủng vi khuẩnB2/DETiHbygszfvggsgitiitliiosiiuiliiRuiiiordlifiritkisiniriitoriubimdiusirbllulkdioSaltiroiNiioritilien 25Hình 4.4 Cá chết sau khi cảm nhiễm ngày thứ 2 22 22252222222z22x+2zzzzzzex 25Hình 4.5 Giải phẫu cá chết có dấu hiệu xuất huyết -2-©2222++22+z2zzzzzze2 26Hình 4.6 Kết quả tái phân lập cá cảm nhiễm chủng T1 trên môi trường NA 27Hình 4.7 Hình thái khuan lạc một số chủng vi khuẩn phân lập được trên môi trường

Hình 4.8 Kha năng ức chế vi khuẩn gây bệnh của các chủng vi khuẩn phân lập đượctiên TOI TONE INA can couse sesemaeses bì eaeneancnens t21G8SE403435G8L381-GSB20SGE3SSSSSEH.SEESEESUEHGHG5S/EES88008588 29Hình 4.9 Kha năng ức chế vi khuẩn T1 của 2 chủng vi khuân có VKK cao nhất trênmỗi trường NA trong 24 B10 bác sssssG5106101016001433915720388503EEHS3EESHSESESE99583538389u583885893/3888 29

CHƯƠNG 1 MỞ ĐẦU

1.1 Đặt vấn đề

Cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) là một trong những loài cá da trơn nướcngọt có giá trị kinh tế cao được nuôi phô biến ở ĐBSCL Với khoảng 600,000 hecta diệntích mặt nước ngọt, ĐBSCL được đánh giá có tiềm năng to lớn cho sự phát triển ngành

nuôi trồng thủy sản, cá tra được xem là đối tượng nuôi chủ lực, đem lại lợi nhuận cao

cho người nuôi và góp phần vào giá trị xuất khâu của cả nước Theo Hiệp hội Chế biến

và Xuất khẩu thủy sản Việt Nam (VASEP), xuất khẩu cá tra Việt Nam đã bức phá mạnh

mẽ với kỷ lục 2,4 tỷ USD Giá xuất khâu cá tra sang các thị trường tăng từ 22 — 55%,nhất là tại thị trường Mỹ Xung đột Nga — Ukraina khiến nguồn cung cá thịt trắng tạinhiều thị trường giảm, tạo cơ hội cho cá tra tăng thị phần Trung Quốc là thị trường số

1 khi chiếm 28% tỷ trọng xuất khẩu cá tra của Việt Nam, thứ hai là thị trường Mỹ chiếm22%.

Tuy nhiên, trong hiện trạng thâm canh hóa mô hình nuôi cá tra hiện nay, tình hình

dịch bệnh diễn ra phức tạp và khó kiểm soát gây ra thiệt hại lớn cho người nuôi cá tra,trong đó, bệnh xuất huyết gây ra bởi các vi khuẩn Aeromonas, Pseudomonas,Enterobacteriaceae, Vibrionaceace, Streptococcaceae, Staphylococcaceae là bệnh hainguy hiểm với tan suất xuất hiện rat cao trong các hộ nuôi được khảo sắt so với các bệnhkhác và gây thiệt hại lớn cho người nuôi Cho đến nay, kháng sinh vẫn là giải pháp chủyếu dé kiểm soát bệnh này Tuy nhiên, việc sử dụng quá nhiều thuốc kháng sinh là mộtthách thức không nhỏ đang đặt ra cho nghề nuôi cá tra ở ĐBSCL do nhiều tồn dư củakháng sinh trong thực phẩm và van đề kháng thuốc của vi khuẩn Vi khuẩn kháng thuốc

có thê là nguồn truyền và phát tán gen kháng thuốc của chúng cho các loài vi khuânkhác, đặc biệt là các loài vi khuẩn có tiềm năng, nguy cơ gây bệnh cho con người như

vi khuan Escherichia coli, Aeromonas sp và Pseudomonas sp Điều này có thé ảnhhưởng trực tiếp hoặc gián tiếp đến sức khỏe người tiêu dùng

Chính vì vậy, việc sử dụng chế pham sinh hoc dé phòng và tri bệnh trong nuôitrồng thủy sản ngày càng được phổ biến Tuy nhiên, các chủng vi sinh vat có lợi nào cótính ức chế mạnh nhất đối với vi khuân gây bệnh dé phục vụ sản xuất chế phẩm sinh

học trong thủy sản van còn là van đề được nhắc nhiều đối với các nhà nghiên cứu nên

đề tài: “Đánh giá khả năng ức chế của một số chủng vi sinh vật có lợi đối với vikhuẩn gây bệnh xuất huyết trên cá tra (Pangasianodon hypophthalmus)” được thựchiện nhằm tuyển chọn được vi sinh vật có khả nang ức chế cao nhất đối với vi khuẩngây bệnh xuất huyết trên cá tra có tiềm năng sử dụng làm chế phẩm sinh học, góp phầncung cấp tài liệu cho các nghiên cứu sâu hơn về vi sinh hữu ích cho các thí nghiệm déphòng bệnh trong nuôi trồng thủy sản.

1.2 Mục tiêu đề tài

Tuyển chọn được vi sinh vật có khả năng ức chế cao nhất đối với vi khuẩn gâybệnh xuất huyết trên cá tra

1.3 Nội dung thực hiện

Xác định vi khuẩn gây bệnh xuất huyết trên cá tra từ các chủng vi khuẩn gây bệnh

cá nhận được từ Phòng Công nghệ Biến đổi Sinh học

Phân lập vi khuan có lợi

Đánh giá khả năng ức chế của các chủng vi sinh vật có lợi đối với vi khuẩn gâybệnh xuất huyết trên cá tra

Định danh chủng vi sinh vật được tuyển chọn

CHUONG 2 TONG QUAN TÀI LIEU

2.1 Thực trạng nuôi trồng và tiêu thụ cá tra tại Việt Nam

Cá tra là loài cá thịt trắng nuôi tại Việt Nam, là một trong những loài cá có giá trikinh tế phổ biến ở Đông Nam A Cá tra ngày càng được người tiêu dùng trên thị trườngthế giới yêu thích vì sự tiện lợi, dễ chế biến và giá cả phù hợp với mọi phân khúc tiêuthụ Theo Bộ Nông Nghiệp và Phát triển nông thôn, cả nước hiện có 200 cơ sở sản xuấtgiống cá tra, 3000 hecta ương dưỡng cá giống, có gần 100 nhà máy sản xuất cá tra tạiViệt nam, tập trung chủ yếu ở ĐBSCL (năm 2019) Theo Tổng cục Thủy sản, ước cảnăm 2022, diện tích thả nuôi cá tra cả nước đạt khoảng 5500 hecta, sản lượng dat 1,6triệu tan, tăng tương ứng 4% và 3,5% so với cùng ky năm 2021 Tới năm 2022, cá traViệt Nam đã chinh phục hơn 140 thị trường trên thế giới, trong đó có các thị trường rấtkhắt khe về an toàn thực phâm và các quy định kỹ thuật như Mỹ, EU và cả những thịtrường vốn không ưa chuộng cá nuôi như Nhật Bản Sự phổ biến của cá tra và sự nồ lựccủa cộng đồng doanh nghiệp Việt Nam đã đưa cá tra đi khắp năm châu, đã giúp chongành thủy sản cá tra mang lại nguồn ngoại tệ lớn mỗi năm Với kim ngạch xuất khâu

từ 1,5 — 2,4 tỷ USD/ năm, tăng 70% so với cùng kỳ năm 2021, riêng cá tra chiếm 16 —26% tong giá trị xuất khâu thủy sản Việt Nam

Một trong những nguyên nhân làm diện tích và sản lượng cá tra tại Việt Nam tăngcao, đặc biệt là khu vực ĐBSCL là do chúng có khả năng thích nghỉ tốt với điều kiệnmôi trường, khí hậu khắc nghiệt và đặc biệt chúng là loài cá rất thích hợp tăng trưởngcủa vùng này Hiện tại, cá tra đã được nuôi thâm canh tại hầu hết các tỉnh ở ĐBSCL,trong đó An Giang, Đồng Tháp và Cần Thơ là các tỉnh có diện tích và sản lượng cá tralớn nhất của vùng Theo báo cáo, phần lớn (trên 90%) sản lượng cá tra nuôi ở nước tađược chế biến và xuất khâu Số doanh nghiệp Việt Nam xuất khâu cá tra tăng liên tụctrong những năm gần đây Năm 2020 có 320 doanh nghiệp xuất khẩu cá tra, năm 2021tăng lên 380 và năm 2022 số doanh nghiệp tham gia xuất khẩu lên tới 435

2.2 Tông quan về cá tra

2.2.1 Phân loại

Theo hệ thống phân loại của Robert và Vidthayanon (1991), thì cá tra thuộc:

Ngành: Chordata

Trong tự nhiên, cá tra phân bó nhiều nhất ở lưu vực sông Mê Kông thuộc các nước

Lào, Campuchia, Thái Lan và Việt Nam.

Ở Việt Nam, cá tra đã được nuôi và phát triển chủ yếu ở 10 tỉnh ĐBSCL bao gồm:

An Giang, Đồng Tháp, Tiền Giang, Cần Thơ, Vĩnh Long, Bến Tre, Hậu Giang, SócTrăng, Trà Vinh, Kiên Giang, và hai tỉnh khác là Tây Ninh và Quảng Nam với tông diệntích canh tác 5400 hecta (năm 2018).

2.2.3 Hình thái

Các loài cá tra đều có da trơn (không vay), thân dai, thon và dep Lưng có mauxám đen, bụng có màu trắng bạc, vây lưng cao, vây ngực có ngạnh Miệng rộng, có 2

đôi râu dai.

Kích cỡ của cá tra tùy thuộc vào từng loài Loài cá tra nuôi ở Việt Nam có kíchthước trưởng thành khoảng 4 — 5 kg/con Tuy nhiên, trên thực té cũng có con nặng

khoảng 10 — 20 kg.

2.2.4 Đặc điểm dinh dưỡng

Cá tra bột mới nở không có khả năng sử dụng thức ăn bên ngoài, chúng dinh dưỡngchủ yêu bằng noãn hoàng đến 2 — 3 ngày sau khi nở Khi khối noãn hoàng đã được sửdụng gần hết, cá bắt đầu sử dụng thức ăn bên ngoài Tinh ăn của cá lúc này là mỗi tươisông và ăn liên tục các loại như luân trùng và các động vật nhỏ sống trôi nổi trong nước

Cá tra là loài ăn tạp, trong tự nhiên cá ăn được mùn bã hữu cơ, rễ cây thủy sinh,

rau quả, tôm tép, cua, côn trùng, ốc và cá Tính ăn lẫn nhau của cá thể hiện cao nhất lúc

cá được 5 — 7 ngày tuôi Khi cá được 10 ngày tuổi thì hoạt động ăn lẫn nhau giảm dần

và không còn ăn thịt lẫn nhau khi được 15 ngày tuổi Cá 20 ngày tuổi sử dụng hiệu quảthức ăn chế biến

2.2.4 Đặc điểm sinh trưởng

Cá tra có tốc độ tăng trưởng khá nhanh Trong tự nhiên, cá tra có thể sông trên 20năm Và người ta cũng đã gặp nhiều con cá tra trong tự nhiên có trọng lượng cỡ 18 — 20

kg, dài từ 1,8 — 2 m.

Khi nuôi trong bè, tốc độ tăng trưởng của cá tra phụ thuộc vào môi trường sống vàthức ăn cung cấp cho chúng Cá tra thuộc loài ăn tạp, nếu cung cấp thức ăn có nguồngốc từ động vật và chứa nhiều đạm thì chúng lớn rất nhanh Khi còn nhỏ, cá tăng trưởngnhanh về chiều dài Còn khi đạt trọng lượng cỡ 2,5 kg trở đi, mức tăng trọng lượngnhanh hơn so với mức tăng về chiều đài cơ thể Sau 2 tháng cá đạt chiều dài khoảng 10

— 12 cm (khoảng 14 — 15 g); sau 1 năm cá đạt khoảng 1 — 1,5 kg/con Và càng về sau cácàng tăng trọng nhanh hơn Sau khoảng 3 — 4 năm, cá có thé đạt 4 — 5 kg/con Lúc này

cá đã trưởng thành và có khả năng sinh sản.

2.2.5 Đặc điểm sinh sản

Cá tra khi đã đạt độ tuôi thuần thục (cá đực 2 năm tuôi, cá cái 3 năm tuổi) thi mới

có khả năng sinh sản Trọng lượng cá thuần thục lần đầu khoảng 2,6 — 3 kg Trong môitrường nuôi nhốt có thể nuôi cá thuần thục sớm hơn, do đó có thể cho cá đẻ sớm hơntrong tự nhiên Cá tra có thé tái phát dục từ 1 — 3 lần trong một năm Cá tra khi nuôitrong ao hay trong bè thì không thể đẻ tự nhiên, chỉ có thể cho chúng đẻ nhân tạo Sứcsinh sản tùy thuộc vào độ tuổi của cá Trung bình một con cá tra đẻ mỗi lần khoảng30,000 — 40,000 trứng Trứng cá tra khá nhỏ, có tính dính Trứng sắp đẻ có đường kinhtrung bình 1 mm Trứng đẻ ra và trương nước, đường kính có thể lên đến 1,5 — 1,6 mm

5

2.3 Tổng quan về bệnh xuất huyết

Bệnh xuất huyết (hay còn gọi là bệnh đốm đỏ, bệnh nhiễm trùng máu) xuất hiện ởhầu hết các loài cá nuôi lồng, bè, ao hồ nước ngọt và ở tất cả các giai đoạn nuôi, gâythiệt hại lớn về kinh tế cho người nuôi ở các tỉnh ĐBSCL Bệnh lây lan nhanh, cao vàđược ghi nhận đầu tiên tại Mỹ năm 1979, sau đó xuất hiện tại các nước châu Á Tại ViệtNam, bệnh được ghi nhận trước năm 1993 Đây là một trong những bệnh xuất hiện tần

số cao nhất trên cá tra ở ĐBSCL

Theo nghiên cứu của Bùi Quang Té (2006), nguyên nhân mắc bệnh: thường do các

họ vi khuẩn Aeromonas, Pseudomonas, Enterobacteriaceae, Vibrionaceace,

Streptococcaceae, Staphylococcaceae gây nên Bệnh dễ phát sinh trong môi trường

nước bị nhiễm ban, bị 6 nhiễm từ các nguồn nước thải công nghiệp, hàm lượng oxy hòatan trong nước thấp Cá nuôi với mật độ dày cũng là nguyên nhân làm cho cá dễ mắcbệnh Đặc biệt trên cá tra, bệnh có thể bộc phát gây hao hụt rất cao khi cá bị stress do

nhiệt độ cao hoặc / và tác động cơ học (do đánh bắt, vận chuyên, ), và thường nhiễm

kép với các tác nhân bệnh khác như: gan thận mủ, hội chứng vàng da, bệnh trương bónghơi Bệnh này thường xuất hiện nhiều lần trong suốt chu kỳ nuôi nên gây ảnh hưởnglớn đến sự tăng trưởng của cá, kéo dài thời gian nuôi và chỉ phí điều trị

Triệu chứng bệnh lý:

Dấu hiệu đầu tiên là cá kém ăn hoặc bỏ ăn, nổi lờ do trên tang mặt Da cá thường đôimàu tôi không có ánh bạc, cá mat nhớt, khô ráp Xuất hiện các đốm xuất huyết màu đỏ

trên thân, các gốc vây, quanh miệng, râu xuất huyết hoặc bạc trắng Xuất hiện các vết

loét ăn sâu vào cơ, có mùi hôi thối, trên vết loét thường có nam va ký sinh trùng ký sinh

Mat lỗi đục, hậu môn viêm xuất huyết, bụng có thể chướng to, các vây xơ rách, tia vây

cụt dan

Giải phẫu nội tạng: Xoang bụng xuất huyết, gan cá xuất huyết nặng, có chứa nhiều

dịch nhờn mùi hôi thôi, ruột viêm và chứa đây hơi.

2.3.1 Bệnh do vi khuẩn Aeromonas hydrophila

Vi khuẩn A hydrophila được phân loại như sau:

Loai: Aeromonas hydrophila

A hydrophila thuộc nhóm gram âm, có hình que ngắn với kích thước dao động từ0,8 — 1,0 x 1,0 — 3,5 pm; thường phát triển rất nhanh trên các môi trường dinh dưỡng.Chúng phát triển tốt ở nhiệt độ 28 — 30°C Sau 18 — 24 giờ cấy trên các môi trường TSA,BHIA hoặc môi trường GSP (Glutamate Starch Phenol Red Agar), khuẩn lạc vi khuẩn

có dạng tròn, to, khích thước 2 — 3 mm, màu vàng kem Vi khuẩn A hydrophila có khảnăng di động, yếm khí tùy tiện, phản ứng đương tính với oxidase, catalase, Voges —

Proskauer, lysine, arginine va ornithine Chúng có kha năng lên men các môi trường

đường va sinh khí từ glucose nhưng không có khả năng tạo khí HaS.

Theo Barrow va Feltham (1993), vi khuẩn A hydrophila đã được xác định là tácnhân chính gây bệnh xuất huyết, nhiễm trùng máu Cá bị bệnh thường kém ăn hoặc bỏ

ăn, nổi lờ do trên tang mặt Da cá thường đổi màu tối không có ánh bạc, cá mat nhớt,khô ráp, rụng vay dé lộ da xuất huyết Các đốm xuất huyết màu đỏ xuất hiện trên thân,

các gốc vây, quanh miệng, râu xuất huyết hoặc bạc trắng Mắt cá bị lồi đục, hậu môn

viêm xuất huyết, bụng có thể chướng to, trên bề mặt nội quan có xuất huyết, xoang cơ

thê và ruột tích dịch, các vây xơ rách, tia vây cụt dân.

rộng khắp môi trường, trong đất và trong nước; có thể gây bệnh cho người, động vật và

thực vật Thường được phân lập từ da, gan, thận là tác nhân gây bệnh chủ yếu trên cá.Trong số các loài Pseudomonas được phát hiện từ cá bệnh gồm: P chlororaphis, P.anguilliseptica, P fluorescens, P putida, và P plecoglossicida.

Theo Nguyén Van Hao va Nguyén Ngoc Du (2009), vi khuan P anguillisepticađược coi là tác nhân gây bệnh nguy hiểm nhất cho cá nuôi Bệnh xảy ra ở nhiệt độ thấp

(dưới 16°C) Biểu hiện xảy ra là chướng bụng, có những đốm xuất huyết ở da và nội

quan Ở cá mú, thân bị lở loét, xuất huyết da, vây và đuôi, mắt lồi và đục

tính với oxydase, âm tính với urease Theo Đỗ Thị Hòa và cộng sự (2004), môi trườngTCBS (Thiosulphate Citrate Bile Salt Agar) là môi trường chọn lọc của Vibrio Chúngphát triển trong môi trường nước biển cơ bản, Na” kích thích cho sự phát triển của tất cảcác loài Vibrio và nhiều loài là nhu cau tuyệt đối, chúng không phát triển trong môitrường không muối (NaCl).

Cá bị nhiễm khuẩn Vibrio spp thường có những dấu hiệu điển hình như xuất huyếttrên các vây và mắt lồi, mờ đục giác mạc Cá lờ đờ biếng ăn, mang có màu nhot nhạt dothiếu máu nặng Đối với tom, Vibrio spp gây bệnh phát sáng, đỏ doc thân, ăn mòn bỏkitin Những vi khuẩn này thường là tác nhân cơ hội, khi động vật thủy sản sốc do môitrường biến đổi xấu hoặc bị nhiễm các bệnh khác như virus, nam, ký sinh trùng

48 giờ hình thành khuẩn lạc nhỏ, đường kính 0,5 — 1,0 mm, mau hơi vàng, hình tròn,hơi lồi

Streptococcus thường được phân lập từ cá nước ngọt và cá biển, khuẩn lạc rất nhỏ

có độ nhớt cao Theo Đặng Thị Hoàng Oanh và Nguyễn Thanh Phương (2012), dấu hiệuchung khi cá bị nhiễm vi khuẩn Streptococcus là màu sắc den tối, bơi lội không bìnhthường, mắt cá bị phù hoặc lồi và đục, xuất huyết trên thân Các vết xuất huyết lan rộngthành lở loét, cá bị bệnh vận động khó khăn, không định hướng, có hình thức bơi xoắn,thận và lách tăng lên về thê tích do phù nề

2.4.6 Bệnh do vi khuẩn Edwardsiella ictaluri

Vi khuẩn E ictaluri được phân loại như sau:

Loai: Edwardsiella ictaluri

E ictaluri thuộc nhóm vi khuẩn gram âm, hình que, kích thước thay đôi từ 1,2 —

1,5 x 0,4 — 0,6 um Theo Shotts và Waltman (1990), vi khuan E ictaluri có thé phát

triển trên các môi trường dinh dưỡng khác nhau như môi trường MCK (MacConkeyAgar), TSA (Tryptic Soy Agar), va BHIA (Brain Heart Infusion Agar) Vi khuẩn pháttriển chậm trên các môi trường như TSA hay BHIA, sau 48 giờ cấy khuẩn lạc có danghình tròn, kích thước tương đối nhỏ (đường kính dao động từ 1 — 2 mm) Vi khuẩn cókhả năng di động yếu, không sinh bào tử, yếm khí tùy tiện, lên men trong môi trường

glucose, phan ứng catalase dương tính, 4m tính trong phan ứng oxidase nhưng dương

tính với indole và H2S Chúng phát triển tốt ở 28°C và tăng trưởng chậm hoặc khôngtăng trưởng ở 37°C.

Cá bệnh do nhiễm E ictaluri thường kém ăn hoặc bỏ ăn, bụng thường chướng to,xung quanh miệng thường có các đốm huyết, gốc vây xuất huyết, mắt lồi Giải phẫu bêntrong, một SỐ co quan nội tạng như gan, lá lách, thận bị hoại tử, tạo thành những đốmtrắng đục đường kính 0,5 — 2,5 mm Theo Austin (1993), vị khuẩn £ ictaluri được phânlập lần đầu tiên trên cá nheo, cũng là nguyên nhân gây bệnh nhiễm trùng máu cấp tínhtrên cá nheo Mỹ với tỷ lệ hao hụt rất cao

2.4.7 Bệnh do vi khuẩn Kurthia gibsonii

Vi khuẩn Kurthia gibsonii được phân loại như sau:

Kurthia gibsonii được phân lập từ phân gà, phân bò, bùn sông, thịt tươi và thịt thôi

rữa, các loại sản phẩm từ thịt, bề mặt lò mồ và sữa tươi (theo Keddi và cộng sự); là vikhuan gram dương, phát triển tốt trên môi trường dinh dưỡng (Nutrient Agar) 6 25°C;tăng trưởng trong phạm vi nhiệt độ từ 5 — 45°C nhưng không phát triển ở 50°C Kurthiagibsonii dương tính với catalase, âm tính với indole Deoxyribonuclease và phosphatase

được tạo ta nhưng không tạo ra acetamidase, lecithinase, ribonuclease, sulphatase hoặc

urease, nhạy cảm với vancomycin và không khử nitrat thành các sản phâm khí hoặcamoniac.

Các khuẩn lạc trên bề mặt thạch có dạng hình thoi và có màu vàng hoặc màu vàngkem Các cạnh của khuẩn lạc non dạng sợi cho thấy hình dạng “đầu Medusa” dưới độphóng đại thấp Kurthia gibsonii khi nuôi cây ở 6 — 12 giờ thường cho thấy các tế bàodạng cầu trùng, kích thước khoảng 0,8 — 1,2 pum; khi được nuôi cay trong thời gian từ

24 — 48 giờ, các tế bào trở thành hình que ngắn, chiều dài có thé phát triển đến 2 — 4 pum

Có thể đi chuyên bằng roi quanh thân

Theo Wanying Zhai và cộng sự (2021), Kurthia gibsonii cùng với Aeromonas

veronii va Proteus mirabillis đã được phân lập từ các vi trí niêm mạc bi nhiễm bệnh của

cá bò (Pelteobagrus fulvidraco) và cá nheo Mỹ (Ictalurus punctatus) Cá bệnh có biéu

hiện bơi chậm gần thành ao có niêm mạc bị loét nghiêm trọng

2.5 Các biện pháp kiểm soát bệnh xuất huyết

2.5.1 Sử dụng kháng sinh

Cho đến hiện tại, việc kiểm soát ảnh hưởng của các tác nhân gây bệnh trên thủysản van đang chủ yếu dựa vào thuốc kháng sinh Theo Treves — Brown (2000), khangsinh cefotaxim là kháng sinh thuộc thế hệ thứ 3 của nhóm cefalosporin được nghiên cứu

dé chống lại tác động phân hủy enzyme beta-lactamse của vi khuan A hydrophila — vikhuẩn phổ biến gây bệnh xuất huyết trên cá tra Vi vậy, có thé dùng kháng sinhcefotaxim dé điều trị bệnh xuất huyết trên cá tra Đồng thời, có thể mở rộng hoạt phốcủa kháng sinh nhóm penicillin bằng cách kết hợp ampicillin và sulbalactam hoặcamoxicillin va clavulanic dé ức chế enzyme beta — lactamase trong viéc diéu tri bénhxuất huyết do vi khuan A hydrophila gây ra (theo Bùi Kim Tung, Prescott và cộng su,2000).

Doxycyclin là khang sinh thuộc thé hệ mới của nhóm tetracyclines Kết quả nghiêncứu “Hiện trạng kháng thuốc kháng sinh trên hai loài vi khuân Edwardsiella ictaluri và

11

Aeromonas hydrophila gây bệnh trên cá tra ở ĐBSCL” của Quách Văn Cao Thi va cộng

sự (2014) cũng cho thấy rằng dòng vi khuẩn A hydrophila nhạy khá cao với kháng sinh

doxycyclin (93,3%), vì vay có thể sử dụng doxycyclin dé trị bệnh xuất huyết trên cá tra

nhưng chỉ nên sử dụng khi thật cần thiết dé hạn chế sự kháng thuốc.

Mặc dù có vai trò lớn trong việc kiểm soát bệnh trên cá tra, tuy nhiên việc sử dụngquá nhiều thuốc kháng sinh gây nên tồn dư kháng sinh trong thực phẩm và hiện trạngkháng thuốc kháng sinh của vi khuẩn ngày càng phức tạp Theo nghiên cứu của QuáchVan Cao Thi và cộng sự (2014), tính kháng của vi khuân 4 hydrophila déi với

florfenicol đã gia tang so với báo cáo của Phạm Thanh Hương và cộng sự (2010) là

63,3% Sự gia tăng tính kháng sinh nhóm fenicol là do vi khuẩn đề kháng thông quanhiều cơ chế khác nhau như đào thải thuốc kháng sinh, mã hóa gen liên quan đếnintergron và thông qua plasmid Vì vậy, không nên sử dụng florfenicol dé diều trị bệnhxuất huyết trên cá tra vì tỷ lệ kháng kháng sinh đã vượt quá 50%

Chloramfenicol là kháng sinh thể hiện tính kháng đối với các vi khuẩn E coli,Aeromonas spp và Pseudomonas spp được phân lập trong môi trường nước và trên cátra ở ĐBSCL (Nguyễn Hoàng Nam Kha, 2012) nhưng đã được đưa vào danh sách cắm

sử dụng trong nuôi trồng thủy sản từ năm 2012 (Thông tư 03/2012/TT BNNPTNT) Mặc

dù bị cam sử dụng nhưng tính kháng của chloramfenicol vẫn tăng có thé liên quan đếnviệc sử dụng thuốc bừa bãi, không rõ nguồn gốc của người dân Vì vậy, cần kiểm soátchặt chẽ các loại thuốc lưu hành trên thị trường nhằm ngăn chặn việc sử dụngchloramfenicol trái phép, tránh tình trạng tồn lưu kháng sinh trong các sản phẩm thủysản, gây ảnh hưởng xấu tới sức khỏe người tiêu dùng

2.5.2 Sử dụng vaccine

Các giải pháp tốt nhất trong việc phòng chống bệnh truyền nhiễm đối với nuôitrồng thủy sản nói chung và cá tra nói riêng là việc ứng dụng tốt các biện pháp quản lýsức khỏe động vật thủy sản Trong đó vaccnine là chiến lược phòng chống và kiểm soátdịch bệnh hiệu quả nhất trong các chương trình quản lý dịch bệnh Các loại vaccinethường được dành cho thủy sản hiện nay thường được sản xuất theo các công nghệ sau:vaccine bat hoạt (vaccnie chết), vaccine sống giảm động lực và vaccine tái tổ hợp DNA

Kỹ thuật sử dụng vaccine trên cá bao gồm phương pháp tiêm, cho ăn hoặc ngâm

Gần đây, nghiên cứu của Khôi và cộng sự (2021) tại Việt Nam cũng đã cho thấyhiệu quả của vaccine tiêm bat hoạt từ 4 hydropphila trên cá tra nuôi (P hypopthalmus)

12

Dé phòng bệnh do Aeromonas spp gây bệnh xuất huyết trên cá tra (Hương va cộng sự2021) đã phát triển vaccine nhược độc bất hoạt và vaccine sông nhược độc kép từ loài

A hydrophila va A dhakensis thông qua phương pháp cho ăn, ngoài ra nghiên cứu còn

sử dụng phương pháp ngâm đơn từng chủng và cho kết quả của vaccine nhược độc bathoạt cho hệ số RPS (%) cao hơn dang vaccine nhược độc sông

Năm 2013 ALPHA JECT Pganga® của Công ty PHARMAQ trở thành vaccine

thương mại đầu tiên cho cá tra tại Việt Nam Vào ngày 6 tháng 12 năm 2012, vaccinedạng tiêm 2 nhị giá phòng bệnh gan thận mủ và xuất huyết trên cá tra đã nhận được giấyphép lưu hành từ Cục thú y Khôi và cộng sự (2012) cũng đã áp dụng vaccine bất hoạtbằng phương pháp sốc nhiệt, hay bằng formol trên vi khuan A hydrophila phan lập ở cátra nuôi Tai Indonesia, Olga và cộng sự (2020) đã sử dụng chung A hydropphila phanlập từ cá tra nuôi (P hypopthalmus) dé làm vaccine bất hoạt và cho thấy các khángnguyên cho kích thích miễn dịch tốt sau 2 tuần

2.5.3 Sử dung probiotic, prebiotic

Đề hạn chế tối đa đã việc sử dung khang sinh trên nuôi trồng thủy sản, góp phanbảo vệ môi trường, sức khỏe người tiêu dùng cũng như người nuôi trồng thủy sản, việc

sử dụng phương pháp phòng, trị bệnh bang probiotic và prebiotic trở nên cần thiết vàphô biến hơn hết Prebiotics là các thành phần thực phâm không tiêu hóa, có tác dụngkích thích sự phát triền hoặc chuyên hóa của các vi khuẩn có lợi trong đường ruột, cókhả năng cải thiện sự cân bằng đường ruột của sinh vật Các prebiotic thường được sửdụng trong thủy sản bao gồm mannanoligosaccharides, fructooligosachhatides, lactose,galacto — gluco — mannans va inulin Nhiều nghiên cứu bồ sung prebiotic cho động vậtthủy sản đã ghi nhận một số lợi ích do prebiotic mang lại cho vật nuôi như tăng trưởngnhanh, cải thiện tình trạng sinh lý, tăng cường hệ miễn dịch và tăng khả năng đề kháng

với bệnh.

Theo Lê Thị Mai Anh và Đỗ Thị Thanh Hương (2013), kết quả thí nghiệm của họcho thấy bổ sung FOS (fructooligosaccharides) vào thức ăn ở mức 0,5% và 1% giúp cátra cải thiện tăng trưởng và tăng hoạt tính men tiêu hóa Bùi Thị Bích Hằng và NguyễnThanh Phương cũng tìm hiểu anh hưởng của việc bổ sung inulin va FOS vào thức ăn lêntăng trưởng và đáp ứng miễn dịch của cá tra giống Bồ sung inulin (0,5% và 1%); FOS(0,5% và 1%) vào thức ăn cá tra trong 28 ngày cho thấy các chỉ tiêu huyết học và hoạttính lysozyme ở các nghiệm thức bổ sung inulin và FOS đều cao hơn nghiệm thức đối

13

chứng sau 28 ngày Cá bổ sung 1% inulin cho kết qua mật độ tổng bạch cầu, bạch cầuđơn nhân, bạch cau trung tính, lympho, tiểu cầu và hoạt tính lysozome tăng cao nhất.Trong một nghiên cứu khác của Bích Hằng và Thanh Phương (2020) cũng đã chứngminh inulin là một prebiotic tiềm năng trong việc tăng cường sức khỏe và kiểm soát dịchbệnh cho cá tra khi bố sung vào thức ăn cho cá với liều lượng 1% và nhịp bổ sung 2tuần/tháng.

Probiotic hay chế phẩm vi sinh bao gồm các vi khuân có lợi như giống Bacillus vànhóm vi khuẩn acid lactic (Lactobacillus, Lactococcus, Carnobacterium, Pediococcus,

Enterococcus va Streptococcus) được công nhận có tác động tăng cường miễn dịch trên

cá, tăng khả năng kháng bệnh và một số tiêu chí khác Giống vi khuẩn Bacillus có khảnăng tạo bào tử, tồn tại trong môi trường bat lợi nên có thé kéo dai đời sống nên thườngđược sử dụng làm probiotic Các loài vi khuẩn B subtilis, B licheniformis, B circulans,

B coagulans, B clausii, B megaterium, đặc biệt là B amyloliquefaciens thường được

sử dụng trong thủy sản như probitotic.

Theo Lê Lưu Phương Hanh và cộng sự (2019), khi sử dụng B amiloliquefaciens

AGWT 13 - 031 trong quá trình ương cá tra bột ở bể composite 500 lit, tỷ lệ cá sống

sau 21 ngày nuôi là 27,18% với kích thước trung bình là 2,83 + 0,14 cm (tăng 6,79%)

và trọng lượng trung bình là 0,15 + 0,02 g (tăng 44,23%, p < 0,05) Trong khi đó, tỷ lệ

cá sông, kích thước trung bình và trọng lượng trung bình của bê đối chứng là 23%, 2,65+ 0,05 cm và 0,104 + 0,007 g Ngoài ra, chủng B amiloliquefaciens AGWT 13 — 031còn hỗ trợ cá kháng bệnh gan thận mủ, hiệu quả bảo vệ có thé đạt đến 54,14% (p<0,05).Một nghiên cứu khác của Võ Minh Son và cộng sự (2013) đã cho thấy việc bổ sung B.circulans, B subtilis, Pediococcus acidilactici dang đơn va tô hợp vào thức ăn cá tratrong 4 tuần, kết quả thu được hỗn hợp có khả năng kích thích hệ miễn dịch tự nhiênnhư hoạt động thực bao, sản sinh oxy hoạt hóa và hoạt tính lysozyme tang cao so vớikhi sử dụng đơn chủng và đối chứng

Năm 2007, Brunt và cộng sự đã chứng tỏ chung Bacillus sp JB — 1 có phổ khángkhuẩn rộng đối với vi khuẩn gây bệnh trên động vật thủy sản như Streptococcus iniae,Lactococcus garvieae, Aeromonas salmonicida, Yersinia ruckeri, V ordalii, V.

anguillarum Aly và cộng sự (2008) cũng chi ra rang B subtilis tiết ra hop chất đối

khang với A hydrophila va Pseudomonas fluorescens Nam 2012, Ran và cộng sự đã

chứng minh probiotic (Bacillus spp.) có tác dụng tăng cường tỉ lệ sống cá nheo Mỹ và

14

cá tra với tỉ lệ bảo hộ đạt 13,5% - 15,2% đối với cá nheo Mỹ và 19,6% - 86,3% đối với

cá tra sau khi gây nhiễm với E ictaluri

2.5.4 Thâm canh hợp lý

Đề kiểm soát bệnh truyền nhiễm trên cá, không thé thành công chỉ với một biện

pháp duy nhất; thay vào đó, cần có sự kết hợp của nhiều phương pháp với các cách tiếpcận khác nhau sẽ mang lại hiệu quả hơn Theo Tổng Cục Thủy San, dé phòng chống,kiểm soát bệnh tại cơ sản sản xuất giống cá bố mẹ, ao nuôi phải có bờ được kè chắcchan, không rò ri Nước phải dam bảo chất lượng theo quy định Mật độ nuôi theo hướngdẫn của cơ quan quản lý nuôi trồng thủy sản Cá bố mẹ phải có nguồn gốc rõ ràng, đạtyêu cầu về chất lượng, khỏe mạnh Thức ăn được sử dụng phải có chất lượng tốt, khôngmang mam bệnh, đủ lượng đạm theo nhu cầu ở từng giai đoạn phát triển của cá Cácloại thức ăn tông hợp và tự chế biến phải được bảo quản tốt, tránh để nhiễm mốc vànhiễm khuẩn; thức ăn tươi sống phải được xử lý tốt, đảm bảo không mang mầm bệnhkhi cho cá ăn.

15

CHƯƠNG 3 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP

3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu

Đề tài được thực hiện từ tháng 12 năm 2022 đến tháng 06 năm 2023 tại phòngCông nghệ Biến đổi Sinh học - Viện Sinh học Nhiệt đới, số 9/621 xa lộ Hà Nội, LinhTrung, Thủ Đức, Hồ Chí Minh

3.2 Vật liệu nghiên cứu

3.2.1 Đối tượng nghiên cứu

Cá tra giống (trọng lượng khoảng 12 — 20 g) dùng dé thực hiện thí nghiệm camnhiễm; được mua từ trại cá giống Tân Vạn — Đồng Nai

Cá tra khỏe và bùn được thu nhận từ ao nuôi trồng thủy sản được thu nhận ở xãTân Thuận Đông, huyện Cao Lãnh, tỉnh Đồng Tháp và khu vực Cồn Lát thuộc xã TânThiéng, huyện Chợ Lach, tỉnh Bến Tre

Các chủng vi khuẩn gây bệnh được phân lập từ cá tra bị bệnh nhận từ Phòng Côngnghệ Biến đổi Sinh hoc

3.2.2 Dụng cụ, thiết bị

Dụng cu: đĩa petri, ống nghiệm, que cấy vòng, que cấy trang, bình tam giác, bénhựa 100 lít, bể nhựa 10 lít và một số dụng cụ thí nghiệm cơ bản khác

Thiết bị: máy đo pH, máy votex, lò vi sóng, máy lắc Shaker, tủ sây Sanyo, nồi hấp

ALP, kính hiển vi Leica DMLS, cân tiểu ly, tủ cấy Telstar, máy ly tâm, hệ thống sục

khí.

3.2.3 Môi trường và hóa chất sử dụng nghiên cứu

3.2.3.1 Môi trường nuôi cấy

Môi trường Nutrient Agar (NA):