Luận văn thạc sĩ sinh học nghiên cứu đặc điểm sinh học của một số chủng vi sinh vật có khả năng sinh tổng hợp enzym nhằm định hướng ứng dụng trong xử lý nước thải hữu cơ

Luận văn Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thị Hồng Hà VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT - - NGUYỄN THỊ HỒNG HÀ NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA MỘT SỐ CHỦNG VI SINH VẬT CÓ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP ENZYM NHẰM ĐỊNH HƯỚNG ỨNG DỤNG TRONG XỬ LÝ NƯỚC THẢI HỮU CƠ Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số: 60 42 01 03 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Thế Trang Hà Nội, tháng 12 năm 2014 Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN K16 http://www.lrc.tnu.edu.vn Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thị Hồng Hà CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ Nguyễn Thị Hồng Hà, Nguyễn Thế Trang, Nguyễn Thị Đà, Phạm Thị Thu Phương, Lê Thị Thanh Xuân, Nguyễn Thúy Nga, Lê Quang Sáng, Phạm Văn Duy (2014) Nghiên cứu đặc điểm sinh học phân loại số chủng vi khuẩn có khả sinh tổng hợp xenlulaza phân lập từ nước thải sau hầm biogas Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, 30,6S Nguyễn Thế Trang, Nguyễn Thị Hồng Hà, Nguyễn Thúy Nga, Phạm Văn Duy (2014) Ứng dụng số chủng vi khuẩn xử lý nước thải giàu hữu sau hầm biogas, Tuyển tập báo cáo khoa học, Hội thảo khoa học quốc tế “Năng lượng tăng trưởng xanh khu vực ASEAN”, Hà Nội 2014 Nhà xuất Khoa học tự nhiên Cơng nghệ Số hố Trung tâm Học liệu – ĐHTN K16 http://www.lrc.tnu.edu.vn Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thị Hồng Hà MỞ ĐẦU Cùng với phát triển nhà máy chế biến nông sản (đồ hộp từ dứa, dưa chuột bao tử, cà chua, ngô ) vấn đề làm xúc nhà sản xuất là: nước thải, phế thải từ trình chế biến Chất thải nhà máy chế biến đồ hộp rau có hàm lượng chất hữu cao (các loại đường đơn, axit hữu cơ, protein, xenluloza …), nguồn dinh dưỡng thích hợp cho nhiều loại vi sinh vật sinh trưởng Sự sinh trưởng vi sinh vật môi trường nước thải giàu hữu từ nông sản khơng có kiểm sốt người thường tạo sản phẩm có mùi thối tác động xấu tới môi trường sinh thái Do vậy, chất thải cần phải xử lý trước thải mơi trường tự nhiên Có nhiều phương pháp xử lý nước thải hữu khác như: Phương pháp học, hóa học, hóa lý sinh học Đối với nước thải hữu phương pháp xử lý sinh học có hiệu hơn, thân thiện với mơi trường hơn, có nhiều ưu điểm hiệu kinh tế kỹ thuật Trong nghiên cứu xử lý nước thải việc dùng biện pháp sinh học ưu tiên hàng đầu Viê ̣c phân hủy chấ t hữu dựa các vi sinh vâ ̣t tự nhiên có sẵn nước thải còn gă ̣p nhiề u ̣n ch ế thời gian phân hủy lâu, trình phân hủy chưa triê ̣t để Do đó, cầ n tuyể n cho ̣n những chủng vi sinh vật (VSV) thích hợp bở sung vào bên cạnh VSV có sẵn để giúp cho q trình xử lý đạt kết tốt [1] Vì vậy, đề tài: “Nghiên cứu đặc điểm sinh học số chủng vi sinh vật có khả sinh tổng hợp enzym nhằm định hướng ứng dụng xử lý nước thải hữu cơ” thực cần thiết Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN K16 http://www.lrc.tnu.edu.vn Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thị Hồng Hà PHẦN I TỔNG QUAN 1.1 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU XỬ LÝ NƢỚC THẢI HỮU CƠ TRÊN THẾ GIỚI VÀ Ở VIỆT NAM 1.1.1 Tình hình nghiên cứu xử lý nƣớc thải hữu giới Sự phát triển phương pháp thứ cấp để xử lý nước thải năm đầu kỷ XX cho cải tiến đáng kể y tế công cộng môi trường suốt thời gian này, việc phát minh "bùn hoạt tính" cho quy trình xử lý nước thải Gilbert Fowler cộng Đại học Manchester tiến hành Trạm Thí nghiệm Lawrence Massachusetts liên quan đến việc sục khí vào nước thải bình phủ lớp tảo Các đồng nghiệp Fowler, Edward Ardern William Lockett, người triển khai nghiên cứu với Văn phịng cơng ty đường sơng Manchester cơng trình xử lý nước thải Davyhulme Thí nghiệm thực lị phản ứng cách hút thu vào, việc xử lý cho hiệu cao Họ sục khí liên tục cho nước thải khoảng tháng kết đạt nitrat hóa hồn tồn nguyên liệu mẫu Điều bùn hoạt hóa chất (một cách tương tự than hoạt tính) q trình đặt tên bùn hoạt tính Kết cơng bố cơng trình Hội thảo 1914, lần hệ thống quy mơ đầy đủ với dịng chảy liên tục lắp đặt Worcester hai năm sau Do hậu chiến tranh giới thứ phương pháp xử lý truyền bá nhanh chóng, đặc biệt Hoa Kỳ, Đan Mạch, Đức Canada [26] Vào cuối năm 1930, việc xử lý nước thải bùn hoạt tính q trình chủ yếu sử dụng tồn giới Trong bùn hoạt tính có nhiều chi vi sinh vật khác Bacillus, Bacterium, Corynebacterium, : Actinomyces, Arthrobacer, Desulfotomacillium, Micrococcus, Pseudomonas, Sarcina … Chúng oxy hóa rượu , axit béo , paraffin, hydrocacbon và hợp chất khác Ở Mỹ, hàm lượng nitơ nước thải thường dao động khoảng 20 ÷ 85 mg/l nitơ dạng hợp chất hữu trung bình từ ÷ 35 mg/l, hàm lượng NH3 từ 12 ÷ 50 mg/l Hàm lượng photphat nguồn nước không ô nhiễm nhỏ 0,01 mg/l Theo quy định Hà Lan, tiêu chuẩn Việt Nam, hàm lượng Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN K16 http://www.lrc.tnu.edu.vn Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thị Hồng Hà photphate nước uống không vượt mg/l Theo tiêu chuẩn cộng đồng chung châu Âu, nước sinh hoạt, hàm lượng photphat không vượt 2,18 mg/l [4] Xử lý nước thải trình chế biến rau nhà khoa học Thái Lan sử dụng chủng nấm men Candida utilis CBS1517 có khả đồng hóa tốt loại đường axit hữu có nhiều thành phần nước thải, kết thu cho thấy sau 96 xử lý điều kiện phịng thí nghiệm COD giảm 89,9 % pH tăng từ 3,5 lên 8,5 [36] Mô ̣t số kế t quả nghiên cứu xử lý nước thải chăn nuôi lơ ̣n bằ ng quá triǹ h SBR hoă ̣c tương tự đươ ̣c tổ ng hơ ̣p : Trong nghiên cứu Bortone G (1992) hiệu xử lý COD T-N trình SBR cấp nước lần đạt cao, tương ứng khoảng 93 % 88 ÷ 93 % Tải trọng COD T-N đạt cao 0,37 kg/(m3.ngày) 0,13 kg/(m3.ngày) [28] Nghiên cứu Chang Won Kim (2000) hiệu xử lý COD chế độ cấp nước lần đạt 57 ÷ 87 % Tải trọng COD T-N 1,0 kg/(m3.ngày) 0,2 kg/(m3.ngày) [29] Q trình sục khí ln phiên cấp nước liên tục nghiên c ứu Jiang Cheng (2011) cho hiệu xử lý cao, COD 57 %, T-N 91 % [31] Nghiên cứu Mohammad N (2011) với trình SBR cấp nước lần cho hiệu xử lý COD T-N 80,3 % 61 % [34] Trong nghiên cứu Zang đồng tác giả (2006) cho hiệu xử lý cao cả, COD T-N tương ứng 96,3 % 97,5 %; tải trọng COD T-N đạt cao 2,1 kg/(m3.ngày) 0,28 kg/(m3.ngày), nước thải nghiên cứu có COD tỉ lệ COD/T-N cao tác giả đưa thêm giai đoạn kỵ khí vào trước giai đoạn thiếu khí/hiếu khí, nâng cao tải trọng xử lý COD Mặt khác, tác giả thực nghiệm thời gian lưu tương đối lớn, tỉ lệ COD/T-N tỉ lệ lưu nước (n=9) cao, nâng cao hiệu suất xử lý T-N [38] 1.1.2 Tình hình nghiên cứu xử lý nƣớc thải hữu Việt Nam Xử lý nước thải vấn đề thời nóng bỏng nởi cộm Việt Nam nay, theo dự báo Tổ chức Kinh tế giới Việt Nam nước có tốc độ phát triển kinh tế vào loại nhanh giới với tốc độ tăng trưởng dự báo % thập kỷ tới Tuy nhiên, việc tăng trưởng kinh Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN K16 http://www.lrc.tnu.edu.vn Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thị Hồng Hà tế cách nhanh chóng mạnh mẽ đồng thời tạo nên thách thức áp lực tác động mặt mơi trường, đó, tác động chất thải rắn nước thải vấn đề nổi cộm Việt Nam Hiện nay, ô nhiễm môi trường vấn đề quan tâm khơng Việt Nam mà cịn nhiều quốc gia giới Theo báo cáo môi trường Quốc gia năm 2010 Bộ Tài Nguyên Môi Trường, từ năm 2007 đến năm 2009, ô nhiễm môi trường nước mặt tất số vượt tiêu chuẩn cho phép theo QCVN 40:2011/BTNMT Các số COD, BOD vượt tiêu chuẩn từ ÷ 10 lần Hàm lượng NH4+ mơi trường nước mặt sông Nhuệ, sông Đáy sông Cầu vượt quy chuẩn cho phép QCVN 40:2011/BTNMT cho nước mặt phù hợp với việc bảo tồn động thực vật thủy sinh là 0,2 mg/l [17] Nước thải chăn nuôi nguyên nhân gây ô nhiễm nguồn nước Hàm lượng nitơ tổng số nước thải chăn ni nằm khoảng từ 512 ÷ 594 mg/l, NH3 từ 304 ÷ 471 mg/l, hàm lượng photpho tởng số từ 13,8 ÷ 62 mg/l [6] Ngày nay, với phát triển dân số, rác thải sinh hoạt ngày gia tăng, nước rỉ rác từ hố chôn lấp khu xử lý rác thải gây ảnh hưởng lớn đến đời sống người dân xung quanh, gây ô nhiễm nguồn nước mặt nước ngầm quanh khu vực Tổng hàm lượng nitơ nước thải rỉ rác dao động khoảng từ 200 ÷ 2000 mg/l, hàm lượng amoni cao, trung bình 200 mg/l, tiêu chuẩn cho phép 0,2 mg/l [11] Với xu hướng hội nhập kinh tế quốc tế, đặc biệt từ Việt Nam gia nhập WTO, với phát triển mạnh mẽ trình cơng nghiệp hố đất nước, chất thải cơng nghiệp ngày gia tăng khối lượng, đa dạng chủng loại vấn đề cấp bách xã hội, địi hỏi phải có nhận thức đắn đầu tư thích đáng cho vấn đề xử lý nước thải Hiện công nghệ xử lý nước thải bị ô nhiễm hợp chất hữu giới Việt Nam chủ yếu sử dụng biện pháp sinh học, phương pháp xử lý hiếu khí xử lý kị khí phở biến nhất, với nguồn nước thải có mức độ ô nhiễm cao thông thường người ta xử lý kết hợp kị khí hiếu khí Kết nghiên cứu Vũ Thúy Nga cộng cho thấy cải thiện chất lượng nước thải chế biến tinh bột sắn chế Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN K16 http://www.lrc.tnu.edu.vn Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thị Hồng Hà phẩm vi sinh vật Để nhằm khắc phục tình trạng nhiễm nước thải chế biến tinh bột sắn, cơng trình nghiên cứu tập trung tuyển chọn giống vi sinh vật có hoạt tính sinh học cao, sản xuất ứng dụng chế phẩm vi sinh vật để nâng cao hiệu xử lý nước thải sau biogas nhà máy chế biến tinh bột sắn Kết nghiên cứu tuyển chọn chủng vi sinh vật gồm Bacillus velezensis, Streptomyces fradiae Nitromonas sp có khả chuyển hóa tốt hợp chất hữu nước thải chế biến tinh bột sắn [15] Nghiên cứu ứng dụng vi khuẩn tích lũy polyphotphat xử lý nước thải Lê Quang Khơi cộng cho thấy dịng vi khuẩn tích lũy poly-P tuyển chọn có hiệu suất loại bỏ photphat hòa tan cao Hai dòng vi khuẩn Acinetobacter radioresistens TGT013L Kurthia sp.TGT025L có hiệu loại bỏ PO43- cao môi trường tổng hợp sau 25 thí nghiệm Sự loại bỏ PO43- thực hoạt động gen ppk dạng IIA q trình chuyển hóa photphat thành dạng poly-P tích lũy tế bào Kết nghiên cứu mang lại nhiều triển vọng ứng dụng dòng vi khuẩn tích lũy poly-P để xử lý photpho hịa tan nước thải chăn ni [14] Với mục đích nghiên cứu phát triển công nghệ xử lý hiệu đồng thời hữu chất dinh dưỡng nước thải ngành chăn nuôi lợn, nghiên cứu Phạm Thị Hải Thịnh đồng tác giả, nghiên cứu ảnh hưởng số điều kiện vận hành tỷ lệ COD/T-N (tỉ lệ nhu cầu oxy hóa học tởng nitơ) chế độ sục khí đến hiệu xử lý COD T-N trình SBR nước thải chăn nuôi qua xử lý kị khí Với chế độ hai chu trình thiếu - hiếu khí thích hợp, hiệu xử lý COD T-N đạt cao, tương ứng khoảng 90 % 80 ÷ 85 % [12] Tuy nhiên nồng độ T-N nước thải chăn nuôi lợn cao thay đởi khoảng rộng, nghiên cứu nâng cao hiệu xử lý nitơ trình nhằm đáp ứng cách ởn định quy chuẩn xả thải cần thiết Theo Phan Đỗ Hùng cộng cho thấy ảnh hưởng tỉ lệ cấp nước thải đến hiệu xử lý q trình SBR hai chu trình thiếu - hiếu khí cấp nước hai lần so sánh với chế độ cấp nước lần Với trình SBR hai chu trình thiếu-hiếu khí, cấp nước hai lần giải pháp để nâng cao hiệu xử lý T-N trình Thực nghiệm cho thấy, tăng tỉ lệ cấp nước (tỉ lệ lượng nước thải cấp lần thứ Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN K16 http://www.lrc.tnu.edu.vn Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thị Hồng Hà tổng lượng nước thải xử lý mẻ), lúc đầu hiệu suất xử lý T-N tăng, nhiên đến giới hạn định hiệu suất xử lý T-N giảm trở lại Hiệu suất xử lý T-N ba tỉ lệ cấp nước nghiên cứu cao, tỉ lệ 2/3 đạt cao nhất, khoảng 85 ÷ 90 % Hiệu suất xử lý T-N thực nghiệm tỉ lệ cấp nước thấp 1/2 2/3 phù hợp với hiệu suất lý thuyết Hiệu suất xử lý COD chế độ cấp nước hai lần cao, 85 ÷ 90 % tỉ lệ cấp nước 2/3, xấp xỉ với trường hợp cấp nước lần [5] 1.2 THÀNH PHẦN CƠ BẢN CỦA NƢỚC THẢI HỮU CƠ 1.2.1 Xenluloza nƣớc thải Trong nước thải hữu hàm lượng chiếm xenluloza thành phần chủ yếu tổ chức thực vật Trong xác thực vật (nhất thân rễ) thành phần hữu chiếm tỷ lệ cao xenluloza Hàm lượng xenluloza thực vật thường thay đổi khoảng 30 ÷ 80 % (tính theo trọng lượng khơ), sợi hàm lượng thường vượt 90 % [30] Xenluloza polysaccarit bền vững, cấu tạo nhiều gốc anhydroglucoza, liên kết với nhờ dây nối β-1,4-glucozit Mỗi phân tử xenluloza thường chứa từ 1.400 đến 10.000 gốc glucoza Khối lượng phân tử xenluloza khác phụ thuộc vào loại thực vật (ở bơng 150.000 ÷ 1.000.000, sợi gai lên tới 1.840.000) Trên chuỗi glucan đơn vị lặp lại glucoza mà xenlobioza Mỗi phân tử glucoza có dạng “ghế bành”, phân tử quay 180o so với phân tử vị trí β nhóm hydroxyl mặt phẳng nằm ngang phân tử Xenluloza có cấu trúc lớp sợi song song, phân tử chuỗi xenluloza gắn với nhờ mạng lưới liên kết hydro, lớp gắn với nhờ lực Vander-Van Trong tự nhiên, chuỗi glucan xenluloza có cấu trúc dạng sợi, đơn vị sợi nhỏ có đường kính khoảng nm Các sợi sơ cấp hợp lại thành vi sợi có đường kính từ 10 ÷ 40 nm, vi sợi hợp thành bó sợi to quan sát kính hiển vi quang học Tồn lớp sợi có lớp vỏ hemixenluloza lignin rắn bao bọc bên ngồi Phân tử xenluloza có cấu trúc khơng đồng Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN K16 http://www.lrc.tnu.edu.vn Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thị Hồng Hà gồm hai vùng: Vùng kết tinh có trật tự cao, bền vững vùng vơ định hình trật tự bền vững Vùng vơ định hình hấp thụ nước trương lên, vùng kết tinh mạng lưới liên kết hydrogen ngăn cản trương Xenluloza có cấu trúc đặc, bền với có mặt lớp vỏ hemixenlulo-lignin khiến cho xâm nhập enzym vào cấu trúc khó khăn làm tăng tính kỵ nước chuỗi β-1-4-glucan, làm cản trở tốc độ phản ứng thủy phân Xenluloza hợp chất cacbon chiếm tỷ lệ trọng lớn (50 %) tổng số hydratcacbon tự nhiên thành phần hữu chủ yếu rác, giấy, gỗ, thân cây, cành cây, cây, rơm rạ, sợi đay, vải bơng, vv… Hình 1.1 Hình ảnh hợp chất cao phân tử xenluloza [30] Mầu nâu - cacbon, màu đỏ - oxy, màu trắng - hydro Xenluloza có cấu trúc bền vững Không tan nước, không bị tiêu hóa đường tiêu hóa người động vật Trong dày động vật nhai lại đất có nhiều vi sinh vật có khả phân giải xenluloza 1.2.2 Hemixenluloza nƣớc thải Trong tế bào thực vật hemixenluloza đứng thứ hai khối lượng Trong thành phần hemixenluloza có nhiều loại đường khác nhau, tên chúng thường gọi theo tên loại đường chủ yếu có thành phần chúng Khối lượng phân tử hemixenluloza nhỏ nhiều so với xenluloza, thường chúng có khoảng 150 gốc đường Các gốc đường đơn nối với liên kết β-1-4, β-1-3, β-1-6 glucozit Các hemixenluloza thường tạo mạch ngắn phân nhánh, so với xenlulo hemixenluloza có cấu trúc khơng chặt chẽ dễ bị phân giải axit yếu kiềm yếu, đơi cịn bị phân giải nước nóng [30] Số hố Trung tâm Học liệu – ĐHTN K16 http://www.lrc.tnu.edu.vn Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thị Hồng Hà 1.2.3 Protein nƣớc thải Protein hợp chất cao phân tử chứa nitơ (15 ÷ 17 % tính theo trọng lượng khơ) Protein thành phần quan trọng thể động, thực vật Sự phân giải protein trải qua trình thuỷ phân protein thành polypeptit, sau axit amin, q trình amon hố, nitrat hố phản nitrat hố Q trình amon hố q trình chuyển hố hợp chất nitơ hữu thành nitơ dạng khống Q trình nitrat hố q trình chuyển hố chất ammoniac ban đầu thành axit nitơ sau thành axit nitric Q trình khử nitrat thành nitơ gọi phản nitrat hoá[ 16] 1.2.4 Tinh bột nƣớc thải Tinh bột cacbonhyđrat cao phân tử bao gồm đơn vị D-glucoza nối với liên kết α-glucozit Công thức phân tử gần (C6H10O5)n n có giá trị từ vài trăm đến khoảng mười nghìn Tinh bột có dạng hạt màu trắng tạo hai loại polyme amiloza amilopectin Amiloza polime mạch thẳng gồm đơn vị D-glucoza liên kết với liên kết α-1,4-glucozit Amilopectin polime mạch nhánh, ngồi chuỗi glucoza thơng thường cịn có chuỗi nhánh liên kết với chuỗi liên kết α-1,6-glucozit Trong tự nhiên, tinh bột thành phần chủ yếu loại ngũ cốc, củ, Hàm lượng tinh bột có hạt củ 40  70 %, phần khác  25 % Chúng đóng vai trị nguồn dự trữ lượng cho q trình nảy mầm hạt, nguồn lương thực chủ yếu người Enzym thủy phân tinh bột phân hủy chủ yếu liên kết α-glucozit Nhóm enzym gồm enzym: α-amylaza, β-amylaza, glucoamylaza, dextrinaza [16] 1.2.5 Một số vi sinh vật gây bệnh khác nƣớc thải Các vi sinh vật gây bệnh chủ yếu nước thải: Salmonella spp., vài lồi Salmonella hiện nước thải đô thị, kể S typhi (gây bệnh thương hàn) Doran cộng cho số lượng 700 Salmonella/l; khoảng chừng Shigellae khoảng 1.000 Vibrio cholera/l thường phát nước thải đô thị khu vực nhiệt đới Shigellae Vibrio cholera nhanh chóng chết thải Số hố Trung tâm Học liệu – ĐHTN K16 10 http://www.lrc.tnu.edu.vn Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thị Hồng Hà mơi trường Do sử dụng biện pháp xử lý để loại Salmonella bảo đảm phần lớn vi khuẩn bị tiêu diệt Enteroviruses: Có thể gây bệnh nguy hiểm sởi, viêm màng não Số lượng chúng tương đối thấp enteroviruses Người ta chứng minh việc loại bỏ lồi vi rút có quan hệ mật thiết với việc loại bỏ chất rắn lơ lửng Ngồi vi sinh vật gây bệnh cịn có số ký sinh trùng: thường bệnh ký sinh trùng chủ yếu Ascaris lumbricoides, trứng lồi ký sinh trùng có kích thước lớn (45  70 m  35  50 m) 1.3 VI SINH VẬT PHÂN GIẢI NƢỚC THẢI HỮU CƠ 1.3.1 Vi sinh vật phân giải xenluloza Xenlulaza đươ ̣c thu từ nhiề u nguồ n nguyên liê ̣u khác ̣ng vâ ̣t (các nhóm thân mềm, lơ ̣n, bò, gà); thực vâ ̣t (trong ̣t ngũ cố c nảy mầ m là đa ̣i ma ̣ch , yế n mạch, lúa mì, mạch đen) vi sinh vật (nấ m sơ ̣i, nấ m men, xạ khuẩn vi khuẩn ) Tuy nhiên, vi sinh vâ ̣t là ng̀ n thu enzym chủ yếu thời gian sống ngắn nên thu đươ ̣c nhiề u lầ n năm và chủ đô ̣ng sử du ̣ng nguồ n nguyên liê ̣u rẻ tiề n để dễ dàng điều khiể n có đinh ̣ hướng nguồ n enzym nuôi hoă ̣c gia tăng lươ ̣ng enzym Có nhiều chủng vi khuẩn , xạ khuẩn, nấ m mố c và mô ̣t số loài nấ m men có khả sinh tởng hợp xenlulaza Các lồi vi khuẩn hiếu khí lẫn ki ̣khí đề u có khả sinh xenlulaza Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus pumilis, Acidothermus cellulobuticus Ngồi cịn có loài ưa kiềm Cephalosporium sp.RYM-202 [9] 1.3.2 Vi sinh vật phân giải hemixenluloza Có nhiều loại vi sinh vật có khả phân giải hemixenluloza Các vi sinh vật có khả phân giải xenluloza sản sinh xenlulaza thường sinh hemixenlulaza Một số loại vi sinh vật có khả phân giải hemixenluloza như: Bacillus, Aspergillus, Clostridium, Streptomyces Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN K16 11 http://www.lrc.tnu.edu.vn Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thị Hồng Hà 1.3.3 Vi sinh vật phân giải protein Dưới tác dụng vi sinh vật hoại sinh, protein phân giải thành axit amin Các axit amin lại số nhóm vi sinh vật phân giải thành NH3 NH4+ gọi nhóm vi khuẩn amin hóa Q trình gọi khống hóa chất hữu qua đó, nitơ hữu chuyển thành dạng nitơ khoáng Dạng NH4+ chuyển hóa thành dạng NO3-nhờ nhóm vi khuẩn nitrat hóa Nhóm vi khuẩn nitrat hóa bao gồm bốn chi khác nhau: Nitrosomonas, Nitrozocystic, Nitrozolobus Nitrosospira, chúng thuộc loại dị dưỡng bắt buộc [3] 1.3.4 Vi sinh vật phân giải tinh bột Có nhiều loại vi khuẩn có khả phân hủy tinh bột, vi khuẩn Bacillus, Pseudomonas, Athrobacter, Achromobacter, Agrobacterium … Một số vi sinh vật có khả tiết loại enzym hệ enzym amylaza Ví dụ số vi nấm bao gồm số loại chi Aspergillus, Fusarium Xạ khuẩn có số có khả phân hủy tinh bột Đa số vi sinh vật khơng có khả tiết vài enzym hệ đó, chúng có khả tiết mơi trường [3] 1.4 THƠNG SỐ CƠ BẢN ĐÁNH GIÁ NƢỚC BỊ Ô NHIỄM Để đánh giá chất lượng nước mức độ nhiễm nước nói chung có nhiều thơng số Tuy nhiên, loại nước với thành phần chất có mà ta chọn thơng số thích hợp so sánh với tiêu chuẩn cho phép thành phần hóa học sinh học loại nước sử dụng cho mục đích khác Các thông số để đánh giá chất lượng nước thải hữu là: pH, độ đục, chất rắn lơ lửng, oxy hòa tan … Đặc biệt hai số BOD COD có ý nghĩa quan trọng Theo QCVN 40:2011/BTNMT - Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia nước thải công nghiệp, số thông số ô nhiễm nước thải cơng nghiệp (bảng 1.1) Số hố Trung tâm Học liệu – ĐHTN K16 12 http://www.lrc.tnu.edu.vn Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thị Hồng Hà Bảng 1.1 Một số thông số ô nhiễm nước thải công nghiệp [9] Thông số QCVN 40:2011/BTNMT Đơn vị Cột A Cột B C 40 40 - 6÷9 5,5 ÷ Màu Pt-Co 50 150 Chất rắn lơ lửng mg/l 50 100 COD mg/l 75 150 BOD5 mg/l 30 50 Tổng nitơ mg/l 20 40 Tổng photpho mg/l NH4(N) mg/l 10 Coliform MPN/100ml 3000 5000 o Nhiệt độ pH  Màu sắc Nước bình thường khơng có màu, nước ao hồ có màu tùy thuộc vào chất có mặt Nước thải thường có màu nâu đen, đỏ đỏ nâu Màu sắc nước chất hữu cơ, vô có mặt nước gây nên Màu sắc nước ảnh hưởng đến chất lượng sản phẩm sử dụng nước có màu sản xuất [16] Màu nước do: + Các chất hữu phần chết thực vật gọi màu thực vật, màu khó xử lý phương pháp đơn giản Ví dụ rong tảo làm nước có màu xanh + Các chất vơ hạt rắn có màu gây ra, màu xử lý Có nhiều phương pháp xác định màu nước, thường dùng phương pháp so màu với dung dịch chuẩn Chlophantinat coban Cường độ màu nước xác định theo phương pháp so màu lọc bỏ chất vẩn đục [16]  Mùi nước Nước tự nhiên không mùi, nước thải nước ô nhiễm thường có mùi khó chịu từ nhẹ đến thối Số hố Trung tâm Học liệu – ĐHTN K16 13 http://www.lrc.tnu.edu.vn Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thị Hồng Hà Có thể xác định mùi nước theo phương pháp đơn giản sau: Mẫu nước chứa bình có nắp đậy kín, lắc khoảng 10 ÷ 20 giây, sau mở nắp, ngửi mùi đánh giá: khơng mùi, mùi nhẹ, trung bình, nặng nặng [16]  Độ pH pH của nướ c thải có ý nghĩa quan trọng trình xử lý Các cơng trình xử lý nước thải áp dụng trình sinh học làm việc tốt pH nằm giới ̣n từ ÷ 7,6 Mơi trường thuâ ̣n lơ ̣i nhấ t để vi khuẩ n phát triể n l mơi trường có pH từ ÷ Các nhóm vi khuẩn khác có giới hạn pH hoạt động khác Ví dụ vi khuẩn nitrit phát triển thuận lợi với pH từ 4,8 ÷ 8; cịn vi khuẩn nitrat với pH từ 6,5 ÷ 9,3 Vi khuẩ n lưu huỳnh có th ể tồn mơi trường có pH từ ÷ Ngồi pH cịn ảnh hưởng đến q trình tạo bơng cặn bể lắng cách tạo cặn phèn nhôm [21] Nước thải sinh hoa ̣t có pH từ 7,2 ÷ 7,6  Nhu cầu oxy sinh hóa - BOD BOD nhu cầu oxy sinh hóa hay nhu cầu oxy sinh học, lượng oxy cần thiết để oxy hóa chất hữu dễ phân hủy có nước VSV (chủ yếu vi khuẩn) hoại sinh, hiếu khí [19] Chỉ tiêu BOD tiêu quan trọng để xác định mức ô nhiễm nước Nó biểu thị lượng chất hữu bị phân hủy VSV Trong thực tế xác định lượng oxy cần thiết để VSV oxy hóa hồn tồn chất hữu có nước, mà cần xác định lượng oxy cần thiết ủ nhiệt độ 20 oC ngày phòng tối để tránh q trình quang hợp, có khoảng 70 ÷ 80 % nhu cầu oxy sử dụng kết biểu thị BOD5 [19]  Nhu cầu oxy hóa học - COD COD nhu cầu oxy cần thiết để oxy hóa tồn chất hữu chất khử có nước thành CO2 H2O [19]  Hàm lượng chất rắn Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN K16 14 http://www.lrc.tnu.edu.vn Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thị Hồng Hà Các chất rắn có nước là: Các chất vơ dạng muối hịa tan khơng tan đất đá dạng huyền phù lơ lửng Các chất hữu xác vi sinh vật, tảo, động vật nguyên sinh, động vật phù du …, chất hữu tởng hợp phân bón, chất thải công nghiệp Chất rắn nước gồm có: Tởng chất rắn (TS) xác định trọng lượng khơ phần cịn lại sau cho bay nước bếp cách thủy sấy khô 105 oC trọng lượng không đổi Đơn vị tính mg (hoặc g/l) Chất rắn lơ lửng dạng huyền phù (SS) Hàm lượng chất huyền phù trọng lượng khơ chất rắn cịn lại giấy lọc sợi thủy tinh Chất rắn hòa tan (DS) Hàm lượng chất rắn hịa tan hiệu số tổng chất rắn với huyền phù: DS = TS – SS Đơn vị tính g (hoặc mg) [22]  Hàm luợng nitơ Trong môi trường nước, hợp chất nitơ tồn chủ yếu dạng amoni (NH4+), nitrat (NO3-), dạng nitrit (NO2-) số hợp chất hữu khác Thành phần xem bền trường không gây hiệu xấu cho mơi trường khí nitơ (N2) Các q trình chu trình nitơ chuyển đởi nitơ từ dạng sang dạng khác tiến hành nhóm vi sinh vật khác với mục đích lấy lượng để tích tụ nitơ thành dạng cần thiết cho phát triển chúng Các dạng nitơ hữu từ nguồn động thực vật sau chết vi khuẩn amoni hóa chuyển hóa thành dạng NH4+ ; sau NH4+ chuyển hóa thành NO2- nhờ vi khuẩn nitrit hóa; NO2- sinh nhóm sinh vật nitrat hóa chuyển hóa thành NO3; cuối nitrat nhóm sinh vật kỵ khí chuyển thành dạng nitơ phân tử nhờ trình khử nitrat Hiện nay, kết hợp phương pháp sinh học xử lý nitơ, photpho nước ô nhiễm hướng nghiên cứu Trong nghiên cứu Jorgensen Pauli, số chủng vi sinh vật có khả tích lũy photpho có khả khử nitrat [18]  Hàm lượng photpho Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN K16 15 http://www.lrc.tnu.edu.vn Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thị Hồng Hà Các hợp chất chứa photpho tự nhiên thường khó phân giải [7] Các nguồn nước thải chăn ni, biogas thường có hàm lượng photpho cao Theo tiêu chuẩn Việt Nam nước thải, hàm lượng photpho nước thải vượt mg/l dẫn đến tượng phú dưỡng (dư thừa chất dinh dưỡng), gây tác động trực tiếp đến động vật, thực vật gây ảnh hưởng đến môi trường sinh thái Việc xử lý nước thải giàu photpho thường khó thực cịn đường sinh học tự nhiên số lượng loài vi sinh vật phân giải chuyển hóa photpho khơng nhiều Một số chủng vi sinh vật phân lập tự nhiên có khả tích lũy photphat cao thuộc chi: Acinetobacter, Aeromonas, Pseudomonas, Alcaligenes, Bacillus, … [8,9] Kết nghiên cứu Bao cộng khả thu nhận tích lũy photpho chi vi khuẩn cho thấy sau 20 vi khuẩn thuộc chi Pseudomonas có khả thu nhận 14,34 mg/l tiến hành điều kiện yếm khí, chi Enterobacteriaceae có khả thu nhận 8,91 mg/l, chi Alcaligenes 6,43 mg/l, Staphylococcus 6,23 mg/l, Bacillus 4,41 mg/l điều kiện hiếu khí [8] Sự tích lũy photphat cung cấp nguồn lượng cho vi sinh vật phát triển Trong thể vi sinh vật, photpho tích lũy dạng chủ yếu photphat Photphat chiếm đến 12 % trọng lượng tế bào vi khuẩn có hoạt tính tích lũy photphat, vi khuẩn khơng tích lũy photphat có khoảng ÷ % Xử lý nước thải có chứa hợp chất photpho phương pháp sinh học dựa khả số nhóm vi sinh vật tích lũy lượng photpho nhiều mức thể chúng cần điều kiện hiếu khí Thơng thường hàm lượng photpho vi sinh vật chiếm từ 1,5 ÷ 2,5 % khối lượng tế bào khơ, số lồi có khả hấp thu cao hơn, từ ÷ % [3], [14] Nghiên cứu Van Bethum cộng sự, cho thấy photpho thể vi sinh vật tích lũy dạng chủ yếu photphat Trong thể chúng, photphat chiếm đến 12 % trọng lượng tế bào vi khuẩn có tích lũy polyphotphat, với vi khuẩn khơng tích lũy polyphotphat, chiếm khoảng 1÷ % trọng lượng tế bào [3]  Chỉ số vệ sinh (E coli) Nước làm lan truyền nguồn bệnh thực tế bệnh lây lan qua môi trường nước nguyên nhân gây nhiều loại bệnh dẫn đến tử Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN K16 16 http://www.lrc.tnu.edu.vn Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thị Hồng Hà vong, nước phát triển Các tác nhân gây bệnh thường tiết phân người động vật bị bệnh, bao gồm nhóm sau: Các vi khuẩn, virus, động vật đơn bào, giun kí sinh Chất lượng mặt vi sinh nước thường sử dụng rộng rãi số E coli [20] 1.5 CÁC YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG ĐẾN SƢ̣ SINH TRƢỞNG CỦ A VI SINH VẬT TRONG QUÁ TRÌ NH XƢ̉ LÝ NƢỚC THẢI 1.5.1 Ảnh hƣởng của nƣớc và nồ ng đô ̣ các chấ t dinh dƣỡng Nước đóng vai trò rấ t quan tro ̣ng hoa ̣t đô ̣ng số ng của vi sinh vâ ̣t Nước hòa tan chất dinh dưỡng nhờ mà chất dinh dưỡng dễ dàng thẩ m thấ u qua màng tế bào vi sinh vật sử dụng Nồ ng đô ̣ các chấ t dinh dưỡng nước thải phải phù hợp với đặc điểm sinh lý tế bào Nồ ng đô ̣ các chấ t dinh dưỡng cao mức giới hạn tế bào nước, nguyên sinh chấ t tế bào bi ̣keo tu ̣ la ̣i làm hoạt động trao đổi chất bị ngưng trệ Ngươ ̣c la ̣i, nước cấ t tế bào bi ̣trương lên xảy hiê ̣n tươ ̣ng thẩ m thấ u của nước qua màng tế bào làm cho tế bào bi ̣vỡ Tỉ lê ̣ các chấ t dinh dưỡng có ảnh hưởng lớn đế n hoa ̣t đô ̣ng số ng của vi sinh vâ ̣t Mỡi lồi vi sinh vật có nhu cầu khác tỷ lệ chất dinh dưỡ ng Tỷ lệ C : N : P phổ biế n cho nhiề u loài là 100 : 10 : 1.5.2 Ảnh hƣởng nhiêṭ đô ̣ Mỗi loa ̣i vi sinh vâ ̣t có đô ̣ giới ̣n nhiê ̣t đô ̣ sinh trưởng thích hợp khác Đối với loại vi sinh vật có giới hạn nhiệt độ sinh trưởng tố i thiể u , nhiê ̣t đô ̣ phát triển tối đa nhiệt độ sinh trưởng thích hợp Phầ n lớn vi khuẩ n có nhiệt độ sinh trưởng thích hợp 30 ÷ 37 oC, có nhiều lồi vi khuẩn có nhiệt độ sinh trưởng thấ p 10 ÷ 20 oC (vi sinh vâ ̣t ưa la ̣nh ) có nhiều lồi nhiệt độ sinh trưởng cao 50 ÷ 60 oC (vi sinh vâ ̣t ưa nhiê ̣t ) Trong xử lý nước thải hầ u viê ̣c điề u chin ̉ h nhiê ̣t đô ̣ không thể thực hiê ̣n đươ ̣c mà thường xử lý ở nhiê ̣t đô ̣ tự nhiên của mơi trường Vì vậy, người ta thường cho ̣n các loa ̣i vi sinh vâ ̣t có sẵn tự nhiên của khu vực để chúng có khả thích nghi với nhiê ̣t đô ̣ môi trường tự nhiên [27] Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN K16 17 http://www.lrc.tnu.edu.vn Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thị Hồng Hà 1.5.3 Ảnh hƣởng pH môi trƣờng Cũng tương tự nhiệt độ , pH môi trường ban đầu yếu tố ảnh hưởng lớn đế n tố c đô ̣ sinh trưởng của vi sinh vâ ̣t Phầ n lớn cá c vi sinh vâ ̣t có pH sinh trưởng tố i ưu từ 5,5 ÷ 7,5 có số lồi sinh trưởng tớ i ưu ở pH thấ p (< 4,5) mô ̣t số loài sinh trưởng tố i ưu ở pH kiề m Ở pH không thích hơ ̣p ̣ enzym vi sinh vâ ̣t hoa ̣t đô ̣ng yế u hoă ̣c bi ̣bấ t hoa ṭ đó ảnh hưởng trực tiế p đế n quá trin ̀ h trao đổ i chấ t của vi sinh vâ ̣t Để vi sinh vâ ̣t sinh trưởng tố t cầ n trì pH thích hơ ̣p suố t thời gian nuôi cấ y 1.5.4 Ảnh hƣởng oxy hòa tan Mố i quan ̣ của vi sinh vâ ̣t đố i với o xy rấ t khác Vi sinh vâ ̣t hiế u khí cầ n oxy để sinh trưởng Vi sinh vâ ̣t yế m khí oxy la ̣i là tác nhân gây ̣c Nhóm vi sinh vâ ̣t trung gian giữa hai nhóm này là nhóm hiế u khí tùy tiê ̣n Trong xử lý nước thải ở các bể a eroten cầ n cung cấ p đủ oxy để vi sinh vâ ̣t hiế u khí oxy hóa các chấ t hữu có nước thải Cịn xử lý yếm khí tiến hành bể kín để oxy khơng tan vào nước thải gây ức ch ế vi sinh vâ ̣t yế m khí [23] 1.6 CÁC PHƢƠNG PHÁP XỬ LÝ NƢỚC THẢI GIÀU HỮU CƠ Có nhiều biện pháp xử lý nước thải: Xử lý học, xử lý hóa học, xử lý sinh học, xử lý cơ-lý-hóa, xử lý nhờ kết hợp biện pháp sinh học cơ-lý-hóa Trong phương pháp phương pháp xử lý sinh học sử dụng nhiều với hiệu cao, đặc biệt nước thải chứa nhiều chất hữu dễ bị phân hủy, không mang hiệu nước thải cơng nghiệp có chứa chất vơ độc hại (kim loại nặng, axit, kiềm) chất hữu bền vững (các clobenzen, phenol …) hiệu số loại vi khuẩn gây bệnh Trong trường hợp phải kết hợp phương pháp xử lý sinh học với phương pháp xử lý cơ-lý-hóa [29] Số hố Trung tâm Học liệu – ĐHTN K16 18 http://www.lrc.tnu.edu.vn Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thị Hồng Hà 1.6.1 Phƣơng pháp xử lý học Phương pháp học thường sử dụng giai đoạn xử lý sơ bộ, dùng để loại vật rắn có kích thước lớn tạp chất rắn khơng tan nước Các chất dạng vơ hữu Các phương pháp xử lý học thường dùng: lọc qua song chắn lưới, lắng, lọc qua lớp cát quay ly tâm 1.6.2 Phƣơng pháp xử lý hóa học Phương pháp hóa học dựa sở phản ứng hóa học, q trình hóa lý diễn chất nhiễm với hóa chất bở sung vào Các phản ứng xảy phản ứng oxy hóa khử, phản ứng tạo chất kết tủa phản ứng phân hủy Do vậy, có phương pháp xử lý hóa học thường sử dụng là: Phương pháp trung hịa, phương pháp oxy hóa-khử, phương pháp điện hóa học 1.6.3 Phƣơng pháp xử lý sinh học Phương pháp phổ biến kinh tế để xử lý nước thải giàu chất hữu phương pháp sinh học Phương pháp dựa sở sử dụng hoạt động vi sinh vật để phân hủy chất hữu gây ô nhiễm nước thải Các vi sinh vật sử dụng chất hữu số khoáng chất làm nguồn dinh dưỡng tạo lượng Trong trình phát triển, chúng nhận chất dinh dưỡng để xây dựng tế bào, sinh trưởng sinh sản nên sinh khối chúng tăng lên Quá trình phân hủy chất hữu nhờ vi sinh vật gọi q trình oxy hóa sinh hóa [8] Nước thải xử lý phương pháp sinh học đặc trưng tiêu COD BOD Để xử lý phương pháp này, nước thải cần không chứa chất độc tạp chất, muối kim loại nặng nồng độ chúng không vượt nồng độ cực đại cho phép, đồng thời thỏa mãn: BOD/COD ≥ 0,5 1.7 TIÊU CHÍ TUYỂN CHỌN VI SINH VẬT XỬ LÝ NƢỚC THẢI HỮU CƠ Xử lý nước thải bằ ng phương pháp sinh ho ̣c chủ yế u dựa vào hoa ̣t đô ̣ng số ng vi sinh vật dị dưỡng có khả phâ n giải chấ t hữu Các vi sinh vật dị Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN K16 19 http://www.lrc.tnu.edu.vn Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật Luận văn Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thị Hồng Hà dưỡng có t hể chia thành ba nhóm nhỏ : Vi sinh vâ ̣t hiế u khí , vi sinh vâ ̣t yế m khí và vi sinh vâ ̣t tùy nghi Khu ̣ vi sinh vâ ̣t sử du ̣ng quá trin ̀ h xử lý nước thải gồ m vi khuẩ n , nấ m men, nấ m mố c , xạ khuẩn Trong đó , vi khuẩ n chiế m số lươ ̣ng lớn nhấ t Trong các bể xử lý sinh ho ̣c , vi khuẩ n đóng vai trò quan tro ̣ng hàng đầ u vì nó chịu trách nhiệm phân hủy thành phần hữu nước thải Do vâ ̣y, bên cạnh viê ̣c lơ ̣i dụng những tính ưu viê ̣t lồi vi sinh vâ ̣t cầ n phải lựa chọn những chủng vi sinh vâ ̣t thích hơ ̣p vừa có khả làm sạch, vừa tạo ̣ kế t lắ ng tố t vừa không gây đô ̣c hại cho mơi trường Các tiêu chí đươ ̣c xét: Có hoạt tính sinh học cao: Có phức hệ enzym phân giải hữu cao, ổn định Sinh trưởng tốt điều kiện thực tế nước thải hữu cơ, cạnh tranh với vi sinh vật có sẵn nước thải Nuôi cấy dễ dàng, sinh trưởng tốt mơi trường tự nhiên, thuận lợi cho q trình nhân giống thu sinh khối Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN K16 20 http://www.lrc.tnu.edu.vn Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật ... vào nước thải gây ức ch ế vi sinh vâ ̣t yế m khí [23] 1.6 CÁC PHƢƠNG PHÁP XỬ LÝ NƢỚC THẢI GIÀU HỮU CƠ Có nhiều biện pháp xử lý nước thải: Xử lý học, xử lý hóa học, xử lý sinh học, xử lý cơ -lý- hóa,... thích hợp bở sung vào bên cạnh VSV có sẵn để giúp cho trình xử lý đạt kết tốt [1] Vì vậy, đề tài: ? ?Nghiên cứu đặc điểm sinh học số chủng vi sinh vật có khả sinh tổng hợp enzym nhằm định hướng ứng. .. chất thải cần phải xử lý trước thải môi trường tự nhiên Có nhiều phương pháp xử lý nước thải hữu khác như: Phương pháp học, hóa học, hóa lý sinh học Đối với nước thải hữu phương pháp xử lý sinh học