Phân lập bacillus spp có khả năng đối kháng với nấm aspergillus sp cdp2, ứng dụng trong xử lý hạt giống đậu phộng

358 PHÂN LẬP BACILLUS SPP CÓ KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG VỚI NẤM ASPERGILLUS SP CDP2, ỨNG DỤNG TRONG XỬ LÝ HẠT GIỐNG ĐẬU PHỘNG Trịnh Lai Lợi, Lê Nguyễn Ái Mi, Lâm Minh Khoa, Hồ Anh ơn Viện Công nghệ Việt  Nhậ[.]

PHÂN LẬP BACILLUS SPP CÓ KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG VỚI NẤM ASPERGILLUS SP CDP2, ỨNG DỤNG TRONG XỬ LÝ HẠT GIỐNG ĐẬU PHỘNG Trịnh Lai Lợi, Lê Nguyễn Ái Mi, Lâm Minh Khoa, Hồ Anh ơn Viện Công nghệ Việt  Nhật, Trường Đại học Cơng nghệ TP Hồ Chí Minh GVHD: TS Nguyễn Hồi Hương TĨM TẮT Từ mẫu đậu phộng (rễ hạt) thu nhận xã Hòa Khánh Tây, tỉnh Long An Đã phân lập tuyển chọn 11 chủng vi khuẩn có hình que sinh bào tử nghi ngờ chủng thuộc chi Bacillus Các chủng tiến hành khảo sát đặc điểm sinh hóa nhằm phân loại dựa vào khác biệt đặc điểm sinh hóa chủng 11 chủng phân lập tuyển chọn chủng có khả kháng nấm Aspergillus sp CDP2 môi trường SDA Từ khóa: Aflatoxin, Bacillus, đối kháng, phân lập vi khuẩn, ức chế nấm mốc sinh aflatoxin ĐẶT VẤN ĐỀ Aflatoxin nhóm chất chuyển hóa thứ cấp độc hại chủ yếu tổng hợp loài nấm sợi bao gồm Aspergillus flavus Aspergillus parasiticus hình thành điều kiện bảo quản lưu trữ Aflatoxin B1, B2, G1 G2 (AFB1, AFB2, AFG1 AFG2) bốn dẫn xuất Aflatoxin với AFB1 xác định chất gây ung thư gan Hơn hàm lượng Aflatoxin cao thực phẩm thường xảy vùng nhiệt đới nơi mà nấm Aspergillus flavus Aspergillus parasiticus phát triển nhiệt độ độ ẩm cao, có nhiều nghiên cứu vấn đề Asp flavus tìm thấy lồi hoại sinh đất với quy mơ toàn giới gây bệnh mùa vụ nông nghiệp; gạo, đậu phộng, hạt bông, trước sau thu hoạch Theo nhiều nghiên cứu cho thấy hạt đậu phộng bị nhiễm mốc thường tỷ lệ nảy mầm thấp Ở thực vật có nhiều lồi vi khuẩn góp phần giúp thúc đẩy phát triển bảo vệ Trong số 20 chi vi khuẩn Bacillus spp.; Pseudomonas spp Streptomyces spp sử dụng rộng rãi chất diệt khuẩn Bacillus spp báo cáo để sản xuất số hợp chất kháng nấm, thúc đẩy tăng trưởng thực vật giúp kiểm soát mầm bệnh thúc đẩy phát triển vi sinh vật vùng rễ (Rhizobacteria) Các peptide kháng nấm sinh loài Bacillus bao gồm mycobacillins, surfactin, mycosubtilins mushistatins enzyme phân hủy vách tế bào nấm mốc chitinase, protease enzyme phân hủy vách tế bào khác Có nhiều báo cáo chi Bacillus có khả đối kháng với nấm mốc Aspergillus flavus hạt đậu phộng 358 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Vật liệu Các chủng vi khuẩn Bacillus sp phân lập từ rễ hạt đậu phộng Chủng nấm mốc thị thuộc Aspergillus sp CDP2 phân lập từ hạt đậu phộng mốc cung cấp Khoa Vi sinh thuộc Trường Đại học Công nghệ Tp.Hồ Chí Minh 2.2 Phương pháp 2.2.1 Phân lập, xác định đặc điểm hình thái, sinh hóa khảo sát khả có lợi Các chủng Bacillus phân lập từ mẫu rễ hạt đậu phộng xử lý 80 oC 15 phút cấy trang môi trường NA ủ 24 Sau xác định đặc điểm hình thái, sinh lý xác định chủng thuộc chi Bacillus theo khóa phân loại Bergey Các chủng thuộc chi Bacillus làm môi trường NA Các chủng làm tiến hành làm đặc điểm sinh hóa: IMViC, nitrate, catalase, thủy phân gelatin, oxidase, nuôi cấy bổ sung NaCl 5% 7%, nuôi cấy 42 oC lên men nguồn nguồn đường [1,2] 2.2.2 Phương pháp đối kháng với nấm Aspergillus sp CDP2 Các chủng khảo sát tuyển chọn chủng tốt có khả đối kháng với nấm Aspergillus sp CDP2 với tỷ lệ cao môi trường SDA Chủng vi khuẩn nuôi cấy môi trường NA 24 cấy vào môi trường SDA cấy nấm Aspergillus sp CDP2, cho từ tâm đ a tới vị trí cấy cm [3,4] 2.2.5 Phương pháp xử lý số liệu Các thử nghiệm xử lý thống kê theo phân tích phương sai yếu tố (one-way ANOVA) (p50% NNK21, NNK24, DP62, DP63, NDP61 Hình 1: A) Tỷ lệ đối kháng với Aspergillus sp CDP2 (Cấy vi khuẩn trước 24 giờ) B) Tỷ lệ đối kháng với Aspergillus sp CDP2 (Cấy lúc) Hình 2: Đối kháng cấy vi khuẩn trước 24 sau cấy Aspergillus sp CDP2 môi trường SDA (A, B, C); Đối kháng cấy vi khuẩn nấm lúc môi trường SDA (D, E, F), đó, (A, D): Đối chứng âm; (B, E): Bacillus sp NNK24; (C, F): Đối chứng dương (Cruise plus 312.5fs) 361 KẾT LUẬN Mười chủng phân lập tiến hành xác định đặc điểm hình thái đặc điểm sinh hóa chi Bacillus Sau chủng tiến hành đối kháng với Aspergillus sp CDP2 môi trường SDA 96 Các chủng cho kết đối kháng ổn định I%>50% đối kháng lúc cấy khuẩn trước 24 NNK21, NNK24, DP62, DP63, NDP61 Trong chủng đối kháng ổn định có tỷ lệ đối kháng cao NNK24 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Nguyễn Lân Dũng Giáo trình Vi sinh vật học Nhà xuất Giáo dục Việt Nam [2] May A.A.Al-Allaf (2011) Isolation of Bacillus spp from some sources and study of its proteolytic activity ISSN: 1813 – 1662 [3] Phạm Hoàng Nhân (2018) Sản xuất chế phẩm sinh học xử lý hạt giống từ Bacillus spp Luận văn Thạc s Trường Đại học Cơng nghệ Thành phố Hồ Chí Minh (HUTECH) [4] Xiaoshuang Xia, Betchem Garba, Hongyin Zhang, Mingyan Li, Peiwu Li, Qi Zhang, Ye Zhang, Yun Wang, (2017) Isolation and characterization of a Bacillus subtilis strain with aflatoxin B1 biodegradation capability Food Control 75 (2017) 92e98 362 ... khơng có khả đối kháng với Aspergillus sp CDP2 Chủng có khả đối kháng mạnh NNK25, 360 NNK24 NDP61 Nhưng cấy lúc chủng NNK25 khơng có khả đối kháng với Aspergillus sp CDP2 mà DP62 cho kết đối kháng. .. Thủy phân tinh bột 3.2 Khả đối kháng nấm Aspergillus sp CDP2 với chủng phân lập môi trường SDA Các chủng vi khuẩn tiến hành đối kháng với Aspergillus sp CDP2 cho thấy, chủng có khả đối kháng. .. nguồn đường [1,2] 2.2.2 Phương pháp đối kháng với nấm Aspergillus sp CDP2 Các chủng khảo sát tuyển chọn chủng tốt có khả đối kháng với nấm Aspergillus sp CDP2 với tỷ lệ cao môi trường SDA Chủng