Đồ án tốt nghiệp thử nghiệm các phương pháp đánh giá khả năng đối kháng của các chủng vi khuẩn bacillus spp và lactobacillus spp đối với một số nấm mốc sinh độc tố aflatoxin

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP THỬ NGHIỆM CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG CỦA CÁC CHỦNG VI KHUẨN BACILLUS SPP VÀ LACTOBACILLUS SPP ĐỐI VỚI[.]

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP THỬ NGHIỆM CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG CỦA CÁC CHỦNG VI KHUẨN BACILLUS SPP VÀ LACTOBACILLUS SPP ĐỐI VỚI MỘT SỐ NẤM MỐC SINH ĐỘC TỐ AFLATOXIN Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : TS NGUYỄN HOÀI HƯƠNG Sinh viên thực MSSV: 1515100007 : LÊ NGÔ VŨ PHƯỢNG Lớp: 15HSH01 TP Hồ Chí Minh, 2016 Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Đồ án tốt nghiệp cơng trình nghiên cứu thân tơi hướng dẫn TS Nguyễn Hồi Hương khoa Cơng Nghệ Sinh Học- Thực PhẩmMôi Trường trường Đại Học Cơng Nghệ Tp Hồ Chí Minh Những kết đồ án hồn tồn khơng chép từ đồ án tốt nghiệp người khác với hình thức Các số liệu trích dẫn đồ án tốt nghiệp hồn tồn trung thực Tơi xin chịu tồn trách nhiệm đồ án TP.HCM, ngày 12 tháng năm 2016 Sinh viên thực Lê Ngô Vũ Phượng i Đồ án tốt nghiệp LỜI CÁM ƠN Đầu tiên, xin gửi lời cảm ơn đến cha mẹ, người ni nấng dạy dỗ khuyến khích tạo điều kiện cho học tập để có thành ngày hơm Trong suốt khoảng thời gian học trường Đại Học Công Nghệ TP.HCM, em thây, cô khoa Công Nghệ Sinh Học- Thực Phẩm- Mơi Trường hết lịng hướng dẫn, giúp đỡ em trình học tập trường trình thực đồ án tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn đến quý Thầy, Cơ nhờ có thầy, trang bị cho chúng em kiến thức cần thiết để tự tin bước vào đời Đặc biệt, em xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Hồi Hương, tận tình hướng dẫn, bảo em suốt khoảng thời gian xây dựng đề cương thực hiện, hoàn thành đồ án Em xin cám ơn Thầy, Cơ phịng thí nghiệm bạn bè quan tâm, giúp đỡ tạo điều kiện cho em hoàn thành đồ án tốt nghiệp Cuối cùng, em xin cảm ơn Thầy, Cô Hội Đồng Phản Biện dành thời gian đọc nhận xét đồ án Em xin gửi đến quý Thầy, Cô lời chúc sức khỏe TP HCM, ngày 12 tháng năm 2016 Sinh viên thực Lê Ngô Vũ Phượng ii Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC TRANG DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH ix MỞ ĐẦU CHƢƠNG I: TÔNG QUAN 1.1 Tổng quan nấm: 1.1.1 Giới thiệu chung 1.1.2 Độc tố nấm tiết .4 1.1.3 Tác hại nấm 1.1.3.1 Tác hại nấm gây cho người động vật 1.1.3.2 Tác hại nấm gây cho thực vật 1.1.4 Một số chủng nấm gây hại thực phẩm 1.2 Tổng quan hợp chất kháng nấm: 1.2.1 Hợp chất kháng nấm hóa học 10 1.2.2 Tác hại hợp chất kháng nấm hóa học .10 1.2.3 Hợp chất kháng nấm sinh học 13 1.2.3.1 Hợp chất kháng nấm từ thực vật: 13 1.2.3.2 Hợp chất kháng nấm từ vi khuẩn: 17 a Khả kháng nấm mốc Bacillus spp 17 b Khả kháng nấm mốc Lactobacillus spp 19 1.3 Các phương pháp sàng lọc chủngVSV kháng nấm mốc: 21 1.3.1 Phương pháp đối kháng trực tiếp (cấy đường vi khuẩn) 21 1.3.2 Phương pháp đối kháng trực tiếp (đặt thạch khuếch tán) 23 1.3.3 Phương pháp đối kháng che phủ (đổ dĩa lớp): 25 iii Đồ án tốt nghiệp CHƢƠNG II: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Địa điểm nghiên cứu: 26 2.2 Thời gian nghiên cứu: 26 2.3 Vật liệu nghiên cứu: 26 2.3.1 Giống vi sinh vật: 26 2.3.1 Hóa chất mơi trường sử dụng 26 2.3.1.1 Hóa chất: 26 2.3.1.2 Môi trường nuôi cấy: 26 2.4 Thiết bị dụng cụ: 27 2.4.1 Thiết bị: 27 2.4.2 Dụng cụ: 28 2.5 Phương pháp luận: 28 2.6 Phương pháp nghiên cứu: 29 2.6.1 Sơ đồ nghiên cứu 29 2.6.2 Khảo sát tăng trường nấm mốc: 30 2.6.3 Thí nghiệm khảo sát khả đối kháng trực phương pháp ria đường vi khuẩn chủng VK Bacillus spp Lactobacillus spp với nấm mốc: 30 2.6.4 Thí nghiệm khảo sát khả đối kháng trực phương pháp đặt thạch khuếch tán chủng VK Bacillus spp.và Lactobacillus spp.với nấm mốc: 35 2.6.5 Thí nghiệm khảo sát khả đối kháng che phủ theo phương pháp đỗ dĩa lớp chủng vi khuẩn Bacillus spp Lactobacillus spp với nấm mốc: 39 2.6.6 Một số phương pháp khảo sát hình thái, đặc điểm sinh lý, sinh hóa số chủng vi khuẩn 43 2.6.6.1 Nhuộm gram 43 2.6.6.2 Nhuộm bào tử 44 2.6.6.3 Một số thử nghiệm sinh hóa: 44 iv Đồ án tốt nghiệp CHƢƠNG III: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 45 3.1 Định danh sơ khảo sát sinh lý - sinh hóa số chủng vi khuẩn 45 3.1.1 Nhuộm Gram: 45 3.1.2 Nhuộm bào tử: 46 3.1.3 Một số thử nghiệm sinh hóa: 47 3.2 Khảo sát tăng trưởng nấm mốc: 48 3.3 Khảo sát khả đối kháng trực phương pháp ria đường vi khuẩn chủng VK Bacillus spp Lactobacillus spp với chủng nấm mốc: 50 3.4 Thí nghiệm khảo sát khả đối kháng trực phương pháp đặt thạch khuếch tán chủng VK Bacillus spp Lactobacillus spp với chủng nấm mốc: 66 3.5 Thí nghiệm khảo sát khả đối kháng che phủ thep phương pháp đỗ dĩa lớp chủng VK Bacillus spp Lactobacillus spp với chủng nấm mốc 81 3.6 So sánh khả đối kháng nấm mốc 20 chủng vi khuẩn thông qua cách chấm điểm LSD (Sai số khác biệt nhỏ nhất) 90 KẾT QUẢ VÀ KIẾN NGHỊ 94 TÀI LIỆU THAM KHẢO 96 PHỤ LỤC v Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT LAB Lactobacillus spp NA Nutrient Agar NB Nutrient Broth MT Môi trường PDA Potato dextrose agar VK Vi khuẩn VSV Vi sinh vật vi Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1.Một số hợp chất kháng nấm hóa học sử dụng để bảo quản hạt giống Bảng 1.2.Một số hợp chất xác định có tiềm kháng nấm mốc nấm men (Corsetti cộng sự, 1998) 18 Bảng 3.1 Đặc điểm hình thái chủng Bacillus spp 45 Bảng 3.2 Một số phản ứng sinh hóa chủng Bacillus spp 47 Bảng 3.3 Thống kê số liệu tỉ lệ ức chế chủng nấm mốc chủng vi khuẩn Bacillus spp theo nhóm với phương pháp cấy đường vi khuẩn 53 Bảng 3.4 So sánh sô liệu tỉ lệ ức chế chủng nấm mốc vi khuẩn Bacillus spp mạnh nhóm theo phương pháp cấy đường vi khuẩn 54 Bảng 3.5 Thống kê số liệu tỉ lệ ức chế chủng nấm mốc vi khuẩn Lactobacillus spp theo nhóm với phương pháp cấy đường vi khuẩn 62 Bảng 3.6 So sánh số liệu tỉ lệ ức chế chủng nấm mốc vi khuẩn Lactobacillus spp mạnh nhóm theo phương pháp cấy đường vi khuẩn 63 Bảng 3.7 Thống kê số liệu vòng ức chế chủng nấm mốccủa chủng vi khuẩn Bacillus spp theo nhóm với phương pháp đặt thạch khuếch tán 68 Bảng 3.8 So sánh sô liệu vòng ức chế chủng nấm mốc vi khuẩn Bacillus spp mạnh nhóm theo phương pháp đặt thạch khuếch tán 69 Bảng 3.9 Thống kê số liệu vòng ức chế chủng nấm mốc vi khuẩn Lactobacillus spp theo nhóm với phương pháp đặt thạch khuếch tán 76 vii Đồ án tốt nghiệp Bảng 3.10.So sánh số liệu vòng ức chế chủng nấm mốc vi khuẩn Lactobacillus spp mạnh nhóm theo phương pháp đặt thạch khuếch tán 77 Bảng 3.11 Thống kê số liệu trung bình ức chế chủng nấm mốc chủng vi khuẩn Bacillus spp theo nhóm với phương pháp đỗ dĩa lớp 84 Bảng 3.12 Sắp xếp sơ liệu trung bình ức chế chủng nấm mốc vi khuẩn Bacillus spp nhóm theo phương pháp đõ dĩa lớp 85 Bảng 3.13 Sắp xếp số liệu trung bình ức chế chủng nấm mốc vi khuẩn Lactobacillus spp theo nhóm với phương pháp đỗ dĩa lớp 89 Bảng 3.14 Sắp xếp sơ liệu trung bình ức chế chủng nấm mốc vi khuẩn Lactobacillus spp nhóm theo phương pháp đỗ dĩa lớp 90 Bảng 3.15 Thống kê điểm chủng vi khuẩn Bacillus spp theo phương pháp dựa theo xếp hạng LSD 91 Bảng 3.16 Thống kê điểm chủng vi khuẩn Lactobacillus spp theo phương pháp dựa theo xếp hạng LSD 92 viii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc hóa học Metalaxyl 10 Hình 1.2 Cấu trúc hóa học Manocozeb 11 Hình 1.3 Cấu trúc hóa học Hexacoconazole 11 Hình 1.4 Cấu trúc hóa học Pyrones 14 Hình 1.5 Cấu trúc hóa học Viridines 15 Hình 1.6 Phương pháp cấy ria đường thể đối kháng vi khuẩn LAB nấm mốc (trích từ Nora Laref, 2013) 20 Hình 1.7 Sơ đồ nghiên cứu khả đối kháng vi khuẩn có lợi theo phương pháp ria đường vi khuẩn 21 Hình 1.8 Phương pháp đặt thạch khuếch tán thể đối kháng vi khuẩn Bacillus spp với Calbicans (trích dẫn Mounyr Balouiri, 2015) 22 Hình 1.9 Sơ đồ nghiên cứu khả đối kháng vi khuẩn có lợi theo phương pháp đặt thạch khuếch tán 23 Hình 1.10 Phương pháp đối kháng che phủ Bacillus spp với loại nấm (trích từ Kumar cộng sự,2009) 24 Hình 1.11 Sơ đồ nghiên cứu khả đối kháng vi khuẩn có lợi theo phương pháp đỗ dĩa .25 Hình 2.1 Sơ đồ tổng quát nghiên cứu khả dối kháng chủng vi khuẩn có lợi nấm mốc 29 Hình 2.2 Sơ đồ chi tiết khảo sát khả đối kháng chủng vi khuẩn với nấm mốc theo phương pháp cấy ria đường 31 ix Đồ án tốt nghiệp Hình 2.3 Mơ tả cách đo đường kính vịng ức chế theo phương pháp ria đường vi khuẩn 35 Hình 2.4 Sơ đồ chi tiết khảo sát khả đối kháng chủng vi khuẩn với nấm mốc theo phương pháp đặt thạch khuếch tán 36 HÌnh 2.5 Cách đặt thạch vi khuẩn phương pháp đặt thạch khuếch tán 37 Hình 2.6 Mơ tả cách đo vịng ức chế vi khuẩn theo phương pháp đặt thạch khuếch tán 38 Hìn h 2.7.Sơ đồ chi tiết khảo sát khả đối kháng chủng vi khuẩn với nấm mốc theo phương pháp đỗ dĩa lớp thạch 40 Hình 3.1 HÌnh thái khuẩn lạc chủng vi khuẩn Bacillus spp 45 HÌnh 3.2 Nhuộm Gram chủng vi khuẩn 46 Hình 3.3 Nhuộm bào tử chủng vi khuẩn 47 Hình 3.4 Sự phát triển nấm mốc sau ngày MT PDA 48 Hình 3.5 Sự phát triển nấm mốc sau ngày MT MRS Cải tiến .49 Hình 3.8 Biểu đồ thể tỉ lệ ức chế nấm mốc nhóm Bacillus spp phân lập tử phụ phế phẩm 55 Hình 3.9 Biểu đồ thể tỉ lệ ức chế nấm mốccủa nhóm Bacillus spp phân lập tử phụ đất 56 Hình 3.10 Biểu đồ thể tỉ lệ ức chế nấm mốc nhóm Bacillus spp phân lập tử nước thải 57 Hình 3.13 Biểu đồ thể tỉ lệ ức chế nấm mốccủa nhóm Lactobacillus sp phân lập tử nem 63 x Đồ án tốt nghiệp Hình 3.14 Biểu đồ thể tỉ lệ ức chế nấm mốc nhóm Lactobacillus sp phân lập tử cơm mẻ 64 Hình 3.18 Biểu đồ thể vịng ức chế nấm mốc nhóm Bacillus spp phân lập tử phụ phế phẩm 70 Hình 3.19 Biểu đồ thể vịng ức chế nấm mốc nhóm Bacillus 66spp phân lập tử đất 71 Hình 3.20 Biểu đồ thể vịng ức chế nấmmốccủa nhóm Bacillus spp phân lập tử nước thải 72 Hình 3.24 Biểu đồ thể vòng ức chế nấm mốc nhóm Lactobacillus sp phân lập tử nem 78 Hình 3.25 Biểu đồ thể vịng ức chế nấm mốc nhóm Lactobacillus sp phân lập tử cơm mẻ 79 xi MỞ ĐẦU Đặt vấn đề: Hiện nay, giới nước ta nghiên cứu phương pháp đối kháng lại loại nấm mốc khác đối kháng nấm có lợi với nấm mốc hay đối kháng vi sinh vật có lợi với nấm mốc Độc tố loại vi nấm có nhiều loại aflatoxin, ocharatoxin, tricothecenes, zearalenone… Các loại độc tố nguy hiểm, thường gây nhiễm nông sản, gây độc cho người gia súc gây tổn thương gan (ung thư gan…), gây quái thai, gây đột biến bị nhiễm hàm lượng cao gây chết người Trong đó, thuốc trừ nấm mốc hóa học lại gây nhiều tác dụng phụ ảnh hường đến đời sống người động vật Vì vậy, nước ta có nhiều cơng trình nghiên cứu khả đối kháng lại nấm mốc gây hại nơng sản thực phẩm loại nấm có lợi khác Trichoderma spp…và sử dụng thuốc bảo vệ thực vật hóa học Nhưng việc sử dụng vi sinh vật có lợi để đối kháng lại loại nấm mốc gây hại chưa áp dụng rộng rãi phịng thí nghiệm Từ vấn đề trên, để phân lập chủng vi sinh vật có khả kháng nấm mốc in vitro có nhiều đề tài phương pháp kháng nấm mốc khác chưa có so sánh phương pháp với Từ đó, em thực nhiều phương pháp kháng nấm mốc khác so sánh chúng sau đó, tìm phương pháp thích hợp hiệu với phịng thí nghiệm trường Chính vậy, em xin thực đề tài “Thử nghiệm phƣơng pháp đánh giá khả đối kháng chủng vi khuẩn Bacillus spp Lactobacillus spp số nấm mốc Aspergillus spp sinh aflatoxin” Tình hình nghiên cứu: Có nhiều cơng trình nghiên cứu ứng dụng vi sinh vật để kháng nấm mốc gây hại nông sản thực phẩm theo nhiều phương pháp khác  Trong nước có nhiều cơng trình nghiên cứu dùng vi sinh vật để kháng lại nấm mốc theo phương pháp đối kháng trực tiếp (Magaldi,2004) như: “ Phân lập tuyển chọn vi khuẩn Bacillus spp ứng dụng bảo quản nông sản” (Văn Hương, 2015), đồ án tốt nghiệp “Khảo sát khả kháng nấm nhiễm thực phẩm Aspergillus Niger Mucor sp Của vi khuẩn Lactobacillus L5”(Phan Nguyễn Hương Thảo, 2015)…  Ngồi nước có cơng trình nghiên cứu hoạt động kháng nấm vi khuẩn lactic phân lập từ Kim Chi để kháng lại Aspergillus fumigatus Jeong75, Hàn Quốc theo phương pháp đối kháng che phủ (Magnusson Schnurer,2001) Mục đích nghiên cứu: Tuyển chọn chủng vi khuẩn có khả kháng nấm mốc cao hiệu từ sưu tập chủng vi khuẩn Bacillus spp Lactobacillus spp phịng thí nghiệm Cơng Nghệ Sinh Học- Thực Phẩm- Môi Trường trường Mục tiêu nghiên cứu: Tìm phương pháp đánh giá khả đối kháng vi nấm hiệu dễ thực áp dụng sưu tập chủng vi khuẩn Bacillus spp Lactobacillus spp phịng thí nghiệm khoa Công Nghệ Sinh Học- Thực Phẩm- Môi Trường Nhiệm vụ nghiên cứu:  Xác định tỉ lệ đối kháng 10 chủng Bacillus spp 10 chủng Lactobacillus spp chủng nấm mốc Aspergillus spp tiềm sinh aflatoxin phân lập từ hạt đậu phông, đậu nành cà phê phương pháp đối kháng trực tiếp (Dual Culture Two Line Culture Method)  Xác định tỉ lệ đối kháng nấm theo phương pháp đặt thạch khuếch tán.(Agar Plug Diffusion Method)  Đánh giá khả đối kháng nấm theo phương pháp đối kháng che phủ (Overlay Method)  Đánh giá tương quan phương pháp, từ đề nghị phương pháp thích hợp cho phịng thí nghiệm Phƣơng pháp nghiên cứu: a Phƣơng pháp luận: Dựa chủng vi khuẩn Bacillus spp Lactobacillus spp phân lập phịng thí nghiệm để thử nghiệm phương pháp đối kháng nấm mơ tả tài liệu.Từ đó, đưa phương pháp thích hợp phịng thí nghiệm để đối kháng lại loại nấm mốc gây hại thực phẩm hạt giống trồng b Phƣơng pháp xử lí số liệu:  Sử dụng phần mềm Excel để vẽ đồ thị  Sử dụng phần mềm SAS 9.1 để xử lí số liệu Kết đạt đƣợc từ đề tài:  Tuyển chọn chủng vi khuẩn Bacillusspp.và vi khuẩn Lactobacillus spp có hoạt tính kháng nấm tốt sưu tập phịng thí nghiệm  Đánh giá tỉ lệ ức chế loại vi nấm chủng vi khuẩn thông qua phương pháp kháng nấm trực phương pháp cấy đường vi khuẩn (Dual Culture Two Line Culture Method)  Xác định đường kính ức chế loại nấm mốc chủng vi khuẩn qua phương pháp đối kháng trực cách đặt thạch khuếch tán (Agar Plug Diffusion Method)  Đánh giá khả ức chế loại nấm mốc chủng vi khuẩn qua phương pháp đối kháng che phủ (Overlay Method)  Đã chọn phương pháp cho kết ổn định phịng thí nghiệm Kết cấu đồ án:  Mở đầu  Chương 1: Tổng quan tài liệu- Nội dung chương đề cập đến nội dung liên quan đến tài liệu nghiên cứu  Chương 2: Vật liệu phương pháp nghiên cứu – Nội dung chương đề cập đến dụng cụ, thiết bị phương pháp nghiên cứu đồ án  Chương 3: Kết thảo luận – Nội dung chương đưa kết mà đề tài thực đưa thảo luận, biện chứng kết thu  Kết luận kiến nghị- Nội dung tóm lại kết mà đề tài đạt kiến nghị cho hướng cần cải tiến thêm đề tài Chƣơng I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan nấm: 1.1.1 Giới thiệu chung nấm:  Nấm học (Mycology) nhà khoa học người Ý Pier Antonio Micheli (1729) nghiên cứu qua tài liệu “Giống lạ” (Nova Plantarum Genera) theo giáo sư Ekriksson Gunnan (1978) người có cơng nghiên cứu sâu nấm mốc lại Elias Fries (17941874).Những đại diện tiêu biểu nấm nấm mốc, nấm men nấm lớn (nấm thể) Phần lớn loài nấm không quan sát mắt thường Đa phần chúng sống đất, chất mùn, xác vi sinh vật, cộng sinh hay kí sinh thể động vật, thực vật hay nấm khác Vi nấm có vai trị quan trọng hệ sinh thái, chúng phân hủy chất hữu thiếu q trình chuyển hóa trao đổi chất  Nấm mốc (hay gọi vi nấm) vi sinh vật chân hạch, thể tản, tế bào khơng có diệp lục tố, thường sinh sản thơng qua bào tử sống dị dưỡng (hoại sinh, kí sinh, cộng sinh),q trình sinh sản vơ tính nhay hữu tính.Vách tế bào chủ yếu chitin, có khơng có cenllulose số thành phần khác có hàm lượng thấp Nấm mốc thường thường phát triển dạng sợi đa bào gọi sợi nấm (hyphae) tạo hệ sợi (mycelium) Có loại sợi:  Sợi nấm dinh dưỡng: nằm lớp môi trường, làm nhiệm vụ hấp thu chất dinh dưỡng cho toàn hệ nấm  Sợi nấm khí sinh: thường nhơ mơi trường, giữ vai trò sinh sản (tạo bào tử) 1.1.2 Độc tố nấm tiết ra:  Theo Nguyễn Duy Tường (2009), độc tố nấm mốc (mycotoxin) nhóm hợp chất có cấu trúc đa dạng, có khối lượng phân tử nhỏ, tạo trao đổi thứ cấp nấm mốc gây độc động vật có vú, gia cầm người  Hiện nay, có khoảng 300 lồi độc tố phát nghiên cứu Tuy nhiên, có khoảng 20 loài độc tố gây hại lên thực phẩm mức độ nghiêm trọng liên quan đến an toàn thực phẩm Được tạo từ chi nấm: Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Alternaria, Clavicep, chúng bao gồm:  Các độc tố Aspergillus: Aflatoxin (B1, B2, M1, M2 G1, G2), Ochratoxin A, Stermatocystin, Axit Cyclopianxoic  Các độc tố Penicillium: Pautulin, Ochratoxin A, Citrinin, Penitrem A, Fumonisin, Moniliformin…  Các độc tố Fusarium: Deoxynivalenon, Nivalenon, Zearalenon, T-2 toxin  Các độc tố Alternaria: Axit Tenuazoic, Alternarion, Methyl Ether Alternarion  Các độc tố Clavicep: alkaloid nấm cựa gà  Trong đó, nấm gây độc chủ yếu nguy hại Aflatoxin Chúng độc tố vi nấm nấm mốc Aspergillus flavus, A.parasiticus sản sinh ra, thường gây độc tố ô nhiễm lên loại đậu (như đậu phộng) Phản ứng gây độc chủ yếu chúng gan Nếu mức độ gây nhiễm thấp tích lũy dần gan làm giảm khả sinh sản động vật lâu dài gây bệnh ung thư  Ngồi ra, cịn có số độc tố vi nấm thường gặp Ochratoxin Penicillium Aspergillus tiết Độc tố Zearalenon Tricothecenes chủ yếu nấm Fusarium tiết ra, độc tố Patulin lại nấm Penicillium Fumonisin tiết 1.1.3 Tác hại nấm mốc: 1.1.3.1 Tác hại nấm gây cho người động vật:  Dị ứng ngộ độc ăn hay tiếp xúc với nấm: Có khoảng 70 loài nấm sinh bào tử tác nhân gây dị ứng Chúng nấm mốc nhà hay trời, đa phần nấm sợi thuộc chi Alternaria, Aspergillus, Cladosporium, Helminthosporium, Epicoccum, Penicillium, Fusarium , có vài lồi nấm đơn bào Candida, Rhodotorula, có số loài nấm lớn Agaricus, Coprinus, Fomer, Ganoderma Bào tử nấm gây chứng hen suyễn, viêm mũi dị ứng, bệnh nấm dị ứng phế quản phổi viêm phổi mẫn Ngộ độc ăn phải nấm độc, làm rối loạn tiêu hóa, ảo giác, bào mịn ống tiêu hóa, làm giảm khả đề kháng tiêu hóa chât dinh dưỡng thức ăn, nghiêm trọng dẫn tử vong  Nấm kí sinh thể người gây bệnh trực tiếp: Những lồi gây bệnh cho người thuộc chi như: Aspergillus, Candida, Cryptococcus, Histoplasma Pneumocystic Chúng gây bệnh da người nấm chân, nấm móng, nấm tóc, hắc lào, lang ben, bệnh nguy hiểm gây chết người viêm màng não (nấm Cryptococcus), hay Viêm phổi nấm Pneumocystic carinii 1.1.3.2 Tác hại nấm gây cho thực vật:  Những loài nấm gây bệnh trồng gây thiệt hại lớn cho ngành nơng nghiệp lâm nghiệp Ví dụ nấm đạo ơn (Magnaporthe oryzae) gây bệnh cho lúa Những loài gây bệnh cho thuộc chi Fusarium, Ustilago, Alternaría Cochliobolus Chúng làm thối rễ, tổn thương phận trồng, hoa, quả, làm giảm suất chất lượng sản phẩm nông nghiệp bị ẩm mốc, 1.1.4 Một số chủng nấm gây hại thực phẩm:  Trong hệ vi khuẩn, nấm mốc thiên nhiên (Fungal flora) có chủng giống nấm mốc chiếm ưu gây độc cho thực phẩm Aspergillus, Fusarium Penicillium thường tiết độc tố vi nấm vào thực phẩm vào thời gian trước, sau thu hoạch ngũ cốc, hạt có dầu, đậu đỗ,…  Có tác động gây độc độc tố vi nấm là: độc cấp tính, mãn tính, gây đột biến quái thai Phổ biến độc cấp tính, làm hư gan rối loạn chức hoạt động thận, gây chết trường hợp nặng Các độc tố vi nấm tác động lên hệ thần kinh, nồng độ thấp gây tê liệt động vật nồng độ cao gây tổn thương não chết Nhiều cơng trình thử nghiệm xác định độc tố vi nấm gây ung thư, đặc biệt gan Qua thử nghiệm động vật ni nhà xác định có số độc tố vi nấm gây rối loạn tới chép ADN gây hậu đột biến quái thai 1.2 Tổng quan hợp chất kháng nấm: Hợp chất kháng nấm chất ức chế tăng trưởng nấm có tầm quan trọng việc kiểm soát tác nhân gây bệnh nấm người động vật việc phòng chống nấm mốc thực phẩm vật liệu khác 1.2.1 Hợp chất kháng nấm hóa học:  Các hợp chất kháng nấm hóa học đa số có mặt loại thuốc trừ nấm mốc gây hại cho nông sản Carbendazim, Metalaxyl, Anvil, … ... Bacillus spp. và Lactobacillus spp. với nấm mốc: 35 2.6.5 Thí nghiệm khảo sát khả đối kháng che phủ theo phương pháp đỗ dĩa lớp chủng vi khuẩn Bacillus spp Lactobacillus spp với nấm mốc: ... nghiệm khảo sát khả đối kháng che phủ thep phương pháp đỗ dĩa lớp chủng VK Bacillus spp Lactobacillus spp với chủng nấm mốc 81 3.6 So sánh khả đối kháng nấm mốc 20 chủng vi khuẩn. .. 3.1.3 Một số thử nghiệm sinh hóa: 47 3.2 Khảo sát tăng trưởng nấm mốc: 48 3.3 Khảo sát khả đối kháng trực phương pháp ria đường vi khuẩn chủng VK Bacillus spp Lactobacillus spp với chủng