BÁO CÁO THỰC HÀNH KỸ THUẬT PHÂN TÍCH SINH HỌC

BÀI 2: Khảo sát hoạt tính Enzyme protease trong quả dứa 1.Mục tiêu: -Nghiên cứu và xác định hoạt tính của enzyme protease có trong quả dứa tác động lên protein trong lòng trắng trứng ở hai điều kiện là nhiệt độ phòng và đun cách thủy ( 100 o C) 2.Quy trình thực hiện: -Cắt nhỏ miếng thơm, nghiền trong cối, lọc qua vải, thu 20ml dịch thơm. -Cho vào hai ống nghiệm: + Ống nghiệm 1: 10ml dịch thơm, để nhiệt độ phòng. + Ống nghiệm 2: 10ml dịch thơm, đun cách thủy 100oC trong 10 phút. -Cho vào 1 khối lòng trắng trứng khoảng 3mm đã luộc chín, cho vài giọt toluen, đậy kín, lắc đều. -Quan sát sau 3-7 ngày. -Giải thích kết quả. 3.Hóa chất, dụng cụ, vật liệu đã sử dụng: -Quả dứa -Quả trứng gà -Dao, thớt -Cối, chày sứ -Vải lọc -Ống nghiệm -Pipette 10ml -Bóp cao su -Bút dạ -Nồi -Bếp đun -Pipette nhỏ giọt -Cốc thủy tinh 50ml -Giá ống nghiệm Giải thích hiện tượng : - Ở nhiệt độ phòng: Enzyme protease từ quả dứa (bromelain) là một loại enzyme có khả năng phân giải protein. Lòng trắng trứng chứa chủ yếu là protein albumin, là các chuỗi axit amin liên kết với nhau bằng các liên kết peptide. Bromelain từ quả dứa cắt các liên kết peptide giữa các axit amin trong chuỗi protein của albumin lòng trắng trứng, dẫn đến việc phân giải protein thành các phân đoạn ngắn hơn (peptide) hoặc axit amin tự do. Khi protein bị phân hủy như vậy, lòng trắng trứng mất cấu trúc ban đầu và chuyển thành dạng lỏng. - Ở nhiệt độ 100 o C: Khi đưa dịch quả thơm đi đun cách thủy (100°C), enzyme từ quả dứa sẽ mất đi hoạt tính. Nên nó không thể cắt các liên kết peptide trong protein của lòng trắng trứng. Vì vậy, lòng trắng trứng không bị phân hủy và giữ nguyên cấu trúc ban đầu. Kết luận: Enzyme protease chỉ có thể hoạt động trong điều kiện nhiệt độ nhất định thí nghiệm này là nhiệt độ phòng. Khi nhiệt độ quá cao (như ở 100°C khi đun cách thủy), enzyme bị biến tính và không thể thực hiện chức năng của mình. Điều này cho thấy tính chất đặc trưng của protein và enzyme, phụ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP TP HỒ CHÍ MINH VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC & THỰC PHẨM

🙣🙣🙣 BÁO CÁO THỰC HÀNH

KỸ THUẬT PHÂN TÍCH SINH HỌC

GVHD: Đào Quốc Hưng Lớp: DHSH17A

BÀI 1: TẠO SƠ ĐỒ CÂY BẰNG PHẦN MỀM NTSYSPC 2.1Bước 1: Tạo File dữ liệu Excel

Bước 2: Tải ứng dụng NTSYSpc 2.1 về máy tính

Bước 3: Chọn Similarity → Qualitative data → Input file → File dữ liệu Excel →

Output file → File name → Save → Compute

Bước 4: Sau khi nhấp chuột vào nút Compute → xuất hiện cửa sổ Report listing →

File → Load notebook và chọn File dữ liệu ở bước 2

Bước 5: Clustering → SAHN → Input file → File dữ liệu ở bước 2; Output file →

File name → Save → Compute

BÀI 2: Khảo sát hoạt tính Enzyme protease trong quả dứa

- Cắt nhỏ miếng thơm, nghiền trong cối, lọc qua vải, thu 20ml dịch thơm.

- Cho vào hai ống nghiệm:

+ Ống nghiệm 1: 10ml dịch thơm, để nhiệt độ phòng.

+ Ống nghiệm 2: 10ml dịch thơm, đun cách thủy 100oC trong 10 phút.

- Cho vào 1 khối lòng trắng trứng khoảng 3mm đã luộc chín, cho vài giọt toluen, đậy kín, lắc đều.

- Quan sát sau 3-7 ngày.

4 Kết quả, hình ảnh

Giải thích hiện tượng :

- Ở nhiệt độ phòng: Enzyme protease từ quả dứa (bromelain) là một loại enzyme có khảnăng phân giải protein Lòng trắng trứng chứa chủ yếu là protein albumin, là các chuỗi axitamin liên kết với nhau bằng các liên kết peptide Bromelain từ quả dứa cắt các liên kếtpeptide giữa các axit amin trong chuỗi protein của albumin lòng trắng trứng, dẫn đến việcphân giải protein thành các phân đoạn ngắn hơn (peptide) hoặc axit amin tự do Khi protein

bị phân hủy như vậy, lòng trắng trứng mất cấu trúc ban đầu và chuyển thành dạng lỏng

- Ở nhiệt độ 100 o C: Khi đưa dịch quả thơm đi đun cách thủy (100°C),enzyme từ quả dứa sẽ mất đi hoạt tính Nên nó không thể cắt các liên kết peptide trongprotein của lòng trắng trứng Vì vậy, lòng trắng trứng không bị phân hủy và giữ nguyên cấutrúc ban đầu

Kết luận: Enzyme protease chỉ có thể hoạt động trong điều kiện nhiệt độ nhất định thí

nghiệm này là nhiệt độ phòng Khi nhiệt độ quá cao (như ở 100°C khi đun cách thủy),enzyme bị biến tính và không thể thực hiện chức năng của mình Điều này cho thấy tínhchất đặc trưng của protein và enzyme, phụ thuộc rất nhiều vào nhiệt độ môi trường

Hình 1 100 o C Hình 2 Nhiệt độ phòng

Bài 3: Xác định hàm lượng polysaccharide trong nấm Linh Chi

1 Mục tiêu

Xác định hàm lượng polysaccharide tổng có trong mẫu nấm linh chi bằng phương pháp đo quang

2 Quy trình thực hiện

- Chuẩn bị mẫu: chuẩn bị nấm linh chi khô, đã nghiền mịn.

- Đo độ ẩm mẫu đã nghiền: Lấy 1g mẫu đo độ ẩm.

- Chiết polysaccharide: cho 0,5g mẫu Linh chi vào bình erlen 100ml, thêm 80ml nước cất và

 Lên màu và đo quang:

- Tính hàm lượng polysaccharide tổng (mg D-glucose/1g mẫu khô):

=c x × Vⅆm

103 ×a × (100−W100 mẫu)× K+ Cx: nồng độ D-glucose đo được (µg/ml)

(µg/ml)

Độ hấp phụ quang (A)

Ghi chú

f(x) = 0.0376057142857143 x − 0.0284761904761904 R² = 0.990974006213004

Đường chuẩn D- glucose

Nồng độ D – glucose trong dịch đo ở cuvette của mẫu phân tích:

2.2 Pha dãy nồng độ chất chuẩn:

a, Chuẩn bị 100ml chất chuẩn caffein 100ppm:

Hình 1: Lọc dung môi Hình 2: Siêu âm chất chuẩn caffeine

Chuyển sangbình định mức100ml

Thêm nước cấtđến vạch

phút

b, Pha dãy nồng độ chất chuẩn caffein: 0, 5, 10, 35, 50, 100ppm

Hình 3: Chuẩn bị dãy nồng độ chất chuẩn caffeine

Hình 4: Siêu âm bình định mức 10 phút trong 300 C

- Cho vào vial: chuyển chất chuẩn ra cốc thủy tinh, dùng kim tiêm hút khoảng 3ml, loại bỏ những giọt đầu tiền, gắn đầu lọc 0.45µm và bơm vào vial khoảng 1.5ml, siêu âm trong 5 phút ở 300 C và có degas

2.3 Chuẩn bị mẫu phân tích:

- Dung dịch mẫu phân tích: nồng độ caffein khoảng 1000ppm

- Pha loãng dung dịch mẫu phân tích sao cho nồng độ nằm khoảng 5 – 100ppm, siêu âm trong 10 phút ở 300 C và có desga

Bài 5: Ảnh hưởng của pH lên hoạt động của enzyme

1 Mục tiêu:

Xác định ảnh hưởng của pH lên hoạt động của enzyme

2 Quy trình thực hiện:

Falcon 31cm 3 dứa +2ml giấm

Falcon 41cm 3 dứa +0,2g baking

so da

Falcon 21cm 3 dứa

Falcon 1

Không mẫu

4 ống falcon (45ml gelatin mỗiống) – đánh số 1, 2, 3, 44g gelatin + 200ml nước ấm

Quan sát và giải thích

Để tủ lạnh 10 – 15 phút (thêm 1falcon tạo gel mới)

Để nhiệt độ phòng 5 – 10 phút

Hình 1: Mẫu phân tích đã chuẩn bị

3 Hóa chất, dụng cụ, thiết bị

- Nguyên liệu: 1 quả dứa

- Hóa chất: 4g bột gelatin, 1g baking soda, giấm, nước cất, falcon

- Thiết bị: tủ lạnh

4 Kết quả

Biện luận kết quả:

Sau 1 tuần nhóm quan sát thấy được 4 ống có các hiện tượng khác nhau:

- Ống 1 (Gelatin pha nước ấm + Nước): Do không có trái dứa nên không có enzyme bromelain.Gelatin sẽ đông đặc vì không có yếu tố nào phá hủy protein trong gelatin → Kết quả: Gelatinđông đặc

- Ống 2 (Gelatin pha nước ấm + Dứa cắt 1 cm): Enzyme bromelain trong dứa sẽ tác động lêngelatin, phá vỡ cấu trúc protein và ngăn không cho nó đông →Kết quả: Gelatin hơi sệt, lỏnghơn nhiều so với ống 1

- Ống 3 (Gelatin pha nước ấm + Dứa cắt 1 cm + 2ml Giấm): Giấm có tính axit sẽ làm giảm hoạtđộng của enzyme bromelain, nhưng không hoàn toàn Nên bromelain vẫn có thể phân giải mộtphần gelatin nhưng ở mức độ nhẹ hơn so với ống 2→Kết quả: Gelatin hơi sệt nhưng khôngbằng ống 2

- Ống 4 (Gelatin pha nước ấm + Dứa cắt 1 cm + 0,2g Baking soda): Baking soda có tính kiềm,

có khả năng làm tăng hoạt động của enzyme bromelain, khiến quá trình phân giải gelatin diễn

ra mạnh hơn Nên enzyme bromelain sẽ phá hủy nhiều protein trong gelatin nhất so với 4 ống

→Kết quả: Gelatin rất lỏng, khó đông

Kết luận: Do tác dụng của các chất như giấm và baking soda lên quá trình đông tụ gelatin Gelatin

là một loại protein và bromelain là enzyme có khả năng phân giải protein Khi bromelain gặpgelatin, nó sẽ phá vỡ cấu trúc protein, làm cho gelatin khó đông hoặc không đông được

Bước 1: Tạo Folder có chứa dữ liệu cần được xử lý

Bước 2: Mở phần mềm LABSOLUTION chọn Postrun Chọn File cần xử lý

dữ liệu

Bước 3: Chọn Wizard

Click Program → thực hiện cắt peak và giữ peak dung môi → chọn OK → chọn Next

Tích vào ô Select → chọn Next

Điều chỉnh số điểm chỉnh muốn chỉnh sửa → chọn Next

Đặt tên peak → chon Finish

Method File

Fill down để áp dụng với cái hàng phía dưới

Sample Type  icon mũi tên của hàng đầu tiên  icon đầu tiên trong cửa sổ  OKSample Type  icon mũi tên của hàng tiếp theo  icon thứ 2 trong cửa sổ  OKFill down để áp dụng với cái hàng phía dưới

Nhấn Save  Start Postrun Batch  Ok

Tab All file

Chọn file đã save ở apply to method để hiện đường chuẩnXuất file dưới dạng PDF

Bước 5: Kết quả

Ngưng tụ: Hỗn hợp hơi nước và tinh dầu đi qua hệ thống làm lạnh bằng một ống có nước chạy qualiên tục để làm Tại đây, hỗn hợp sẽ ngưng tụ thành chất lỏng, gồm cả nước và tinh dầu.

Tách tinh dầu: Do tinh dầu và nước không hòa tan và có khối lượng riêng khác nhau, tinh dầu sả sẽnổi lên trên Phần này sẽ được thu thập riêng qua bộ phận tách dầu, tạo ra tinh dầu

Tiến hànhchưng cất 2-3giờThu tinh dầu

Lắp ráp bìnhchưng cất tinhdầu

Hình 2: Bộ chưng cất tinh dầu

Hình 3: Quá trình chưng cất Hình 4: Hệ thống chưng cất tinh dầu

Hình 5: Kết quả tinh dầu đã thu được

Kết quả: Thu được 0.7ml tinh dầu sả sau 50 phút thực hiện chưng cất

5 Tính hàm lượng tinh dầu có trong mẫu ban đầu

X=V ×100

m =

0.7 ×100

200 = 0.35Trong đó: V là thể tích tinh dầu sả (ml)

m là khối lương sả ban đầu (g)

 Hàm lượng tinh dầu sả trong 200g mẫu ban đầu sau 50 phút chưng cất thu được 0.35% tinh dầu

2 Pha dãy nồng độ chất chuẩn

2.1 Chuẩn bị dung môi

Chuẩn bị nước khủe deion và methanol

2.2 Chuẩn bị 100ml chất chuẩn caffein 100ppm:

2.2 Chuẩn bị mẫu phân tích:

- Dung dịch mẫu phân tích: nồng độ caffein khoảng 1000ppm

- Pha loãng dung dịch mẫu phân tích sao cho nồng độ nằm khoảng 5 – 100ppm, siêu âm trong 15 phút ở 300 C và có desga

phút

Nồng đô caffein (ppm) cần pha C2 (ppm) 0 5 10 25 50 100

Kết quả chạy HPLC của nhóm hình thành được peak của caffeine với nồng độ 10ppm