Khóa luận tốt nghiệp Hóa học: Cô lập một số dẫn xuất của Erythritol từ loài địa y roccella sinensis (NYL.) hale thu hái ở Bình Thuận

KHOA LUẬN TOT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUYLỜI MỞ ĐÀU Địa y lả thực vật bậc thấp, là kết quả của sự cộng sinh của tảo vả một thành phan quang hợp thường là tao hay vi khuân lam.. HOẠT TINH

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH

KHOA HÓA

BỘ MÔN HÓA HỮU CƠ

-—-b›»cqL]><s KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP

CÔ LẬP MỘT SÓ DẪN XUÁT CỦA ERYTHRITOL

LỜI CẢM ƠN

Hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này, em xin chân thành cảm ơn:

Cam ơn Thay Dương Thúc Huy đã theo sat, tận tình hướng dẫn, giúp đỡ, cung cap

kiến thức, động viên em trong suốt thời gian thực hiện dé tài khỏa luận tốt nghiệp Được

Thay hướng dẫn là một may mắn lớn của em trong năm học cuối cùng này tại trường Đại

học Sư Phạm Em xin cảm ơn Thây!

Cảm ơn tắt cả qui Thay Cô của khoa Hóa đã tận tinh day dỗ em trong suốt bốn

năm qua dé em có kiến thức hoan thành khóa luận tốt nghiệp của minh.

Cam on bạn tat ca các bạn Nguyễn Chính Nhân, bạn Ngô Thị Hing Phượng, bạn Võ

Quốc Thanh, bạn Tran Thị Thanh Thủy, bạn Vũ Thị Kiểu Trang, bạn Nguyễn Thùy Trang, ban

Lê Thị Thảo Uyén va bạn Huynh Cam Vinh đã giúp đỡ, chia sẽ cùng em những khó khan,

vui buôn trong suốt quá trình thực hiện đề tài.

Cam ơn ba mẹ đã nuôi nắng, dạy dỗ, là chỗ dựa tinh than vững vàng nhất giúp em

vượt qua mọi khó khăn và đã tạo mọi điều kiện tốt nhất để em hoàn thành đẻ tài khóa

luận tốt nghiệp này.

Xin gửi lời chúc tốt đẹp nhất đến mọi người!

L4

NHÀN XÉT CỦA HỘI ĐÔNG

Atte RE EERE EEEEEEEEE RETR EEEEEEEEEEEEEEEEE EER EEEEE EERE EEEEEEESEEEE EEE SEES EE EEEREEEEEE EER EEEEEEREREEE REESE ESTE SEREEEEEHEREE SETHE EERO

Adee REAR ER EEE EEE N OEE EEEREEEEEESES SEES SESSROSSE EES EEN SEES HSER EE 8800018818898 89921 11c c pc | cờ ca 3g FÏcỊỹ.ẹ ợc

——-ˆ _._

FERRE EEE EERE EEE EERE EEE REET EEE EE REET EERE EE EE 19 001611109909010199Ó09Ó1ÓỐ0Ố2Ố2Ố0ỐÔ2Ố01019010Ố2ỐÔ0ỐÔỐ0Ố9ỐỐ 1 113v313013110101361440999910090590904460019090419999919999994090990199099+

AEE EERE EERE EERE EEE EERE EEEE EERE EEE EERE EEE EEEEEEEE SEES EEE EEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEE TEESE ED EEEEEEEOEEEEEEE EEE ESSE EERE REEEE ESSER RES HEE

FEE E EERE EEE EET EEE EE ETE RE EEE EET EERE ET THEE EE TEE REET TESTE TERETE TTT TEEPE TEE HOTT ETT E TET TTT TEESE T TET TOOT T ETHERS Err

HEE ERAEREREER ERNE NE EEEERESEEREREREEEEEEREEEEEREEERUEEE EERE EEREEEERER EEE SEESEEEEEEEEEEEREEEEESEEE EERE RESO SEE EEREREREEER 69999”.

Ad Re TERN TERETE OPER ESHER EEE ERE ESTEE EEEETEEEEEEETESESESTEEEEEETEEESESSESESEETESEEEESESESEEESEESEETERERTEESTEEESEEEEEEEEES ESSERE EEO EE

T1 EEEEEEEEEE REESE ES EE SEEEEERE SEEDER EEE RECO

Aden REE EERE EERE EEEREEEREEEEREEENIEEE SESE EEEEOESEEEEESERETEREEEEEEEE ESD EREEEEEEEE EERSTE EEE EEEEEHEEEEESE SEER EEEEEEEEEREEEERSES RENO OD

T1 1 1.11 10//1/.

—<};ŸỹỊ}ƯƯỔƠ 9909060600040 0 0040:4606 6004046090 0 THỊ C19999 ES ESTEE EEE cc7cG 1] Ị H119 099001 1.1331 13.cc.c.c.c.z3ýz4z7/)7° PA 1.00990990900999

FALTER RETR TEER EEEEETREEEE EET REE EERE EE EEEEEEEESES ESET Ố001Ô1Ó90900900900090000Ố2Ố0ỐÔ0Ô9Ô190909090904100909000 2l 19199441309194911994909044019400999949940991%901019909'9*

AEE eRe E EERE REE E EERE EEE EERE EE TEER DEERE EE EEEEE EEE EE EEESEOEEEEEEEEEEEEEEEEEEOEE EEE EEESE SEER EEE EEEEEHE EEE EEEEEEE EEE EEE SESE EEE EE EH

SHEER EE RR RE EE EEEE EEE EE SERRE EEE EERE ERSTE EEEEEEEE EEE EREEEEEREEEEEEEE ESTEE EERE EEEEEEEEEREEEEEEEEEEEE REESE EEEEEEEEEEEE TEETER EEE EE EEE

KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

MỤC LỤC

LOT MỞ ĐÀU TH ng HH 1111111011101 0111111 110111 21 1 1121111111 11150 1512 1 1 9

CHƯNG 15 “BEING: CHUAN tác cccitc:ciccsicuiittacaexatddgadaai 10

Bs KRKHATQUẤT VỀ BH 6 aici cession at 6i664666i8Gkã-st82002i86aaxg4 10

Leh: 0nb SN Wk CIN: Nene Á cc scobnccicwsacyitatetshashsepstcmcschion sh iewinanetveanron ds ieniccsonmtateansh 10

1.1.2 Vai trò của các hợp chất tự nhiên trong địa y Í* 222 22222222 23 22 ccczzcczzccz 10

118 8 tr ng DI l cuiineedeaieenieeaeeeaeeeseseseeo II

1.2 HOẠT TINH CUA CÁC HOP CHAT TỪ BIA Y 2-5 St S223 32 3e, H

1.3 NGHIÊN CU'U HOA HỌC VE CÁC HỢP CHAT CÓ TRONG DIA Y 14

1.4 MÔ TA DIA Y ROCCELLA SINENSIS (NYL.) HALE

«e8 127 LH 1S

1.5 MOT SO HOP CHAT HUU CO CO TRONG DIA Y THUOC CHI

ROCCELLA DA ĐƯỢC NGHIÊN CUU .00 sccsssesssesssoessnesssseessnneessnnensnvessnsensnneeneess 16

14:1: Choc Cho cieereicsreenia nae aii nine iam eer, 16

1:5:2:Các Mappa leh carbolay threat ssc vi SEIS 16

1.5.3 Các hợp chất chromanes và chromones - s2 2552 3 1072372122252 110 l6

1-5.4 Các hợp chất dibeswmofirramess c iia<isiassissssssiissiusssasaccnsoossisstoossconsesenssisssansdecsesosnies l6

13: G6: Teas CUS carne nen nà cecu 6n: 20850028409 E6202 658608 17

1.5.7 Các hợp chat aliphatic và cyclo aliphatic - 5-55 12111211111, 17

1.5.8 Cac hợp chất chứa nitrogen: cs.ecseesscsersesssesseecoeeesesesenssvesconeeconensusenneesoeennenens 17

PHƯƠNG 2 THỰC NPRM scsceetiassccsectcalsintcc CCGGGGCGG.0GAtoiZacuoi 20

SVTH: NGUYEN THỊ NHUNG 4

KHOA LUẬN TOT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

3,11 HỒN GỖ (oi tuscccGieccboEnasiclioGaiadbkiaGAA160i1À8066426ãLes635i403:863866030,c114 20

Sy | ee ee eT 20

325 WAG SAT NGUYEN TB acs eneeeeieiasaaaeneaseeennueees=eeee 20

2.3 CO LAP CÁC HOP CHAT HỮU CO TRONG CAO ETHYL ACETATE 212.3.1 Sắc ki cột cho cao chiết ethyl acetate .ccsscsescssecsseesssessecsssesescesssssesessseecssesenees 21

2.3.2 Điều chế các cao ethyl acetate từ A2 cccsscsssesssecsneessvessveesversveesosersvesseeseversssneseare 21

2.3.3 Sắc kí cột silica gel áp dụng cho phân đoạn A2.2 -.2-255- 555222 22 2.3.4 Sắc kí cột silica gel áp dụng cho phân đoạn A.2.2.2 -. 5-e- 23

3.1 KHẢO SÁT CÁU TRÚC HOA HỌC CUA HOP CHAT N.I.T - 26

3.2 KHAO SÁT CÁU TRÚC HÓA HỌC CUA HỢP CHAT RS-C17e 32

CHƯƠNG 4: KET LUẬN VÀ DE XUÁT, ¿-22+5222S+cE+v2g2222eecrrrsrrie 38

á;T-KẾT TIẾN ‹¡:catttctoi401iáistcooi10G2102G210/0i0CG208l01000220664052000104G65a6008/ 38

ca EU: 1 (|, 5 NIIEN 40

SVTH; NGUYEN TH] NHUNG 5

KHÓA LUAN TÓT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

DANH MỤC HÌNH ẢNH

SVTH: NGUYEN THỊ NHŨNG 6

KHOA LUẬN TOT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

DANH MỤC BANG

SVTH: NGUYÊN THỊ NHUNG 7

KHỎA LUẬN TÓT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

nvz > Mass to charge ratio Transfer

NMR : (Nuclear magnetic resonance)

HSQC : Heteronuelear Single Quantum Correlation

HMBC : Heteronuclear Multiple Bond Coherence

‘H-NMR : Proton Nuclear Magnetic Resonance

"C-NMR : Carbon Nuclear Magnetic Resonance

DEPT : Distortionless Enhancement by Polarization Transfer

KHOA LUẬN TOT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

LỜI MỞ ĐÀU

Địa y lả thực vật bậc thấp, là kết quả của sự cộng sinh của tảo vả một thành

phan quang hợp thường là tao hay vi khuân lam Nhờ dang sóng này, địa y có

thé sống được ở nhiều nơi trên dat, đá, thân cây, trong những điều kiện khác

nghiệt và khô hạn của vùng nhiệt đới Ở Việt Nam, người ta dễ dàng tìm thấy

sự có mặt của địa y ở những nơi quen thuộc với sự phân bố phong phú và đa

dạng.

Ngày nay địa y được sử dụng làm một số loại thuốc dan gian dé chữa một

số bệnh như: long đờm, điều trị bệnh dai tháo đường, bệnh phối, bệnh viêm

mũi

Ngoài công dụng chữa bệnh, địa y còn được sử dung lam thực phẩm, mỹ

phẩm, xả phòng, nước hoa Đặc biệt, địa y được xem như là các chất chỉ thị sinh

học cho ô nhiễm môi trường.

Với những công dụng đó, địa y được nhiều nhà hóa dược nghiên cứu,

nhiều hợp chất tự nhiên được cô lập vả một số được xác định có hoạt tính khángkhuan, kháng ung thư, kháng virut, giảm dau,

Chính vì sự đa dạng về hoạt tính sinh học, nên em chọn loài địa y

Roccella sinensis (NyL) Hale thu hái ở Bình Thuận để nghiên cứu

SVTH: NGUYEN THỊ NHUNG 9

KHÓA LUẬN TOT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

CHƯƠNG 1 TONG QUAN 1.1 KHÁI QUAT VE DIA Y

1.1.1 Định nghĩa và phân loại địa y

Địa y, dạng thực vật bậc thấp đặc biệt, là kết quả cộng sinh của nim

(mycobiont) và một thành phan quang hợp (photobiont) thường là tảo

(greenalga) hay vi khuân lam (cyanobacterium) Khoảng 17.000 loài địa y đã

được biết Địa y thường được chia làm ba dang chính: dang kham (crustose),

Xanthoria sp., Xanthoparmelia cf Dia y sgi

địa y khám trên đá núi lửa lavicola, một địa y phiến, Hypogymnia cf

tai miệng nui lửa ở Idaho, USA trén da bazan tubulosa ở miền núi

Canada.

Hình 1: Ba dạng chính của địa y

Thanh phan tảo của địa y sản sinh các carbohydrate bằng quá trình quang hợp,

còn thanh phan nắm sản sinh các hợp chất tự nhiên (để chống tia UV, ngăn

chặn sâu bọ vả các loài động vật ăn cỏ, ), cung cấp nước và khoáng chất Kết

quả từ sự cộng sinh nay giúp địa y có thé sinh trưởng và sóng sót trong những

điều kiện khắc nghiệt, chủ yếu ở vùng vĩ độ cao, vùng nhiệt đới, và có thể hiện

điện ở khắp mọi nơi như trên đá, đất, lá cây, thân cây, kim loại, thủy tính !*Ỳ

1.1.2 Vai trò của các hợp chất tự nhiên trong địa y ”“

- Bảo vệ đối với cây trông bậc thấp và bậc cao

- Các hợp chat thơm hap thụ tia UV, bảo vệ địa y chông lại bức xạ có hai

- Các carboxylic acid từ địa y là tác chất tạo phức mạnh và giúp cho địa y lấy

được các khoáng chất từ vật chủ nơi địa y bám vao (substrate).

- Giúp xua đuôi thú ăn thịt và côn trùng.

————ễễ

SVTH: NGUYEN THỊ NHUNG 10

KHỎA LUẬN TÓT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

1.1.3 Một số ứng dụng của địa y

Địa y đã được sứ dụng làm thực phẩm, làm phẩm nhuộm, nguyên liệu

Evernia prunastri và Pseudevernia furfuracea (gọi là oakmoss) được khai thác

hang nằm ở Pháp cho ngành công nghiệp nước hoa.!'Ì

Y học cô truyền Trung quốc từng sử dụng 71 loài địa y của 17 chi (9 Họ)

với mục dich làm thuốc chữa bénh.""! Địa y thuộc họ Parmeliaceac, Usneaceae,

Cladionaceae được sử dụng nhiều hơn hết Một vài loại cao điều chế từ địa y

được sử dung dé trị các bệnh khác nhau như Lobaria pulmonaria chữa cácbệnh về phổi Xanthoria parientina chữa bệnh vàng da, chi Usnea để đường tóc

Cetraria islandica (được gọi Ireland moss) chữa nhiễm khuẩn và tiêu chảy l'Ì

1.2 HOẠT TINH CUA CÁC HỢP CHAT TỪ DIA Y

Địa y sản sinh ra một lượng lớn các hợp chất hữu cơ, đa số có hoạt tinh

sinh học vả nhiễu loại trong chúng 1a đặc hiệu của địa y trong hoá học các hợp

chất tự nhiên Tuy vậy, các khảo sat hoá học trên địa y bị hạn chế do nguồn

cung có hạn, vì các địa y phát triển rất chậm Những nghiên cứu gần đây cho

thấy việc nuôi cấy địa y trong phòng thí nghiệm cũng không dé dang, chỉkhoảng 10 % địa y được nuôi cấy thành công, tuy nhiên chúng lại chứa các hợp

chất hữu cơ khác hẳn với các hợp chất có trong cùng loại địa y tự nhién'"!, Lê Hoàng Duy Í°” đã nghiên cứu nuôi cấy thành công 10 % trên khoáng 50 loài địa

y lấy từ Việt Nam Tuy đạt thành công về mặt cô lập hợp chất mới nhưng hau

như các hợp chất cô lập tir địa y nuôi cay đều khác so với các hợp chất địa y tự

nhiên.

Khoảng gan 1.000 hợp chất địa y đã được cô lập cho đến nay Nghiên

cứu về hoạt tính sinh học va khả năng được học của các hợp chat tự nhiên từ

địa y được thống kê đẩy đủ của Boustie (2007) 'Ì, Huneck (1999) '* Muller

(2001) ÍÌ về kháng khuẩn, kháng virus, chống oxy hóa, kháng ung thư, khang

viêm, kháng enzyme

ee

SVTH; NGUYEN THỊ NHUNG H

KHOA LUẬN TOT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

Bảng 1: Hoạt tính điều tiết tăng trưởng đối với thực vật bậc cao!"

Địa y hoặc các hợp chat của địa y

Barbatic acid, 4-O-demethylbarbatic acid, | Uc chế sự tăng trưởng của cây

diffractaic acid, evernic acid, lecanoric acid, | rau diép

f-orcinolcarboxylic acid, orsellinic acid

Ergochrome AA (secalonic acid A) Gây độc cho thực vật

Evemic acid Giảm các nông độ chất diệp lục

trong lá rau bina

Nguyên nhân gây bất thường cho

gốc của cây Allium cepa

Hoạt tính ức chế của độc chất

thực vật

Ức chế sự nguyên phân của rễ

cây Allium cepa

Uc chế sự nay mam va phát triển

của Lepidium sativum Bang 2: Hoạt tính khang ung thư và kháng đột bién của các hợp chat địa

Khang ung thu phéi Lewis, ung thu bach cau P388,

(-)-Usnic acid ức chế phân bào, có hoạt tinh chống lại tế bào sừng

hóa HaCaT

SUẾ — 3 Có hoạt tính chống lại tế bào ung thư bạch cầu

K-Protolichesterinic acid 562 và khối u rắn Ehrlich

KHỎA LUẬN TÓT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

Bảng 3: Hoạt tinh kháng virut của các hợp chat địa y'"!

(+)-Usnic acid và 4 depside khác Virut Epstein-Barr (EBV)

Emodin, 7-Cloroemodin,

7-Cloro-1-O-metylemodin, 5,7- HIV, cytomegalovirus va các virut khác

Dicloroemodin, Hypericin

Bang 4: Hoạt tinh kháng khuân va kháng của các hợp chất địa y

mat [ie

Vi khuân gram (+), Bacteroides spp., Clostridium

perfringens, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus,

Staphylococcus spp., Enterococcus spp., Mycobacterium

aurum

Protolichesterinic acid Helicobacter pylori

Methyl orsellinate, Epidermophyton floccosum, Microsporum canis, gypseum, Trichophyton rubrum, T ng Ban

ap aaa Seti Verticillium achliae, Bacillus subtilis, Staphylococcus

f aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli,

cacniines Candida albicans

sarmentin Staphylococcus aureus, Mycobacterium smegmatitis

1 ˆ-Chloropannarin, : :

=f

Emodin, Physcion Bacillus brevis

sage Ne Drechslera rostrata, Alternaria alternate,

Pulvinic acid va dẫn xuất Vi khuẩn hiếu khí va vi khuẩn ky khí.

— và dẫn Vi khuẩn Gram (+) va gram (-)

SVTH: NGUYEN TH] NHUNG 13

Usnic ots và các dẫn

KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

Bang 5: Các loại enzym bị ức chế bởi các hợp chat của địa y'"

Confluentic acid, 2B-Ø-methylperlatolic acid

4-O-Methyicryptochlorophaeic acid Prostataglandinsynthetase (+)-Protolichesterinic acid 5-Lipoxygenase (Sao chép

Vulpinic acid

Norsolorinic acid

Physodic acid

Monoamino oxidase Arginine decarboxylase Usnic acid

ẫ = E

Omithine decarboxylase

1.3 NGHIÊN CỨU HOA HỌC VE CÁC HỢP CHAT CÓ TRONG BJA Y

thống phân loại được sử dụng nhiều nhất là hệ thống phân loại đo Shibata vảcộng sự đề ra‘),

Các hợp chất hóa học trong địa y được chia làm ba nhóm chính dựa theo

nguồn gốc sinh tông hợp của chúng (hình 2)

® Nguồn gốc shikimic acid: terphenylquinone va dẫn xuất của acid tetronic.

® Nguồn gốc mevalonic acid: terpenoid, steroid.

®Nguồn gốc polyketide: depside, depsidone, quinones, xanthones, chromones,

aliphatic acid

SVTH: NGUYEN THỊ NHUNG l4

KHOA LUẬN TOT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

Hình 2: Sinh tổng hợp của các hợp chat từ địa y'"!

1.4 MÔ TA DJA Y ROCCELLA SINENSIS (NYL.) HALE

KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

Hình 3: Địa y Roccella synensis.

1.5 MỘT SO HỢP CHAT HỮU CƠ CÓ TRONG DIA Y THUỘC CHI

ROCCELLA ĐÃ ĐƯỢC NGHIÊN CỨU.

Năm 1969, C F Culberson!"”! đã cô lập được hợp chất meso-erythitol (3) từ

Roccella phycopis và D-tagatose (4) từ Roccella fuciformis.

Năm 1945, Anker R M và Cook A H !! đã cô lập được ethylorsellinate (5) từ Roccella fuciformis Sau đó hợp chat này cũng được tim rabởi Dyke HJ và cộng sự"”

Năm 1969, C.F Culberson va các cộng sự!'”Ì đã cô lập được

(+)-montagnetol (6) từ Roccella montagnei.

Năm 1992, Huneck SỈ”? đã cô lập được mollin (10) và roccellin (11) tir

Roccellaria mollis, Năm 1992, Huneck S.'"*) đã công bố hợp chất galapagin (12)

từ Roccella galapagoensis FolÌm.

1.5.4 Các hợp chất dibenzofuranes

Năm 1991, Huneck S và cộng sự!''! đã cô lập được 9-methylpannarate (13)

từ Roccella capesis Follm.

SVTH: NGUYEN TH] NHUNG 16

KHÓA LUẬN TOT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

Năm 1993, Huneck S va cộng su!'®! đã tìm thấy 3-O-demethylschizopeltic

acid (14) từ Roccella hypomecha Bory.

1.5.5 Các hợp chat depsides

Năm 1980, Sundholm E G và Huneck S.'"" đã cô lập được erythrin (15) từ

Roccella phycopsis Ach.

1.5.6 Các hợp chất carotenoids

Năm 1988, Czcczuga'” đã cô lập được các -carotene (16) từRoccella fuciformis|"TM'

1.5.7 Các hợp chat aliphatic và cyclo aliphatic

Năm 1970, Ferguson G va Mackey L R.''”) tìm ra acethylportentol

(18) từ Roccella fuciformis cũng trong năm đó Aberhart D J !””Ì đã phan lập

được prortentol (19) từ Roccella galapagones.

1.5.8 Các hợp chất chứa nitrogen:

Năm 1983, Marcuccio S M và Elix J A"! đã cô lập được

picroroccellin (20) từ Roccella fuciformis.

và y-carotene (17) từ Roccella montagnei Bell.

Năm 1972, Bohman-Lindgren G và Ragnarsson U.!Ì tim ra roccanin (21)

tir Roccella canariensis.

1.5.9, Công thức của các hợp chất

SVTH: NGUYEN THỊ NHUNG 17

KHOA LUẬN TOT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM

2.1 HOA CHAT VA THIẾT BỊ

2.1.1 Hóa chit

- Dung môi: chlorofom, methanol, alcol 95°, hexane, ethyl acetate.

- Silica gel: silica gel 60, 0.04 - 0.06 mm, An Độ, dùng cho sắc kí cột

- Silica gel pha đáo, RP - 18, Merck dùng cho sắc kí cột

- Sắc ki ban mỏng loại 25D - Aflufolein 20 x 20, Kiesel gel 60F254, Merck

- Sắc kí ban mỏng loại 25DC, RP — 18, Merck

- Thuốc thử hiện hình sắc ki bản mỏng: H;SO; đặc, phun xịt bằng dung dich

acid sulfuric 30% hoặc vanillin/H;SO; hoặc đèn soi UV.

2.1.2 Thiết bj

- Các thiết bj ding dé giải ly, dung cụ chứa mẫu

- Cột sắc kí: cột cỗ điền

- Máy cô quay chân không Heidolph, máy sấy

- Pho cộng hưởng từ hạt nhân NMR được thực hiện trên máy cộng hưởng

từ hạt nhân BRUKER AC.200, tan số cộng hưởng 500 MHz cho phô 'H

NMR va 125 MHz cho phổ "C-NMR

Tat cả phô được ghi tại:

- Phòng Phân Tích Trung tâm trường Đại học Khoa Học Tự Nhiên thành phố

Hỗ Chi Minh, số 227, Nguyễn Văn Cừ, Quận 5, thành phố Hồ Chí Minh

2.2 KHẢO SÁT NGUYÊN LIỆU

Địa y Roccella sinensis (Nyl.) Hale được thu hái vào tháng 07/2011, trên

than cây chín tang ở chùa Hang, ở độ cao 300 mét so với mực nước biển, huyện

Liên Hương, tỉnh Bình Thuận.

Tên khoa học của địa y được xác định bởi tiến sĩ Harrie J M Sipman,

Khoa Thực vật học, Dai Học Freie, Berlin, Đức

Mẫu ký hiệu US-B028, được lưu trong quyền tiêu bản thực vật, bộ môn

Hóa hữu cơ, khoa Hóa, trường Đại Học Khoa Học Tự Nhiên TP.HCM

_—————PỄỆ

SVTH: NGUYEN THỊ NHUNG 20

KHỎA LUẬN TÓT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

1.3 CÔ LẬP CÁC HỢP CHÁT HỮU CƠ TRONG CAO ETHYL

ACETATE

Từ địa y Roccella sinensis được thu hái ở tinh Bình Thuận, tiến hành quạt

làm khô ở nhiệt độ phòng rồi xay nhỏ thu được 1.7 kg mẫu bột địa y Sau đó tiến hành ngâm dam trích kiệt bằng methanol đối với bột mẫu, lấy địch chiết cô

quay thu héi dung môi đưới áp suất thấp thu được cao methanol thô (400 g) Sử

dụ , giải ly lan lug

môi có độ phân cực tăng dan hexane, choloroform ethyl acetate, methanol! thu

được các cao tương img.

Kẻ thừa những kết quả nghiên cứu vé loài địa y Roccella sinensis của các sinh viên khóa K35 gồm Nguyễn Thị Thuong, Nguyễn Thị Ngọc Nga, Võ Như Nguyện, Bùi Thị Mỹ Lan, Phan Hoài Thu, chúng tdi tiếp tục kháo sắt các cao

chiết còn lại của nhóm sinh viên nảy ma chủ yếu là cao chiết ethy] acetate

2.3.1 Sắc kí cột cho cao chiết ethyl acetate

Sắc kí cột silica gel áp dụng cho cao chiết ethyl acetate, giải ly bằng các

hỗn hợp dung môi có độ phân cực tăng dan Dung dịch giải ly từ cột sắc ki

được hứng vảo các bình tam giác 250 ml Sử dụng sắc kí bản mỏng để kiểm tra

phan cao thu được, những phan giống nhau gom lại, thu hồi dung môi thu được

bón phân đoạn.

Kết quả được 4 phân đoạn từ Al đến A4, các phân đoạn được trình baytrong sơ dé 1

2.3.2, Điêu chế các cao ethyl acetate từ A2

Cao A2 (66g) thực hiện sắc kí cột silica gel, giải ly bằng dung môi

H:EA (5:5) và tăng dan độ phân cực Dịch giải ly từ cột sắc ki được hứng vào

các bình tam giác 250ml Sau đó, ding máy cô quay thu hỏi dung môi, phan

cao thu được đựng vào các hủ bi Dùng sắc kí bản mỏng dé kiểm tra phan cao

thu được, những phân giống nhau gom lại thành một phân đoạn Kết quả được

4 phân đoạn trình bay trong sơ đỗ 2 (bang 6).

SVTH: NGUYÊN THỊ NHUNG 21

KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

Bảng 6: Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn A2

Khối lượng

Sắc kí bảng mỏng

(gam)

Vết không rd

Phân đoạn A2.2 (11g) thực hiện sắc kí cột silica gel, giải ly bằng dung

môi H:EA:AcOH (5:5:0.1) và tăng dan độ phân cực Dịch giải ly từ cột sắc ki

được hứng vào các bình tam giác 250ml Sau đó, dùng máy cô quay thu hỏi

dung môi, phan cao thu được đựng vào các hu bi Dùng sắc kí bản mỏng để

kiểm tra phan cao thu được, những phan giống nhau gom lại thành một phân

đoạn Kết quả được 3 phân đoạn, các phân đoạn được trình bảy trong bảng 7

SVTH: NGUYÊN THỊ NHUNG 22

KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

Bang 7: Sắc kí cột silica gel trên phan đoạn A2.2

H:EA:AcOH (5:5:0.1) | 6.00 | Vết tach rõ

2.3.4 Sắc kí cột silica gel áp dụng cho phân đoạn A.2.2.2

Phân đoạn A2.2.2 (6.00g) thực hiện sắc kí cột silica gel, giải ly bằng

dung môi C:EA:AcOH:Ac (9: I:0.1:1.5)và tăng dan độ phân cực Dịch giải ly từ

cột sắc ki được hứng vảo các hủ bi Sau đỏ, dùng máy cô quay thu hồi dung

môi, phan cao thu được đựng vảo các hủ bi Dùng sắc ki bản mỏng để kiểm tra

phan cao thu được, những phan giống nhau gom lại thành một phân đoạn Kết

quả được 3 phân đoạn, các phân đoạn được trình bày trong bảng 8.

Bảng 8: Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn A.2.2.2 Phân hồi | Sắc kí bản

Dung môi giải ly Móng 5

đoạn (gam)

KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

Sơ đồ 1: Sơ đô điều chế cao từ loại địa y Roccella sinenssis

- Làm sạch, để khô nghiền

- Ngâm dam bằng methanol

~ Thụ hồi dang môi

[Cao methanol thi] | Phằncònii

- Chiết pha ran silica gel

- Giải li bằng các dung môi khác nhau.

KHỎA LUẬN TÓT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

Sơ đồ 2: Sơ đô điều chế và cô lập chất từ các phân đoạn của A2

- Sic kí cột silica gel tir dung môi H:EA (5:5) rồi ting din đến

methanol

Lọc, thu hỏi dung môi.

[ae] [aac] [aac]

- Sac kí cột silica gel Dung mỗi

KHOA LUẬN TOT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

_ CHƯƠNG 3: KET QUA VÀ THẢO LUẬN3.1 KHẢO SÁT CÁU TRÚC HÓA HỌC CUA HỢP CHAT N.1.T

se - Được cỏ lập từ phân đoạn A2.2.2.1

© Trang thai: chat bột, mau tring Tan trong acetone

¢ Phé 'H-NMR (500MHz, acetone-d6) (phụ lục1):Trình bay trong bảng 4.

se - Phổ "C-NMR (125MHz, acetone-¿6)(phụ lục2):Trình bày trong bảng 4

e© Phé HSQC (acetone-46) (phụ lục 3)

¢ Phd HMBC (acetone-¿6) (phụ lục 4): Trinh bày trong bảng 4.

Biện luận cấu trúc:

Phổ 'H-NMR cho thấy có 3 nhóm methy! gắn trên vòng thơm [ô„ 2.54, 3H,s; ôụ 2.49, 3H, s; 5, 2.41, 3H, s], 6 proton vòng thơm lần lượt ghép -mera với

nhau thành 3 cặp [õ„ 6.28, 1H, m; 5, 6.26, 1H, m; 5y 6.24, 1H, m; dy 6.22, 1H,

d, J=2.5; 8, 6.21, 1H, đ, J=2.5; 5y 6.20, 1H, đ, J=2.5], 3 nhóm hydroxy kiềm

nối [5 11.50, 1H, s; 5, 11.47, 1H, s; 54 11.40, 1H, s} Những dữ liệu này chothấy hợp chất N.1.T chứa 3 đơn vị orcinol

Ngoài ra, phô 'H-NMR còn cho thấy có 2 nhóm methylene, dựa vào hằng

số J cho biết: 2 proton không tương đương của nhóm methylene thứ nhất ở

(4.97, dd, J,= 2.5, J;=12.5, H-I`A; 8 4.77, dd, J,=6.5, J;=12.0, H-1 B] ghép cặp

với nhau và 2 proton không tương đương của nhóm methylene thứ hai ở [ 4.64,

m, Jy=5.5, J;=14, H-4°A; 84.52, m, J,=5.5, J;=13.5, H-4 ] ghép cặp với nhau

Thêm nữa, phỏ 'H-NMR còn cho thấy tín hiệu proton H-2' ở [ 5.72 , 1H, đi,J,=6.5, J;= 2.5)] có độ địch chuyển hóa học cao hơn so với tin hiệu protontương ứng ở [ỗ„ 5.67, 1H, m] của hợp chất RS-C17b (bảng 10) Điều đó chứng

SVTH; NGUYEN THỊ NHUNG 26

KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

tỏ C-2' chịu ảnh hưởng rút electron ở vị trí B của | nhóm carboxyl tái khẳng

định vị trí C-2' của N.1.T.

Mặt khác, phô 'H-NMR còn cho thay tín hiệu proton H-4'ớ [4.97, m,

J,=§5.5, J=l4, H-4°A; 84.77, m, J,=6.5, J;=120, H-4'B] có độ dịch chuyển

hóa học cao hon so với tín hiệu proton tương ứng ở (3.79, dd, J;=11.0, J;= 4.5,

H-4°A; 6 3.72, dd, J,=11.0 J;=5.5, H-4'B] của hợp chất RS-C17b (bang 10) Điều đó chứng to C-4" cũng chịu anh hướng rút electron ở vị trí B của 1 nhóm

carboxyl tái khăng định vị trí C-4" của N.1.T

Phé 'H-NMR cũng cho thấy tín hiệu của hai proton không tương đương của nhóm methylene thứ nhất (liên kết với O) [4.97, dd, 1,=2.5, J;=12.5, H-1"A;

4.77, dd, ],=6.5, I,=12.0] ghép cặp với nhóm methine (liên kết với O) (>CH-O-)

ở [5.72 (1H, dt, J,=2.5, J;=6.5] trong hệ thống ABX Hai proton không tương

đương của nhóm methylene thử hai (liên kết với O) [4.64, m, J=5.5, J;=14,

H-4`A; 4.52, m, J,= 5.5, J;=13.S] ghép cập với nhóm methine liên kết với O

(>CH-O-) [ 4.51, IH, m] trong hệ thống ABC.

Dựa vào phổ 'H-NMR, phân tích sự chẻ mũi của proton H-2' cho thấy

proton này ghép cặp với proton H-3" với hằng số ghép J=6.5.Theo tải liệu tham

khảo'*`Ì về cấu hình tương đối của erythitol, từ đó, cấu hinh tương đối của C-2'

vả C-3' được đẻ nghị là erythro

Phé 'ÌC-NMR tái khăng định các carbon đặc trưng của 3 đơn vị orcinol: 3nhóm carboxy! (6 172.4, ô 172.3, § 171.8), 3 nhóm methyl gắn ở vòng thơm (6

24.4, ö 24.5, 8 25.6), 6 carbon vòng thơm gắn O (5 166.5, 5 166.4, ô 166.2, ô

163.9, ö 163.8, ö 163.8), 6 carbon methine vòng thom (6 112.7, 6 112.5, ỗ

112.5, 8 101.7, 8 101.7, 8 101.6 ) và 6 carbon vòng thơm mang nhóm thế khác

KHÓA LUẬN TOT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

(8 112.7, õ 112.5, ô 112.5), 3 proton ở (84 6.22, ỗu 6.21, 5 6.20) tương quan

mốt nối với carbon ở (6 101.7, 8 101.7, 8 101.6) Đồng thời phd HSQC cúng cố

hệ thong ABX (-CH;-CH-) của hai proton ở 5y 4.97, 54 4.77 tương quan một

noi với carbon nhóm methylene ở (ô 64.3), hai proton ở 5y 4.64, ô„ 4.52 tương quan một nỗi với carbon nhóm methylene ở (5 66.7) củng cd hệ thống ABC (-

CH,-CH-), proton ở 5, 4.51 tương quan một nói với carbon nhóm methine ở 5 68.8, proton ở 5, 5.72 tương quan một ndi với carbon nhóm methine ở 873.4.

Phé HMBC xác định cấu trúc của 3 đơn vị orcinol nhờ tương quan của

proton nhóm methyl (H-8) gắn với vòng thơm trên đơn vị orcinol thứ nhất với

C-1, C-5, C-6 vả tương quan của proton nhóm methyl (H-§'`') gắn với vòng

thơm trên đơn vị orcinol thử hai với C-1"', C-5"*, C-6ˆ`, tương quan của proton

nhóm methyl gắn với vòng thơm trên đơn vị oreinol còn lại (H-8'"") với C-1""",

C-5""", C-6"".

Trên phô HMBC, tin hiệu proton ở H-1*, H-2', H-4' cho tương quan với

các carbon 172.4, 172.3, 171.8 Chứng tỏ các vị trí này phải liên kết trực tiếp

với nhóm chức ester.

Khối phỏ, chế độ đương của hợp chất N.1.T cho pic ion giả phân tử tại m/z

$71.1489 [M+H]” tương ứng với công thức phân tử C;yH;;O;; giá trị tính toán

là 571.144899 sai số 4.00°/,, Do đó cấu trúc của hợp chất N.1.T được đề nghị

là 3-hydroxybutane- | ,2,4-triyl tris(2,4-dihydroxyl-6-methylbenzoate).