ĐẶNG HỒNG ANH NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP VÀ TÁC DỤNG GIẢM ĐAU, CHỐNG VIÊM CỦA BÀI THUỐC BẠI ĐỘC TÁN GIA VỊ TRÊN THỰC NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC HÀ NỘI, NĂM 2024... ĐẶNG HỒNG ANH NGHIÊNNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệmNghiên cứu độc tính cấp và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc Bại độc tán gia vị trên thực nghiệm
TỔNG QUAN
Tổng quan về viêm và đau theo y học hiện đại
Viêm là phản ứng của hệ thống miễn dịch đối với các tác nhân gây hại tại mô liên kết, thể hiện qua sự thực bào tại chỗ nhằm loại bỏ tác nhân gây viêm và sửa chữa tổn thương Khi động vật phát triển đến giai đoạn có hệ tuần hoàn, viêm luôn đi kèm với sự thay đổi mạch máu và sự tham gia của thần kinh, giúp đưa các tế bào thực bào từ lòng mạch đến vị trí phản ứng viêm.
Viêm là một phản ứng tự nhiên của cơ thể nhằm bảo vệ chống lại các tác nhân gây bệnh, nhưng đồng thời cũng có thể trở thành phản ứng bệnh lý khi gây ra tổn thương, hoại tử và rối loạn chức năng của các cơ quan, dẫn đến những hậu quả nghiêm trọng.
Viêm có thể do nhiều nguyên nhân khác nhau, bao gồm cả tổn thương và cái chết của tế bào tại chỗ Các nguyên nhân này được chia thành hai nhóm chính: nguyên nhân bên ngoài và nguyên nhân bên trong.
Viêm có thể do nhiều nguyên nhân bên ngoài, trong đó vi khuẩn, virus và ký sinh trùng là những tác nhân phổ biến nhất Bên cạnh đó, các yếu tố gây viêm khác bao gồm tác nhân vật lý như bỏng và chấn thương do vết cắt, hóa chất như thuốc, độc tố và rượu, cùng với các chấn thương cơ học như sây sát.
Nguyên nhân bên trong của hoại tử tổ chức bao gồm sự nghẽn mạch, lấp quản, viêm tắc động mạch, và chảy máu trong lan rộng Ngoài ra, sự lắng đọng các phức hợp miễn dịch có hoạt hóa bổ thể, như phức hợp kháng nguyên - kháng thể, cũng đóng vai trò quan trọng trong các bệnh lý như viêm cầu thận và viêm trong hiện tượng Arthurs.
Viêm có thể được phân loại dựa trên nguyên nhân như nhiễm khuẩn và vô khuẩn, vị trí như viêm nông và viêm sâu, hoặc tính chất như viêm đặc hiệu và không đặc hiệu Tuy nhiên, phân loại chủ yếu hiện nay tập trung vào giai đoạn của viêm, bao gồm viêm cấp tính và viêm mạn tính.
Viêm cấp tính chủ yếu được khởi phát bởi các tế bào miễn dịch như tế bào đuôi gai, đại thực bào, tế bào Kupffer, tế bào mô bào và tế bào Mast, nhờ vào các thụ thể nhận diện mẫu trên bề mặt của chúng Khi được kích hoạt, những tế bào này giải phóng các chất trung gian gây viêm, dẫn đến các dấu hiệu đặc trưng như đỏ da, nóng, sưng và đau Quá trình giãn mạch và tăng tính thấm mạch máu gây ra sự rò rỉ dịch và protein huyết tương vào khoảng gian bào, đồng thời bạch cầu trung tính di chuyển đến vị trí viêm trong mô theo gradient hóa học do các tế bào tại vùng tổn thương tạo ra.
Viêm mạn tính thường phát sinh từ viêm cấp tính khi quá trình giải quyết tình trạng viêm không thành công do các nguyên nhân như tổn thương kéo dài, nhiễm trùng dai dẳng, tiếp xúc lâu với các tác nhân độc hại hoặc các bệnh tự miễn Khi viêm cấp tính không được khắc phục, nó sẽ chuyển sang giai đoạn mạn tính, dẫn đến sự phá hủy mô, xơ hóa và hoại tử Trong quá trình này, các tế bào đơn nhân như tế bào lympho, đại thực bào và tế bào plasma đóng vai trò chủ yếu.
1.1.1.4 Những thay đổi tại tổ chức viêm
Viêm bao gồm ba hiện tượng chính có mối liên hệ chặt chẽ với nhau: tổn thương mô và rối loạn chuyển hóa, rối loạn tuần hoàn và vi tuần hoàn, cùng với sự tăng sinh của các tế bào tổ chức liên kết.
❖ Tổn thương và rối loạn chuyển hóa tại tổ chức viêm
Tổn thương có thể xảy ra ngay lập tức khi các yếu tố bệnh lý tác động lên tổ chức (tổn thương nguyên phát) hoặc phát sinh muộn hơn do rối loạn tuần hoàn và các yếu tố khác (tổn thương thứ phát) Cơ chế tổn thương liên quan đến sự tác động của yếu tố bệnh lý lên các thụ cảm thần kinh tại chỗ, dẫn đến trạng thái cận sinh, tạo điều kiện cho các biến đổi loạn dưỡng và hoại tử Tổn thương chủ yếu ảnh hưởng đến siêu cấu trúc tế bào, đặc biệt là ti lạp thể và lysosome, làm giảm khả năng hấp thụ oxy và hoạt động của các enzym chuyển hóa Hệ quả là quá trình chuyển hóa vật chất như glucid, lipid, và protid bị rối loạn, không hoàn tất bằng bài tiết CO2 và H2O mà dừng lại ở các sản phẩm trung gian, tạo ra một lượng lớn acid hữu cơ như acid lactic, acid pyruvic, acid alpha ketoglutaric, acid malic và polypeptid.
Tổn thương tổ chức và rối loạn chuyển hóa gia tăng khi thiếu oxy do rối loạn tuần hoàn tại tổ chức viêm Sự tổn thương các lysosome và tiêu vật của nguyên sinh chất tế bào dẫn đến việc giải phóng các enzyme thủy phân như hydrolase, cathepsin, và các enzyme tiêu glucid, lipid, protid Các lysosome của bạch cầu trung tính, đại thực bào và tế bào nhu mô trong tổ chức viêm đều có thể bị tổn thương, đóng vai trò quan trọng trong bệnh sinh của viêm.
❖ Rối loạn tuần hoàn và vi tuần hoàn trong tổ chức viêm
Trong quá trình viêm, bên cạnh tổn thương tổ chức và rối loạn chuyển hoá, còn xuất hiện rối loạn tuần hoàn Các hiện tượng này bao gồm rối loạn vận mạch, thoát dịch rỉ viêm, thoát bạch cầu và hiện tượng thực bào.
Rối loạn vận mạch diễn ra qua bốn giai đoạn liên tiếp: co chớp nhoáng các tiểu động mạch, xung huyết động mạch chủ động do tiểu tĩnh mạch và ứ máu, và tắc mạch Giai đoạn đầu tiên, co chớp nhoáng các tiểu động mạch, xảy ra do các yếu tố viêm kích thích thần kinh co mạch và tế bào cơ trơn tại tổ chức viêm Hiện tượng này rất ngắn và khó quan sát, bởi vì tác dụng kích thích nguyên phát diễn ra nhanh chóng, trong khi noradrenalin, một trung gian hoá học của hệ thần kinh giao cảm, bị huỷ bởi monoamin oxidase trong tổ chức viêm Tiếp theo, các tiểu động mạch và mao mạch sẽ xung huyết động mạch theo cơ chế thần kinh thể dịch Thần kinh dãn mạch được kích thích theo phản xạ sợi trục và chịu ảnh hưởng của các sản phẩm sinh vật hoạt tính trong tổ chức viêm như histamin, serotonin, và bradykinin, dẫn đến dãn các tiểu tĩnh mạch và mao mạch tĩnh mạch, tạo ra xung huyết tĩnh mạch thụ động, với tác động mạnh mẽ hơn từ các yếu tố gây viêm.
Sản phẩm có hoạt tính sinh học tích tụ trong tổ chức viêm là nguyên nhân chính gây hủy hoại các sợi liên kết.
Sự phát sinh và phát triển của hiện tượng này phụ thuộc vào nhiều yếu tố, trong đó có sự tê liệt thần kinh - cơ của huyết quản làm mất trương lực thành mạch Độ nhớt của máu tăng lên do nước thấm qua thành mao mạch, khiến bạch cầu dạt vào thành huyết quản, làm chậm dòng chảy của máu Các huyết cầu và tế bào nội mô phình lên gây khó khăn cho việc vận chuyển máu, trong khi nước tràn vào tổ chức khe kẽ gây phù nề, tạo áp lực lên các tiểu tĩnh mạch và cản trở dòng máu Tăng tính đông máu trong tổ chức viêm do tổn thương thành mạch dẫn đến sự ngưng tụ tiểu cầu và giải phóng các yếu tố đông máu, gây cản trở lưu thông bạch mạch do tắc bởi cục fibrin nhỏ Sự ứ máu và tắc mạch xảy ra khi các mạch máu giãn ra, làm dòng máu chảy chậm lại và cuối cùng ứ lại Trước khi tuần hoàn ngừng lại, các mạch máu tại tổ chức viêm có những biến đổi độc đáo trong hướng chảy, với nhịp co bóp của tim Trong thời kỳ tâm thu, sóng mạch chảy qua mao mạch bị giãn, nhưng sau đó áp lực máu giảm nhanh và gặp trở ngại từ dòng máu tĩnh mạch, dẫn đến tình trạng máu bị dồn ngược lại, gây tắc mạch và ảnh hưởng nghiêm trọng đến quá trình chuyển hóa và dinh dưỡng tại tổ chức viêm.
Tổng quan viêm và đau theo y học cổ truyền
1.2.1 Sơ lược quan niệm viêm và đau theo y học cổ truyền
Viêm không phải là một bệnh cụ thể trong YHCT mà là một quá trình bệnh lý chung, thể hiện qua dương chứng (sưng kèm theo nóng đỏ) và âm chứng (sưng không kèm theo nóng đỏ) Tình trạng viêm có thể xuất phát từ nguyên nhân nội nhân, ngoại nhân hoặc bất nội ngoại nhân, và hậu quả chính của viêm là đau Đau là một vấn đề quan trọng trong YHCT, và quan niệm cũng như lý luận về đau đã trải qua nhiều giai đoạn phát triển trong y học cổ truyền.
"Hoàng Đế Nội Kinh" xác định mối liên hệ giữa đau và hệ kinh lạc, coi hàn và nhiệt là nguyên nhân chính, điều trị bằng châm cứu và cứu ngải để điều hòa khí huyết Trong "Thương Hàn Tạp Bệnh Luận", Trương Trọng Cảnh phân loại đau thành ngoại sinh và nội sinh, áp dụng phương pháp biện chứng dựa trên lý - pháp - phương - dược Ông phát triển nền tảng chẩn đoán và điều trị đau theo lục kinh và lý luận "dương hư âm huyền" Các trường phái lý luận sau đó như Lý Đông Viên nhấn mạnh tắc nghẽn kinh lạc gây đau, trong khi Chu Đan Khê phân tích đau liên quan đến khí, huyết, đàm, uất, và đề xuất học thuyết đàm luận trị Trương Giới Tân phát triển học thuyết "bổ hư trị thống", phân loại đau theo bát cương: biểu lý, hàn nhiệt, hư thực Diệp Thiên Sĩ kết hợp các yếu tố hàn - nhiệt, khí - huyết, hư - thực, phân loại đau và đề xuất phương pháp điều trị như châm cứu, xoa bóp, chườm ấm Các bài thuốc như "Huyết phủ trục ứ thang" của Vương Thanh Nhậm trở thành chuẩn mực trong điều trị đau, tiếp tục áp dụng nguyên tắc "bất thông tắc thống, bất vinh tắc thống" để khôi phục trạng thái sinh lý bình thường.
Viêm và đau có mối liên hệ chặt chẽ, đặc biệt là trong chứng tý, với các triệu chứng như đau nhức, tê bì, cảm giác nặng nề, sưng nóng, và khó khăn trong việc co duỗi cơ, gân, xương và khớp.
Chứng tý được ghi nhận lần đầu trong cuốn "Hoàng đế nội kinh", trong đó “Tố vấn – Tý luận” đã chỉ ra nguyên nhân, quá trình phát bệnh, phân loại triệu chứng và diễn biến của bệnh Các yếu tố gây bệnh bao gồm tà khí phong, hàn, và thấp, với phong thắng thuộc hành tý, hàn thắng thuộc thuốc tý, và thấp thắng thuộc trước tý.
Trương Trọng Cảnh trong “Kim quỹ yếu lược – Trúng phong lịch tiết bệnh” có nhắc đến phong thấp, lịch tiết phong cũng có liên quan đến chứng tý [24]
Các y gia trong nhiều tác phẩm như “Tế sinh phương” và “Thiên kim yếu phương” đã thảo luận sâu sắc về chứng tý, mà theo họ, hình thành từ sự suy yếu của khí huyết do bệnh lâu ngày hoặc tuổi tác Chứng bệnh này có thể do tà khí phong hàn thấp xâm nhập vào cơ thể, gây tổn thương cho can thận Ngoài ra, sự tích tụ nhiệt trong tạng phủ và kinh lạc, kết hợp với tà khí, làm cho khí không lưu thông, dẫn đến đau nhức kéo dài Như trong “Kim Quỹ Dực” đã chỉ ra, sự ứ đọng nhiệt và tà khí phong hàn thấp khiến cho tình trạng bệnh trở nên trầm trọng hơn, gây ra cảm giác khó chịu âm ỉ.
Cơ chế bệnh sinh của chứng tý chủ yếu do tà khí phong, hàn, thấp, nhiệt và đàm ứ tích tụ trong cơ thể, gây tắc nghẽn kinh mạch ở tứ chi, bì phu và các khớp Sự xâm nhập của ngoại tà và bẩm tố cơ thể khác nhau dẫn đến sự chuyển hóa giữa hàn và nhiệt Những người có dương khí yếu dễ bị phong hàn thấp, trong khi những người có âm hư lại dễ bị cảm ngoại tà, gây sưng, nóng, đỏ và đau ở các khớp, dẫn đến chứng phong thấp nhiệt tý Trong quá trình bệnh phát triển, tà khí tắc nghẽn kinh mạch, ảnh hưởng đến lưu thông khí huyết và dịch tân, dẫn đến huyết trệ và hình thành đàm trọc, từ đó xâm nhập vào khớp, gây sưng to, cứng khớp và biến dạng.
Nguyên tắc điều trị bệnh tý tập trung vào việc trừ tà và thông lạc, dựa trên sự phân biệt rõ ràng về tà khí Các phương pháp điều trị bao gồm trừ phong, tán hàn, trừ thấp, thanh nhiệt, hóa đàm, hành ứ, và thông kinh hoạt lạc Đối với chứng tý, cần chú trọng vào việc dưỡng huyết, hoạt huyết, kết hợp ôn dương bổ hỏa để trị hàn, và kiện tỳ ích khí để trị thấp Bệnh tý lâu ngày thường thuộc chứng hư, do đó, các phương pháp bổ can thận, ích khí huyết là rất quan trọng trong điều trị.
Viêm và đau là những triệu chứng phổ biến trong các bệnh lý viêm khớp như viêm khớp dạng thấp và gout Theo y học cổ truyền, các bệnh lý liên quan đến khớp được phân loại vào chứng tý, trong khi gout được xem là một dạng của chứng thống phong.
1.2.2 Các thể lâm sàng và điều trị
Trong y văn cổ điển, chứng tý được phân chia thành hai thể chính: Phong hàn thấp tý, bao gồm các loại Phong tý, Hàn tý và Thấp tý, và Phong thấp nhiệt tý.
Theo Trung Y Nội khoa, chứng tý được chia thành 10 thể chính: Phong thấp tý, Hàn thấp tý, Hàn nhiệt thác tạp tý, Thấp nhiệt tý, Nhiệt độc tý, Huyết ứ tý, Đàm trọc tý, Đàm ứ tý, Khí âm lưỡng hư tý và Can thận lưỡng hư tý Mỗi thể này đều có những triệu chứng lâm sàng riêng, phương pháp điều trị đặc hiệu và phương thuốc phù hợp.
Triệu chứng lâm sàng của bệnh bao gồm đau nhức khớp và cơ, khó khăn trong việc co duỗi, cùng cảm giác nặng nề Đau thường di chuyển và xảy ra chủ yếu ở các khớp nhỏ và vừa Trong giai đoạn tiến triển, các khớp sẽ sưng đau, kèm theo hiện tượng bì phù và cảm giác tê bì Thời kỳ đầu, bệnh nhân có thể cảm thấy sợ gió và xuất hiện sốt Lưỡi thường nhợt, với rêu lưỡi mỏng, trắng hoặc nhờn dính Mạch có thể phù hoãn hoặc nhu hoãn.
Pháp điều trị: Khu phong, trừ thấp, thông lạc, chỉ thống
Bài Quyên tý thang trong Y học tâm ngộ được gia giảm với các thành phần như Tang chi (40g), Tần giao (12g), Độc hoạt (12g), Khương hoạt (12g), Đương quy (12g), Hải phong đằng (40g), Bắc mộc hương (6g), Quế chi (10g), Xuyên khung (10g), Nhũ hương (6g) và Cam thảo (6g).
Triệu chứng lâm sàng của bệnh bao gồm cảm giác đau, lạnh và nặng nề ở các khớp của chi trên và chi dưới Đau thường cố định, ít di chuyển, với cường độ nhẹ vào ban ngày và nặng hơn vào ban đêm Thời tiết lạnh, ẩm cũng làm tăng cường độ đau, nhưng chườm nóng có thể giúp giảm đau Khu vực đau thường không sưng nề, khớp tổn thương không có dấu hiệu nóng đỏ, và người bệnh gặp khó khăn trong việc co duỗi Ngoài ra, chất lưỡi nhợt, rêu lưỡi trắng nhờn, mạch huyền khẩn hoặc huyền hoãn cũng là những dấu hiệu đi kèm.
Pháp điều trị: Ôn kinh, tán hàn, trừ thấp, thông lạc
Phương dược: Bài thuốc Ô đầu thang (Kim quỹ yếu lược) gia vị: Chế xuyên ô
12g, Bạch thược 12g, Bạch truật 12g, Thương truật 16g, Ma hoàng 12g, Hoàng kỳ 12g, Chích Cam thảo 12g, Đương quy 12g, Khương hoàng 12g [26], [27]
❖ Thể hàn nhiệt thác tạp
Triệu chứng lâm sàng của bệnh bao gồm sưng và đau ở các khớp và cơ, với cảm giác nóng tại chỗ nhưng không có sốt cao khi đo nhiệt độ Bệnh nhân gặp khó khăn trong việc co duỗi khớp, nhưng cảm thấy dễ chịu khi chườm ấm Các khớp có thể bị cứng và biến dạng, thân nhiệt có thể tăng vào ban đêm kèm theo cảm giác khát nhưng không muốn uống nước Lưỡi có thể đỏ, với rêu lưỡi trắng, nhợt hoặc vàng, và mạch có thể huyền sác hoặc huyền khẩn.
Pháp điều trị: Ôn kinh, tán hàn, thanh nhiệt, trừ thấp
Bài Quế chi thược dược tri mẫu thang, theo Kim quỹ yếu lược, bao gồm các thành phần như Quế chi 8g, Bạch thược 12g, Chích cam thảo 8g, Ma hoàng 8g, Phụ tử chế 8g, Bạch truật 12g, Tri mẫu 12g, Phòng phong 12g, và Sinh khương 3g Công thức này được sử dụng trong y học cổ truyền nhằm hỗ trợ điều trị một số triệu chứng nhất định.
Một số nghiên cứu về giảm đau, chống viêm bằng thuốc YHCT
1.3.1 Một số nghiên cứu về giảm đau, chống viêm bằng thuốc YHCT trong nước
Năm 2015, Vũ Bình Dương và Nguyễn Hoàng Ngân đã nghiên cứu tác dụng chống viêm và giảm đau của cao lỏng “Kiện khớp tiêu thống”, bao gồm các thành phần như Mẫu lệ, Cốt toái bổ, Ngũ gia bì, Hy thiêm thảo, Cẩu tích, Dây đau xương, Thổ phục linh, Thiên niên kiện và Can khương Kết quả cho thấy cao lỏng này có hiệu quả chống viêm (cả cấp và mạn) và giảm đau tốt trên mô hình thực nghiệm, đạt hiệu quả tương đương với các thuốc NSAIDs như diclofenac và aspirin.
Năm 2017, Lê Thị Hải Yến và cộng sự đã nghiên cứu tác dụng chống viêm và giảm đau của cao lỏng chiết từ cây an xoa (Helicteres hirsuta Lour.) trên chuột nhắt thực nghiệm Kết quả cho thấy, liều 24 g/kg/ngày và 72 g/kg/ngày, khi uống liên tục trong 5 ngày, đều có tác dụng giảm đau, được kiểm tra bằng máy đo ngưỡng đau và mô hình mâm nóng Đặc biệt, liều 72 g/kg/ngày còn cho thấy hiệu quả chống viêm cấp trên mô hình gây phù chân chuột, với tác dụng rõ rệt ở các thời điểm 2 và 4 giờ sau khi gây viêm.
Năm 2022, nghiên cứu của Nguyễn Thị Thanh Hà và cộng sự đã chỉ ra tác dụng chống viêm, giảm đau của viên hoàn cứng TD0015, bao gồm các thành phần như Hoàng bá, Sinh địa, và Đương quy, trên động vật thực nghiệm Kết quả cho thấy liều 1,2 g/kg/ngày và 3,6 g/kg/ngày có hiệu quả trong việc chống viêm cấp trên mô hình gây phù chân chuột, trong khi liều 2,4 g/kg/ngày và 7,2 g/kg/ngày cho thấy tác dụng chống viêm mạn bằng cách giảm trọng lượng u hạt, xơ hóa và số lượng tế bào viêm ở chuột nhắt trắng.
Năm 2023, Tô Lê Hồng và cộng sự đã nghiên cứu tác dụng giảm đau và chống viêm của cao lỏng “Cốt thống Tuệ Tĩnh”, bao gồm các thành phần như Hy thiêm, Đương quy, Thổ phục linh, Ngưu tất, Dây gắm, Trần bì và Củ dòm Kết quả cho thấy, liều 12 g/kg/ngày có tác dụng giảm đau rõ rệt trên cả 3 mô hình thử nghiệm; liều 24 g/kg/ngày giảm đau hiệu quả trên mô hình quặn đau do acid acetic và có xu hướng giảm đau trên mô hình mâm nóng cũng như mô hình tail-flick ở chuột nhắt chủng Swiss Ngoài ra, các liều 6 g/kg/ngày, 12 g/kg/ngày và 24 g/kg/ngày đều cho thấy xu hướng chống viêm cấp và mạn tính.
1.3.2 Một số nghiên cứu về giảm đau, chống viêm bằng thuốc YHCT nước ngoài
Năm 2006, nghiên cứu của Thi Húc Quang và cộng sự trên mô hình chuột cống trắng bị viêm khớp cho thấy rằng bài thuốc Hoàng kỳ quế chi ngũ vật thang có khả năng cải thiện tình trạng viêm khớp, giảm lipid peroxide, và ức chế sự hình thành nitric oxide (NO) Kết quả là, nồng độ superoxide dismutase (SOD) được cải thiện và hoạt tính của enzym glutathione peroxidase (GSH Px) được hồi phục, thể hiện tác dụng chống oxy hóa hiệu quả.
Năm 2011, Hàn Lam và cộng sự nghiên cứu thực nghiệm trên chuột cống trắng
Nghiên cứu của Wistar cho thấy Đào hồng tứ vật thang với liều lượng 22g/kg và 44g/kg trên chuột cống trắng có khả năng kéo dài thời gian đông máu và thời gian hình thành cục máu đông, đồng thời giảm độ nhớt máu toàn phần Kết quả này cho thấy bài thuốc có tác dụng hoạt huyết hóa ứ, mở ra khả năng nghiên cứu ứng dụng trong điều trị các bệnh lý phong thấp.
Năm 2016, nghiên cứu của Yan Chen và cộng sự trên mô hình chuột TNF-Tg đã chỉ ra rằng Độc hoạt kí sinh thang có khả năng ức chế mức độ nghiêm trọng của tình trạng viêm bằng cách thúc đẩy chức năng dẫn lưu bạch huyết ở chuột TNF-Tg.
Một số mô hình nghiên cứu về độc tính và tác dụng giảm đau, chống viêm
1.4.1 Một số phương pháp nghiên cứu độc tính cấp trên thực nghiệm
Mô hình Behrens, được đề xuất từ năm 1929, khẳng định rằng "Những con vật đã sống sót ở một mức liều nào đó sẽ sống ở tất cả các mức liều thấp hơn, trong khi những con vật đã chết ở một mức liều sẽ không sống ở tất cả các mức liều cao hơn."
1.4.1.2 Phương pháp theo Litchfield - Wilcoxon
Mô hình Litchfield-Wilcoxon, được đề xuất vào năm 1949, đã cải tiến và khắc phục những hạn chế của các phương pháp trước đó Kết quả của mô hình này được ghi trên giấy log-probit và tính toán bằng phương pháp toán đồ có hiệu chỉnh, mang lại độ chính xác cao hơn Trước đây, phương pháp này thường được sử dụng để xác định giá trị LD50 cho các chất có độc tính cao.
1.4.2 Một số phương pháp nghiên cứu tác dụng giảm đau, chống viêm
1.4.2.1 Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp trên mô hình gây phù chân chuột bằng Carrageenin
Nguyên tắc: Gây phù chân chuột bằng carrageenin theo Winter và cộng sự
Carrageenin, một polysaccharid được cấu tạo từ các polymer của β-(1,3)-D-galactose và β-(1,4)-3,6-hydroD-galactose, khi vào cơ thể sẽ trở thành kháng nguyên thông qua cơ chế miễn dịch kháng nguyên - kháng thể Mức độ viêm tối đa xảy ra trong khoảng thời gian 3-5 giờ, và các mẫu có tác dụng kháng viêm có khả năng giảm mức độ phù chân chuột Carrageenin gây ra viêm cấp theo hai pha: pha đầu tiên là sự giải phóng histamin và serotonin, trong khi pha thứ hai liên quan đến sự giải phóng bradykinin, protease, prostaglandin và lysosom.
1.4.2.2 Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp trên mô hình gây viêm màng bụng chuột cống trắng
Phương pháp gây viêm cấp màng bụng được sử dụng để nghiên cứu tác dụng chống viêm, trong đó tác nhân gây viêm là hỗn hợp carrageenin và formaldehyd Quá trình này chủ yếu liên quan đến sự đáp ứng của bạch cầu đa nhân trung tính, nhưng do sự hiện diện của formaldehyd, triệu chứng chính là tăng tiết dịch tại vị trí viêm Mô hình này cho phép đánh giá hiệu quả của thuốc nghiên cứu trong việc giảm tính thấm thành mạch và sự xâm nhập của bạch cầu vào ổ viêm, từ đó giúp giảm các triệu chứng sưng, nóng, đỏ và đau liên quan đến phản ứng viêm.
1.4.2.3 Nghiên cứu tác dụng chống viêm mạn theo mô hình gây u hạt trên chuột nhắt trắng
Amiant là một dị vật khó loại bỏ khi vào cơ thể, và việc cấy amiant đã được tẩm carrageenin dưới da gáy chuột sẽ làm tăng cường quá trình viêm so với cấy amiant đơn thuần Cơ thể phản ứng bằng cách tập trung nhiều tế bào, tạo ra mô bào lưới và nguyên bào sợi bao quanh vật lạ, dẫn đến hình ảnh u hạt của viêm mạn tính trong thí nghiệm Các loại thuốc chống viêm mạn có tác dụng ức chế sự hình thành u hạt, giảm khối lượng và sự xơ hóa của u hạt.
1.4.2.4 Nghiên cứu tác dụng chống viêm thông qua tuyến ức
Tác dụng chống viêm thông qua việc giảm khối lượng tuyến ức được coi là mô hình tương tự như tác dụng của corticoid Corticoid, một hormon từ vỏ thượng thận, có khả năng ngăn chặn sự hình thành tế bào miễn dịch, dẫn đến hiện tượng ly giải lympho bào và teo tuyến ức.
1.4.2.5 Nghiên cứu tác dụng giảm đau trên mô hình gây đau bởi phiến nóng (Hotplate)
Mô hình gây đau bởi phiến nóng (Hotplate) được dựa theo phương pháp nghiên cứu được mô tả bởi Baker và cộng sự (2002) [40], [41]
Mô hình gây đau bằng phiến nóng (Hotplate) được sử dụng để đánh giá tác dụng giảm đau theo cơ chế trung ương Cường độ kích thích gây cảm giác đau được tạo ra bằng cách sử dụng nhiệt tác động vào da và các thụ cảm thể nhận kích thích nhiệt Khi có kích thích nhiệt, tín hiệu sẽ được dẫn truyền từ ngoại vi về tủy sống, sau đó từ tủy sống kích thích lên não, dẫn đến phản xạ liếm chân sau ở chuột.
1.4.2.6 Nghiên cứu tác dụng giảm đau tại tổ chức viêm (Randall - Selitto Test)
Nguyên tắc của mô hình gây đau tại tổ chức viêm (Randall – Selitto Test) là sử dụng tác nhân hóa học để đánh giá cường độ đau và hiệu quả giảm đau ngoại vi Thí nghiệm này bao gồm hai pha: pha đáp ứng đầu tiên do kích thích trực tiếp lên sợi cảm giác, và pha đáp ứng muộn hơn liên quan đến phản ứng viêm và sự giải phóng các trung gian hóa học gây đau.
1.4.2.7 Nghiên cứu tác dụng giảm đau theo mô hình gây đau quặn (Writhing Test) sử dụng acid acetic
Mô hình gây đau quặn (Writhing Test) sử dụng acid acetic dựa theo phương pháp nghiên cứu của Koster và cs (1959) [38]
Mô hình gây đau quặn bằng acid acetic được sử dụng để đánh giá tác dụng giảm đau theo cơ chế ngoại biên, trong đó acid acetic kích thích gây viêm và đau tại chỗ Cơ chế gây đau xảy ra khi hóa chất này kích thích các đại thực bào và dưỡng bào có mặt ở phúc mạc, dẫn đến sự giải phóng các chất gây đau như TNF-α, IL-1β và IL-8.
Tổng quan bài thuốc nghiên cứu “Bại độc tán gia vị”
1.5.1 Xuất xứ bài thuốc “Bại độc tán gia vị”
Bài thuốc “Bại độc tán gia vị” được phát triển từ bài thuốc cổ phương “Bại độc tán” trong Tiểu nhi dược chứng trực quyết, có tác dụng khu phong trừ thấp, ích khí giải biểu Ban đầu, bài thuốc này được áp dụng cho trẻ em do cơ thể còn non nớt và dễ bị ngoại tà xâm nhập Sau đó, “Bại độc tán” cũng được sử dụng cho người già, sản phụ và những người sau khi bệnh nặng, khi cơ thể hư nhược và dễ mắc phong hàn thấp tà Đặc điểm chính của bài thuốc là tăng cường chính khí để đẩy tà khí ra ngoài.
Bại độc tán có tác dụng khu phong, trừ thấp, ích khí giải biểu, thích hợp cho các bệnh thuộc biểu như chứng tý ở cân cơ, xương khớp và kinh lạc Trong quá trình phát sinh, bệnh có thể chuyển từ hàn chứng sang nhiệt chứng do sự biến đổi giữa hàn và nhiệt Để điều trị hiệu quả, việc thêm Dây đau xương và Cốt khí củ, hai dược liệu tính mát, giúp khu phong, trừ thấp và thanh nhiệt là rất cần thiết Sự kết hợp này giúp cân bằng tính nóng lạnh trong bài thuốc, tuân theo nguyên tắc âm dương, tạo sự hài hòa trong điều trị.
Trong điều trị các bệnh lý cơ xương khớp, Khương hoạt và Độc hoạt cho kết quả tích cực, nhưng sự mạnh mẽ của chúng có thể gây hại cho tỳ vị Vì chứng tý là bệnh lý kéo dài, cần điều trị lâu dài, nhóm nghiên cứu đã tìm ra giải pháp Dựa trên nghiên cứu của Đỗ Tất Lợi về Lá khôi và Ô tặc cốt, nhóm đã thêm hai vị dược liệu này vào bài thuốc Bại độc tán để cải thiện tình hình.
Việc bổ sung 4 vị dược liệu: Dây đau xương, Cốt khí củ, Lá khôi, Ô tặc cốt vào bài thuốc Bại độc tán không chỉ nhằm tăng cường hiệu quả khu phong trừ thấp và thanh nhiệt, mà còn giúp hạn chế các tác dụng không mong muốn của thuốc Điều này đặc biệt phù hợp cho bệnh nhân mắc chứng tý lâu ngày, khi chính khí bị hao tổn và cảm phải ngoại tà.
4 Đẳng sâm 12g 11 Dây đau xương 12g
5 Bạch linh 12g 12 Cốt khí củ 12g
Công dụng: Khu phong trừ thấp, ích khí giải biểu
Bài thuốc gồm các thành phần như Khương hoạt và Độc hoạt giúp giải biểu, khu phong, tán hàn và trừ thấp Dây đau xương và Cốt khí củ có tác dụng trừ phong thấp, trong khi Xuyên khung hỗ trợ hành khí trong huyết, giúp Khương hoạt và Độc hoạt giảm đau Đẳng sâm bổ khí và kiện tỳ, Bạch linh có tác dụng thẩm thấp, hóa đàm Tiền hồ, Cát cánh và Chỉ xác giúp chữa tức ngực, ho có đờm Sài hồ cũng có tác dụng giải biểu Lá khôi và Ô tặc cốt giúp giảm tính mãnh liệt của Độc hoạt và Khương hoạt đến tỳ vị, trong khi Cam thảo điều hòa các vị thuốc Bài thuốc này được ứng dụng để chữa sưng đau các khớp do viêm khớp dạng thấp và chứng khí hư do ngoại cảm phong hàn, với các triệu chứng như sợ lạnh, sốt không ra mồ hôi, đau cứng đầu gáy, nhức mỏi tay chân, ngạt mũi và ho có đờm.
1.5.2 Mô tả tác dụng của các vị trong thành phần bài thuốc
(Danh mục các vị dược liệu có trong bài thuốc “Bại độc tán gia vị” được thể hiện trong phụ lục kèm theo) [45], [46], [47].
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Bài thuốc nghiên cứu
Bảng 2.1 Thành phần bài thuốc Bại độc tán gia vị
TT Tên thuốc Tên khoa học Hàm lượng Tiêu chuẩn dược liệu
1 Khương hoạt Rhizoma et Radix Notopterygii 12 g Dược điển Việt Nam V
2 Độc hoạt Radix Angelica pubescentis 12 g Dược điển Việt Nam V
3 Xuyên khung Rhizoma Ligustici wallichii 08 g Dược điển Việt Nam V
4 Đẳng sâm Radix Codonopsis 12 g Dược điển Việt Nam V
5 Bạch linh Poria 12 g Dược điển Việt Nam V
6 Tiền hồ Radix Peucedani 12 g Dược điển Việt Nam V
7 Sài hồ Radix Bupleuri chinensis 12 g Dược điển Việt Nam V
8 Cát cánh Radix Platycodi grandiflori 08 g Dược điển Việt Nam V
9 Chỉ xác Fructus Aurantii 08 g Dược điển Việt Nam V
10 Cam thảo Radix et Rhizoma Glycyrrhizea 06 g Dược điển Việt Nam V
11 Dây đau xương Caulis Tinospora sinensis Merr 12 g Dược điển Việt Nam V
12 Cốt khí củ Rhizoma Reynoutriae japonicae 12 g Dược điển Việt Nam V
13 Lá khôi Folium Ardisiae 12 g Dược điển Việt Nam V
14 Ô tặc cốt Os Sepiae 12 g Dược điển Việt Nam V
Các nguyên liệu trong bài thuốc được dùng dưới dạng nguyên liệu khô và đạt tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam V
Nguồn cung cấp dược liệu: Khoa Dược, Bệnh viện Tuệ Tĩnh
Các vị thuốc được chế biến dưới dạng thuốc sắc theo phương pháp YHCT, sử dụng máy sắc thuốc bán tự động Mỗi thang thuốc được chia thành 2 túi, với dung tích 150 ml cho mỗi túi, đảm bảo tuân thủ đúng quy chuẩn tại khoa Dược – Bệnh viện Tuệ Tĩnh.
Trong nghiên cứu thực nghiệm, thuốc nghiên cứu sẽ được cô đặc và sau đó được pha loãng với nước thành các nồng độ khác nhau tùy thuộc vào từng thí nghiệm để cho động vật uống.
Đối tượng nghiên cứu
- Chuột nhắt trắng trưởng thành chủng Swiss, cả hai giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 25 – 30 g
- Chuột cống trắng trưởng thành chủng Wistar, cả hai giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 250 ± 30 g
- Chuột cống đực non chủng Wistar, trọng lượng 100 ± 20 g
Chuột được nuôi trong phòng thí nghiệm của Bộ môn Dược lý - Trường Đại học
Trong khoảng thời gian từ 5 đến 10 ngày trước khi nghiên cứu và suốt quá trình nghiên cứu, chuột được nuôi dưỡng bằng thức ăn chuẩn do Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương cung cấp, đồng thời được cung cấp nước uống tự do.
Phương tiện nghiên cứu
- Acetic acid AR chai 500 ml (Xilong, Trung Quốc)
- Phối hợp tramadol hydrochloride 37,5 mg và paracetamol 325 mg (gọi tắt là PATRA), dạng viên nén, biệt dược Paratramadol (Polpharma, Poland)
- Prednisolone 5 mg, Hanoi Pharma JSC
- Diclofenac 50 mg, biệt dược Voltaren, Novartis, Thổ Nhĩ Kỳ
- Povidone idodine 10%, biệt dược Asi-Iodine, Công ty CP Dịch vụ và Thiết bị y tế An Sinh
- Chloral hydrate dạng bột, AR, > 99,0%, Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd
- Carageenan sodium salt, BDH Chemicals Ltd Poole England
- Dịch truyền tĩnh mạch Natri Clorid 0,9% B Braun, Việt Nam
- Máy móc, dụng cụ và trang thiết bị phục vụ nghiên cứu
Địa điểm, thời gian nghiên cứu
- Địa điểm: Bộ môn Dược lý và Trung tâm Dược lý lâm sàng – Trường Đại học
- Thời gian: Từ tháng 05/2024 đến tháng 11/2024.
Phương pháp nghiên cứu
Nghiên cứu thực nghiệm đã được tiến hành với thiết kế so sánh trước và sau thực nghiệm cùng với nhóm đối chứng Kết quả cho thấy, liều 1 thang (150g dược liệu)/ngày mang lại hiệu quả điều trị tốt cho người bệnh Liều dùng trung bình được xác định là 3,0g dược liệu/kg thể trọng/ngày, tương ứng với người có trọng lượng 50 kg Khi áp dụng liều dùng này cho động vật thực nghiệm, chuột nhắt trắng cần 36,0 g dược liệu/kg thể trọng/ngày (gấp 12 lần liều dùng trên người), chuột cống trắng cần 21,0 g/kg/ngày (gấp 7 lần), và chuột cống non cần 24,0 g/kg/ngày (gấp 8 lần).
2.5.2 Nghiên cứu độc tính cấp
Nghiên cứu độc tính cấp của bài thuốc Bại độc tán gia vị được thực hiện trên chuột nhắt trắng theo hướng dẫn của Tổ chức Y tế Thế giới về thuốc từ dược liệu Nghiên cứu này tuân thủ các quy định trong Hướng dẫn thử nghiệm tiền lâm sàng và lâm sàng thuốc đông y, cũng như thuốc từ dược liệu của Cục Khoa học Công nghệ và Đào tạo, Bộ Y tế.
Y tế [51], và tính giá trị LD50 theo phương pháp Litchfield - Wilcoxon [35]
Chuột nhắt trắng khỏe mạnh, mỗi con nặng từ 25 – 30 g, được chia thành từng lô 10 con và cho uống thuốc thử với các liều khác nhau, từ liều cao nhất không gây chết đến liều thấp nhất gây chết 100% chuột Trước khi uống thuốc, chuột được nhịn ăn 12 giờ nhưng vẫn có nước uống tự do Số lượng chuột chết được theo dõi trong 72 giờ đầu và tình trạng chung của chuột được quan sát trong 7 ngày sau khi uống thuốc, bao gồm ăn uống, hoạt động thần kinh, đi lại và bài tiết Nếu có chuột chết, tiến hành mổ để đánh giá tổn thương đại thể của các cơ quan.
Xác định LD50 theo tỷ lệ chuột chết trong vòng 72 giờ
2.5.3 Nghiên cứu tác dụng chống viêm, giảm đau
2.5.3.1.Nghiên cứu tác dụng chống viêm
❖ Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp
- Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp trên mô hình gây phù chân chuột bằng carrageenin
Tác dụng chống viêm cấp được đánh giá trên mô hình gây phù chân chuột bằng carrageenin, theo phương pháp của Winter và cộng sự (1968) [36], [52]
Chuột cống trắng được chia ngẫu nhiên thành 4 lô
- Lô 1 (n = 6) Chứng sinh học: uống nước cất
- Lô 2 (n = 12) Chứng dương: uống diclofenac liều 10 mg/kg/ngày [53]
- Lô 3 (n = 12) Bại độc tán gia vị liều cao: uống Bại độc tán gia vị liều 42 g/kg/ngày (gấp 2 lần liều dự kiến dùng trên lâm sàng)
Trong nghiên cứu này, lô 4 (n = 12) được sử dụng để đánh giá tác dụng của Bại độc tán gia vị liều thấp với liều 21 g/kg/ngày, dựa trên hệ số ngoại suy 7 cho liều lâm sàng Chuột được cho uống thuốc liên tục trong 5 ngày trước khi tiến hành gây viêm Vào ngày thứ 5, sau khi uống thuốc 1 giờ, viêm được gây ra bằng cách tiêm carrageenan 1% (pha trong nước muối sinh lý) với thể tích 0,05 mL vào gan bàn chân sau bên phải của chuột Để đo lường mức độ viêm, thể tích chân chuột (đến khớp cổ chân) được ghi nhận bằng máy đo viêm Plethysmometer (Ugo Basile model 7250, Italy) tại các thời điểm: trước khi gây viêm (V0) và sau khi gây viêm ở các thời điểm 2 giờ (V2), 4 giờ (V4), 6 giờ (V6) và 24 giờ (V24).
Kết quả được tính theo công thức của Fontaine Độ tăng thể tích chân của từng chuột được tính theo công thức:
V 0 ×100 Trong đó: V0 là thể tích chân chuột trước khi gây viêm
Vt là thể tích chân chuột sau khi gây viêm
Tác dụng chống viêm được đánh giá bằng khả năng ức chế phản ứng phù (I%):
V c × 100 Trong đó: V c là trung bình độ tăng thể tích chân chuột ở lô mô hình
V t là trung bình độ tăng thể tích chân chuột ở lô uống thuốc
- Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp trên mô hình gây viêm màng bụng chuột cống trắng
Nghiên cứu được tiến hành dựa trên phương pháp của Griswold và cộng sự
Chuột cống trắng được chia ngẫu nhiên thành 4 lô
- Lô 1 (n = 6) Chứng sinh học: uống nước cất
- Lô 2 (n = 12) Chứng dương: uống diclofenac liều 10 mg/kg/ngày [53]
- Lô 3 (n = 12) Bại độc tán gia vị liều cao: uống Bại độc tán gia vị liều 42 g/kg/ngày (gấp 2 lần liều dự kiến dùng trên lâm sàng)
Lô 4 (n = 12) Bại độc tán gia vị liều thấp được nghiên cứu với liều 21 g/kg/ngày, theo hệ số ngoại suy 7 Chuột được cho uống nước cất hoặc thuốc thử mỗi sáng trong 5 ngày liên tiếp Vào ngày thứ 5, sau khi uống thuốc thử 1 giờ, chuột được gây viêm màng bụng bằng dung dịch carrageenan 0,05 g và formaldehyd 1,4 mL hòa trong 100 mL nước muối sinh lý, tiêm 1 mL/100g vào ổ bụng Sau 24 giờ gây viêm, tiến hành mở ổ bụng chuột để hút dịch rỉ viêm, đo thể tích, đếm số lượng bạch cầu/mL và định lượng protein trong dịch rỉ viêm.
❖ Nghiên cứu tác dụng chống viêm mạn
- Nghiên cứu tác dụng chống viêm mạn theo mô hình gây u hạt trên chuột nhắt trắng
Nghiên cứu được tiến hành dựa trên phương pháp của Meier và cộng sự (1950)
[56], được cải tiến bởi Ducrot, Julou và cộng sự (1963) [57]
Chuột nhắt trắng được chia ngẫu nhiên thành 4 lô, mỗi lô 15 con
- Lô 1 (Chứng sinh học): uống nước cất
- Lô 2 (Chứng dương): uống prednisolon liều 5 mg/kg/ngày
- Lô 3 (Bại độc tán gia vị liều cao): uống Bại độc tán gia vị liều 72 g/kg (gấp
2 lần liều dự kiến dùng trên lâm sàng)
- Lô 4 (Bại độc tán gia vị liều thấp): uống Bại độc tán gia vị liều 36 g/kg (liều dự kiến dùng trên lâm sàng, tính theo hệ số ngoại suy 12)
Phương pháp gây u hạt tạo ra tình trạng viêm mạn: Cấy hạt amiant trọng lượng
Một lượng 6 mg đã được tiệt trùng bằng cách sấy ở 120℃ trong 1 giờ và được tiêm carrageenan 1% dưới da gáy của chuột Trước khi tiến hành cấy, chuột đã được gây mê bằng cách tiêm chloral hydrat với liều 250 mg/kg qua màng bụng.
Sau khi cấy hạt amiant, chuột được cho uống nước cất hoặc thuốc thử liên tục trong 7 ngày Vào ngày thứ 8, chuột sẽ bị giết và mổ để lấy khối u hạt Trọng lượng ướt và trọng lượng khô của khối u hạt được xác định, với trọng lượng khô được sấy ở 60℃ trong 18 giờ, được coi là chỉ số cho sự hình thành u hạt Phần trăm ức chế (PI) của sự phát triển khối u hạt được tính theo một công thức cụ thể.
P c ×100 Trong đó: Pc là trọng lượng khô khối u hạt lô đối chứng
Pt là trọng lượng khô khối u hạt lô thuốc thử
- Nghiên cứu tác dụng chống viêm thông qua tuyến ức [42]
Chuột cống đực còn non, trọng lượng trung bình 100 ± 20 gam, được chia ngẫu nhiên làm 4 lô, mỗi lô 10 con
- Lô 1 (Chứng sinh học): uống nước cất
- Lô 2 (Chứng dương): uống prednisolon liều 6 mg/kg/ngày
- Lô 3 (Bại độc tán gia vị liều cao): uống “Bại độc tán gia vị” liều 48,0 g/kg/ngày (gấp 2 lần liều dự kiến dùng trên lâm sàng)
- Lô 4 (Bại độc tán gia vị liều thấp): uống “Bại độc tán gia vị” liều 24,0 g/kg/ngày (liều tương đương liều dự kiến dùng trên lâm sàng).
Chuột được cho uống thuốc thử trong 3 ngày vào lúc 8h30 sáng Sau khi uống liều cuối cùng, chuột được giết thịt sau 6 giờ và tuyến ức được bóc tách để cân ngay lập tức Kết quả sẽ được so sánh dựa trên trọng lượng tương đối của tuyến ức, tính theo 100 g thể trọng của chuột giữa các lô khác nhau.
2.3.2.2 Nghiên cứu tác dụng giảm đau
❖ Nghiên cứu tác dụng giảm đau trung ương
- Nghiên cứu tác dụng giảm đau trên mô hình gây đau bởi mâm nóng (Hotplate)
Dựa theo phương pháp nghiên cứu được mô tả bởi Baker và cộng sự (2002) [40],
Chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên làm 5 lô, mỗi lô 10 con
Lô nghiên cứu Điều trị
1 Chứng sinh học Uống nước lọc 0,2 ml/10g
2 Paracetamol và tramadol Uống phối hợp paracetamol + tramadol với liều paracetamol 216,7 mg/kg và tramadol 25 mg/kg
3 Diclofenac Uống diclofenac liều 20 mg/kg
4 Bại độc tán gia vị liều cao Uống Bại độc tán gia vị liều 72 g/kg
5 Bại độc tán gia vị liều thấp Uống Bại độc tán gia vị liều 36 g/kg
Trong nghiên cứu này, chuột được cho uống nước hoặc thuốc thử mỗi sáng trong 5 ngày liên tiếp Thời gian phản ứng với nhiệt độ của chuột được đo trước khi uống thuốc và một giờ sau khi uống liều cuối cùng Chuột được đặt trên mâm nóng (hot plate) luôn duy trì ở nhiệt độ ổn định.
Nghiên cứu được thực hiện với nhiệt độ 56 độ C bằng hệ thống ổn nhiệt, đo thời gian từ khi chuột tiếp xúc với mâm nóng cho đến khi chuột liếm chân sau Những chuột có phản ứng quá nhanh (dưới 8 giây) hoặc quá chậm (trên 30 giây) sẽ bị loại bỏ khỏi nghiên cứu Mục tiêu là so sánh thời gian phản ứng với kích thích nhiệt trước và sau khi chuột uống thuốc thử.
❖ Nghiên cứu tác dụng giảm ngoại biên
- Nghiên cứu tác dụng giảm đau tại tổ chức viêm (Randall - Selitto Test)
Based on the research methodology of Randall and Selitto, modified by Winter et al (1962), as outlined in the publication "Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays" by Springer.
Chuột cống trắng được chia làm 4 lô, mỗi lô 10 con
- Lô 1 (Chứng sinh học): uống nước cất liều 10 ml/kg/ngày
- Lô 2 (Chứng dương): uống diclofenac 10 mg/kg/ngày [53]
- Lô 3 (Bại độc tán gia vị liều cao): uống Bại độc tán gia vị liều 42 g/kg (gấp 2 lần liều dự kiến dùng trên lâm sàng)
- Lô 4 (Bại độc tán gia vị liều thấp): uống Bại độc tán gia vị liều 21 g/kg (liều dự kiến dùng trên lâm sàng)
Chuột các lô được uống nước hoặc thuốc thử mỗi ngày vào buổi sáng trong 5 ngày liên tục
Để gây viêm bàn chân chuột, tiêm 0,05 mL carrageenan 1% pha trong nước muối sinh lý vào gan bàn chân sau bên phải Phản ứng đau do kích thích cơ học được đo bằng máy đo phản ứng đau Analgesy-Meter (mẫu Ugo Basile).
37215, Italy) Ngưỡng cảm nhận đau được đo vào các thời điểm trước uống thuốc;
Sau khi uống thuốc, việc kiểm tra áp lực bàn chân theo phương pháp Randall-Selitto cho thấy sự khác biệt trong cảm nhận đau giữa bàn chân bị viêm và bàn chân không bị viêm Cơn đau ở bàn chân bị viêm chủ yếu do sự giải phóng chất trung gian gây đau ở ngoại vi, trong khi cơn đau ở bàn chân không bị viêm xuất phát từ hoạt động trung tâm, liên quan đến sự kích thích trực tiếp của các sợi thần kinh thụ thể đau.
- Nghiên cứu tác dụng giảm đau theo mô hình gây đau quặn (Writhing Test) sử dụng acid acetic
Theo phương pháp nghiên cứu của Koster và cs (1959) [38]
Chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên làm 5 lô, mỗi lô 10 con
Lô nghiên cứu Điều trị
1 Chứng sinh học Uống nước lọc 0,2 ml/10g
2 Paracetamol và tramadol Uống phối hợp paracetamol + tramadol với liều paracetamol 216,7 mg/kg và tramadol 25 mg/kg
3 Diclofenac Uống diclofenac liều 20 mg/kg
4 Bại độc tán gia vị liều cao Uống Bại độc tán gia vị liều 72 g/kg
5 Bại độc tán gia vị liều thấp Uống Bại độc tán gia vị liều 36 g/kg
Chuột được cho uống thuốc thử hoặc nước cất trong 5 ngày liên tục Vào ngày thứ 5, sau khi dùng thuốc 60 phút, tiến hành gây đau quặn bằng cách tiêm phúc mạc dung dịch acid acetic 1% với liều 0,1 ml/10g thể trọng Sau khi tiêm, tất cả chuột đều biểu hiện cơn đau quặn với các triệu chứng như thóp bụng lại, áp bụng xuống sàn, và duỗi dài thân cùng chân sau Thời gian xuất hiện cơn đau được ghi lại từ lúc tiêm acid acetic đến khi có cơn đau quặn đầu tiên, và số cơn đau quặn được đếm trong từng khoảng thời gian 5 phút cho đến 30 phút sau tiêm Kết quả giữa các lô nghiên cứu được so sánh, tính % ức chế đau quặn theo công thức đã được thiết lập.
Tỷ lệ giảm số cơn đau quặn của lô thử thuốc được tính bằng A%, trong đó Dc đại diện cho số cơn đau quặn của lô chứng sinh lý, còn Dt là số cơn đau quặn của lô thử thuốc.
Kỹ thuật phân tích số liệu
Dữ liệu được thu thập và phân tích bằng phần mềm Microsoft Excel 2010 và SPSS 22.0 Phương pháp paired t-test được sử dụng để so sánh trong nhóm, trong khi Student’s t-test được áp dụng để xác định sự khác biệt đáng kể giữa hai nhóm Kết quả được coi là có ý nghĩa thống kê khi p < 0,05.
Sơ đồ 2.1 Sơ đồ nghiên cứu
Xác định độc tính cấp
Mô h ìn h gây ph ù ch ân ch u ột M ô hìn h gây viêm m àn g bụ ng Mô h ìn h gây u h ạt Mô h ìn h gây viêm tu yế n ức
Ph ươn g ph áp g ây đau tạ i t ổ ch ức viêm Ph ươn g p há p gây đ au q uặ n
Xây dựng thành phần bài thuốc nghiên cứu
Thuốc nghiên cứu (Thuốc sắc, tỉ lệ 1:2)
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
Kết quả nghiên cứu độc tính cấp
Chuột nhắt trắng đã được cho uống Bại độc tán gia vị với liều từ thấp nhất đến cao nhất, cụ thể là 0,25 ml/10 g, 4 lần trong vòng 24 giờ Sau khi theo dõi, không có biểu hiện hay triệu chứng bất thường nào xuất hiện trong 72 giờ sau khi uống.
Kết quả được trình bày ở bảng 3.1.
Bảng 3.1 Kết quả nghiên cứu độc tính cấp của bài thuốc “Bại độc tán gia vị”
Lô chuột n Liều (ml dung dịch đậm đặc/kg Tỷ lệ chết (%) Dấu hiệu bất thường khác
Kết quả từ bảng 3.1 cho thấy rằng các lô chuột được cho uống Bại độc tán gia vị với liều từ 50 ml/kg đến 100 ml/kg không xuất hiện triệu chứng độc tính cấp tính.
Liều dung nạp tối đa của Bại độc tán gia vị được tính từ bảng 3.1 là 100 ml dung dịch đậm đặc trên mỗi kg, tương ứng với 2 thang/kg, và luôn nhỏ hơn 50% so với liều chết.
Kết quả nghiên cứu tác dụng chống viêm, giảm đau
3.2.1 Kết quả nghiên cứu tác dụng chống viêm
3.2.1.1 Kết quả nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp
❖ Kết quả nghiên cứu tác dụng chống viêm trên mô hình gây phù chân chuột bằng carrageenin
Kết quả được biểu thị dưới dạng trung vị và khoảng tứ phân vị ΔV: Độ tăng thể tích chân của từng chuột từng thời điểm 2 giờ, 4 giờ, 6 giờ, 24 giờ (%)
**p0,05).
Bại độc tán gia vị 42 g/kg Bại độc tán gia vị 21 g/kg Diclofenac 10 mg/kg
Kết quả được biểu thị dưới dạng giá trị trung bình ± SE
**p