Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm. Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm.
TỔNG QUAN
XÁC ĐỊNH TÍNH AN TOÀN CỦA THUỐC Ở GIAI ĐOẠN TIỀN LÂM SÀNG
1.1.1 Xác định độc tính cấp
Thuốc phải đảm bảo an toàn và hiệu lực, trong đó tính an toàn được coi trọng hơn Dù thuốc có hiệu quả cao, nếu không an toàn sẽ không được sử dụng Nghiên cứu độc tính là vấn đề hàng đầu trong phát triển thuốc, và thử nghiệm độc tính tiền lâm sàng là một phần quan trọng Thông tin về độc tính cần được cung cấp trước khi tiến hành thử nghiệm trên người, do đó, hầu hết các chất dùng làm thuốc đều phải trải qua kiểm tra độc tính Tại Việt Nam, nghiên cứu độc tính và độ an toàn của thuốc được quy định trong hướng dẫn của Bộ Y tế Theo quy định, thử nghiệm độc tính cấp và bán trường diễn là bắt buộc cho tất cả các chế phẩm y học cổ truyền không phải bài thuốc cổ phương bào chế dạng truyền thống.
Vào năm 1927, JW Trevan đã nỗ lực tìm ra phương pháp ước tính hiệu lực ngộ độc của các loại thuốc và hóa chất thời bấy giờ Ông đã phát triển thử nghiệm LD 50, trong đó cái chết được sử dụng làm "mục tiêu" để so sánh mức độ độc hại của các hóa chất khác nhau khi tiếp xúc với cơ thể Kể từ đó, nhiều nhà khoa học đã cải tiến và phát triển các phương pháp thử nghiệm LD 50 một cách trực tiếp và nhanh chóng hơn.
LD, viết tắt của "Lethal Dose", đặc trưng cho liều lượng hóa chất gây tử vong cho 50% nhóm động vật thử nghiệm, được gọi là LD50 Đây là một chỉ số quan trọng để đánh giá độc tính cấp tính, tức là khả năng của hóa chất gây ra tác động xấu trong thời gian ngắn Độc tính cấp tính được xác định khi có dấu hiệu ngộ độc xảy ra ngay sau khi hấp thụ hoặc sau 4 giờ tiếp xúc liên tục với hóa chất trong không khí.
"Tương đối sớm" được hiểu là khoảng thời gian từ vài phút đến 24 giờ hoặc khoảng 2 tuần, nhưng hiếm khi kéo dài hơn Do đó, giá trị LD 50 trở nên cần thiết và mang ý nghĩa khoa học quan trọng.
Thử độc tính cấp là cần thiết để xác định mức độ độc của thuốc, hỗ trợ trong điều trị ngộ độc cấp và thiết lập liều lượng cho các thử nghiệm độc tính tiếp theo Do đó, việc thực hiện các phép thử độc tính cấp là rất quan trọng.
- Liều dung nạp tối đa;
- Liều gây ra độc tính có thể quan sát được;
- Liều thấp nhất có thể gây chết động vật thí nghiệm (nếu có);
- Liều LD 50 gần đúng (nếu có thể xác định được);
Dưới đây là một số định nghĩa cụ thể:
Độc tính của thuốc được định nghĩa là những tác dụng không mong muốn, gây hại cho cơ thể Biểu hiện của độc tính có thể từ nhẹ, như thay đổi hành vi, buồn nôn, và mẩn ngứa, đến nghiêm trọng, có thể dẫn đến tử vong.
Độc tính cấp của thuốc, hay còn gọi là độc tính xảy ra sau khi sử dụng thuốc một lần hoặc vài lần trong ngày, là một khía cạnh quan trọng trong nghiên cứu dược phẩm Nghiên cứu này thường được thực hiện trên động vật thí nghiệm với mục tiêu xác định liều chết trung bình (LD50), tức là liều lượng gây tử vong cho 50% số lượng động vật trong những điều kiện nhất định.
Liều chết, ký hiệu là LD (lethal dose), là liều lượng thuốc gây tử vong cho động vật Thử nghiệm liều chết chỉ được thực hiện trên các con vật thí nghiệm và không áp dụng cho con người.
Liều chết tuyệt đối, viết tắt là ALD (absolute lethal dose) và thường được ký hiệu là LD100, là liều tối thiểu gây tử vong cho 100% các con vật thí nghiệm Nếu liều sử dụng vượt quá LD100, tất cả các con vật đều sẽ chết.
Liều chết trung bình, hay còn gọi là MLD (mean lethal dose), được ký hiệu là LD50, là liều lượng gây tử vong cho 50% số lượng động vật thí nghiệm.
Liều chết tối thiểu được xác định là liều lượng khi thử nghiệm trên một nhóm động vật cho thấy có một con chết Cụ thể, nếu trong số 20 con thử nghiệm có một con chết, thì liều chết tối thiểu tương ứng là 5% (LD5); nếu có 2 con chết, thì liều chết tối thiểu là 10% (LD10) Ngược lại, nếu chỉ thử nghiệm 4 con và có một con chết, thì liều chết tối thiểu sẽ là 25% (LD25).
Liều dưới liều chết (ILD), hay còn gọi là liều dung nạp tối đa (MTD), được ký hiệu là LD0, là liều cao nhất mà không gây tử vong cho động vật Mặc dù liều MTD có thể gây ra các tác động độc hại từ nhẹ đến nặng, nhưng nó không dẫn đến cái chết của con vật.
- Liều an toàn: là mức liều cao nhất mà không gây ra bất kỳ tai biến nào có thể quan sát được (NOAEL: no obsered adverse effect level).
Những triệu chứng ngộ độc điển hình có thể quan sát được trên động vật và khả năng hồi phục (nếu có) [6].
1.1.1.2 Động vật thực nghiệm Động vật nghiên cứu: thử ít nhất trên 2 loài động vật có vú, trong đó có một loài không gặm nhấm Tùy điều kiện, có thể chấp nhận thử độc tính cấp trên một loài động vật.
- Loài gặm nhấm thường sử dụng là chuột nhắt, chuột cống.
- Loài không gặm nhấm có thể dùng là chó hoặc khỉ.
Nên sử dụng số lượng động vật thí nghiệm nhỏ nhất, tùy theo mô hình áp dụng (thường là 3 đến 5 con/mức liều) [7].
Có thể sử dụng thuốc qua nhiều phương pháp như đường uống, tiêm bắp thịt, tiêm dưới da, tiêm phúc mạc và tiêm tĩnh mạch Phương pháp tốt nhất là chọn đường dùng phù hợp cho người trong lâm sàng sau này Khi cho thuốc uống qua ống xông, cần lưu ý tránh để thuốc vào khí quản, vì điều này có thể khiến chuột chết không phải do tác dụng độc của thuốc.
Để đảm bảo an toàn và hiệu quả khi sử dụng thuốc cho chuột nhắt trắng, cần tính liều lượng theo ml/kg cân nặng Đối với chuột nặng 20g, thể tích thuốc uống lý tưởng là 0,2-0,5 ml, và nếu cần dùng nhiều hơn, nên chia thành 2-3 lần trong ngày, tránh dùng quá 1 ml để không gây căng thẳng cho dạ dày Khi tiêm, có thể lựa chọn tiêm tĩnh mạch, bắp thịt, phúc mạc hoặc dưới da, và nên làm ấm dung dịch tiêm khoảng 37°C để tránh sốc nhiệt Đảm bảo tốc độ tiêm và pH dịch tiêm phù hợp với yêu cầu, và dụng cụ tiêm phải được vô trùng Nếu cần tiêm thể tích lớn, có thể phân chia vào nhiều vị trí khác nhau để giảm thiểu nguy cơ tổn thương.
TỔNG QUAN VỀ CÁC MÔ HÌNH NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG GIẢM ĐAU
Để nghiên cứu tác dụng giảm đau trên động vật thực nghiệm, có nhiều phương pháp khác nhau được áp dụng Việc lựa chọn mô hình nghiên cứu phù hợp phụ thuộc vào mục đích cụ thể của từng nghiên cứu Dưới đây là một số mô hình nghiên cứu về tác dụng giảm đau đang được sử dụng trong thực nghiệm.
1.2.1 Nghiên cứu tác dụng giảm đau trung ương
Nghiên cứu tác dụng giảm đau trên mô hình gây đau bởi phiến nóng
Nghiên cứu được thực hiện theo phương pháp của Baker và cộng sự, trong đó chuột nhắt trắng được chia thành 4 lô ngẫu nhiên và được cho uống thuốc cùng với thuốc thử Thí nghiệm diễn ra vào hai thời điểm: trước và sau 5 ngày khi chuột uống thuốc thử Vào ngày thứ 5, sau khi cho chuột uống thuốc 1 giờ, chuột được đặt lên mâm nóng ở nhiệt độ 56°C của Máy đo đau bản nóng, lạnh Thời gian từ khi chuột được đặt vào mâm nóng cho đến khi chúng liếm chân sau được ghi nhận để tính thời gian chịu đau Tác dụng giảm đau được đánh giá qua mức tăng thời gian chịu đau, so sánh giữa các lô và tính phần trăm kéo dài thời gian đáp ứng Trong giai đoạn trước khi uống thuốc, những chuột có thời gian phản ứng dưới 8 giây sẽ bị loại bỏ khỏi thí nghiệm.
1.2.2 Nghiên cứu tác dụng giảm ngoại biên. a Nghiên cứu tác dụng giảm đau tại tổ chức viêm (Randall - Selitto Test).
Dựa theo phương pháp nghiên cứu của Randall và Selitto, chuột cống trắng được chia thành 4 lô, mỗi lô được cho uống nước cất, Diclofenac sodium 20 mg/kg, thuốc nghiên cứu liều 1 và thuốc nghiên cứu liều 2 trong 5 ngày trước khi gây viêm Vào ngày thứ 5, gây phù viêm cấp bằng cách tiêm Carrageenin 1% vào dưới da gan bàn chân chuột Sau 3 giờ, chuột được cho uống thuốc thử hoặc nước cất với thể tích 5 ml/kg Ngưỡng đau bàn chân gây phù viêm được đo bằng máy đo giảm đau áp lực bàn chân chuột tại các thời điểm 30, 60, 90 và 120 phút sau khi dùng thuốc Cuối cùng, tiến hành so sánh ngưỡng đau giữa các lô và nghiên cứu tác dụng giảm đau theo mô hình gây đau quặn sử dụng acid acetic.
Theo nghiên cứu của Koster và cộng sự (1959), chuột nhắt trắng được chia thành 4 lô ngẫu nhiên Mỗi lô sẽ uống lần lượt nước cất, Diclofenac sodium với liều 20 mg/kg, thuốc nghiên cứu với liều dự kiến có tác dụng, và thuốc nghiên cứu với liều gấp đôi.
1 Chuột được uống thuốc thử hoặc nước cất 5 ngày liên tục Ngày thứ 5, sau khi dùng thuốc 60 phút, tiến hành gây đau quặn bằng cách tiêm phúc mạc bằng dung dịch acid acetic 0,6% liều 0,1 ml/10g thể trọng Sau khi tiêm acid acetic vào ổ bụng, ở tất cả các chuột đều có những cơn đau quặn với biểu hiện thóp bụng lại, áp bụng xuống sàn, duỗi dài thân và chân sau Thời gian xuất hiện đau (tính từ lúc tiêm acid acetic đến khi có cơn đau quặn đầu tiên) và đếm số cơn đau quặn trong từng khoảng thời gian 5 phút cho đến kết thúc 20 phút sau tiêm acid acetic được ghi lại đối với từng chuột trong mỗi lô So sánh kết quả giữa các lô nghiên cứu, tính % ức chế đau quặn theo công thức:
Tỷ lệ A% thể hiện mức độ giảm số cơn đau quặn ở lô thử thuốc, trong khi Dc là số cơn đau quặn của lô chứng sinh lý và Dt là số cơn đau quặn của lô thử thuốc.
Chúng tôi đã chọn mô hình Randall - Selitto Test cho đề tài này vì nó đơn giản, dễ thực hiện và có độ chính xác cao.
ĐAU THEO Y HỌC HIỆN ĐẠI VÀ Y HỌC CỔ TRUYỀN
1.3.1 Đau theo y học hiện đại
Theo Hiệp hội Quốc tế Nghiên cứu về Đau (IASP), đau là cảm giác giác quan và xúc cảm do tổn thương hiện tại hoặc tiềm tàng ở mô gây ra, phụ thuộc vào mức độ nghiêm trọng của tổn thương Cảm giác đau có thể phát sinh từ bất kỳ điểm nào trên đường dẫn truyền đau.
Đau theo sinh lý học thần kinh, theo Geissner và Wurtele, là một khái niệm trừu tượng phụ thuộc vào nhiều yếu tố như cơ địa, cảm xúc và khả năng chịu đựng khác nhau của từng bệnh nhân.
Cảm giác đau là một trải nghiệm đặc biệt, khác biệt so với các cảm giác khác, đóng vai trò quan trọng trong việc cảnh báo não về những kích thích có hại cho cơ thể Nó yêu cầu các cơ chế sinh lý và tâm lý để loại bỏ những tác nhân gây hại Do đó, cảm giác đau là một hiện tượng phức tạp.
Đau là trải nghiệm khó chịu cả về cảm giác lẫn cảm xúc, thường liên quan đến tổn thương thực tế hoặc giả định Đau mang tính chủ quan, bị ảnh hưởng bởi kinh nghiệm sống và các yếu tố như truyền thống, văn hóa, và tôn giáo Triệu chứng đau có thể xuất hiện ở bất kỳ vị trí nào trên cơ thể với nhiều đặc điểm khác nhau như đau nông, sâu, âm ỉ, chói, đột ngột, tại chỗ hay lan tỏa Tính chất của cơn đau có thể giúp chẩn đoán nhiều bệnh lý khác nhau.
1.3.1.2 Dẫn truyền cảm giác đau
Cảm giác đau cấp được truyền qua sợi Aγ có myelin với tốc độ 6 - 30 mét/giây, trong khi cảm giác đau mạn được truyền qua sợi C không myelin với tốc độ 0,5 - 2 mét/giây Việc ức chế sợi Aγ sẽ làm mất cảm giác đau cấp, trong khi ức chế sợi C bằng thuốc tê tại chỗ sẽ làm mất cảm giác đau chậm Các nơron này trong tuỷ đi lên hoặc xuống từ 1 đến 3 đốt tuỷ và tận cùng ở chất xám sừng sau Nơron thứ hai sẽ bắt chéo sang cột trắng trước - bên đối diện và tiếp tục lên não qua nhiều đường, bao gồm bó tuỷ sống.
Đồi thị và bó tuỷ sống có cấu tạo lưới tận cùng tại hành não, cầu não và não giữa ở cả hai bên Từ cấu trúc lưới này, nhiều nơron kết nối tới các nhân của đồi thị và một số khu vực ở nền não, đồng thời có các sợi thần kinh đi lên để kích thích hoạt động của vỏ não.
Nơron thứ ba từ đồi thị lên nhiều vùng ở nền não và vùng cảm giác đau ở vỏ não [19]
1.3.1.3 Trung tâm nhận thức cảm giác đau Đường dẫn truyền cảm giác đau tận cùng ở cấu trúc lưới của thân não, trung tâm dưới vỏ như nhân lá trong của đồi thị và vùng S-I, S-II, vùng đỉnh, vùng trán của vỏ não Kích thích vào những vùng này gây cảm giác đau.
Cấu trúc lưới và trung tâm dưới vỏ vừa có chức năng nhận thức đau vừa tạo ra các đáp ứng về tâm lý khi đau.
Vỏ não có chức năng phân tích cảm giác đau tinh vi, phân biệt vị trí, đánh giá mức độ đau [19].
1.3.1.4 Phân loại đau a Theo cơ chế gây đau:
- Đau cảm thụ: là đau do tổn thương tổ chức (cơ, da, nội tạng…) gây kích thích vượt ngưỡng đau [20] Đau cảm thụ có 2 loại:
+ Đau thân thể: là đau do tổn thương mô da, cơ, khớp…
+ Đau nội tạng: là đau do tổn thương nội tạng.
- Đau thần kinh: là chứng đau do những thương tổn nguyên phát hoặc những rối loạn chức trong hệ thần kinh gây nên. Đau thần kinh chia 2 loại:
Đau thần kinh ngoại vi là tình trạng gây ra bởi tổn thương các dây hoặc rễ thần kinh, thường gặp trong các trường hợp như đau sau herpes, đau dây V, và bệnh thần kinh ngoại vi do đái tháo đường.
+ Đau thần kinh trung ương: do tổn thương não hoặc tuỷ sống
Đau hỗn hợp là loại đau kết hợp giữa cơ chế đau cảm thụ và đau thần kinh Đau cấp tính là đau mới xuất hiện với cường độ mạnh mẽ, thường được coi là dấu hiệu cảnh báo hữu ích Loại đau này giúp chẩn đoán để xác định nguồn gốc thực thể của cơn đau, thường kéo dài dưới 3 tháng Các loại đau cấp tính bao gồm nhiều dạng khác nhau.
- Đau mạn tính: là chứng đau dai dẳng tái đi tái lại nhiều lần.
+ Đau khung chậu mạn tính.
+ Đau do nguyên nhân thần kinh… [21], [22], [23]
1.3.1.5 Cơ chế đau do viêm
Viêm là phản ứng tự nhiên của cơ thể tại mô liên kết, xuất hiện ở mọi cơ quan, nhằm loại trừ tác nhân gây viêm và sửa chữa tổn thương Quá trình viêm luôn đi kèm với sự thay đổi mạch máu và sự tham gia của hệ thần kinh, giúp đưa các tế bào thực bào đến vị trí viêm Mặc dù viêm là cơ chế bảo vệ quan trọng chống lại yếu tố gây bệnh, nhưng nó cũng có thể dẫn đến tổn thương, hoại tử và rối loạn chức năng cơ quan, gây ra hậu quả nghiêm trọng.
Hiện nay, viêm được phân loại theo nhiều cách khác nhau, mỗi phương pháp mang lại những lợi ích riêng Có thể phân loại viêm dựa vào nguyên nhân, như viêm khớp nhiễm khuẩn và viêm khớp vô khuẩn Ngoài ra, viêm cũng được phân chia theo vị trí, bao gồm viêm nông và viêm sâu Một cách phân loại khác dựa vào tính chất dịch rỉ viêm, như viêm thanh dịch, viêm tự huyết và viêm mủ.
Viêm có thể được phân loại thành hai loại: viêm đặc hiệu và viêm không đặc hiệu Viêm đặc hiệu xảy ra do phản ứng miễn dịch không thuận lợi, trong khi viêm không đặc hiệu không liên quan đến phản ứng này Mặc dù cơ chế gây viêm của hai loại này khác nhau, nhưng bản chất của chúng vẫn tương đồng.
Viêm được chia thành viêm cấp và viêm mạn, với viêm cấp diễn ra trong thời gian ngắn (vài phút đến vài ngày) và có đặc điểm tiết dịch chứa nhiều protein huyết tương cùng với sự xuất hiện của bạch cầu đa nhân trung tính Ngược lại, viêm mạn kéo dài từ vài ngày đến nhiều tháng hoặc năm, với đặc điểm mô học là sự xâm nhập của lympho - bào và đại thực bào, kèm theo tổn thương và sửa chữa mô Trong viêm cấp, phản ứng tức thời với tổn thương giúp huy động bạch cầu đến vị trí tổn thương để làm sạch vi khuẩn và mô hoại tử Tuy nhiên, bạch cầu cũng có thể kéo dài viêm và gây tổn thương mô do giải phóng enzym và các chất trung gian hóa học Viêm cấp có ba hiện tượng chính: làm dãn mạch và tăng lượng máu tới ổ viêm, thay đổi cấu trúc trong mạch để cho phép protein huyết tương ra ngoài, và di tản bạch cầu vào khu vực tổn thương Các triệu chứng như sưng, nóng, đỏ xuất hiện sớm, trong khi đau và rối loạn chức năng cơ quan thường xuất hiện muộn hơn, do tác động của hóa chất trung gian và bạch cầu thực bào Các hóa chất này, bao gồm LPS, TNF, IL-1, IL-6, IL-8, PG và NO, là nguyên nhân gây đau trong viêm, đặc biệt là viêm khớp.
1.3.1.6 Thuốc giảm đau a Thuốc giảm đau trung ương
Các opioid hoạt động bằng cách gắn vào các receptor opioid (μ, κ, δ), kích thích các receptor này thông qua việc cặp đôi với protein Gi Sự kích thích này ức chế adenylcyclase, giảm mở kênh Ca2+ và tăng hoạt động của kênh K+, dẫn đến tình trạng ưu cực Kết quả là, quá trình giải phóng các chất dẫn truyền thần kinh như chất P và acid glutamic bị ức chế, ngăn cản sự dẫn truyền xung động thần kinh.
* Các thuốc trong nhóm thuốc giảm đau trung ương
- Thuốc chủ vận trên receptor opioid:
+ Các opioid tự nhiên: morphin, codein,…
+ Các opioid tổng hợp: pethidin, methadon,
- Thuốc chủ vận - đối kháng hỗn hợp và chủ vận từng phần trên receptor opioid: pentazocin, nalorphin,, nalbuphil, butorphanol,… [25]
- Thuốc đối kháng đơn thuần trên receptor opioid: naloxon, naltrexon b Thuốc giảm đau ngoại vi
Thuốc hoạt động bằng cách giảm tổng hợp prostaglandin F2, từ đó làm giảm độ nhạy của dây thần kinh cảm thụ đối với các chất gây đau trong phản ứng viêm như bradykinin và serotonin.
Các thuốc trong nhóm: paracetamol, ibuprofel, indomethacin, diclofenac,…
TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU THUỐC Y HỌC CỔ TRUYỀN CÓ TÁC DỤNG GIẢM ĐAU TRÊN THẾ GIỚI VÀ TRONG NƯỚC
DỤNG GIẢM ĐAU TRÊN THẾ GIỚI VÀ TRONG NƯỚC
1.4.1 Tình hình nghiên cứu thuốc y học cổ truyền có tác dụng giảm đau trên thế giới
Một nghiên cứu năm 2008 đã xác định sáu hợp chất hoạt tính sinh học trong Cốt khí củ (Rhizoma et Radix Polygoni Cuspidati) thông qua phương pháp sắc kí, bao gồm polydatin, resveratrol, rhein, emodin, chrysophanol và Physcion Radix Polygoni cuspidaii có nhiều tác dụng dược lý, như kháng khuẩn, kháng virus, chống viêm, giảm đau, bảo vệ hệ tim mạch và gan, chống khối u, cũng như cải thiện miễn dịch.
Năm 2009, Devbhuti D và cộng sự đã nghiên cứu độc tính cấp và định tính sơ bộ các chất chiết xuất từ Dây đau xương Nghiên cứu được thực hiện trên chuột nhắt và chuột cống, xác định LD50 trong 24 giờ cho methanol và chất chiết xuất nước Kết quả cho thấy các chất chiết xuất này không độc khi sử dụng đường uống với liều lượng lên đến 3,5 g/kg.
Năm 2019, Hui Xiong và cộng sự đã tiến hành nghiên cứu về tác dụng của Kuan-Jin-Teng (Dây đau xương) trong việc chống viêm khớp trên chuột bị viêm khớp do collagen Nghiên cứu chỉ ra rằng Dây đau xương có khả năng ức chế sản xuất các cytokine tiền viêm như NO, TNF-α, IL-1β, và IL-6, đồng thời điều hòa đường truyền tín hiệu MAPK, từ đó cho thấy hiệu quả chống viêm khớp rõ rệt.
- 6 và điều chỉnh giảm con đường tín hiệu MAPK [30].
Năm 2019, Yang J.-L và cộng sự đã tiến hành nghiên cứu về tác dụng chống viêm của các hoạt chất trong Thiên niên kiện Nghiên cứu đã phân lập 19 sesquiterpenoids (1-19) với cấu trúc cacbocyclic khác nhau và đánh giá khả năng ức chế của chúng đối với mRNA COX-2 cùng với biểu hiện protein COX-2, chứng minh tác dụng chống viêm của Thiên niên kiện.
1.4.2 Tình hình nghiên cứu thuốc y học cổ truyền có tác dụng giảm đau trong nước
Năm 2011, Hoàng Thị Quế, Nguyễn Nhược Kim và Nguyễn Trần Thị Giáng Hương đã nghiên cứu tác dụng của bài thuốc Tam tý thang gia giảm, bao gồm các thành phần như độc hoạt, phòng phong, tần giao, bạch thược, xuyên khung, ngưu tất, quế chi, cam thảo, đương quy, hoàng kỳ, tục đoạn, đẳng sâm, phục linh, thục địa, tế tân và đỗ trọng, trong điều trị viêm khớp dạng thấp (VKDT) Kết quả nghiên cứu thực nghiệm cho thấy bài thuốc này có tính an toàn cao và có tác dụng giảm đau thông qua cơ chế trung ương và ngoại vi.
Năm 2014, Phan Phước Hiền và cộng sự đã nghiên cứu về độc tính bán trường diễn và tác dụng kháng viêm, giảm đau của cao phối hợp Thiên niên kiện và Bách bệnh Kết quả cho thấy cao phối hợp này có khả năng ức chế peroxid hóa lipid với IC50 là 751,5 µg/ml Độc tính cấp đường uống trên chuột nhắt trắng được xác định với liều LD0 = 21,5g cao/kg Sau 2 tháng sử dụng liều 2,15 g/kg (tương đương 1/10 LD0), không ghi nhận biểu hiện bất thường nào về độc tính, các chỉ số huyết học và chức năng gan - thận đều bình thường Cao phối hợp ở hai liều 1,075 g/kg và 2,15 g/kg có tác dụng giảm đau hiệu quả.
Năm 2017, Nguyễn Ngọc Thược và cộng sự đã tiến hành nghiên cứu đề tài
Nghiên cứu về độc tính cấp và tác dụng chống viêm, giảm đau của Cao lỏng TK1 cho thấy không xác định được LD50 khi sử dụng đường uống trên chuột nhắt trắng Liều cao nhất cho chuột uống trong 24 giờ là 300,0g dược liệu khô/kg thể trọng mà không ghi nhận độc tính cấp Cao lỏng TK1 có khả năng chống viêm hiệu quả đối với cả viêm cấp và viêm mạn, đồng thời thể hiện tác dụng chống viêm tương tự như corticoid Ngoài ra, nghiên cứu cũng chỉ ra rằng Cao lỏng TK1 có tác dụng giảm đau cả ở ngoại vi lẫn trung ương.
Năm 2018, nghiên cứu của Nguyễn Thị Như Qúy và cộng sự đã chỉ ra rằng bài thuốc “Thái Bình HV” có tác dụng chống viêm hiệu quả trên động vật thực nghiệm Cụ thể, Cao lỏng “Thái Bình HV” với liều lượng 11,9g/kg/ngày và 23,8g/kg/ngày cho thấy khả năng điều trị viêm khớp do tá chất Freund trên chuột cống trắng Ngoài ra, sản phẩm này cũng thể hiện tác dụng chống viêm cấp tính tốt trong mô hình gây phù chân chuột bằng Carragenan và tác dụng chống viêm mạn tính hiệu quả trong mô hình gây u hạt trên chuột cống trắng.
GIỚI THIỆU BÀI THUỐC “THÁI BÌNH HV”
1.5.1 Đặc điểm của bài thuốc
Bài thuốc "Thái Bình HV" được phát triển từ bài thuốc Nam truyền thống Thái Bình, một phương pháp chữa bệnh đã được ghi chép trong sách vở của nước ta.
“ Toa thuốc Đông y cổ truyền Việt Nam” của Bác sĩ Nguyễn Văn Hưởng (1906-
1998) và được Nguyễn Thị Như Quý bước đầu nghiên cứu đánh giá “Thái Bình HV” [35],
Bài thuốc này có tác dụng chống viêm và giảm đau, đã được sử dụng trong dân gian từ lâu để điều trị đợt cấp của viêm khớp Người dùng thường sắc uống mỗi ngày một thang để đạt hiệu quả tốt nhất.
Bài thuốc “Thái Bình HV” [36] gồm các vị thuốc của bài Thái Bình bỏ đi vị Phòng kỷ, gia thêm vị Cốt khí củ.
Ngũ gia bì chân chim Cortex Schefflera heptaphyllae 10g
Dây đau xương Caulis Tinosporae tomentosae 10g
Cốt khí củ Radix Polygoni cuspidaii 10g
Cam thảo dây Herba Abri precatorii 05g
Cà gai leo Radix et Ramulus Solani 10g
Củ khúc khắc Rhizoma Smilacis glabrae 10g
Thiên niên kiện Rhizoma Homalomenae 10g
- Công năng: khu phong trừ thấp, thông kinh hoạt lạc, mạnh gân cốt, bổ can, thận.
- Ứng dụng: điều trị viêm khớp, thoái hóa khớp, giải độc…
Bài thuốc Thái Bình HV kết hợp nhiều vị thuốc có tác dụng thanh nhiệt, giải độc và trừ phong thấp Củ khúc khắc giúp tiêu viêm và giảm đau, trong khi Cẩu tích và Thiên niên kiện bổ can thận, mạnh gân xương Dây đau xương phối hợp với các thành phần khác để khu phong và thư cân Ngũ gia bì chân chim, hay Sâm nam, không chỉ giúp khứ phong thấp mà còn bồi bổ cơ thể và tăng sinh lực Cốt khí củ có tác dụng hoạt huyết, tiêu viêm và giảm đau, trong khi Tỳ giải chuyên trị các bệnh lở loét và viêm khớp Cà gai leo hỗ trợ trừ phong thấp và giảm đau, còn Cam thảo Nam bổ trợ cho các vị thuốc khác Tất cả các thành phần này gộp lại mang lại tác dụng trừ phong thấp, thư cân hoạt lạc, mạnh gân xương và bổ can thận.
Về tác dụng dược lý của bài thuốc “Thái Bình HV”, bài thuốc được cấu tạo bởi bốn nhóm thuốc sau:
Nhóm một gồm các vị thuốc chống viêm và giảm đau hiệu quả mà không gây tăng cường cơn đau ban đầu, bao gồm Độc hoạt, Thương truật, Hoàng nàn, Mã tiền cùng với các vị thuốc như Cẩu tích, Tỳ giải, Củ khúc khắc, Thiên niên kiện và Dây đau xương (khoan cân đằng).
- Nhóm hai gồm các vị thuốc trừ thấp, giảm đau tiêu viêm như Cẩu tích, Tỳ giải, Củ khúc khắc, Cốt khí củ.
- Nhóm ba gồm các vị thuốc giải độc, giảm đau như Cà gai leo, Cam thảo dây,
Củ khúc khắc Ngoài ra, Cam thảo dây còn giảm đau theo kiểu co thắt cơ, cùng với
Củ khúc khắc có tác dụng tiêu viêm giảm đau kiểu corticoid.
Nhóm bốn vị thuốc bổ can thận và mạnh gân cốt, bao gồm Cẩu tích, Thiên niên kiện, và Ngũ gia bì chân chim, có tác dụng giảm đau hiệu quả cho những người bị thoái hóa xương khớp, phì đại đĩa đệm và gai đôi cột sống.
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
CHẤT LIỆU ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU
Cao nước chiết xuất từ bài thuốc “Thái Bình HV” (TBHV) theo tỉ lệ 1:1 (1ml dịch chiết tương đương 1g dược liệu của bài thuốc).
Bảng 2.1 Thành phần của bài thuốc “Thái Bình HV” (01 thang)
STT Tên dược liệu Tên khoa học Số lượng
3 Ngũ gia bì chân chim Cortex Schefflera heptaphyllae 10g
4 Dây đau xương Caulis Tinosporae tomentosae 10g
5 Cốt khí củ Radix Polygoni cuspidaii 10g
6 Cam thảo dây Herba Abri precatorii 05g
7 Cà gai leo Radix et Ramulus Solani 10g
8 Củ khúc khắc Rhizoma Smilacis glabrae 10g
9 Thiên niên kiện Rhizoma Homalomenae 10g
Các dược liệu trong bài thuốc được dùng dưới dạng dược liệu khô và đạt tiêu chuẩn trong Dược điển Việt Nam V [37].
Cao nước từ bài thuốc “TBHV” được chiết xuất với tỉ lệ 1:1, trong đó 1ml dịch chiết tương đương với 1g dược liệu Quá trình chiết xuất được thực hiện tự động tại khoa Dược của Bệnh viện Tuệ Tĩnh.
Thuốc được chiết xuất với tỷ lệ 1:1 và cô đặc thành cao có độ ẩm từ 15-20%, được pha chế phù hợp để chuột uống Bài thuốc “TBHV” có tổng trọng lượng dược liệu khô là 85g, dự kiến sử dụng cho một người nặng 50kg trong một ngày Liều dùng cho người được tính toán là 85g chia cho 50kg và 24 giờ.
= 1,70g/kg/24h Quy đổi ra liều dự kiến có tác dụng: Ở chuột cống trắng là 1,70 x 7
= 11,90g/kg/24h Ở chuột nhắt trắng là 20,4g/kg/24h
Chuột nhắt trắng chủng Swiss, cả 2 giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 18 – 22g do Ban chăn nuôi - Học viện Quân Y cung cấp.
Chuột được nuôi trong phòng thí nghiệm của Ban chăn nuôi động vật thí nghiệm – Học viện Quân Y từ 5-10 ngày trước khi tiến hành nghiên cứu Trong suốt quá trình nghiên cứu, chuột được cung cấp thức ăn chuẩn dành riêng cho chuột do Viện Vệ sinh dịch tế Trung ương cung cấp, và chúng được uống nước đun sôi để nguội một cách tự do.
2.1.2.2 Độc tính bán trường diễn
Chuột cống trắng Wistar, trọng lượng 180 ± 20 g, được cung cấp bởi Ban chăn nuôi – Học viện Quân Y, được nuôi trong phòng thí nghiệm để đảm bảo đáp ứng nhu cầu thí nghiệm ít nhất một tuần trước khi tiến hành Động vật được cho ăn theo tiêu chuẩn thức ăn cho động vật nghiên cứu và có nước sạch đun sôi để nguội uống tự do Hàng ngày, quá trình quan sát và ghi chép diễn biến kết quả thí nghiệm được thực hiện, với số lượng động vật mỗi loại được nêu cụ thể trong phần phương pháp nghiên cứu.
2.1.2.3 Mô hình giảm đau tại tổ chức viêm (Randall-Selitto Test)
Chuột cống trắng chủng Wistar trọng lượng 180g - 200g do Ban chăn nuôi –Học viện Quân Y cung cấp Chuột được nhịn đói 18h trước khi uống thuốc để tiến hành thí nghiệm.
ĐỊA ĐIỂM VÀ THỜI GIAN TIẾN HÀNH NGHIÊN CỨU
Bộ môn Dược lý – Học viện Quân Y
PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu thực nghiệm, có đối chiếu với nhóm chứng
Tính toán xác định LD50
Liều cao nhất không có chuột chết Liều thấp nhất gây chết 100% chuột
Uống cao đặc “Thái Bình HV” liều tăng dần trong cùng một thể tích
Chuột Cân nặng 180-200 gam Nhịn ăn qua đêm Chia 10 con/lô Cao đặc “Thái Bình HV”
Nghiên cứu xác định LD50 của thuốc “TBHV” trên chuột nhắt trắng được thực hiện bằng phương pháp Litchfield - Wilcoxon, tuân thủ hướng dẫn của WHO Trong thí nghiệm, chuột nhắt trắng được chia thành 6 lô, mỗi lô gồm 10 con.
Chuột được cho uống cao đặc “Thái Bình HV” với liều lượng tăng dần, 0,2ml/10g/lần, 3 lần/24 giờ, cách nhau 8 giờ Trong suốt quá trình thí nghiệm, chuột được nuôi dưỡng cẩn thận và theo dõi tình trạng chung như tập tính vận động, ăn uống, lông, da, niêm mạc và chất tiết Tỷ lệ chuột chết trong 72 giờ sau khi uống thuốc được ghi nhận, và chuột sống được theo dõi liên tục trong 7 ngày Cuối cùng, tiến hành phẫu tích để quan sát tình trạng các tạng ngay sau khi chuột chết và tất cả chuột còn sống nhằm xác định nguyên nhân gây độc.
Để tính toán LD50, cần xác định khoảng cách giữa liều cao nhất không gây tử vong cho chuột và liều thấp nhất gây chết 100% số chuột Số lượng chuột chết ở các mức liều trong khoảng này sẽ được sử dụng để tính toán LD50 được tính bằng phần mềm Excel và được xác minh lại bằng phương pháp Litchfield-Wilcoxon.
Sơ đồ 2.1 Sơ đồ nghiên cứu độc tính cấp
Theo dõi tình trạng chung, biểu hiện nhiễm độc trong 72 giờ và7 ngày sau khi uống thuốc.
- Phẫu tích đánh giá tất cả chuột chết (nếu có)
Lô 3: uống liều 35,7g dược liệu /kg/ngày × 1 lần (sáng) × 01 tháng
Mức độ hủy hoại tế bào gan
Lô 2: uống liều 11,9g dược liệu /kg/ngày × 1 lần (sáng) × 01 tháng
Các chỉ tiêu theo dõi trước, trong và sau quá trình nghiên cứu:
* Số chuột chết/có biểu hiện bất thường trong suốt 7 ngày và tỷ lệ chết trong vòng 72 giờ sau khi uống thuốc.
* Các chỉ số liên quan đến tình trạng chung của chuột: ăn, ngủ, vận động, bài tiết…
* Các chỉ số liên quan đến dấu hiệu nhiễm độc: nôn, co giật, kích động, bài tiết
2.3.2 Độc tính bán trường diễn
Nghiên cứu độc tính bán trường diễn trên chuột cống theo đường uống theo hướng dẫn của WHO đối với thuốc y học cổ truyền [39].
Chuột được chia làm 3 lô, mỗi lô 10 con, mỗi con nhốt riêng một chuồng:
- Lô 1 (n = 10): uống dung môi pha thuốc (nước cất) 3ml/kg/ngày.
- Lô 2 (n = 10): uống cao đặc “TBHV” liều 11,9g/kg/ngày (tương đương liều có tác dụng trên người, tính theo hệ số 7).
- Lô 3 (n = 10): uống cao đặc “TBHV” liều 35,7g/kg/ngày (liều gấp 3 lần lô trị 1). Chuột được uống nước hoặc thuốc thử trong 1 tháng, mỗi ngày một lần vào buổi sáng.
Sơ đồ 2.2 Sơ đồ nghiên cứu độc tính bán trường diễn
Các chỉ tiêu theo dõi trước, trong và sau quá trình nghiên cứu:
* Tình trạng chung, thể trọng của chuột cống.
* Đánh giá chức phận tạo máu: thông qua số lượng hồng cầu, hàm lượng hemoglobin, số lượng bạch cầu, số lượng tiểu cầu.
* Đánh giá chức năng gan: Thông qua định lượng một số enzym và chất chuyển hoá trong máu: ALT, AST, bilirubin toàn phần, albumin và cholesterol toàn phần.
* Đánh giá chức năng thận: Thông qua định lượng nồng độ creatinin huyết thanh.
Thời gian nghiên cứu: 1 tháng
Các thông số theo dõi được kiểm tra vào trước lúc uống thuốc, sau 2 tuần và sau 4 tuần uống thuốc.
* Đánh giá mô bệnh học:
- Sau 30 ngày uống thuốc, chuột cống được mổ để quan sát đại thể toàn bộ các cơ quan.
- Kiểm tra ngẫu nhiên cấu trúc vi thể gan, thận của 30% số chuột cống ở mỗi lô.
2.3.3 Nghiên cứu tác dụng giảm đau (Randall-Selitto Test)
Based on the research method developed by Randall and Selitto, and modified by Winter et al (1962), this information is presented in the publication "Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays" by Springer.
Chuột cống trắng được chia ngẫu nhiên thành 4 lô, mỗi lô 10 con Các chuột được nhịn đói 18h trước khi uống thuốc.
Chuột được điều trị bằng thuốc liên tục trong 3 ngày trước khi tiến hành gây phù viêm Vào ngày thứ 4, phù viêm cấp được tạo ra bằng cách tiêm 0,1 ml hỗn dịch Carrageenin 1% vào dưới da gan bàn chân chuột Sau 3 giờ kể từ khi tiêm, chuột sẽ được cho uống thuốc hoặc nước cất với liều lượng 5 ml/kg cân nặng.
+ Lô 1 (chứng sinh lý): uống nước cất.
+ Lô 2 (thuốc tham chiếu): uống Diclofenac sodium liều 15mg/kg.
+ Lô 3 (cao đặc TBHV liều 1): uống cao đặc Thái Bình HV liều 11,9g/kg.+ Lô 4 (cao đặc TBHV liều 2): uống cao đặc Thái Bình HV liều 23,8g/kg.
- Chuột uống thuốc 3 ngày liên tục, ngày 4 gây phù viêm, sau 3 giờ uống thuốc hoặc nước cất với cùng thể
Lô 4: uống cao đặc Thái Bình HV liều
Nghiên cứu đã đo ngưỡng đau bàn chân của chuột gây phù viêm với liều 23,8g/kg tại các thời điểm 30 phút, 60 phút, 90 phút và 120 phút sau khi sử dụng thuốc Kết quả cho thấy sự khác biệt trong ngưỡng đau bàn chân giữa các lô chuột được so sánh với nhau.
Lô 3: uống cao đặc Thái Bình HV liều 11,9g/kg
Lô 2: uống Diclofenac sodium liều
Lô 1: uống nước cất Cao đặc “Thái Bình HV” Đo ngưỡng đau bàn chân gây phù viêm của chuột bằng máy đo giảm đau áp lực bàn chân chuột (Paw Pressure Analgesy Meter) tại các thời điểm sau 30 phút, 60 phút, 90 phút và 120 phút sau dùng thuốc So sánh ngưỡng đau bàn chân chuột giữa các lô với nhau.
Sơ đồ 2.3 Sơ đồ nghiên cứu đánh giá tác dụng giảm đau
CÔNG CỤ VÀ PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU
2.4.1 Thuốc và hoá chất dùng trong nghiên cứu
Kít định lượng enzym và chất chuyển hoá trong máu bao gồm ALT, AST, bilirubin toàn phần, albumin, cholesterol toàn phần và creatinin của hãng Erba, được thực hiện trên máy sinh hoá bán tự động Erba của Ấn Độ.
- Các dung dịch xét nghiệm máu của hãng Horiba ABX, định lượng trên máy Horiba ABX Micros của Pháp.
- Các hoá chất xét nghiệm và làm tiêu bản mô bệnh học.
- Carrageenin 1%, Diclofenac sodium liều 15mg/kg (Số lô: KV692, ngày sản xuất: 3/2020, hạn sử dụng: 2/2022)
2.4.2 Máy móc và dụng cụ phục vụ nghiên cứu
- Cân điện tử của Nhật, độ chính xác 0,001gam.
- Kim đầu tù cho chuột uống thuốc.
- Cốc chia vạch, bơm kim tiêm 1ml.
- Máy đo giảm đau áp lực bàn chân chuột Paw Pressure Analgesy Meter.
XỬ LÝ SỐ LIỆU
Tất cả số liệu thu được đã được xử lý bằng phần mềm SPSS 20.0, áp dụng thuật toán ONE-WAY ANOVA để so sánh giá trị trung bình, với hậu kiểm bằng LSD Dữ liệu được trình bày dưới dạng MEAN ± SD, và sự khác biệt được coi là có ý nghĩa thống kê khi p < 0,05.
SAI SỐ VÀ CÁCH KHỐNG CHẾ SAI SỐ
- Sai số các phương pháp thu thập số liệu.
Để hạn chế tối đa các sai số trong quá trình thu thập, phân tích và xử lý số liệu, cần áp dụng nhiều phương pháp khác nhau Việc kiểm tra độ chính xác của dữ liệu ngay từ giai đoạn thu thập là rất quan trọng Sử dụng các công cụ phân tích tiên tiến giúp giảm thiểu sai sót trong quá trình xử lý Ngoài ra, việc đào tạo nhân viên về kỹ thuật và quy trình thu thập dữ liệu cũng góp phần nâng cao chất lượng dữ liệu Cuối cùng, việc thực hiện các biện pháp kiểm tra và xác minh định kỳ sẽ đảm bảo tính chính xác và tin cậy của số liệu.
+ Động vật nghiên cứu được lựa chọn tương đối đồng đều, khỏe mạnh, không có dị tật hay dấu hiệu bất thường.
+ Thời gian thực hiện các bước thí nghiệm giữa các lô chuột là thống nhất cùng một thời điểm.
Dữ liệu được thu thập một cách cẩn thận và chính xác bằng các thiết bị, máy móc tại phòng thí nghiệm được chuẩn hóa, đảm bảo độ chính xác cao.
+ Xử lý số liệu bằng phần mềm chuyên dụng trên máy tính.
+ Các tiêu chuẩn và chỉ tiêu rõ ràng để đưa ra kết quả chính xác và sát với mục tiêu
+ Lưu trữ số liệu, thông tin bằng sổ ghi chép, chụp ảnh.
ĐẠO ĐỨC TRONG NGHIÊN CỨU
Nghiên cứu được thực hiện trên chuột cống trắng, với số lượng động vật trong các mô hình thí nghiệm được hạn chế tối thiểu Mục tiêu là đảm bảo thu được kết quả đáng tin cậy và đủ để thực hiện các phân tích thống kê cần thiết.
Những chuột chết trong quá trình làm thí nghiệm (nếu có) và số chuột sau khi thí nghiệm hoàn thành đều được xử lý theo đúng quy định.
Việc lựa chọn và chăm sóc động vật thí nghiệm phải tuân thủ nghiêm ngặt "Hướng dẫn nội dung cơ bản thẩm định kết quả nghiên cứu tiền lâm sàng" của Bộ Y tế, đảm bảo tính chính xác và đáng tin cậy trong nghiên cứu thuốc tân dược, thuốc cổ truyền, vắc xin và sinh phẩm y tế.
KẾT QUẢ
3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA BÀI THUỐC THÁI BÌNH HV
BÀN LUẬN
4.1 Về độc tính cấp và bán trường diễn của bài thuốc Thái Bình HV
4.1.1 Về độc tính cấp của bài thuốc Thái Bình HV
Theo Tổ chức Y tế thế giới, tất cả các thuốc từ dược liệu, ngoại trừ những bài thuốc cổ truyền được chiết xuất theo phương pháp truyền thống, đều cần phải được đánh giá độc tính cấp và bán trường diễn trên động vật thực nghiệm trước khi tiến hành thử nghiệm trên người.
Theo định nghĩa của Hệ thống hòa hợp toàn cầu (Globally Harmonised System
Độc tính cấp (GHS) là những tác dụng không mong muốn xảy ra trong vòng 24 giờ sau khi sử dụng một chất Trong nghiên cứu, động vật thí nghiệm, thường là chuột, được cho dùng thuốc trong 24 giờ và sau đó được quan sát trong một tuần để xác định các triệu chứng độc Nghiên cứu bao gồm cả chuột đực và chuột cái, do đó, kết quả phản ánh sự tác động đến cả hai giới Đường đưa thuốc được sử dụng là đường uống, phù hợp với cách sử dụng dự kiến trên người.
Nghiên cứu không xác định được LD50 của Bài thuốc Thái Bình HV khi sử dụng qua đường uống trên chuột nhắt trắng Thử nghiệm cho thấy, với liều cao nhất là 375 g/kg thể trọng trong 24 giờ, không ghi nhận dấu hiệu độc tính cấp tính.
Liều dự kiến có tác dụng trên chuột nhắt trắng là 20,4 g/kg/24h Trong nghiên cứu, chuột đã uống liều lên đến 375 g/kg, gấp 18,38 lần liều dự kiến mà không có con nào chết và không xuất hiện biểu hiện bất thường Kết quả này chứng tỏ Bài thuốc Thái Bình HV có tính an toàn trong nghiên cứu đánh giá độc tính cấp tính qua đường uống ở chuột nhắt trắng.
4.1.2 Về độc tính bán trường diễn của bài thuốc Thái Bình HV
Nghiên cứu độc tính bán trường diễn được tiến hành bằng cách cho chuột cống trắng uống Bài thuốc Thái Bình HV hàng ngày trong 30 ngày Mỗi lô thí nghiệm gồm 10 con chuột, chia thành ba lô: một lô chứng sinh lý, một lô dùng thuốc với liều điều trị tương đương (gấp 7 lần liều ở người), và một lô dùng liều gấp 3 lần liều đầu Thiết kế này nhằm đảm bảo độ tin cậy và tuân thủ quy định của Bộ Y tế về đánh giá tính an toàn của thuốc, giúp xác định tính an toàn của chế phẩm trong các giai đoạn lâm sàng I và II.
Các chỉ tiêu đánh giá độc tính bán trường diễn bao gồm tình trạng chung, thay đổi thể trọng, chỉ số huyết học, chỉ số sinh hóa chức năng gan, thận và đặc điểm giải phẫu bệnh của gan, lách, thận Kết quả nghiên cứu độc tính bán trường diễn sau 30 ngày trên chuột cống trắng cho thấy những thông tin quan trọng về ảnh hưởng của chất độc đến sức khỏe của động vật thí nghiệm.
* Tình trạng chung và sự thay đổi thể trọng
Tình trạng chung và cân nặng của động vật thực nghiệm là các chỉ số quan trọng cần theo dõi trước và trong quá trình sử dụng thuốc Trong suốt nghiên cứu, chuột ở cả ba lô đều duy trì hoạt động bình thường, lông mượt, da niêm mạc khỏe mạnh, ăn uống ổn định và phân thành khuôn Sự phát triển cân nặng của chuột trong các lô cũng cho thấy sự bình thường.
* Ảnh hưởng của Bài thuốc Thái Bình HV đến chỉ số huyết học toàn phần (công thức máu ngoại vi).
Công thức máu ngoại vi là xét nghiệm quan trọng để đánh giá sức khoẻ, giúp phát hiện các biến đổi có thể phản ánh độc tính của thuốc lên tuỷ xương và các tế bào máu Nghiên cứu cho thấy không có sự khác biệt có ý nghĩa giữa các chỉ số như hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, thể tích trung bình hồng cầu, hematocrit và huyết sắc tố so với lô chứng và trước khi dùng thuốc (p > 0,05) Kết quả này khẳng định rằng chưa có dấu hiệu độc tính trên tuỷ xương và các tế bào máu ngoại vi.
* Ảnh hưởng của Bài thuốc Thái Bình HV đến gan, lách, thận
Gan, thận là những cơ quan dễ bị tổn thương trong quá trình dùng thuốc, do liên quan nhiều đến quá trình chuển hoá, thải trừ của thuốc.
Khi đưa thuốc vào cơ thể, thuốc có thể gây độc với gan, làm tổn thương gan.
Tổn thương tế bào gan dẫn đến sự gia tăng hoạt động của một số enzym gan trong huyết thanh, trong đó quan trọng nhất là hai enzym ALT (Alanin transaminase) và AST.
ALT là enzym chủ yếu ở gan, tập trung trong bào tương tế bào gan, và khi tế bào gan bị tổn thương, hoạt độ ALT trong máu tăng cao Trong khi đó, 2/3 lượng AST nằm trong ty thể và chỉ một phần nhỏ ở bào tương Khi tổn thương gan xảy ra, AST từ ty thể được giải phóng, dẫn đến sự gia tăng cả AST và ALT trong máu, nhưng mức tăng của ALT thường cao hơn và xuất hiện sớm hơn, trước khi có dấu hiệu vàng da Nghiên cứu cho thấy hoạt độ ALT và AST trong máu chuột sau khi uống Bài thuốc Thái Bình HV không khác biệt có ý nghĩa so với nhóm chứng, và không có sự khác biệt giữa các thời điểm 15 và 30 ngày sau khi uống thuốc.
Nghiên cứu cho thấy HV không gây tổn thương đến tế bào gan, điều này được xác nhận qua kết quả mô bệnh học và xét nghiệm hóa sinh máu Cả hai lô uống Bài thuốc Thái Bình HV đều cho thấy cấu trúc tế bào gan bình thường, với khoảng cửa và mạch máu không có dấu hiệu tổn thương vi thể, tương tự như lô chứng.
Albumin là protein huyết thanh quan trọng, giữ vai trò duy trì 70-80% áp lực thẩm thấu trong huyết tương và vận chuyển các chất nhỏ như bilirubin, acid béo và thuốc Gan tổng hợp albumin, do đó, tổn thương gan dẫn đến suy giảm chức năng và kém hấp thụ protein, ảnh hưởng đến nồng độ albumin trong máu Xét nghiệm nồng độ albumin có giá trị trong đánh giá tổn thương gan Nghiên cứu cho thấy Bài thuốc Thái Bình HV, ở cả hai liều dùng trong 30 ngày, không ảnh hưởng đến nồng độ albumin máu chuột, chứng tỏ chế phẩm này không độc hại cho gan và không làm giảm chức năng tổng hợp albumin.
Bilirubin là sản phẩm thoái hóa của hemoglobin, được tạo ra chủ yếu tại gan, lách và tuỷ xương Nghiên cứu này đánh giá chỉ số bilirubin toàn phần trong máu để xác định độc tính của thuốc đối với gan, bao gồm khả năng gây hủy hoại tế bào gan, tắc mật và suy giảm chức năng liên hợp của gan, tất cả đều có thể làm tăng bilirubin trong máu Ngoài ra, chỉ số này cũng giúp đánh giá tác động của thuốc đến đời sống hồng cầu, vì độc tố có thể gây tan máu, dẫn đến tăng bilirubin Kết quả nghiên cứu cho thấy chỉ số bilirubin trong máu ở mức bình thường, chứng tỏ chế phẩm không gây độc cho gan và không ảnh hưởng đến đời sống hồng cầu.
Cholesterol là một thành phần quan trọng của lipid máu, đóng vai trò thiết yếu trong hoạt động của tế bào thần kinh và sản xuất hormone, giúp cơ thể duy trì sức khỏe Cholesterol toàn phần chủ yếu được tổng hợp tại gan (75%) và tế bào thành ruột, và được sử dụng để đánh giá nguy cơ vữa xơ động mạch cũng như chẩn đoán và theo dõi các bệnh liên quan đến nồng độ cholesterol và rối loạn chuyển hóa lipid Nghiên cứu cho thấy bài thuốc Thái Bình HV không làm thay đổi chỉ số cholesterol toàn phần trong máu chuột thí nghiệm.
Thận là cơ quan dễ bị tổn thương khi sử dụng thuốc do chức năng thải trừ các chất qua nước tiểu Creatinin là chỉ số phổ biến nhất để đánh giá và theo dõi chức năng thận, vì nó là thành phần đạm trong máu ổn định, không bị ảnh hưởng bởi chế độ ăn uống hay thay đổi sinh lý, mà chỉ phụ thuộc vào khả năng đào thải của thận Khi cầu thận bị tổn thương, nồng độ creatinin trong máu sẽ tăng lên sớm và đáng tin cậy Trong thí nghiệm, nồng độ creatinin trong máu chuột uống Bài thuốc Thái Bình HV ở cả hai liều dùng sau 15 và 30 ngày không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng (p > 0,05) Kết quả này tương đồng với mô bệnh học thận, cho thấy cấu trúc vi thể và đại thể của thận chuột thí nghiệm vẫn bình thường như lô chứng.