TỔNG QUAN
XÁC ĐỊNH TÍNH AN TOÀN CỦA THUỐC Ở GIAI ĐOẠN TIỀN LÂM SÀNG
1.1.1 Xác định độc tính cấp
Thuốc phải đảm bảo an toàn và hiệu lực, với tính an toàn được xem là quan trọng hơn Độc tính là vấn đề hàng đầu trong nghiên cứu thuốc, và việc chứng minh an toàn của thuốc cần dựa vào nghiên cứu độc tính Thử độc tính tiền lâm sàng là một phần quan trọng trong phát triển dược phẩm, và thông tin này phải được cung cấp trước khi tiến hành thử nghiệm trên người Tại Việt Nam, nghiên cứu độc tính và độ an toàn của thuốc được quy định bởi Bộ Y tế, yêu cầu thử nghiệm độc tính cấp và bán trường diễn cho tất cả các chế phẩm y học cổ truyền không phải bài thuốc cổ phương.
Năm 1927, JW Trevan đã phát triển thử nghiệm LD50 nhằm ước tính hiệu lực ngộ độc tương đối của các loại thuốc và hóa chất Việc sử dụng cái chết làm "mục tiêu" trong thử nghiệm này cho phép so sánh các chất độc được phơi nhiễm cho cơ thể theo nhiều cách khác nhau.
Kể từ khi Trevan công bố tác phẩm đầu tay, các nhà khoa học đã nghiên cứu và phát triển nhiều phương pháp tiếp cận mới nhằm thử nghiệm LD50 một cách trực tiếp và nhanh chóng hơn.
LD, viết tắt của "Lethal Dose", đề cập đến liều lượng hóa chất gây tử vong cho 50% nhóm động vật thí nghiệm Chỉ số LD50 là công cụ đo lường độc tính cấp tính, phản ánh khả năng ngộ độc ngắn hạn của hóa chất Độc tính cấp tính thể hiện tác động xấu của hóa chất xảy ra nhanh chóng, thường ngay sau khi tiếp xúc hoặc sau 4 giờ tiếp xúc liên tục với hóa chất trong không khí.
"Tương đối sớm" được hiểu là khoảng thời gian từ vài phút đến 24 giờ hoặc khoảng 2 tuần, nhưng hiếm khi kéo dài hơn Do đó, giá trị của LD50 trở nên cần thiết và có ý nghĩa trong nghiên cứu khoa học.
Thử độc tính cấp là cần thiết để phân loại mức độ độc của thuốc, hỗ trợ điều trị ngộ độc cấp và xác định liều lượng cho các thử nghiệm độc tính tiếp theo Do đó, các phép thử này cần được thực hiện một cách chính xác và có hệ thống.
- Liều dung nạp tối đa;
- Liều gây ra độc tính có thể quan sát được;
- Liều thấp nhất có thể gây chết động vật thí nghiệm (nếu có);
- Liều LD50 gần đúng (nếu có thể xác định được);
Dưới đây là một số định nghĩa cụ thể:
Độc tính của thuốc đề cập đến những tác dụng không mong muốn và có hại cho cơ thể, có thể biểu hiện từ những triệu chứng nhẹ như thay đổi hành vi, buồn nôn và mẩn ngứa, đến những tác động nghiêm trọng hơn, thậm chí gây tử vong.
Độc tính cấp của thuốc đề cập đến mức độ độc hại xảy ra sau khi sử dụng thuốc một lần hoặc vài lần trong ngày Nghiên cứu độc tính cấp thường được tiến hành trên động vật thí nghiệm nhằm xác định liều chết trung bình, hay còn gọi là LD50, tức là liều lượng gây tử vong cho 50% số động vật trong các điều kiện nhất định.
Liều chết, ký hiệu là LD (lethal dose), là liều lượng thuốc gây tử vong cho động vật Khái niệm này chỉ được áp dụng thử nghiệm trên các con vật thí nghiệm, không được thử nghiệm trên con người.
Liều chết tuyệt đối, hay còn gọi là ALD (absolute lethal dose), được ký hiệu là LD100, là liều tối thiểu gây tử vong cho 100% số lượng động vật thí nghiệm Nếu sử dụng liều cao hơn LD100, tất cả các động vật sẽ đều chết.
Liều chết trung bình, hay còn gọi là MLD (mean lethal dose), thường được ký hiệu là LD50, là liều lượng cần thiết để gây tử vong cho 50% số lượng động vật thí nghiệm.
Liều chết tối thiểu (LD) được xác định dựa trên số lượng động vật thử nghiệm và tỷ lệ tử vong Cụ thể, nếu trong một nhóm 20 con vật có một con chết, liều này tương ứng với LD5, tức là liều gây chết 5% Tương tự, nếu có một con chết trong nhóm 4 con, liều đó sẽ là LD25, tương ứng với liều gây chết 25% Các thông số này giúp đánh giá độ độc hại của các chất thử nghiệm.
Liều dưới liều chết (ILD), hay còn gọi là liều dung nạp tối đa (MTD), được ký hiệu là LD0, là liều lớn nhất mà không gây chết cho động vật Mặc dù liều MTD có thể gây ra độc tính nhẹ hoặc nặng, nhưng vẫn không dẫn đến tử vong cho chúng.
- Liều an toàn: là mức liều cao nhất mà không gây ra bất kỳ tai biến nào có thể quan sát được (NOAEL: no obsered adverse effect level)
Những triệu chứng ngộ độc điển hình có thể quan sát được trên động vật và khả năng hồi phục (nếu có) [6]
1.1.1.2 Độ ng v ậ t th ự c nghi ệ m Động vật nghiên cứu: thử ít nhất trên 2 loài động vật có vú, trong đó có một loài không gặm nhấm Tùy điều kiện, có thể chấp nhận thử độc tính cấp trên một loài động vật
- Loài gặm nhấm thường sử dụng là chuột nhắt, chuột cống
- Loài không gặm nhấm có thể dùng là chó hoặc khỉ
Nên sử dụng số lượng động vật thí nghiệm nhỏ nhất, tùy theo mô hình áp dụng (thường là 3 đến 5 con/mức liều) [7]
Có nhiều phương pháp sử dụng thuốc như đường uống, tiêm bắp, tiêm dưới da, tiêm phúc mạc và tiêm tĩnh mạch Phương pháp tốt nhất là lựa chọn cách sử dụng phù hợp với lâm sàng sau này Khi cho thuốc uống bằng ống xông, cần chú ý không để thuốc vào khí quản, vì điều này có thể gây chết chuột mà không phải do tác dụng độc của thuốc.
TỔNG QUAN VỀ CÁC MÔ HÌNH NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG GIẢM ĐAU
Để nghiên cứu tác dụng giảm đau trên động vật thực nghiệm, có nhiều phương pháp khác nhau được áp dụng Việc lựa chọn mô hình nghiên cứu phù hợp phụ thuộc vào mục đích của nghiên cứu Dưới đây là một số mô hình nghiên cứu về tác dụng giảm đau đang được sử dụng trong thực nghiệm.
1.2.1 Nghiên cứu tác dụng giảm đau trung ương
Nghiên cứu tác dụng giảm đau trên mô hình gây đau bởi phiến nóng (Hotplate)
Dựa theo phương pháp nghiên cứu của Baker và cộng sự, chuột nhắt trắng được chia ngẫu nhiên thành 4 lô để uống thuốc và thuốc thử Thí nghiệm được thực hiện vào hai thời điểm: trước và sau 5 ngày khi chuột uống thuốc thử Vào ngày thứ 5, sau khi chuột uống thuốc 1 giờ, chuột được đặt lên mâm nóng có nhiệt độ ổn định 56°C của Máy đo đau bản nóng, lạnh Thời gian chịu đau của chuột được tính từ lúc đặt chân vào mâm nóng đến khi chuột liếm chân sau, nhằm đánh giá tác dụng giảm đau thông qua mức tăng thời gian chịu đau.
So sánh giữa các lô giúp xác định phần trăm kéo dài và thời gian đáp ứng Trong quá trình nghiên cứu, cần tiến hành kiểm tra trước khi uống thuốc, đồng thời loại bỏ những chuột phản ứng trong khoảng thời gian dưới 8 giây và sau đó.
1.2.2 Nghiên cứu tác dụng giảm ngoại biên a Nghiên cứu tác dụng giảm đau tại tổ chức viêm (Randall - Selitto Test)
Dựa trên phương pháp nghiên cứu của Randall và Selitto, chuột cống trắng được chia thành 4 lô ngẫu nhiên và được cho uống nước cất, Diclofenac sodium liều 20 mg/kg, thuốc nghiên cứu liều 1 và thuốc nghiên cứu liều 2 trong 5 ngày trước khi gây viêm Vào ngày thứ 5, gây phù viêm cấp bằng cách tiêm 0,1 ml dung dịch Carrageenin 1% dưới da gan bàn chân chuột Sau 3 giờ, chuột được cho uống thuốc thử hoặc nước cất với thể tích 5 ml/kg Ngưỡng đau bàn chân chuột được đo bằng máy đo giảm đau áp lực tại các thời điểm 30, 60, 90 và 120 phút sau khi dùng thuốc, sau đó so sánh giữa các lô Nghiên cứu cũng tiến hành kiểm tra tác dụng giảm đau theo mô hình gây đau quặn sử dụng acid acetic.
Theo phương pháp nghiên cứu của Koster và cs (1959) [17] Chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên làm 4 lô, mỗi lô được uống lần lượt nước cất, Diclofenac sodium liều
20 mg/kg, thuốc nghiên cứu liều dự kiến có tác dụng, thuốc nghiên cứu gấp đôi liều
1 Chuột được uống thuốc thử hoặc nước cất 5 ngày liên tục Ngày thứ 5, sau khi dùng thuốc 60 phút, tiến hành gây đau quặn bằng cách tiêm phúc mạc bằng dung dịch acid acetic 0,6% liều 0,1 ml/10g thể trọng Sau khi tiêm acid acetic vào ổ bụng, ở tất cả các chuột đều có những cơn đau quặn với biểu hiện thóp bụng lại, áp bụng xuống sàn, duỗi dài thân và chân sau Thời gian xuất hiện đau (tính từ lúc tiêm acid acetic đến khi có cơn đau quặn đầu tiên) và đếm số cơn đau quặn trong từng khoảng thời gian 5 phút cho đến kết thúc 20 phút sau tiêm acid acetic được ghi lại đối với từng chuột trong mỗi lô So sánh kết quả giữa các lô nghiên cứu, tính % ức chế đau quặn theo công thức:
A% là tỷ lệ giảm cơn đau quặn ở lô thử thuốc, trong khi Dc đại diện cho số cơn đau quặn ở lô chứng sinh lý và Dt là số cơn đau quặn ở lô thử thuốc.
Trong phạm vi và giới hạn của đề tài, chúng tôi lựa chọn mô hình Randall -
Selitto Test do tính đơn giản, dễ tiến hành và có tính chính xác cao.
ĐAU THEO Y HỌC HIỆN ĐẠI VÀ Y HỌC CỔ TRUYỀN
1.3.1 Đau theo y học hiện đại
Theo Hiệp hội Quốc tế Nghiên cứu về Đau (IASP), đau được định nghĩa là cảm nhận giác quan và xúc cảm do tổn thương thực tế hoặc tiềm tàng ở các mô Mức độ đau phụ thuộc vào mức độ nghiêm trọng của tổn thương, và cảm giác đau có thể phát sinh từ bất kỳ điểm nào trên đường dẫn truyền đau.
Theo Geissner và Wurtele, đau theo sinh lý học thần kinh là một khái niệm trừu tượng, chịu ảnh hưởng bởi các yếu tố như cơ địa, cảm xúc và khả năng chịu đựng khác nhau của từng bệnh nhân.
Cảm giác đau là một trải nghiệm phức tạp, thông báo cho não về những kích thích có hại cho cơ thể Đau không chỉ là cảm giác mà còn liên quan đến cảm xúc, xuất phát từ tổn thương thực tế hoặc tiềm tàng Đau mang tính chủ quan, chịu ảnh hưởng bởi kinh nghiệm sống, truyền thống, văn hóa và tôn giáo Nó có thể xuất hiện ở nhiều vị trí trong cơ thể với các đặc điểm khác nhau như đau nông, đau sâu, đau âm ỉ, hoặc đau chói Đau cũng là triệu chứng phổ biến trong nhiều bệnh lý và có thể giúp chẩn đoán bệnh dựa vào tính chất của nó.
Cảm giác đau cấp được truyền qua sợi Aγ có myelin với tốc độ 6 - 30 mét/giây, trong khi cảm giác đau mạn được truyền qua sợi C không myelin với tốc độ 0,5 - 2 mét/giây Việc ức chế sợi Aγ sẽ làm mất cảm giác đau cấp, trong khi ức chế sợi C bằng thuốc tê tại chỗ sẽ làm mất cảm giác đau chậm Trong tủy sống, các nơron này có thể đi lên hoặc xuống từ 1 đến 3 đốt tủy và tận cùng ở chất xám sừng sau Nơron thứ hai sẽ bắt chéo sang cột trắng trước - bên đối diện và tiếp tục lên não qua nhiều đường, bao gồm bó tủy sống.
Đồi thị và bó tuỷ sống có cấu tạo lưới tận cùng tại hành não, cầu não và não giữa ở cả hai bên Từ cấu trúc lưới này, nhiều nơron kết nối tới các nhân của đồi thị và một số vùng ở nền não, đồng thời có những sợi nơron đi lên để kích thích hoạt động của vỏ não.
Nơron thứ ba từ đồi thị lên nhiều vùng ở nền não và vùng cảm giác đau ở vỏ não [19]
1.3.1.3 Trung tâm nhậ n th ứ c c ảm giác đau Đường dẫn truyền cảm giác đau tận cùng ở cấu trúc lưới của thân não, trung tâm dưới vỏ như nhân lá trong của đồi thị và vùng S-I, S-II, vùng đỉnh, vùng trán của vỏ não Kích thích vào những vùng này gây cảm giác đau
Cấu trúc lưới và trung tâm dưới vỏ vừa có chức năng nhận thức đau vừa tạo ra các đáp ứng về tâm lý khi đau
Vỏ não có chức năng phân tích cảm giác đau tinh vi, phân biệt vị trí, đánh giá mức độ đau [19]
1.3.1.4 Phân loại đau a Theo cơ chế gây đau:
- Đau cảm thụ: là đau do tổn thương tổ chức (cơ, da, nội tạng…) gây kích thích vượt ngưỡng đau [20] Đau cảm thụ có 2 loại:
+ Đau thân thể: là đau do tổn thương mô da, cơ, khớp…
+ Đau nội tạng: là đau do tổn thương nội tạng
- Đau thần kinh: là chứng đau do những thương tổn nguyên phát hoặc những rối loạn chức trong hệ thần kinh gây nên Đau thần kinh chia 2 loại:
Đau thần kinh ngoại vi là tình trạng đau do tổn thương các dây hoặc rễ thần kinh, thường gặp trong các trường hợp như đau sau herpes, đau dây V, và bệnh thần kinh ngoại vi do đái tháo đường.
+ Đau thần kinh trung ương: do tổn thương não hoặc tuỷ sống
Đau hỗn hợp là loại đau bao gồm cả cơ chế đau cảm thụ và đau thần kinh Đau cấp tính là đau mới xuất hiện với cường độ mạnh mẽ, thường được coi là dấu hiệu báo động hữu ích Nó giúp chẩn đoán để xác định liệu chứng đau có nguồn gốc thực thể hay không, và thường kéo dài dưới 3 tháng Các loại đau cấp tính rất đa dạng và có ý nghĩa quan trọng trong việc đánh giá tình trạng sức khỏe.
- Đau mạn tính: là chứng đau dai dẳng tái đi tái lại nhiều lần
+ Đau khung chậu mạn tính
+ Đau do nguyên nhân thần kinh… [21], [22], [23]
1.3.1.5 Cơ chế đau do viêm
Viêm là phản ứng tự nhiên của cơ thể tại mô liên kết, xuất hiện ở mọi cơ quan, nhằm loại trừ tác nhân gây viêm và sửa chữa tổn thương Quá trình này thường đi kèm với những biểu hiện bệnh lý và thay đổi mạch máu, cùng sự tham gia của hệ thần kinh để đưa các tế bào thực bào đến vị trí viêm Mặc dù viêm đóng vai trò bảo vệ cơ thể trước các yếu tố gây bệnh, nhưng nó cũng có thể gây ra tổn thương, hoại tử và rối loạn chức năng cơ quan, đôi khi ở mức độ nghiêm trọng và nguy hiểm.
Hiện nay, viêm được phân loại theo nhiều tiêu chí khác nhau, mỗi loại mang lại lợi ích riêng Các cách phân loại bao gồm: dựa vào nguyên nhân, với viêm khớp nhiễm khuẩn và viêm khớp vô khuẩn; dựa vào vị trí, phân chia thành viêm nông và viêm sâu; và dựa vào tính chất dịch rỉ viêm, như viêm thanh dịch, viêm tự huyết và viêm mủ.
Viêm được chia thành hai loại chính: viêm đặc hiệu và viêm không đặc hiệu Viêm đặc hiệu xảy ra do phản ứng miễn dịch không thuận lợi, trong khi viêm không đặc hiệu không liên quan đến phản ứng này Mặc dù hai loại viêm này khác nhau về cơ chế gây ra, nhưng bản chất của chúng vẫn giống nhau.
Viêm được phân chia thành hai loại chính: viêm cấp và viêm mạn Viêm cấp có thời gian diễn biến ngắn, từ vài phút đến vài ngày, với đặc điểm tiết dịch chứa nhiều protein huyết tương và sự xuất hiện của bạch cầu đa nhân trung tính Ngược lại, viêm mạn kéo dài từ vài ngày đến nhiều tháng hoặc năm, thể hiện qua sự xâm nhập của lympho-bào và đại thực bào, cùng với tổn thương và quá trình sửa chữa, bao gồm sự tăng sinh của mạch máu và mô xơ.
Trong viêm cấp, có sự đáp ứng nhanh chóng đối với tổn thương, với chức năng chính là huy động bạch cầu tới vị trí tổn thương để làm sạch vi khuẩn và các tác nhân gây viêm, đồng thời tiêu hủy mô hoại tử Tuy nhiên, bạch cầu cũng có thể kéo dài viêm và gây tổn thương mô do giải phóng enzym, chất trung gian hóa học và gốc oxy độc Viêm cấp gồm ba hiện tượng chính: làm dãn mạch để tăng lượng máu tới ổ viêm, thay đổi cấu trúc mạch để cho phép protein huyết tương ra khỏi mạch máu, và di tản bạch cầu từ vi tuần hoàn vào nơi tổn thương Các triệu chứng như sưng, nóng và đỏ xuất hiện sớm, trong khi đau và rối loạn chức năng cơ quan thường xuất hiện muộn hơn do tác động của hóa chất trung gian và bạch cầu thực bào Các hóa chất trung gian trong viêm bao gồm các chất gây viêm như LPS của vi khuẩn và TNF.
IL -1, IL -6, IL – 8, PG, NO, những chất này là nguyên nhân dẫn đến đau trong viêm nói chung và viêm khớp nói riêng [24]
1.3.1.6 Thu ố c gi ảm đau a Thuốc giảm đau trung ương
Các opioid hoạt động bằng cách gắn vào các receptor opioid (μ, κ, δ), kích thích các receptor này và gây ức chế adenylcyclase Tất cả các receptor opioid đều kết hợp với protein Gi, dẫn đến việc ức chế mở kênh Ca2+ và kích hoạt kênh K+ (tăng ưu cực) Điều này giúp ngăn chặn giải phóng các chất dẫn truyền thần kinh như chất P và acid glutamic, từ đó cản trở quá trình dẫn truyền xung động thần kinh.
* Các thuốc trong nhóm thuốc giảm đau trung ương
- Thuốc chủ vận trên receptor opioid:
+ Các opioid tự nhiên: morphin, codein,…
+ Các opioid tổng hợp: pethidin, methadon,
- Thuốc chủ vận - đối kháng hỗn hợp và chủ vận từng phần trên receptor opioid: pentazocin, nalorphin,, nalbuphil, butorphanol,… [25]
- Thuốc đối kháng đơn thuần trên receptor opioid: naloxon, naltrexon b Thuốc giảm đau ngoại vi
Thuốc hoạt động bằng cách giảm tổng hợp prostaglandin F2, từ đó làm giảm độ nhạy của dây thần kinh cảm thụ đối với các chất gây đau trong phản ứng viêm như bradykinin và serotonin.
Các thuốc trong nhóm: paracetamol, ibuprofel, indomethacin, diclofenac,…
TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU THUỐC Y HỌC CỔ TRUYỀN CÓ TÁC DỤNG GIẢM ĐAU TRÊN THẾ GIỚI VÀ TRONG NƯỚC
DỤNG GIẢM ĐAU TRÊN THẾ GIỚI VÀ TRONG NƯỚC
1.4.1 Tình hình nghiên cứu thuốc y học cổ truyền có tác dụng giảm đau trên thế giới
Nghiên cứu năm 2008 đã xác định sáu hợp chất hoạt tính sinh học trong Cốt khí củ (Rhizoma et Radix Polygoni Cuspidati) thông qua phương pháp sắc ký, bao gồm polydatin, resveratrol, rhein, emodin, chrysophanol và Physcion Radix Polygoni cuspidaii có nhiều tác dụng dược lý, như kháng khuẩn, kháng virus, chống viêm, giảm đau, bảo vệ hệ tim mạch, bảo vệ gan, chống khối u và cải thiện miễn dịch.
Năm 2009, Devbhuti D và cộng sự đã nghiên cứu độc tính cấp tính của các chất chiết xuất từ Dây đau xương, bao gồm methanol và chất chiết xuất từ nước, trên chuột nhắt và chuột cống Kết quả cho thấy LD50 trong 24 giờ của các chất chiết xuất này là không độc khi sử dụng đường uống với liều lượng lên đến 3,5 g/kg ở cả hai loại chuột.
Năm 2019, nghiên cứu của Hui Xiong và cộng sự đã chỉ ra rằng Kuan-Jin-Teng (Dây đau xương) có tác dụng chống viêm khớp hiệu quả trên chuột bị viêm khớp do collagen Cơ chế hoạt động của Dây đau xương là ức chế sản xuất các cytokine tiền viêm như NO, TNF-α, IL-1β và IL-17, đồng thời điều hòa đường truyền tín hiệu MAPK Kết quả này cho thấy tiềm năng của Dây đau xương trong việc điều trị viêm khớp.
- 6 và điều chỉnh giảm con đường tín hiệu MAPK [30]
Năm 2019, Yang J.-L và cộng sự đã nghiên cứu tác dụng chống viêm của các hoạt chất trong Thiên niên kiện, phát hiện 19 sesquiterpenoids với cấu trúc cacbocyclic khác nhau Các hoạt chất này được phân lập và đánh giá khả năng ức chế mRNA COX-2 cũng như biểu hiện protein COX-2, cho thấy tác dụng chống viêm rõ rệt của Thiên niên kiện.
1.4.2 Tình hình nghiên cứu thuốc y học cổ truyền có tác dụng giảm đau trong nước
Năm 2011, Hoàng Thị Quế, Nguyễn Nhược Kim và Nguyễn Trần Thị Giáng Hương đã nghiên cứu tác dụng của bài thuốc Tam tý thang gia giảm, bao gồm các thành phần như độc hoạt, phòng phong, tần giao, bạch thược, xuyên khung, ngưu tất, quế chi, cam thảo, đương quy, hoàng kỳ, tục đoạn, đẳng sâm, phục linh, thục địa, tế tân và đỗ trọng, trong điều trị viêm khớp dạng thấp (VKDT) Kết quả nghiên cứu thực nghiệm cho thấy bài thuốc này có tính an toàn cao và có tác dụng giảm đau thông qua cơ chế trung ương và ngoại vi.
Năm 2014, Phan Phước Hiền và cộng sự đã thực hiện nghiên cứu về độc tính bán trường diễn và tác dụng kháng viêm, giảm đau của cao phối hợp Thiên niên kiện và Bách bệnh Kết quả cho thấy cao phối hợp này ức chế peroxid hóa lipid với IC50 là 751,5 àg/ml Độc tính cấp đường uống trên chuột nhắt trắng được xác định với liều LD0 = 21,5g cao/kg thể trọng Sau 2 tháng sử dụng liều 2,15 g/kg (1/10 LD0), không ghi nhận biểu hiện bất thường về độc tính, các chỉ số huyết học và chức năng gan - thận đều bình thường Hai liều 1,075 g/kg và 2,15 g/kg cho thấy tác dụng giảm đau hiệu quả.
Năm 2017, Nguyễn Ngọc Thược và cộng sự đã tiến hành nghiên cứu đề tài
Nghiên cứu về độc tính cấp và tác dụng chống viêm, giảm đau của Cao lỏng TK1 cho thấy không phát hiện LD50 khi sử dụng đường uống trên chuột nhắt trắng Liều tối đa an toàn cho chuột là 300,0g dược liệu khô/kg thể trọng trong 24 giờ mà không gây độc tính Cao lỏng TK1 có khả năng chống viêm hiệu quả đối với cả viêm cấp và viêm mạn, đồng thời thể hiện tác dụng chống viêm tương tự như corticoid Ngoài ra, nghiên cứu cũng chỉ ra Cao lỏng TK1 có tác dụng giảm đau cả ở ngoại vi lẫn trung ương.
Năm 2018, nghiên cứu của Nguyễn Thị Như Qúy và cộng sự đã chỉ ra rằng bài thuốc “Thái Bình HV” có tác dụng chống viêm hiệu quả trên động vật thực nghiệm Cụ thể, Cao lỏng “Thái Bình HV” với liều lượng 11,9g/kg/ngày và 23,8g/kg/ngày cho thấy khả năng điều trị viêm khớp do tá chất Freund ở chuột cống trắng Ngoài ra, bài thuốc này cũng thể hiện tác dụng chống viêm cấp tốt khi gây phù chân chuột bằng Carragenan và hiệu quả chống viêm mạn tính trong mô hình gây u hạt trên chuột cống trắng.
GIỚI THIỆU BÀI THUỐC “THÁI BÌNH HV”
1.5.1 Đặc điểm của bài thuốc
Bài thuốc “Thái Bình HV” được phát triển từ bài thuốc Nam Thái Bình, một phương pháp y học cổ truyền của Việt Nam Thông tin về bài thuốc này được ghi chép trong sách “Toa thuốc Đông y cổ truyền Việt Nam” của Bác sĩ Nguyễn Văn Hưởng (1906-1998) và được Nguyễn Thị Như Quý tiến hành nghiên cứu, đánh giá ban đầu.
Bài thuốc này có tác dụng chống viêm và giảm đau trên động vật thực nghiệm Được áp dụng trong dân gian từ lâu đời, nó được sử dụng để điều trị đợt cấp của viêm khớp, với liều sắc uống mỗi ngày một thang.
Bài thuốc “Thái Bình HV” [36] gồm các vị thuốc của bài Thái Bình bỏ đi vị Phòng kỷ, gia thêm vị Cốt khí củ
Ngũ gia bì chân chim Cortex Schefflera heptaphyllae 10g
Dây đau xương Caulis Tinosporae tomentosae 10g
Cốt khí củ Radix Polygoni cuspidaii 10g
Cam thảo dây Herba Abri precatorii 05g
Cà gai leo Radix et Ramulus Solani 10g
Củ khúc khắc Rhizoma Smilacis glabrae 10g
Thiên niên kiện Rhizoma Homalomenae 10g
- Công năng: khu phong trừ thấp, thông kinh hoạt lạc, mạnh gân cốt, bổ can, thận
- Ứng dụng: điều trị viêm khớp, thoái hóa khớp, giải độc…
Bài thuốc Thái Bình HV kết hợp nhiều thảo dược có tác dụng thanh nhiệt, giải độc và giảm đau Củ khúc khắc giúp thanh nhiệt và trừ phong thấp, trong khi Cẩu tích và Thiên niên kiện bổ can thận, mạnh gân xương Dây đau xương hỗ trợ khu phong và thư cân hoạt lạc Ngũ gia bì chân chim, hay Sâm nam, không chỉ giúp khứ phong thấp mà còn bồi bổ cơ thể Cốt khí củ có tác dụng khu phong, hoạt huyết và giảm đau, trong khi Tỳ giải giải độc và trị lở loét Cà gai leo cũng hỗ trợ trong việc trừ phong thấp và giảm đau Cam thảo Nam giúp bồi bổ tỳ và hòa hoãn các vị thuốc khác Tất cả các thành phần này kết hợp lại mang lại hiệu quả trừ phong thấp, thư cân hoạt lạc, giảm đau, và bổ can thận.
Về tác dụng dược lý của bài thuốc “Thái Bình HV”, bài thuốc được cấu tạo bởi bốn nhóm thuốc sau:
Nhóm một bao gồm các vị thuốc chống viêm và giảm đau hiệu quả mà không gây ra tác dụng phụ đau tăng lên khi mới sử dụng, như Độc hoạt, Thương truật, Hoàng nàn, và Mã tiền Các vị thuốc trong nhóm này gồm Cẩu tích, Tỳ giải, Củ khúc khắc, Thiên niên kiện, và Dây đau xương (khoan cân đằng).
- Nhóm hai gồm các vị thuốc trừ thấp, giảm đau tiêu viêm như Cẩu tích, Tỳ giải,
Củ khúc khắc, Cốt khí củ
- Nhóm ba gồm các vị thuốc giải độc, giảm đau như Cà gai leo, Cam thảo dây,
Củ khúc khắc Ngoài ra, Cam thảo dây còn giảm đau theo kiểu co thắt cơ, cùng với
Củ khúc khắc có tác dụng tiêu viêm giảm đau kiểu corticoid
Nhóm bốn thuốc bổ can thận và mạnh gân cốt, bao gồm Cẩu tích, Thiên niên kiện, Ngũ gia bì chân chim, có tác dụng giảm đau hiệu quả do thoái hóa xương khớp, phì đại đĩa đệm và gai đôi cột sống.
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
CHẤT LIỆU ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU
Cao nước chiết xuất từ bài thuốc “Thái Bình HV” (TBHV) theo tỉ lệ 1:1 (1ml dịch chiết tương đương 1g dược liệu của bài thuốc)
Bảng 2.1 Thành phần của bài thuốc “Thái Bình HV” (01 thang)
STT Tên dược liệu Tên khoa học Số lượng
3 Ngũ gia bì chân chim Cortex Schefflera heptaphyllae 10g
4 Dây đau xương Caulis Tinosporae tomentosae 10g
5 Cốt khí củ Radix Polygoni cuspidaii 10g
6 Cam thảo dây Herba Abri precatorii 05g
7 Cà gai leo Radix et Ramulus Solani 10g
8 Củ khúc khắc Rhizoma Smilacis glabrae 10g
9 Thiên niên kiện Rhizoma Homalomenae 10g
Các dược liệu trong bài thuốc được dùng dưới dạng dược liệu khô và đạt tiêu chuẩn trong Dược điển Việt Nam V [37]
Cao nước được chiết xuất từ bài thuốc “TBHV” với tỉ lệ 1:1, nghĩa là 1ml dịch chiết tương đương 1g dược liệu Quá trình chiết xuất được thực hiện tự động tại khoa Dược của Bệnh viện Tuệ Tĩnh.
Thuốc được chiết xuất với tỷ lệ 1:1 và cô đặc thành cao có độ ẩm từ 15-20%, được pha chế để cho chuột uống Liều dùng được tính dựa trên gam dược liệu khô, với bài thuốc “TBHV” có tổng lượng dược liệu khô là 85g, dự kiến sử dụng cho một người nặng 50kg trong một ngày Tính toán liều dùng cho người là 1,70g/kg/24h, tương ứng với liều dự kiến có tác dụng trên chuột cống trắng là 11,90g/kg/24h và trên chuột nhắt trắng là 20,4g/kg/24h.
Chuột nhắt trắng chủng Swiss, cả 2 giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 18 – 22g do Ban chăn nuôi - Học viện Quân Y cung cấp
Chuột được nuôi trong phòng thí nghiệm của Ban chăn nuôi động vật thí nghiệm – Học viện Quân Y từ 5-10 ngày trước khi tiến hành nghiên cứu Trong suốt quá trình nghiên cứu, chuột được cung cấp thức ăn chuẩn dành riêng cho chuột, do Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương cung cấp, và có nước đun sôi để nguội để uống tự do.
2.1.2.2 Độc tính bán trườ ng di ễ n
Chuột cống trắng Wistar, với trọng lượng 180 ± 20 g, được cung cấp bởi Ban chăn nuôi - Học viện Quân Y Động vật được nuôi dưỡng trong môi trường thí nghiệm ít nhất một tuần trước khi tiến hành thí nghiệm, đảm bảo đáp ứng đầy đủ nhu cầu nghiên cứu Chúng được cho ăn theo tiêu chuẩn thức ăn cho động vật nghiên cứu và uống nước sạch đã đun sôi để nguội Hàng ngày, quá trình thí nghiệm được quan sát, theo dõi và ghi chép kết quả Số lượng động vật cho từng loại sẽ được nêu cụ thể trong phần phương pháp nghiên cứu.
2.1.2.3 Mô hình giảm đau tạ i t ổ ch ức viêm (Randall -Selitto Test)
Chuột cống trắng chủng Wistar trọng lượng 180g - 200g do Ban chăn nuôi – Học viện Quân Y cung cấp Chuột được nhịn đói 18h trước khi uống thuốc để tiến hành thí nghiệm.
ĐỊA ĐIỂM VÀ THỜI GIAN TIẾN HÀNH NGHIÊN CỨU
Bộ môn Dược lý – Học viện Quân Y
PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu thực nghiệm, có đối chiếu với nhóm chứng
Nghiên cứu xác định LD50 của thuốc “TBHV” trên chuột nhắt trắng bằng phương pháp Litchfield - Wilcoxon, tuân theo hướng dẫn của WHO Trong thí nghiệm, chuột nhắt trắng được chia thành 6 lô, mỗi lô gồm 10 con.
Chuột được cho uống cao đặc “Thái Bình HV” với liều lượng tăng dần, cụ thể là 0,2ml/10g/lần, 3 lần trong 24 giờ, cách nhau 8 giờ Trong suốt quá trình thí nghiệm, chuột được nuôi dưỡng cẩn thận và theo dõi tình trạng tổng quát về vận động, ăn uống, lông, da, niêm mạc, và chất tiết Tỷ lệ chuột chết trong 72 giờ sau khi uống thuốc được ghi nhận cho từng lô Sau đó, chuột tiếp tục được theo dõi trong 7 ngày Cuối cùng, tiến hành phẫu tích để quan sát tình trạng các tạng ngay sau khi chuột chết và tất cả chuột còn sống sau khi kết thúc thí nghiệm nhằm xác định nguyên nhân gây độc.
Để xác định LD50, chúng ta cần xác định khoảng cách giữa liều cao nhất không gây chết chuột và liều thấp nhất gây chết 100% số chuột Số chuột chết ở từng mức liều trong khoảng này sẽ được sử dụng để tính toán LD50 được tính bằng phần mềm Excel và được kiểm tra lại bằng phương pháp Litchfield-Wilcoxon.
Sơ đồ 2.1 Sơ đồ nghiên cứu độc tính cấp
Uống cao đặc “Thái Bình HV” liều tăng dần trong cùng một thể tích Liều thấp nhất gây chết 100% chuột
Cao đặc “Thái Bình HV”
Liều cao nhất không có chuột chết
Theo dõi tình trạng chung, biểu hiện nhiễm độc trong 72 giờ và7 ngày sau khi uống thuốc.
- Phẫu tích đánh giá tất cả chuột chết (nếu có) Tính toán xác định
Các chỉ tiêu theo dõi trước, trong và sau quá trình nghiên cứ u:
* Số chuột chết/có biểu hiện bất thường trong suốt 7 ngày và tỷ lệ chết trong vòng 72 giờ sau khi uống thuốc
* Các chỉ số liên quan đến tình trạng chung của chuột: ăn, ngủ, vận động, bài tiết…
* Các chỉ số liên quan đến dấu hiệu nhiễm độc: nôn, co giật, kích động, bài tiết
2.3.2 Độc tính bán trường diễn
Nghiên cứu độc tính bán trường diễn trên chuột cống theo đường uống theo hướng dẫn của WHO đối với thuốc y học cổ truyền [39]
Chuột được chia làm 3 lô, mỗi lô 10 con, mỗi con nhốt riêng một chuồng:
- Lô 1 (n = 10): uống dung môi pha thuốc (nước cất) 3ml/kg/ngày
- Lô 2 (n = 10): uống cao đặc “TBHV” liều 11,9g/kg/ngày (tương đương liều có tác dụng trên người, tính theo hệ số 7)
- Lô 3 (n = 10): uống cao đặc “TBHV” liều 35,7g/kg/ngày (liều gấp 3 lần lô trị 1) Chuột được uống nước hoặc thuốc thử trong 1 tháng, mỗi ngày một lần vào buổi sáng
Sơ đồ 2.2 Sơ đồ nghiên cứu độc tính bán trường diễn
Các chỉ tiêu theo dõi trước, trong và sau quá trình nghiên cứ u:
HV” Lô 1: uống nước cất
Lô 2: uống liều 11,9g dược liệu /kg/ngày × 1 lần (sáng) × 01 tháng
Lô 3: uống liều 35,7g dược liệu /kg/ngày × 1 lần (sáng) × 01 tháng
- Mức độ hủy hoại tế bào gan
* Tình trạng chung, thể trọng của chuột cống
* Đánh giá chức phận tạo máu: thông qua số lượng hồng cầu, hàm lượng hemoglobin, số lượng bạch cầu, số lượng tiểu cầu
* Đánh giá chức năng gan: Thông qua định lượng một số enzym và chất chuyển hoá trong máu: ALT, AST, bilirubin toàn phần, albumin và cholesterol toàn phần
* Đánh giá chức năng thận: Thông qua định lượng nồng độ creatinin huyết thanh
Thời gian nghiên cứu: 1 tháng
Các thông số theo dõi được kiểm tra vào trước lúc uống thuốc, sau 2 tuần và sau 4 tuần uống thuốc
* Đánh giá mô bệnh học:
- Sau 30 ngày uống thuốc, chuột cống được mổ để quan sát đại thể toàn bộ các cơ quan
- Kiểm tra ngẫu nhiên cấu trúc vi thể gan, thận của 30% số chuột cống ở mỗi lô
2.3.3 Nghiên cứu tác dụng giảm đau (Randall-Selitto Test)
Based on the research methodology developed by Randall and Selitto, as modified by Winter and colleagues in 1962, this study is detailed in the publication "Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays" by Springer.
Chuột cống trắng được chia ngẫu nhiên thành 4 lô, mỗi lô 10 con Các chuột được nhịn đói 18h trước khi uống thuốc
Chuột được điều trị bằng thuốc liên tục trong 3 ngày trước khi tiến hành gây phù viêm Vào ngày thứ 4, thực hiện gây phù viêm cấp bằng cách tiêm 0,1 ml hỗn dịch Carrageenin 1% (pha chế ngay trước khi tiêm) vào dưới da gan bàn chân chuột Sau 3 giờ từ khi tiêm Carrageenin, chuột sẽ được cho uống thuốc hoặc nước cất với thể tích 5 ml/kg cân nặng.
+ Lô 1 (chứng sinh lý): uống nước cất
+ Lô 2 (thuốc tham chiếu): uống Diclofenac sodium liều 15mg/kg
Lô 3 sử dụng cao đặc Thái Bình HV với liều 11,9g/kg, trong khi lô 4 sử dụng liều 23,8g/kg Để đo ngưỡng đau và tình trạng phù viêm ở bàn chân chuột, chúng tôi sử dụng máy đo giảm đau áp lực bàn chân chuột (Paw Pressure Analgesy Meter) tại các thời điểm 30 phút và 60 phút.
90 phút và 120 phút sau dùng thuốc So sánh ngưỡng đau bàn chân chuột giữa các lô với nhau
Sơ đồ 2.3 Sơ đồ nghiên cứu đánh giá tác dụng giảm đau
CÔNG CỤ VÀ PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU
2.4.1 Thuốc và hoá chất dùng trong nghiên cứu
Kít định lượng enzym và chất chuyển hoá trong máu bao gồm các chỉ số ALT, AST, bilirubin toàn phần, albumin, cholesterol toàn phần và creatinin Sản phẩm này được cung cấp bởi hãng Erba và được thực hiện trên máy sinh hoá bán tự động Erba của Ấn Độ.
- Các dung dịch xét nghiệm máu của hãng Horiba ABX, định lượng trên máy Horiba ABX Micros của Pháp
- Các hoá chất xét nghiệm và làm tiêu bản mô bệnh học
Cao đặc “Thái Bình HV”
Lô 2: uống Diclofenac sodium liều
Lô 3: uống cao đặc Thái Bình HV liều
Nghiên cứu đo ngưỡng đau bàn chân gây phù viêm của chuột với kết quả 11,9g/kg tại các thời điểm 30 phút, 60 phút, 90 phút và 120 phút sau khi sử dụng thuốc So sánh ngưỡng đau bàn chân giữa các lô chuột cho thấy sự khác biệt đáng kể.
Lô 4: uống cao đặc Thái Bình HV liều
- Chuột uống thuốc 3 ngày liên tục, ngày 4 gây phù viêm, sau 3 giờ uống thuốc hoặc nước cất với cùng thể tích 5 ml/kg cân nặng
- Carrageenin 1%, Diclofenac sodium liều 15mg/kg (Số lô: KV692, ngày sản xuất: 3/2020, hạn sử dụng: 2/2022)
2.4.2 Máy móc và dụng cụ phục vụ nghiên cứu
- Cân điện tử của Nhật, độ chính xác 0,001gam
- Kim đầu tù cho chuột uống thuốc
- Cốc chia vạch, bơm kim tiêm 1ml
- Máy đo giảm đau áp lực bàn chân chuột Paw Pressure Analgesy Meter.
XỬ LÝ SỐ LIỆU
Tất cả dữ liệu thu được đã được xử lý bằng phần mềm SPSS 20.0, áp dụng thuật toán ONE-WAY ANOVA để so sánh giá trị trung bình, với kiểm tra hậu kiểm bằng phương pháp LSD.
Số liệu được trình bày dưới dạng MEAN ± SD Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê khi p < 0,05.
SAI SỐ VÀ CÁCH KHỐNG CHẾ SAI SỐ
- Sai số các phương pháp thu thập số liệu
Để hạn chế tối đa các sai số trong quá trình thu thập, phân tích và xử lý số liệu, cần áp dụng các phương pháp hiệu quả như kiểm tra độ chính xác của dữ liệu, sử dụng công cụ phân tích phù hợp và thực hiện quy trình kiểm định chất lượng Việc đào tạo nhân viên về kỹ thuật thu thập dữ liệu cũng góp phần giảm thiểu sai sót Thêm vào đó, việc cập nhật thường xuyên các phần mềm và công nghệ hỗ trợ sẽ nâng cao tính chính xác trong quá trình xử lý số liệu.
+ Động vật nghiên cứu được lựa chọn tương đối đồng đều, khỏe mạnh, không có dị tật hay dấu hiệu bất thường
+ Thời gian thực hiện các bước thí nghiệm giữa các lô chuột là thống nhất cùng một thời điểm
Dữ liệu được thu thập một cách cẩn thận và chính xác thông qua các thiết bị và máy móc tại phòng thí nghiệm đạt tiêu chuẩn, đảm bảo độ chính xác cao.
+ Xử lý số liệu bằng phần mềm chuyên dụng trên máy tính
+ Các tiêu chuẩn và chỉ tiêu rõ ràng để đưa ra kết quả chính xác và sát với mục tiêu
+ Lưu trữ số liệu, thông tin bằng sổ ghi chép, chụp ảnh.
ĐẠO ĐỨC TRONG NGHIÊN CỨU
Nghiên cứu này được thực hiện trên chuột cống trắng với số lượng động vật thí nghiệm tối thiểu, nhằm đảm bảo độ tin cậy của kết quả và đủ điều kiện cho việc xử lý thống kê.
Những chuột chết trong quá trình làm thí nghiệm (nếu có) và số chuột sau khi thí nghiệm hoàn thành đều được xử lý theo đúng quy định
Việc lựa chọn động vật thí nghiệm, cũng như điều kiện nuôi dưỡng và chăm sóc, được thực hiện theo hướng dẫn nghiêm ngặt của Bộ Y tế Điều này đảm bảo rằng tất cả các quy trình liên quan đến động vật thí nghiệm đều tuân thủ "Hướng dẫn nội dung cơ bản thẩm định kết quả nghiên cứu tiền lâm sàng thuốc tân dược, thuốc cổ truyền, vắc xin và sinh phẩm y tế".
KẾT QUẢ
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG GIẢM ĐAU CỦA CAO ĐẶC THÁI BÌNH HV TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM
4.1 Về độc tính cấp và bán trường diễn của bài thuốc Thái Bình HV
4.1.1 V ề độ c tính cấ p c ủa bài thuốc Thái Bình HV
Theo Tổ chức Y tế thế giới, tất cả các thuốc từ dược liệu, trừ các bài thuốc cổ phương chiết xuất theo phương pháp truyền thống, đều cần phải được đánh giá độc tính cấp và bán trường diễn trên động vật thực nghiệm trước khi tiến hành thử nghiệm trên người.
3 Theo định nghĩa của Hệ thống hòa hợp toàn cầu (Globally Harmonised System
Độc tính cấp (GHS) đề cập đến các tác dụng không mong muốn xảy ra sau khi sử dụng một chất trong vòng 24 giờ Trong nghiên cứu, động vật thí nghiệm, thường là chuột, được cho dùng thuốc trong 24 giờ và theo dõi trong một tuần để xác định các triệu chứng độc hại nếu có Nghiên cứu bao gồm cả chuột đực và chuột cái, đảm bảo kết quả phản ánh đầy đủ cho cả hai giới Đường đưa thuốc được sử dụng là đường uống, phù hợp với phương pháp dự kiến áp dụng cho con người.
4 Kết quả nghiên cứu không xác định được LD50 của Bài thuốc Thái Bình HV theo đường uống trên chuột nhắt trắng Với mức liều cao nhất có thể cho chuột uống trong 24h là
375 g/kg thể trọng không xuất hiện độc tính cấp
5 Liều dự kiến có tác dụng trên chuột nhắt là chuột nhắt trắng là 20,4g/kg/24h Chuột đã uống đến liều 375 g/kg, gấp 18,38 lần liều dự kiến có tác dụng mà chuột không có con nào chết, cũng như không thấy có biểu hiện bất thường nào Kết quả này chứng tỏ Bài thuốc Thái Bình HV có tính an toàn trong nghiên cứu đánh giá độc tính cấp trên đường uống ở chuột nhắt trắng
4.1.2 V ề độc tính bán trườ ng di ễ n c ủa bài thuốc Thái Bình HV
6 Nghiên cứu độc tính bán trường diễn được thực hiện bằng cách cho động vật thí nghiệm uống thuốc thử hàng ngày liên tục trong một khoảng thời gian nhất định Độc tính bán trường diễn của Bài thuốc Thái Bình HV được thực hiện trên chuột cống trắng, số lượng chuột mỗi lô là 10, và gồm 3 lô: một lô chứng sinh lý; một lô dùng thuốc với mức liều tương đương mức liều dự kiến điều trị (quy đổi theo hệ số liều ở
BÀN LUẬN
4.1 Về độc tính cấp và bán trường diễn của bài thuốc Thái Bình HV
4.1.1 V ề độ c tính cấ p c ủa bài thuốc Thái Bình HV
Theo Tổ chức Y tế thế giới, tất cả các thuốc có nguồn gốc từ dược liệu, ngoại trừ các bài thuốc cổ phương chiết xuất theo phương pháp truyền thống, đều cần phải được đánh giá độc tính cấp và bán trường diễn trên động vật thực nghiệm trước khi tiến hành thử nghiệm trên người.
3 Theo định nghĩa của Hệ thống hòa hợp toàn cầu (Globally Harmonised System
Độc tính cấp (GHS) đề cập đến các tác dụng không mong muốn xảy ra trong vòng 24 giờ sau khi sử dụng một chất Trong nghiên cứu, động vật thí nghiệm, thường là chuột, được cho dùng thuốc trong 24 giờ và được theo dõi trong một tuần để xác định các triệu chứng độc hại Nghiên cứu bao gồm cả chuột đực và chuột cái, vì vậy kết quả phản ánh đầy đủ cả hai giới Đường đưa thuốc được sử dụng là đường uống, phù hợp với cách sử dụng dự kiến trên người.
Nghiên cứu không xác định được giá trị LD50 của Bài thuốc Thái Bình HV khi sử dụng theo đường uống trên chuột nhắt trắng Liều cao nhất có thể cho chuột uống trong vòng 24 giờ đã được ghi nhận.
375 g/kg thể trọng không xuất hiện độc tính cấp
Liều dự kiến có tác dụng trên chuột nhắt trắng là 20,4g/kg/24h Trong nghiên cứu, chuột đã uống liều lên đến 375 g/kg, gấp 18,38 lần liều dự kiến, nhưng không có con nào chết và không thấy biểu hiện bất thường Kết quả này chứng tỏ rằng Bài thuốc Thái Bình HV có tính an toàn khi đánh giá độc tính cấp trên đường uống ở chuột nhắt trắng.
4.1.2 V ề độc tính bán trườ ng di ễ n c ủa bài thuốc Thái Bình HV
Nghiên cứu độc tính bán trường diễn được thực hiện bằng cách cho chuột cống trắng uống thuốc thử hàng ngày trong 30 ngày Mỗi lô gồm 10 chuột, bao gồm một lô chứng sinh lý, một lô dùng liều điều trị dự kiến (gấp 7 lần liều ở người), và một lô dùng liều gấp 3 lần liều đầu tiên Thiết kế này nhằm đảm bảo độ tin cậy của nghiên cứu và tuân thủ quy định của Bộ Y tế về đánh giá tính an toàn của thuốc, giúp xác định tính an toàn của chế phẩm trong các giai đoạn lâm sàng I và II.
Các chỉ tiêu đánh giá độc tính bán trường diễn bao gồm tình trạng chung, thay đổi thể trọng, các chỉ số huyết học, chỉ số sinh hóa chức năng gan, thận và đặc điểm giải phẫu bệnh của gan, lách, thận Nghiên cứu độc tính bán trường diễn sau 30 ngày trên chuột cống trắng đã cho thấy những kết quả quan trọng.
8 * Tình trạng chung và sự thay đổi thể trọng
Tình trạng chung và cân nặng của động vật thực nghiệm là các chỉ số nghiên cứu quan trọng cần theo dõi trước và trong quá trình sử dụng thuốc Trong suốt nghiên cứu, chuột ở cả ba lô đều duy trì hoạt động bình thường, lông mượt, da niêm mạc khỏe mạnh, chế độ ăn uống ổn định và phân thành khuôn Sự phát triển cân nặng của chuột trong các lô cũng diễn ra bình thường.
* Ảnh hưởng của Bài thuốc Thái Bình HV đến chỉ số huyết học toàn phần (công thức máu ngoại vi)
Công thức máu ngoại vi là xét nghiệm quan trọng để đánh giá sức khỏe, phản ánh độc tính của thuốc lên tuỷ xương và các tế bào máu Nghiên cứu cho thấy không có sự khác biệt có ý nghĩa giữa các chỉ số như hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, thể tích trung bình hồng cầu, hematocrit và huyết sắc tố trước và sau khi dùng thuốc (p > 0,05) Kết quả này khẳng định chưa phát hiện độc tính trên tuỷ xương và các tế bào máu ngoại vi.
11 * Ảnh hưởng của Bài thuốc Thái Bình HV đến gan, lách, thận
12 Gan, thận là những cơ quan dễ bị tổn thương trong quá trình dùng thuốc, do liên quan nhiều đến quá trình chuển hoá, thải trừ của thuốc
13 Khi đưa thuốc vào cơ thể, thuốc có thể gây độc với gan, làm tổn thương gan
Tổn thương tế bào gan dẫn đến sự gia tăng hoạt độ của các enzym gan trong huyết thanh, đặc biệt là hai enzym quan trọng là ALT (Alanin transaminase) và AST.
ALT là enzym chủ yếu ở gan, tập trung trong bào tương tế bào gan, và hoạt động của nó tăng cao khi có tổn thương tế bào gan Ngược lại, 2/3 AST nằm trong ty thể và chỉ một phần nhỏ ở bào tương Khi có tổn thương tế bào gan, cả AST và ALT đều tăng, nhưng ALT thường tăng cao hơn và sớm hơn trước khi xuất hiện vàng da Nghiên cứu cho thấy hoạt độ ALT và AST trong máu chuột uống Bài thuốc Thái Bình HV không khác biệt so với lô chứng, cho thấy không có tổn thương tế bào gan sau 15 và 30 ngày sử dụng Kết quả mô bệnh học cũng xác nhận rằng cấu trúc tế bào gan ở cả hai lô uống Bài thuốc Thái Bình HV vẫn bình thường, không có dấu hiệu tổn thương vi thể.
Albumin là protein huyết thanh quan trọng, giữ 70-80% áp lực thẩm thấu trong huyết tương và vận chuyển các chất nhỏ như bilirubin và acid béo Gan tổng hợp albumin, vì vậy tổn thương gan làm giảm khả năng này, dẫn đến hấp thụ dinh dưỡng kém Xét nghiệm nồng độ albumin trong máu giúp đánh giá chức năng gan Nghiên cứu cho thấy Bài thuốc Thái Bình HV, sử dụng trong 30 ngày với cả hai liều, không ảnh hưởng đến chỉ số albumin máu chuột, chứng tỏ chế phẩm an toàn và không độc hại cho gan.
Bilirubin là sản phẩm thoái hóa của hemoglobin, chủ yếu được hình thành ở gan, lách và tuỷ xương Trong nghiên cứu này, chỉ số bilirubin toàn phần trong máu được sử dụng để đánh giá độc tính của thuốc đối với gan, bao gồm khả năng gây hủy hoại tế bào gan, tắc mật và suy giảm chức năng liên hợp Ngoài ra, chỉ số này cũng giúp xác định liệu thuốc có ảnh hưởng đến đời sống hồng cầu hay không, vì độc tính có thể dẫn đến tan máu và tăng bilirubin Kết quả cho thấy chỉ số bilirubin trong máu ở mức bình thường, cho thấy chế phẩm không gây độc cho gan và không ảnh hưởng đến hồng cầu.
Chỉ số cholesterol là thành phần quan trọng của lipid máu, đóng vai trò thiết yếu trong hoạt động của cơ thể, bao gồm chức năng của tế bào thần kinh và sản xuất hormone Cholesterol chủ yếu được tổng hợp tại gan (75%) và tế bào thành ruột, và có vai trò trong việc phát hiện nguy cơ vữa xơ động mạch cũng như chẩn đoán và theo dõi các bệnh liên quan đến nồng độ cholesterol và rối loạn chuyển hóa lipid Nghiên cứu cho thấy bài thuốc Thái Bình HV không làm thay đổi các chỉ số cholesterol toàn phần trong máu chuột nghiên cứu.
Thận là cơ quan thải trừ quan trọng, dễ bị tổn thương khi sử dụng thuốc, và creatinin là chỉ số chính để đánh giá chức năng thận Creatinin, một thành phần ổn định trong máu, chủ yếu phụ thuộc vào khả năng đào thải của thận Khi cầu thận bị tổn thương, nồng độ creatinin trong máu tăng lên sớm và đáng tin cậy Trong nghiên cứu, nồng độ creatinin ở chuột uống Bài thuốc Thái Bình HV không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng sau 15 và 30 ngày (p > 0,05) Kết quả này tương đồng với mô bệnh học thận, cho thấy cấu trúc vi thể và đại thể của thận ở chuột thí nghiệm vẫn bình thường như lô chứng.
Lách không chỉ đóng vai trò trong chức năng miễn dịch mà còn tham gia vào việc tiêu hủy các tế bào máu già cỗi Độc tính từ thuốc có thể ảnh hưởng đến huyết học và miễn dịch, và những tác động này thường dễ nhận thấy ở lách Qua quan sát đại thể và cấu trúc vi thể của lách chuột thực nghiệm trong hai lô uống Bài thuốc Thái Bình HV, kết quả cho thấy không có sự khác biệt so với lô chứng.