Luận văn thạc sĩ y học nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng giảm đau của bài thuốc thái bình hv trên động vật thực nghiệm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ HỌC VIỆN Y DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN VIỆT NAM NGUYỄN THỊ MAI LINH NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP, BÁN TRƯỜNG DIỄN VÀ TÁC DỤNG GIẢM ĐAU CỦA BÀI THUỐC THÁI BÌNH HV TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM th ạc sĩ Y họ c LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Lu ậ n vă n HÀ NỘI, NĂM 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ HỌC VIỆN Y DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN VIỆT NAM NGUYỄN THỊ MAI LINH NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP, BÁN TRƯỜNG DIỄN VÀ TÁC DỤNG GIẢM ĐAU CỦA BÀI THUỐC THÁI BÌNH HV TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC họ Mã số: 8720115 c Chuyên ngành: Y học cổ truyền Y Người hướng dẫn khoa học: TS.BS Trần Đức Hữu th ạc sĩ TS.DS Nguyễn Văn Quân Lu ậ n vă n HÀ NỘI, NĂM 2022 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN .3 1.1 XÁC ĐỊNH TÍNH AN TỒN CỦA THUỐC Ở GIAI ĐOẠN TIỀN LÂM SÀNG 1.1.1 Xác định độc tính cấp 1.1.2 Xác định độc tính bán trường diễn 1.2 TỔNG QUAN VỀ CÁC MƠ HÌNH NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG GIẢM ĐAU …………………………………………………………………………….10 1.2.1 Nghiên cứu tác dụng giảm đau trung ương 10 1.2.2 Nghiên cứu tác dụng giảm ngoại biên 11 1.3 ĐAU THEO Y HỌC HIỆN ĐẠI VÀ Y HỌC CỔ TRUYỀN 12 1.3.1 Đau theo y học đại .12 1.3.2 Tổng quan đau theo y học cổ truyền .16 1.4 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU THUỐC Y HỌC CỔ TRUYỀN CĨ TÁC DỤNG GIẢM ĐAU TRÊN THẾ GIỚI VÀ TRONG NƯỚC 18 1.4.1 Tình hình nghiên cứu thuốc y học cổ truyền có tác dụng giảm đau giới………… 18 1.4.2 Tình hình nghiên cứu thuốc y học cổ truyền có tác dụng giảm đau nước………… 19 1.5 GIỚI THIỆU BÀI THUỐC “THÁI BÌNH HV” 20 1.5.1 Đặc điểm thuốc .20 họ c 1.5.2 Phân tích thuốc 21 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 sĩ Y 2.1 CHẤT LIỆU ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 23 ạc 2.1.1 Chất liệu nghiên cứu 23 th 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu 24 n 2.2 ĐỊA ĐIỂM VÀ THỜI GIAN TIẾN HÀNH NGHIÊN CỨU .24 Lu ậ n vă 2.2.1 Địa điểm nghiên cứu 24 2.2.2 Thời gian nghiên cứu 24 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .24 2.3.1 Độc tính cấp 24 2.3.2 Độc tính bán trường diễn .26 2.3.3 Nghiên cứu tác dụng giảm đau (Randall-Selitto Test) 27 2.4 CÔNG CỤ VÀ PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 28 2.4.1 Thuốc hoá chất dùng nghiên cứu 28 2.4.2 Máy móc dụng cụ phục vụ nghiên cứu 29 2.5 XỬ LÝ SỐ LIỆU 29 2.6 SAI SỐ VÀ CÁCH KHỐNG CHẾ SAI SỐ 29 2.7 ĐẠO ĐỨC TRONG NGHIÊN CỨU .29 CHƯƠNG KẾT QUẢ 31 3.1 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP CỦA BÀI THUỐC THÁI BÌNH HV .31 3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA BÀI THUỐC THÁI BÌNH HV .31 3.3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG GIẢM ĐAU CỦA CAO ĐẶC THÁI BÌNH HV TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM .44 CHƯƠNG BÀN LUẬN 46 KẾT LUẬN ………………………………………………………………….… 56 KHUYẾN NGHỊ ………………………………………………………………… 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO Lu ậ n vă n th ạc sĩ Y họ c PHỤ LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Trong bệnh lý viêm khớp, gout, viêm khớp dạng thấp… đau triệu chứng xuất sớm phổ biến nhất, đau xuất bệnh lý tất hệ quan thể, đặc biệt bệnh lý xương khớp Chúng gây khó khăn sinh hoạt, làm việc làm giảm chất lượng sống Theo thống kê Tổ chức Y tế Thế giới WHO, viêm khớp bệnh lý phổ biến mà theo số liệu điều tra 100 người trưởng thành có từ 2-5 người bị mắc bệnh Đây bệnh lý xảy khớp thể người như: khớp cổ tay; khớp cổ chân; khớp đầu gối…Triệu chứng đặc trưng bệnh khớp bị sưng, nhức đau, khiến cho người bệnh gặp nhiều khó khăn sinh hoạt thường ngày, vận động di chuyển Bệnh xảy độ tuổi, nhiên người cao tuổi phụ nữ đối tượng dễ mắc bệnh Viêm khớp bao gồm viêm khớp cấp mạn tính Bệnh viêm khớp cấp tính khơng điều trị sớm, chế độ sinh hoạt hàng ngày không khoa học, bệnh nhanh chóng chuyển sang giai đoạn mãn tính Bệnh cần điều trị lâu dài theo dõi thường xuyên, tùy thuộc vào loại viêm khớp mà lựa chọn thuốc dùng để điều trị viêm khớp khác Các thuốc điều trị bao gồm nhóm thuốc DMARDs (Disease-modifying antirheumatic drugs) kinh điển (methotrexate, sulfasalazine, hydroxychloroquine ), thuốc cắt NSAIDs, corticoid nhằm giảm đau chống viêm nhanh chóng, nhiên nhược điểm nhóm thuốc có nhiều tác dụng khơng mong muốn, việc sử dụng kéo dài dễ dẫn tới nguy mắc bệnh lý như: viêm dày, xuất huyết tiêu hóa, lỗng c xương [1], [2], [3] Vì vậy, việc nghiên cứu thuốc chữa viêm khớp có hiệu họ điều trị cao tác dụng không mong muốn mục tiêu hàng đầu Y nhà y học sĩ Ngày nay, xu nghiên cứu thảo dược để sử dụng điều trị ngày ạc phổ biến giới, nước Châu Á mà khu vực Châu Âu Lu ậ n vă n th Từ nghiên cứu thành phần hóa học, tác dụng dược lý chứng minh thuốc y học cổ truyền có hiệu điều trị số bệnh lý phức tạp, mang lại lợi ích lớn cho người bệnh tác dụng khơng mong muốn, tốn Nhằm mục tiêu kết hợp Y học cổ truyền (YHCT) với Y học đại (YHHĐ), đại hóa Y Dược học cổ truyền, nghiên cứu bảo tồn, kế thừa sử dụng hiệu nguồn tài nguyên thuốc Việt Nam Bài thuốc Thái Bình - thuốc Nam kinh nghiệm nhân dân ta sử dụng lâu đời để chữa bệnh liên quan tới xương khớp có hiệu Bài thuốc có tác dụng chống viêm giảm đau động vật thực nghiệm Tuy nhiên chưa có nghiên cứu độc tính, độc tính bán trường diễn tác dụng giảm đau tổ chức viêm thuốc Thái Bình HV Đề tài "Nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn tác dụng giảm đau thuốc Thái Bình HV động vật thực nghiệm" với mục tiêu: Đánh giá độc tính cấp, bán trường diễn thuốc Thái Bình HV động vật thực nghiệm Đánh giá tác dụng giảm đau thuốc Thái Bình HV động vật thực Lu ậ n vă n th ạc sĩ Y họ c nghiệm CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 XÁC ĐỊNH TÍNH AN TỒN CỦA THUỐC Ở GIAI ĐOẠN TIỀN LÂM SÀNG 1.1.1 Xác định độc tính cấp 1.1.1.1 Mục tiêu Thuốc muốn sử dụng phải an toàn có hiệu lực Xét tổng thể tính an tồn cịn quan trọng hiệu lực, thuốc dù có hiệu lực đến đâu, khơng an tồn khơng sử dụng Trong nghiên cứu thuốc, vấn đề độc tính có tầm quan trọng hàng đầu Để chứng minh thuốc có an tồn phải nghiên cứu độc tính Thử độc tính tiền lâm sàng nội dung quan trọng nghiên cứu phát triển dược phẩm Thông tin độc tính thuốc cần cung cấp trước thực thử nghiệm người Do vậy, hầu hết chất dùng làm thuốc điều trị dự phòng chữa bệnh phải thử nghiệm xác định độc tính Tại Việt Nam, nghiên cứu độc tính độ an tồn thuốc quy định hướng dẫn Bộ y tế đánh giá tính an tồn tác dụng thuốc Theo quy định Bộ y tế, thử nghiệm độc tính cấp độc tính bán trường diễn bắt buộc tất chế phẩm y học cổ truyền thuốc cổ phương bào chế dạng truyền thống [4] Năm 1927, JW Trevan cố gắng để tìm cách để ước tính hiệu lực ngộ độc tương đối loại thuốc loại thuốc sử dụng thời điểm Ơng phát triển thử nghiệm LD50 việc sử dụng chết "mục tiêu" cho phép c so sánh hóa chất độc phơi nhiễm cho thể theo cách khác họ Kể từ tác phẩm đầu tay Trevan, nhà khoa học khác phát triển phương Y pháp tiếp cận khác để thử nghiệm LD50 trực tiếp hơn, nhanh sĩ LD viết tắt "Lethal Dose" LD50 liều lượng hoá chất phơi nhiễm ạc thời điểm, gây chết cho 50% (một nửa) nhóm động vật dùng Lu ậ n vă n cấp tính) hố chất th thử nghiệm LD50 cách thức đo lường khả ngộ độc ngắn hạn (độc tính Độ độc cấp tính khả hóa chất gây tác động xấu tương đối sớm sau uống sau tiếp xúc liên tục với hóa chất khơng khí "Tương đối sớm" thường định nghĩa khoảng thời gian phút, (lên đến 24) ngày (khoảng tuần) dài nên giá trị LD50 cần thiết có ý nghĩa khoa học Thử độc tính cấp nhằm cung cấp thơng tin cho việc xếp loại mức độ độc thuốc; điều trị ngộ độc cấp; thiết lập mức liều cho thử nghiệm độc tính [5] Do vậy, phép thử độc tính cấp cần xác định: - Liều an tồn; - Liều dung nạp tối đa; - Liều gây độc tính quan sát được; - Liều thấp gây chết động vật thí nghiệm (nếu có); - Liều LD50 gần (nếu xác định được); Dưới số định nghĩa cụ thể: - Độc tính thuốc: độc tính (toxicity) thuốc tính chất biểu tác dụng khơng mong muốn, có hại cho thể Độc tính thuốc nhẹ thay đổi hành vi, thay đổi vận động, buồn nơn, mẩn ngứa, nặng, chí gây chết - Độc tính cấp thuốc: độc tính cấp (acute toxicity) thuốc độc tính xảy sau dùng thuốc lần vài ba lần ngày Nghiên cứu độc tính cấp thuốc động vật thí nghiệm, mục đích xác định liều chết trung bình (mean lethal dose) tức liều làm chết 50% số vật thí nghiệm điều kiện định ký hiệu LD50 (lethal dose 50%) họ c - Liều chết: liều gây chết vật dùng thuốc, ký hiệu LD (lethal dose) Liều chết không áp dụng thử cho người mà thử vật thí nghiệm sĩ Y - Liều chết tuyệt đối: liều chết tuyệt đối viết tắt ALD (absolute lethal ạc dose), thường ký hiệu LD100 Đó liều nhỏ gây chết 100% vật thí th nghiệm Tất nhiên dùng liều cao LD100 tất vật bị chết - Liều chết trung bình: liều chết trung bình viết tắt MLD (mean lethal dose) Lu ậ n vă n thường ký hiệu LD50 Đó liều làm chết 50% số vật thí nghiệm - Liều chết tối thiểu: Liều chết tối thiểu liều thử lơ động vật thấy có chết Do thử 20 có chết liều chết tối thiểu liều gây chết 5% (LD5); chết 10% (LD10); thử có chết liều chết tối thiểu liều gây chết 25% (LD25) - Liều liều chết: liều liều chết (ILD: infralethal dose) gọi liều dung nạp tối đa (MTD: maximum tolerated dose) ký hiệu LD0 liều lớn nhất, không làm chết vật Liều MTD gây độc nhẹ nặng cho vật, khơng gây chết - Liều an tồn: mức liều cao mà không gây tai biến quan sát (NOAEL: no obsered adverse effect level) Những triệu chứng ngộ độc điển hình quan sát động vật khả hồi phục (nếu có) [6] 1.1.1.2 Động vật thực nghiệm Động vật nghiên cứu: thử lồi động vật có vú, có lồi khơng gặm nhấm Tùy điều kiện, chấp nhận thử độc tính cấp lồi động vật - Loài gặm nhấm thường sử dụng chuột nhắt, chuột cống - Lồi khơng gặm nhấm dùng chó khỉ Nên sử dụng số lượng động vật thí nghiệm nhỏ nhất, tùy theo mơ hình áp dụng (thường đến con/mức liều) [7] 1.1.1.3 Đường dùng Có thể dùng đường uống, tiêm bắp thịt, tiêm da, tiêm phúc mạc, tiêm tĩnh mạch Tốt dùng đường dự định dùng cho người lâm sàng sau Cho uống ống xông phải ý tránh cho thuốc vào khí quản chuột chết mà họ c tác dụng độc thuốc 1.1.1.4 Mức liều thử sĩ Y Tốt tính theo ml/kg cân nặng cho tất lô Nếu vậy, nồng độ thuốc ạc dùng cho lô khác phải khác Riêng với chuột nhắt trắng, dùng uống th thể tích dùng tốt 0,2-0,5 ml cho chuột nặng 20g Trường hợp buộc phải dùng thể tích lớn hơn, dùng đến thể tích 0,8-1 ml cho chuột 20g Lu ậ n vă n Nếu muốn cho uống thể tích lớn hơn, nên chia làm 2-3 lần uống ngày Cần ý dùng thể tích lớn (từ 1ml trở lên cho chuột 20g), chuột khơng chết, ta khẳng định liều chuột khơng chết Nếu chuột chết độc tính thuốc, chết dùng thể tích lớn làm dày chuột căng mức vỡ bục Qua đường tiêm, tiêm tĩnh mạch, tiêm bắp thịt, tiêm phúc mạc, tiêm da, tùy theo đường tiêm dự kiến người Khi tiêm thể tích lớn, đặc biệt tiêm tĩnh mạch, cầm làm ấm dung dịch tiêm lên khoảng 37°C trước tiêm để tránh cho vật không lạnh bị tiêm thuốc Phải đảm bảo tốc độ tiêm truyền theo định, pH dịch tiêm phải giống pH dự kiến dùng cho người, dụng cụ tiêm cần phải vô trùng Trong số trường hợp cần tiêm thể tích lớn vào bắp thịt da, tiêm vào nhiều vị trí khác - Số lần dùng thuốc: Khi thử độc tính cấp, nguyên tắc dùng thuốc lần Trong trường hợp đặc biệt, dùng vài lần ngày - Dung mơi hịa tan thuốc: Dung mơi hịa tan thuốc tốt dùng nước cất Trường hợp thuốc khơng tan nước cất thì: Nếu dùng uống: phải nghiền thuốc thật mịn nước cất, tạo thành hỗn dịch đồng Nếu cần, thêm dịch gồm để hỗn dịch phân tán đồng lắng chậm Nếu dùng tiêm: phải dùng loại dung môi dự kiến dùng chế thuốc để tiêm cho người sau Một số mơ hình dùng với số lượng động số liều dùng như: Mơ hình liều cố định: thử với số liều cố định 5, 50, 300, 2000, 5000mg/kg Dùng vật cho nhóm, thử mức liều Lựa chọn liều khởi đầu số liều cố định gợi ý, tùy theo kết đáp ứng liều khởi đầu mà tiến hành thử tiếp mức liều cao thấp Thử nghiệm họ c tiếp tục xác định mức liều gây độc tính rõ ràng, liều gây chết không con, liều cao khơng gây ảnh hưởng mức liều sĩ Y thấp gây chết động vật thí nghiệm [8], [9] ạc Mơ hình phân loại độc: thử theo quy trình bậc thang, bước dùng th giới (uống mức liều xác định) Tùy theo động vật có chết Lu ậ n vă n hay không bước thử mà xác định cho bước thử tiếp theo, không cần thử