Tìm hiểu phương pháp thẩm Định quy trình Định lượng cetirizine trong viên nén bằng phương pháp hplc và Đầu dò uv vis

TRUONG DAI HOC NGUYEN TAT THANH Chuyên ngành: DƯỢC HỌC Đà ài: TÌM HIẾU PHƯƠNG PHÁP THÁM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG CETIRIZINE TRONG VIÊN NÉN BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VÀ ĐẦU DÒ UV-VIS N

TRUONG DAI HOC NGUYEN TAT THANH

Chuyên ngành: DƯỢC HỌC

Đà ài:

TÌM HIẾU PHƯƠNG PHÁP THÁM ĐỊNH QUY TRÌNH

ĐỊNH LƯỢNG CETIRIZINE TRONG VIÊN NÉN BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VÀ ĐẦU DÒ UV-VIS

Nhóm: HOA HƯỚNG DƯƠNG Hướng dẫn khoa học: Th.S Lê Hải Đường

TP HCM - 2019

TRUONG DAI HOC NGUYEN TAT THANH

Chuyên ngành: DƯỢC HỌC

Đề tài:

TÌM HIẾU PHƯƠNG PHÁP THÁM ĐỊNH QUY TRÌNH

ĐỊNH LƯỢNG CETIRIZINE TRONG VIÊN NÉN BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VÀ ĐẦU DÒ UV-VIS

Hướng dẫn khoa học: Th.S Lê Hải Đường

Nhóm: HOA HƯỚNG DƯƠNG

Pham Thi Quynh Nhu

Nguyễn Thúy Thanh Thiên Nguyễn Thị Diễm Nguyễn Thị Huệ Đoàn Đỗ Kim Huệ Trần Thị Thu Hương Nguyễn Thị Quỳnh Như Trần Bùi Trọng Phạm Nguyên Quốc Trần Văn Cương

Bùi Thanh Liêm

Phạm Huỳnh Cao Chánh

TP HCM - 2019

Tham gia thuyết Mức độ hoàn

STT Họ và tên MSSV Lớp Nội dung thực hiện trình thành (%)

01 Pham Thi Quynh Nhu | 1511536216 | 15DDS.TCLTIA cá Popa con lại Dẫn chương 100%

08 Nguyễn Thị Huệ 1511536685 | 15DDS.TCLTIA Chương II 100%

10 | Nguyễn Thúy Thanh Thiên | 1511536214 | 15DDS.TCLTIA Chương IT Tham gia 100%

"1 Phạm Nguyên Quốc 1511536448 | 15DDS.TCLTIA Chương II 100%

12 Bùi Thanh Liêm 1511536864 | 15DDS.TCLTIA Chương II Tham gia 100%

BAO CAO TIEN DO THUC HIEN DO AN CHUYEN NGANH HOA PHAN TICH

TP Hỗ Chí Minh, ngày tháng năm

Đồ án chuyên ngành HÓA PHÂN TÍCH Nhóm SV thực hiện: H

NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA GIẢNG VIÊN

Đề tài: TÌM HIỂU PHƯƠNG PHÁP THÁM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH

LƯỢNG CETIRIZINE TRONG VIÊN NÉN BẰNG PHƯƠNG PHÁP

HPLC VÀ ĐẦU DÒ UV-VIS

Hoe phan: BO AN CHUYEN NGANH HOA PHAN TICH

Sinh viên thực hiện: Nhóm HOA HƯỚNG DƯƠNG

TP Hồ Chí Minh, ngày tháng năm

Giảng viên giảng dạy

Th.S Lé Hai Duong

Đồ án chuyên ngành HÓA PHÂN TÍCH Nhóm SV thực hiện: Hoa Hướng Dương

LỜI CÁM ƠN

s.eeeeececTlleveeeeeeee

Lời nói đầu tiên nhóm Hoa Hướng Dương chân thành gửi lời cảm ơn đến cô Lê Hải

Đường trong suốt quá trình học tập, nhóm chúng em đã nhận được rất nhiều sự quan tâm

cũng như chia sẻ tận tình của Cô, với tri thức và tâm huyết của mình Cô đã truyền đạt vốn kiến thức quý báu cho nhóm chúng em trong suốt thời gian học tập Cô đã trực tiếp

hướng dẫn và luôn tạo mọi điều kiện thuận lợi cũng như dành thời gian thảo luận, chỉ bảo

giúp chúng tôi hoàn thành đồ án môn học này Thông qua đó những kiến thức, kỹ năng

chúng tôi đã được học trở nên mở rộng, sâu sắc và thực tế hơn

Trân trọng cảm ơn và kính chúc Cô thành công, nhiều sức khỏe và hạnh phúc trong

cuộc sông.

1.1 Giới thiệu sơ lược về CeliFÍH€: He ryo 9

1.2 Cấu trúc và tính ChẤC 0 S2 22112212 12x sya 9

FIHÌ, J H/,/äliÝÝỶÝỶÝ 10

1.5 Cơ chế hoạt động: nu rue 11

2 TÔNG QUAN VỀ PHƯƠNG PHÁP HPLC e-o-5 -S- 12

21 Giới thiệu sơ lược về phương pháp HPLC -cesce sec 12 2.2 Nguyên tắc - cầu tạo của máy HPLC và các thông số sắc kí 12

2.3 Các kỹ thuật HPLC 522 5222122212122 ee 16

2.3.1 Sac ki pha dao (Reversed phase chromatography RPC): 16 2.3.2 Sắc kí cặp ion (Ion Pair Chromatography IP€): 18

2.4 Ưu điểm của phương pháp HPLC 2 22t t2 12 ren 21

3 TÔNG QUAN VỀ THẤM ĐỊNH QUY TRÌNH PHẨN TÍCH 22

3.1 Tính tương thích hệ thống 2 S2 2T 2221221 re 22 3.2 Tính đặc hiệu 222- 22222212 21221212212211222.22222222 re 23

Đồ án chuyên ngành HÓA PHÂN TÍCH Nhóm SV thực hiện: Hoa Hướng Dương

3.3 Tính tuyến tính s2 nọ n2 t2 tro 3.4 Độ đứng s2 0122122222221 2212222211222ye

==—;?.,› '.0- .šẼšẽ sa

3.6 Giới hạn phát hiện - 2252222 22221222222222222 22a

3.7 Giới hạn định lượng 12: 2222121121 122121 2151121211281 181 12t re

CHƯƠNG II: ĐÔI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

4 Kết luận:

4.1 Bước sóng hấp thu cực đại của cetITLZI€ co con nen re 4.2 Quy trình định tính, định lượng cefIr1ZIne - 2 2222222

4.2.1 Định tính c1 t2 1211121221111 211122121 2111520121811 151 81111111 tre 4.2.2 Thâm định quy trình định lượng cetirizine

DANH MUC CHU VIET TAT

Association of Official Analytical Chemists

Hiệp hội các nhà hóa phân tích chính thống

Coefficient of Variation

Hệ số phân tan

Diode Array Detector

Đầu đò dãy diode quang

Food and Drug Administration

Cơ quan quản lý thực phẩm và thuốc Hoa Kỳ

High Performance Liquid Chromatography

Phương pháp sắc ki lỏng hiệu năng cao

International Conference on Harmonization

Hội nghị quốc tế về hài hòa các thủ tục đăng ký được phẩm sử dụng cho con người

The - lon Pairing Agent

Đồ án chuyên ngành HÓA PHÂN TÍCH Nhóm SV thực hiện: Hoa Hướng Dương

Minimum Inhibitory Concentration

Nông độ ức chế tối thiếu

Penicillin Binding Protein

Reversed Phase-High Performance Liquid Chromatography Phương pháp sắc kí long hiệu nang cao pha dao

Relative Standard Deviation

Độ lệch chuẩn tương đối

Standard Deviation

Độ lệch chuẩn

United States Pharmacopoeia

Dược điện Hoa Kỳ

Ultraviolet Visible

Đồ án chuyên ngành HÓA PHÂN TÍCH Nhóm SV thực hiện: Hoa Hướng Dương

DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh về thuốc Ceffime 22 2212212211222 22222 ae 3

Hình 1.2 Công thức cầu tạo Cefixime C;H¡sN:O;8;.3H;O J

Hình 1.3 Sơ đồ thê hiện sự ảnh hưởng của các lực rửa giải 9

Hinh 1.4, Quá trình rửa giải va tach peak của chất A, B co, 9

Hình I.5 Sơ đồ hệ thống HPLC 22 2222211212 2212128 rerr dường 9 Hình 1.6 Cột sắc kí đùng trong HPLC 222222222 2221221127212 te 11

Hình I.7 Mối quan hệ giữa các thành phần trong kỹ thuật HPLC 13

Hình 1.8 Hai giai đoạn theo cơ chế kiêu tĩnh điện 2222222222 ceg 14 Hình I.9 Hình minh họa quy tắc 2 pH 22s ch rrrye 16 Hinh 1.10 Hinh anh céc thach ambien ccccccccccccccssesseecessesseseserseeseseseisere 16

CHƯƠNG I TỎNG QUAN TÀI LIỆU:

TONG QUAN VE CETIRIZINE:

LI Giới thiệu sơ lược về Cetirtine:

Thuốc kháng histamin HI còn được gọi là chẹn HI là một loại thuốc ức chế động

của histamine ở thụ thể HI giúp giảm phản ứng dị ứng Thuốc kháng histamin được phân loại theo nhóm receptor của histamin mà nó đối kháng Bao gồm loại thuốc kháng receptor H1, H2, H3, H4 Trong đó chỉ có khang histamin H1, H2 la có tam quan trong

trong điều trị, đặc biệt điều trị dị ứng hay chống lại viêm dạ dày

Cetirizine thuộc nhóm thuốc kháng histamin H, thế hệ 2 được sử dụng rộng rãi, Trên

lâm sàng thuốc kháng H, dùng ngăn ngừa các biêu hiện dị ứng, ngăn ngừa chứng say tàu

xe Vài thuốc kháng HI khác (Doxylamin) còn có thể dùng để điều trị ốm nghén, chúng

Đồ án chuyên ngành HÓA PHÂN TÍCH Nhóm SV thực hiện: Hoa Hướng Dương

+ Cong thire phan tu: C18H25CIN203

+ Khéi lr ond an tr P88, ghirc cau tao cua cetirizine dihydroclorid

+ Tén khoa hoc: Acid(RS)- 2-[2-[4-[(4-chlorophenyl)-phenylmethyl]piperazin- Ì- yllethoxy Jacetic

Tinh chat:

- Cetirizine là dạng bột két tinh mau trang khéng mui, pK1 = 2,9 tuong img nhom pKa của carboxylic, pK2= 8,3 tương ứng nhóm pKa của acid amin bac 3

- Tan tét trong nước, dac biét la aceton va methylen clorid

- Trong phân tử cetirizin có dây nói liên hợp nên có khả năng hấp thụ ánh sáng tử

ngoại Phô hấp thụ của đung dịch 20 Jig/ml trong dung dịch acid hydrochloric R (10,3

ø/1) Trong giới hạn quét phố từ 210 nm đến 350 nm có cực 3đại hấp thụ tại 230 nm với

độ hấp thụ riêng 359-381 [9,10]

1.3 Dược lực học:

Cetirizin là chất thuộc nhóm dẫn chất của piperazin, là chất chuyên hoá của hydroxyzin (oxy hoá nhóm chức -OH alcol thành -COOH) Có tác dụng đối kháng

histamin mạnh, kéo đài và đặc biệt chon lọc trên thy thé Hj Cetirzin có tác đụng an thân,

gây ngủ và kháng cholinergie đều rất yêu, không kháng serotonin Cetirizin ức chế giai đoạn sớm của phản ứng dị ứng qua trung gian histamin và cũng làm giảm sự di đời của các tế bào viêm Giảm giải phóng các chất trung gian ở giai đoạn muộn của phản ứng dị

ứng Chất này có tác dụng bảo vệ dưỡng bào, giảm đáng kế đáp ứng hen suyễn với

Thuốc chịu ảnh hưởng chuyển hoá của hệ enzym cytochrom 3A4P Thuốc được đào thải chủ yếu qua thận khoảng 70 %, qua gan khoảng 10 %

1.5 Cơ chế hoạt động:

Thụ thể histamin H1 có mặt ở nhiều loại tế bao, bao gom té bao co tron trén duong

hô hấp và mạch máu, tế bào nội mô, tế bào biểu mô, bạch cầu ái toan và bạch cầu trung

tính Mặc dù các thụ thê này gắn với histamin, các thụ thể này cũng có thể hình thành tín hiệu mà không cần histamin liên kết với bề mặt tế bào Có sự cân bằng giữa dang hoat

động và dạng không hoạt động của thụ thê này Sự có mặt của histamin giúp én định

dạng hoạt động của thụ thể, trong khi thuốc kháng histamin làm ôn định dạng không hoạt động của thụ thể Từ đó, có thê thấy các thuốc kháng histamin H1 hoạt động như chất chủ

vận ngược (inverse agonists) Loratadin được chuyển hóa ở gan, trong khi cetirizin, desloratadin và fexofenadin phần lớn không được chuyển hóa Cetirizin được thải trừ qua

nước tiêu và fexofenadin được bài tiết qua phân Nên cân nhắc giảm liều thuốc ở bệnh

nhân rối loạn chức năng gan hoặc thận nặng

Uu diém cia Cetirizin:

Theo nghiên cứu mới nhất của trường đại học ở Mỹ cetirizin có tác dụng làm giảm các tốn thương da ở những người điều trị prednisolon

TONG QUAN VE PHUONG PHAP HPLC

21 Giới thiệu sơ lược về phương pháp HPLC

Phương pháp HPLC ra đời từ năm 1967 — 1968 dựa trên cơ sở phát triển và cải tiễn từ phương pháp sắc kí cột cô điển lần đầu tiên được minh chứng bởi nhà thực vật học người Nga Milkhail Tswett vào năm 1906.Trải qua gần bốn thập kỷ, từ sau năm 1970 phương

pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC) đã được ứng dụng rộng rãi vào công tác phân tích trong nhiều lĩnh vực khoa học như ngành công nghiệp dược phẩm, thực phẩm và môi

Đồ án chuyên ngành HÓA PHÂN TÍCH Nhóm SV thực hiện: Hoa Hướng Dương

trường Nhờ những ưu điểm nỗi bật, sắc kí lỏng hiệu năng cao nhanh chóng được áp

dụng rộng rãi trong lĩnh vực Dược học, một ngành có nhu cầu phân tích đa dạng với độ

chính xác cao Vì thế, hầu hết các chuyên luận phân tích nguyên liệu và thành phẩm trong

các Dược điển hiện đại như Dược điển Mỹ, Dược điển Anh, Dược điển Châu Âu đều

dùng HPLC như là phương pháp chủ lực để xác định hàm lượng hoạt chất trong chế

phẩm [4]

2.2 Nguyên tắc - cu tạo của máy HPLC và các thông số sắc kí:

Nguyên tắc: Sắc ký lỏng hiệu năng cao là một phương pháp chia tách trong đó pha

động là chất lỏng và pha tĩnh chứa trong cột là chất rắn đã được phân chia đưới đạng tiêu

phân hoặc một chất lỏng được phủ lên một chất mang rắn, hay một chất mang đã được

biến đôi bằng liên kết hóa học với các nhóm chức hữu cơ Quá trình sắc ký lỏng dựa trên

cơ chế hấp phụ, phân bố, trao đôi ion hay phân loại theo kích cỡ rây phân tử

- Pha tĩnh là một yếu tố quan trọng quyết định bản chất của quá trình sắc ký và loại cơ chế trong sắc ký Nếu pha tĩnh là chất hấp phụ thì ta có Sắc ký hấp phụ pha thuận hoặc pha đảo Nếu pha tĩnh là chất trao đôi Ion thì ta có Sắc ký trao đối ion Nếu pha tĩnh

là chất lỏng thì ta có Sắc ký phân bố hay sắc ký chiết Nếu pha tĩnh là Gel thì ta có Sắc ký

Gel hay Rây phân tử

- Pha động cùng với pha tĩnh để rửa giải chất phân tích ra khỏi cột Như vậy nếu

chúng ta nạp mẫu phân tích gồm hỗn hợp chất phân tích A, B, C vào cột phân tích, kết quả cac chat A, B, C có thé sẽ được tách ra khỏi nhau sau khi đi qua cột Quyết định hiệu quả của sự tách sắc ký ở đây là tống hợp các tương tác

Hinh 1.1 So dé thê hiện sự ảnh hưởng của các lực rửa giải

Tổng của 3 tương tác này sẽ quyết định chất nào được rửa giải ra khỏi cột trước

tiên khi lực lưu giữ trên cột là nhỏ nhất (F.) và ngược lại Đối với mỗi chất, sự lưu giữ được qui định bởi 3 lực F¡, F›, F: Trong đó F; và Fa giữ vai trò quyết định, con F; là yếu

tố ảnh hưởng không lớn Ở đây F: là lực giữ chất phân tích trên cột, F› là lực kéo của pha động đối với chất phân tích ra khỏi cột Như vậy với các chất khác nhau thì F¡ va F là

khác nhau Kết quả là các chất khác nhau sẽ di chuyên trong cột với tốc độ khác nhau và tách ra khỏi nhau khi ra khỏi cột như hình 1.4

Hình I.2 Quá trình rửa giải và tách peak của chất A, B

s Cấu tạo cơ bản: Máy HPLC bao gồm các bộ phận:

Hình 1.3 Sơ đồ hệ thống HPLC

14

Đồ án chuyên ngành HÓA PHÂN TÍCH Nhóm SV thực hiện: Hoa Hướng Dương

- Binh dung mi

dung môi được thực hiện bởi chương trình dung môi, gồm:

- _ Rửa giai dang mdi (isocratic elution)

- Rửa giải tiệm tién (gradient elution)

Trong rửa giải isocratic, chat phân tích được rửa giải qua cột bằng pha động có

thành phần tỷ lệ không đổi trong suốt quá trình sắc kí Phương pháp rửa giải này đơn gián

và ít tốn kém, thường áp dụng cho định lượng và sắc kí điều chế do có đệ lặp lại cao [4]

- Thường làm bằng thép không rí, chiều đài từ 10 - 30 cm, đường kính trong

khoảng 2 - 5 mm, hạt nhồi cỡ 5 - 10 nm Hạt nhồi thường làm bằng silicagel hoặc

silicagel co bao một lớp mỏng chất hữu cơ hoặc liên kết hóa học với các nhóm chức hữu

vào tính phân cực của các nhóm chức liên kết [5] Trên thực tế, không thể liên kết tất cả

các nhóm silanol bề mặt Do đó, các nhóm silanol không liên kết sẽ tương tác với phân tử phân cực và ảnh hưởng đến quá trình sắc kí pha đảo Dé giảm số lượng các nhóm silanol không liên kết trên cột pha đảo, phương pháp khóa đuôi (end-capping) được áp dụng

bằng cách cho nhóm silanol không liên kết tác dụng với một chất silyl hóa chuỗi ngắn, ví

dụ như trimetylclorosilan [4]

Hình I.4 Cột sắc kí ding trong HPLC

Đâu dò: Bộ phân phát hiện, đo các tín hiệu sinh ra khi có chất ra khỏi cột và các tín hiệu này được ghi dudi dang pic trên sắc kí đồ Cho đến nay, đầu dò hấp thu tử ngoại -

khả kiến (UV - VIS) dugc xem 1a théng dung nhat trong HPLC Dau do day diode (DAD

- diode array detector) được phát triển từ đầu dò UV - VIS và có thể đo trong vùng bước sóng từ 190 - 700 nm

* Ưu điểm của loại đầu đò này là tạo được phố UV của các chất phân tách trong

khoảng bước sóng đã chọn, kiểm tra sự tỉnh khiết của sản phẩm Vì thế, hiện nay nó

được dùng rộng rãi nhất trong lĩnh vực kiểm nghiệm và nghiên cứu

s - Cúc thông số sắc kí thường sử dụng: