74 3.2 Kết quả đánh giá phơi nhiễm thuốc BVTV nhóm OP qua các chỉ số PChE và 6 chất chất chuyển hóa DAP của đối tượng nghiên cứu tại tỉnh An Giang .... 94 4.2 Đánh giá phơi nhiễm thuốc B
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Thiết kế nghiên cứu
Đề tài thực hiện với 3 kiểu thiết kế như sau:
♦ Mục tiêu 1: Nghiên cứu thực nghiệm: Xây dựng quy trình định lượng chất chuyển hóa Dialkyl phosphat
♦ Mục tiêu 2,3: Nghiên cứu cắt ngang có phân tích
♦ Mục tiêu 4: Nghiên cứu can thiệp tại cộng đồng
Đối tượng nghiên cứu
Chất phân tích: Các chất chuyển hóa DAP của thuốc BVTV nhóm OP trong nước tiểu
Nước tiểu giả lập: Được tạo ra bằng cách thêm hỗn hợp chuẩn vào nước tiểu trắng với tỷ lệ 5 - 10% thể tích Trong đó mẫu nước tiểu trắng là mẫu sử dụng làm vật liệu nội kiểm được cung cấp từ Trung tâm kiểm chuẩn xét nghiệm y học Đại học
Y dược TP.HCM được bảo quản ở -70 o C
Tất cả người làm nông nghiệp có tham pha phun xịt thuốc BVTV bao gồm pha, trộn và xịt thuốc trong vụ mùa tại tỉnh An Giang
Người làm nông nghiê ̣p có tham gia pha, trộn, xịt thuốc BVTV ta ̣i hai huyện Phú Tân và An Phú tỉnh An Giang thuô ̣c Đồng Bằ ng sông Cửu Long trong thời gian nghiên cứu và phù hợp với tiêu chí chọn mẫu
Nhóm phơi nhiễm (nhóm nghiên cứu): Người làm nông nghiê ̣p là nam giới, có độ tuổi từ 18 - 60 tuổi, thâm niên làm nông nghiệp trên 2 năm, đang cư trú trên đi ̣a bàn xã của huyện An Phú và Phú Tân tỉnh An Giang, thuô ̣c đồng bằ ng sông Cửu Long được cho ̣n ngẫu nhiên ta ̣i thời điểm nghiên cứu và tham gia pha, trộn, xịt thuốc trên 1 lần trong tuần vào tại thời điểm khảo sát
Nhóm không tiếp xúc (nhóm chứng): Là nam giới, sinh sống trong địa bàn nghiên cứu, làm công việc khác nhau như văn phòng, giáo viên, thợ hớt tóc, nghề tự do có tuổi từ 18 - 60 tuổi, không có tham gia bất kỳ giai đoạn nào trong phun thuốc BVTV như pha, trộn, xịt thuốc trong vụ mùa trong vòng hai năm tính từ thời điểm khảo sát
Người làm nghề phun thuốc đã tham gia nghiên cứu cắt ngang và thuộc địa bàn nghiên cứu được chọn tiến hành can thiệp Cụ thể là người dân phun thuốc 3 xã Bình Thạnh Đông, Phú Bình và Hiệp Xương của huyện Phú Tân chọn làm dân số mục tiêu, phù hợp các tiêu chí chọn mẫu
Tiêu chuẩn chọn vào: Đã tham gia nghiên cứu cắt ngang Ưu tiên đối tượng làm đủ 3 xét nghiệm DAP, PChE và tinh dịch đồ
Tất cả đối tượng nghiên cứu ở nhóm can thiệp được quản lý tại cộng đồng được theo dõi tư vấn hướng dẫn các biện pháp an toàn lao động và phòng chống nhiễm độc
Kiểm soát sai lệch chọn lựa:
Định nghĩa rõ ràng và cụ thể các biến số
Thiết kế bộ câu hỏi đúng mục tiêu, rõ ràng về từ ngữ, ngắn gọn, dễ hiểu
Những câu hỏi về thực hành thay đổi lối sống như hút thuốc, uống rượu, được xây dựng dựa và bộ câu hỏi điều tra giám sát các yếu tố nguy cơ của bệnh không lây của tổ chức Y tế thế giới
Tập huấn kỹ cho điều tra viên có cùng kỹ năng phỏng vấn
Bộ câu hỏi được tiến hành nghiên cứu thử, sau đó chỉnh sửa những sai sót và bất hợp lý trong bộ câu hỏi trước khi tiến hành nghiên cứu chính thức
Điều tra viên không được cho biết giả thuyết nghiên cứu để tránh để sai lệch trong khi phỏng vấn
Các cuộc phỏng vấn bộ công cụ khảo sát mặt đối mặt được thực hiện bởi nhóm sinh viên được tập huấn Bác sĩ trạm y tế địa phương phối hợp Bác sĩ đoàn khám từ Đại học Y dược TP HCM thăm khám và tuyển chọn đảm bảo đúng đối tượng
Có khu vực riêng dành cho tư vấn và hướng dẫn làm xét nghiệm tinh dịch đồ, tránh ảnh hưởng bởi những người xung quanh và đảm bảo quyền riêng tư cho đối tượng được tư vấn
Thời gian và địa điểm nghiên cứu
Xây dựng quy trình định lượng chất chuyển hoá DAP từ tháng 12/2020 đến tháng 12 năm 2021
Nghiên cứu cắt ngang từ tháng 12/2021 đến tháng 03/2022
Nghiên cứu can thiệp tại cộng đồng từ tháng 03/2022 đến tháng 03/2023
Nghiên cứu thực nghiệm: Xây dựng quy trình và phân tích mẫu DAP tại Phòng thí nghiệm của Viện kiểm nghiệm thuốc TPHCM
Nghiên cứu cắt ngang và can thiệp tại cộng đồng: hai huyện Phú Tân và An Phú của tỉnh An Giang, bao gồm các xã Bình Thạnh Đông, Phú Bình, Hiệp Xương, Vĩnh Lộc, Phú Hữu, Vĩnh Trường, Vĩnh Hậu.
Cỡ mẫu nghiên cứu
2.4.1 Cỡ mẫu nghiên cứ u cắt ngang
2.4.1.1 Cỡ mẫu Được tính theo công thức chọn mẫu ngẫu nhiên đơn, cỡ mẫu n n = Z²(1-α/2) x p (1-p) x DE d²
- p là tỷ lệ tăng hoặc giảm các tiêu chí liên quan biến số kết cuộc (tham khảo các nghiên cứu trước)
- d = 0,05: là sai số lựa chọn Hệ số thiết kế DE = 1,5 Thay số và làm trò n
Bảng 2.1 Tính cỡ mẫu theo từng mục tiêu
Nghiên cứu Kết quả nhóm tiếp xúc N
Prasit Kachaiyaphum, Thái Lan 82 PChE giảm 32% 503 Farrukh Jamal, Ấn Độ 7 Tỷ lệ tinh trùng sống giảm 12% 243 Mohamed A Dalvie, Nam Phi 83 Hình dạng tinh trùng BT giảm 84% 309 Sandra Yucra, Peru 84 DMP (Tỷ lệ phát hiện 86,9%) 278 Chúng tôi chọn cỡ mẫu nghiên cứu dựa vào hoạt tính PChE do có cơ số mẫu lớn nhất trong các mục tiêu trọng tâm
Cỡ mẫu n = 503 Dự trù mất mẫu 10%, cỡ mẫu tối thiểu cần nghiên cứu là: nU9 đối tượng
Thực tế chúng tôi đã tiến hành khảo sát được 748 đối tượng, trong đó bao gồm
611 đối tượng nhóm phơi nhiễm và 137 đối tượng nhóm chứng
* Chọn huyện: Tỉnh An Giang được chia thành 11 đơn vị hành chính có 02 thành phố, 01 thi ̣ xã và 08 huyện, bốc thăm ngẫu nhiên chọn 02 huyện
* Chọn xã : Mỗi huyện chọn 03 xã theo phương pháp bốc thăm ngẫu nhiên Như vậy có 6 xã được chọn để nghiên cứu Với cỡ mẫu là 600 đối tượng trong tổng số 6 xã Mỗi xã chọn mẫu thuận tiê ̣n 100 người làm nghề nông nghiệp có tham gia phun thuốc tại thời điểm khảo sát Ngoài ra chúng tôi chọn 30 người trong mỗi xã làm công việc khác nhau như giáo viên, nhân viên văn phòng, làm ở uỷ ban nhân xã, tài xế, thợ hớt tóc và công việc tự do, không có tham gia phun thuốc như pha, trộn, xịt trong vụ mùa Tuy nhiên do đợt khảo sát xã Vĩnh Lộc đang trong ngày tuyển quân nhập ngũ, nên đối tượng tham gia nghiên cứu ít hơn dự kiến nên chúng tôi tiến hành chọn xã thứ 7 bổ sung cho đủ cơ số mẫu đó là xã Vĩnh Trường
* Chọn người dân: Tại mỗi xã tiến hành lấy mẫu thuâ ̣n tiê ̣n cho đến khi đủ cỡ mẫu
2.4.2 Cỡ mẫu nghiên cứu can thiệp tại cộng đồng
2.4.2.1 Cỡ mẫu Áp dụng công thức so sánh 2 trung bình với hệ số đã biết theo các chỉ số ước lượng của một nghiên cứu tương tự tại Malaysia 70 :
Sai lầm loại 1: α = 0,05 - Sai lầm loại 2: β = 0,1
Mật độ tinh trùng trung bình của nhóm không can thiệp: μ1 = 55x10 6 /ml Độ lệch chuẩn của nhóm không can thiệp: σ1 = 28 x10 6 /ml (σ1)
Mật độ tinh trùng trung bình của nhóm can thiệp: μ2 = 20,7x10 6 /ml Độ lệch chuẩn của nhóm can thiệp: σ2 = 18,6 x10 6 /ml
Tỉ số mẫu trong hai nhóm: r = n2/n1 = 2/3 Áp dụng công thức cho cỡ mẫu tối thiểu là 27 người
Dùng phương pháp bốc thăm ngẫu nhiên chọn một trong hai huyện đã tiến hành nghiên cứu cắt ngang ở giai đoan 2 vào nhóm can thiệp, mỗi nhóm chọn đối tượng trong xã đã có tham gia nghiên cứu cắt ngang ở giai đoạn 2 Kết quả chúng tôi chọn ba xã của huyện Phú Tân vào nhóm can thiệp, do nguồn lực có hạn và và địa bàn rộng, để cho việc kiểm soát quá trình can thiệp được chặt chẽ chúng tôi không tiến hành can thiệp hết tất cả đối tượng của hai huyện
Định nghĩa biến số
Bảng 2.2 Định nghĩa và phân loại các biến số
Tên biến số Phân loại Định nghĩa biến số Giá trị biến số
A Biến số độc lập A1 Biến số nền
Tên biến số Phân loại Định nghĩa biến số Giá trị biến số
Tuổi ghi nhận bằng cách lấy năm khảo sát trừ năm sinh
Trình độ học vấn Thứ tự Được xác định bởi bậc học đã hoàn thành trong hệ thống giáo dục
≥ THPT Thói quen uống rượu bia
Thứ tự Có uống ≥ 3 ly chuẩn
(đối với nam), vào bất kỳ ngày nào trong tuần
Không uống hoặc có uống nhưng không quá
< 3 ly chuẩn (đối với nam), ở tất cả các ngày trong tuần
Không có uống Dưới 2 lần/tuần
Từ 2-3 lần/tuần Trên 3 lần/tuần
Hút thuốc lá Thứ tự Tính theo số lượng điếu thuốc sử dụng trong 1 ngày mà đối tượng tự khai báo
Không có hút thuốc Hút dưới 10 điếu/ngày Hút từ 10 -20 điếu/ngày Trên 20 điếu
Thu nhập Thứ tự Thu nhập trong năm của đối tượng từ tất cả các công việc Ước lượng theo năm gần nhất
Từ 50 - 80 triệu/năm Trên 80 triệu /năm
A2 Đặc điểm và tính chất công việc
Là công việc có liên quan như pha, trộn và xịt thuốc phục vụ cho
Phun cho gia đình Phun thuê
Cả hai hình thức trên
Tên biến số Phân loại Định nghĩa biến số Giá trị biến số gia đình hoặc phun thuê
Số lần phun thuốc trong tuần
Thứ tự Số lần đối tượng tham gia trong tuần vào vụ đông xuân
Từ 3- 4 lần/ tuần Trên 4 lần/ tuần
Số giờ phun thuốc mỗi lần
Thứ tự Số giờ trung bình đối tượng thực hiện trên 1 lần phun
Từ 5 -6 giờ/ lần Trên 6 giờ/ lần
Số năm làm nông nghiệp
Thứ tự Là số năm đối tượng có tham phun thuốc BVTV
Từ 05 - 10 năm Trên 10 năm Thói quen sử dụng thuốc BVTV
Thứ tự Cách tiến hành pha trộn trong một lần phun
Sử dụng 1 loại thuốc Pha 2 loại thuốc Pha trên 2 loại
Sử dụng bảo hộ lao động (PPE)
Thứ tự Có sử dụng 1 trong 4 loại BHLĐ: Áo, găng tay, mắt kính, khẩu trang
Loại bảo hộ lao động được sử dụng
Thứ tự Dụng cụ phải đúng tiêu chuẩn do nhà sản xuất cung cấp dành cho những người làm việc môi trường độc hại không phải tự chế tạọ lấy
Khẩu trang Găng tay Áo và quần Kính bảo hộ Nón bảo hộ
A3 Triệu chứng liên quan quá trình phun thuốc
Tên biến số Phân loại Định nghĩa biến số Giá trị biến số
Chóng mặt Nhị giá Triệu chứng xuất hiện sau khi phun hoặc trong quá trình phun thuốc
Nhức đầu Nhị giá Triệu chứng xuất hiện sau khi phun hoặc trong quá trình phun thuốc
Nôn ói Nhị giá Triệu chứng xuất hiện sau khi phun hoặc trong quá trình phun thuốc
Có Đỏ mắt Nhị giá Triệu chứng xuất hiện sau khi phun hoặc trong quá trình phun thuốc
Ngứa và rát vùng da Nhị giá Triệu chứng xuất hiện sau khi phun hoặc trong quá trình phun thuốc
Có Đau bụng hay tiêu chảy
Nhị giá Triệu chứng xuất hiện sau khi phun hoặc trong quá trình phun thuốc
Ho khó thở đau tức ngực
Nhị giá Triệu chứng xuất hiện sau khi phun hoặc
Tên biến số Phân loại Định nghĩa biến số Giá trị biến số trong quá trình phun thuốc
A4 Nhận thức và rào cản sử dụng thuốc BVTV và bảo hộ lao động
BVTV ảnh hưởng đến sức khoẻ
Nhị giá Ghi nhận theo câu trả lời của đối tượng
Sử dụng BHLĐ tránh ảnh hưởng sức khoẻ
Nhị giá Ghi nhận theo câu trả lời của đối tượng
Không sử dụng bảo hộ lao động là do giá thành BHLĐ cao
Nhị giá Ghi nhận theo câu trả lời của đối tượng
Sử dụng BHLĐ khi phun thuốc rất khó khăn hay thoải mái
Nhị giá Ghi nhận theo câu trả lời của đối tượng
BHLĐ là gì không có sẵn thói quen quên mang theo
Nhị giá Ghi nhận theo câu trả lời của đối tượng
Thay đổi hình thức phun thuốc
Nhị giá Ghi nhận theo câu trả lời của đối tượng
Thay đổi BHLĐ cho phù hợp
Nhị giá Ghi nhận theo câu trả lời của đối tượng
/huyết thanh Định lượng Đơn vị UI/L tại 37 0 C Biến số liên tục
Tên biến số Phân loại Định nghĩa biến số Giá trị biến số
Nhị giá PChE bình thường:
Kết quả giới hạn bình thường
Kết quả giảm so với giới hạn bình thường
Nồng độ DAP trong nước tiểu Định lượng
Bao gồm 6 chất chuyển hoá (DMP, DMTP, DMTP, DEP, DETP, DEDTP) phát hiện trong mẫu nước tiểu khi LOD ≥ 5 ng/ml Định lượng liên tục
∑ DAP Là tổng 6 chất chuyển hoá thu được từ quá trình định lượng
∑(DMP+DMTP+DMDTP) + ∑(DEP+DETP+DEDTP)
Nồng độ Creatinin trong nước tiểu Định lượng
Là giá trị thu được trên máy H3000 x hệ số pha loãng (1/20) Định lượng liên tục
B1.Thông số tinh trùng đồ
Phân loại mật độ tinh trùng
Nhị giá Giá trị tham chiếu là 15 x 10 6 tinh trùng/ml (nguồn WHO 2021) 85
Bình thường (≥ 15x10 6 /ml) Bất thường (< 15x10 6 /ml) Tổng số tinh trùng Nhị giá Giá trị tham chiếu là 39 x 10 6 tinh trùng/ml) (nguồn WHO 2021) 85
≥ 39x10 6 /ml Phân loại di động
Nhị giá Giá trị tham chiếu 40%
Tên biến số Phân loại Định nghĩa biến số Giá trị biến số
Phân loại di động tiến tới (PR.%)
Nhị giá Giá trị tham chiếu 32% Bất thường < 32%
Bất động (IM.%) Nhị giá Bất động là tinh trùng không có cử động đuôi
Hình dạng tinh trùng bình thường
Nhị giá Hình dạng tinh trùng bình thường được xem là không có bất kỳ bất thường nào Giá trị tham chiếu > 4% 85
Hình dạng bất thường, kết quả < 4%
Hình dạng bình thường, kết quả ≥ 4% Điểm số chất lượng tinh trùng
Nhị giá Hàm đa biến gồm các giá trị mật độ, tiến tới nhanh và hình dạng bình thường, theo hãng MES Global, trên thiết bị SQA-iO
Chất lượng tinh trùng yếu <
80 Chất lượng tinh trùng trung bình ≥ 80
Phương pháp, công cụ đo lường và thu thập số liệu
2.6.1 Phương pháp, công cụ đo lường xây dựng quy trình định lượng DAP
2.6.1.1 Các bước chuẩn bị khảo sát quy trình phân tích
Chất chuẩn đối chiếu và nội chuẩn:
Bảng 2.3 Chất chuẩn đối chiếu và nội chuẩn
Chất phân tích SKS/CAS Hàm lượng (tính theo nguyên trạng) Nơi cung cấp
Dung môi, hóa chất: Các dung môi như acetonitril, methanol đạt tiêu chuẩn dùng cho sắc ký lỏng, acid acetic, acid formic, amoni format đạt tiêu chuẩn phân tích (Merck)
Bảng 2.4 Cách pha dung di ̣ch chuẩn gốc
Thể tích vừa đủ (mL)
Hỗn hợp chuẩn và mẫu giả lập: Để khảo sát các điều kiện sắc ký và điều kiện khối phổ, chuẩn bị hỗn hợp chuẩn gồm DMP, DEP, DMTP, DETP, DMDTP, DEDTP và
IS với nồng độ mỗi chất là 1 àg/mL Thờm hỗn hợp chuẩn vào nước tiểu trắng với tỷ lệ 5 - 10% thể tích để thu được mẫu giả lập
Trang thiết bị phục vụ cho xây dựng quy trình phân tích
Hệ thống máy ACQUITY UPLC H-CLASS SYSTEM Waters Xevo TQS MS/MS, và các thiết bị hỗ trợ như máy lắ c IKA vortex Genius 3; Máy trộn Roller-Mixer (DAIHAN Scientific); Máy Multivortex (THOMAS Scientific); Cân phân tích CPA3235 SARTORIUS; Máy đo pH Metler Toledo Seven Easy; Thiết bi ̣ làm khô sử dụng khí nitơ Các thiết bị này đã được hiệu chuẩn theo GLP/ISO 17025 và các dụng cụ thủy tinh đạt yêu cầu chính xác dùng trong phân tích
2.6.1.2 Khảo sát các điều kiện cho quy trình định lượng
Bảng 2.5 Nội dung thực hiện cho xây dựng quy trình Các thông số Mục đích Nội dung thực hiện
Khả o sát điều kiện khối phổ
Tín hiệu các mảnh ion có tỷ số khối lượng/điện tích (m/z) cao nhất
Khảo sát kỹ thuật ion hóa ESI (-) và APCI (-) Lựa chọn kỹ thuật ghi phổ full scan và MRM
Chọn dung môi pha động ảnh hưởng ít nhất đến tín hiệu các chất, phù hợp với hệ thống LC-MS, tín hiệu đáp ứng các chất phân tích cao
Khảo sát thành phần pha động Lựa chọn một trong 8 dung môi sau:
Amoni format 5 mM pH 6,3 Amoni format 5 mM pH 3,0 Amoni acetat 5 mM pH 3,0 Acid formic 0,1 % pH 2,4 Acid acetic 0,1 % pH 2,6 Nước, NH3
Khảo sát tỷ lệ pha động: Methanol- nước
Tỷ lệ lần lượt là 90:10; 75:25; 50:50 và 30:70
Khảo sát loại cột sắc ký
Lựa chọn cột sắc ký phù hợp với các chất phân tích, thời gian phân tích ngắn, độ phân giải cao
Khảo sát chọn 1 trong 6 loại cột sắc ký như sau: Cột C18 - Hilic (100 x 2,1 mm; 1,7 àm)
Cụ̣t UPLC BEH C18 (100 x 2,1 mm; 1,7 àm) Cột Inertsustain phenyl – hexyl (150 x 4,6 mm;
5 àm) Cột Inertsustain C18 (150 x 4,6 mm; 5 àm) Cột Phenominex C18 (150 x 4,6 mm; 5 àm) Cột Luna 5u SCX 100A (150 x 4,6 mm; 5 àm)
Các thông số Mục đích Nội dung thực hiện
Khả o sát phương pháp xử lý mẫu nước tiểu
OP cao và ổn định
Phương pháp chiết pha rắn (SPE) Cột SPE Silica, và Cột SPE SCX Phương pháp chiết lỏng – lỏng (LLE) Phương pháp pha loãng bằng dung môi:
Acetonitril, Acid formic 1%, Amoniac với nồng độ lần lượt là 5%, 10% và 15%
Tín hiệu chuẩn nội tương đương với chất phân tích
Tiến hành khảo sát chuẩn nội DBP và FOS
Xác định khoảng nồng độ định lượng các chất chuyển hóa DAP Đường chuẩn dự kiến: 5 -1000 ng/mL
Tiến hành xác định khoảng nồng độ tuyến tính của từng chất chuyển hóa OP, tính toán mức nồng độ của các mẫu kiểm chứng (LLOQ, LQC, SQC, MQC, HQC, ULOQ) Mức nồng độ kiểm chứng: LLOQ: 5 ng/mL;LQC: 10 ng/mL;SQC: 25 ng/mL ;MQC: 100 ng/mL HQC: 800 ng/mL;ULOQ:1000 ng/mL
2.6.1.3 Thẩm định quy trình phân tích
Quy trình định lượng các chất chuyển hóa dialkyl phosphat của thuốc BVTV nhóm OP trong nước tiểu bằng kỹ thuật LC-MS/MS được thẩm định dựa theo những qui định và yêu cầu trong hướng dẫn của US-FDA và EMA hiện hành 43
Bảng 2.6 Nội dung thẩm định quy trình phân tích
Thông số Yêu cầu Nội dung thực hiện
Tính phù hợp của hệ thống
Khảo sát các thông số sắc ký gồm tỷ số thời gian lưu, tỷ số diện tích đỉnh có hệ số phân tán (CV) không được quá 5%
Tiêm lặp lại 6 lần dung dịch chuẩn và chuẩn nội ở mức nồng độ trung bình 100 ng/mL (MQC)
Thông số Yêu cầu Nội dung thực hiện Độ đặc hiệu Mẫu nước tiểu trắng cho tín hiệu có thời gian lưu tương ứng với các chất phân tích và chuẩn nội nằm trong giới hạn cho phép (≤ 20% diện tích đỉnh đối với các chất phân tích và ≤ 5% đối với chuẩn nội)
Tiêm 6 mẫu nước tiểu trắng và 6 mẫu dung dịch chuẩn và chuẩn nội ở mức nồng độ giới hạn định lượng dưới 5 ng/mL (LLOQ)
Giớ i ha ̣n đi ̣nh lươ ̣ng dưới
Tín hiệu đáp ứng của chất phân tích so với tín hiệu đáp ứng của mẫu nước tiểu trắng ít nhất bằng 5 lần và cho độ chính xác ≤ 20% và độ đúng 80 – 120%
Tiêm 6 mẫu dung dịch chuẩn từ (AS1-AS6) ở mức nồng độ giới hạn định lượng dưới 5ng/mL (LLOQ)
Hệ số tương quan R ≥ 0,99 (tương ứng với R 2 ≥ 0,9801)
Chuẩn bị các hỗn hợp chuẩn với nồng độ trong phạm vi định lượng Thêm các hỗn hợp chuẩn vào nước tiểu trắng với tỷ lệ 5 % thể tích, thêm tiếp chuẩn nội và tiến hành xử lý mẫu để thu được giai mẫu chuẩn có nồng độ trong phạm vi định lượng như bảng 2.5 Đô ̣ đúng và đô ̣ chính xá c trong ngày Độ đúng: 80 – 120% so với nồng độ lý thuyết ở nồng độ LLOQ và 85 – 115% ở nồng độ LQC, MQC, HQC Độ đúng và độ chính xác được xác định cùng lúc trên các mẫu nước tiểu có chứa chất cần phân tích tại
4 mức nồng độ LLOQ, LQC, MQC, HQC Mỗi mức nồng độ
Thông số Yêu cầu Nội dung thực hiện Độ chính xác: CV ≤ 20% ở nồng độ LLOQ và
CV ≤ 15% ở nồng độ LQC, MQC, HQC chuẩn bị 6 mẫu Tiến hành xử lý mẫu và sắc ký trong 1 ngày Đô ̣ đúng và đô ̣ chính xác giữa cá c ngày Đánh giá độ chính xác và độ đúng giữa các ngày bằng cách tiếp tục thực hiện thêm tối thiểu 2 ngày
2.6.2 Phương pháp, công cụ đo lường và thu thập số liệu cho nghiên cứu cắt ngang
Bước 1: Công tác chuẩn bị
Thành lập nhóm nghiên cứu Tổ chức tập huấn cho cán bộ y tế, các cộng tác viên tham gia nghiên cứu Tổ chức hội nghị đồng thuận với lãnh đạo Trung tâm y tế huyện Ban chỉ đạo chăm sóc sức khỏe nhân dân, trưởng trạm y tế xã và thành viên hội khuyến nông xã cũng như hội nông dân tại địa bàn nghiên cứu
Tiến hành lâ ̣p danh sách đối tượng làm nghề phun thuốc ta ̣i đi ̣a phương Cộng tác viên tại các xã gửi thư mời hoặc mời trực tiếp các đối tượng được chọn theo danh sách đã được ấn định
Tổ chức đoàn điều tra thu thập số liệu mỗi đợt gồm các thành viên sau:
Bảng 2.7 Thành viên tham gia thu thập số liệu tại địa bàn nghiên cứu
STT Thành viên Công việc Số lượng
01 Điều dưỡng Tiếp nhận thư mời, cân đo chiều cao 01
02 Bác sỹ / Y sỹ Khám sàng lọc (trạm y tế 01) 02
05 Giảng viên Tư vấn, hướng dẫn lấy mẫu tinh dịch 02
06 Trưởng đoàn Điều phối chung 01
Bước 2: thu thập thông tin, số liệu
♦ Thu thập các yếu tố dịch tễ và tính chất công việc
Phỏng vấn trực tiếp đối tượng nghiên cứu mặt đối mặt thông qua bộ câu hỏi cấu trúc (phụ lục 3)
♦ Thu thập chỉ số Cholinesterase (PChE):
Cholinesterase (PChE) được thu thập bằng cách lấy mẫu máu toàn phần Mẫu máu được ly tâm tách huyết thanh tại địa điểm nghiên cứu, bảo quản ở 4 0 C trong thùng lạnh và vận chuyển về Bộ môn Xét nghiệm, tiếp tục bảo quản ở -70 0 C, đến khi phân tích Thực hiện phân tích trên máy sinh hoá tự động hãng Beckman coulter AU 480
Mẫu chúng tôi tập trung chạy từng đợt (7 đợt) Việc kiểm soát chất lượng nội kiểm, trước khi chạy mẫu mỗi đợt chúng tôi sử dụng mẫu kiểm từ hãng Cormay mẫu bình thường và mẫu có giá trị cao với 2 lô như sau CORMAY SERUM HN (Cat No 5-
172) và CORMAY SERUM HP (Cat No 5-173) Để hiệu chuẩn hệ thống máy phân tích tự động AU480, chúng tôi sử dụng mẫu multicalibrator CORMAY level 1 và 2 (Cat No 5-174; 5-176)
Bảng 2.8 Kết quả nội kiểm PChE
Xét nghiệm phòng Giá trị công ty cung cấp
♦ Thu thập Creatinine trong nước tiểu
Mỗi người dân tham gia nghiên cứu được cấp phát 2 lọ đựng nước tiều, lấy mẫu vào buổi sáng tại nhà và mang đến địa điểm nghiên cứu bao gồm lọ fancol 50 ml để phân tích chất chuyển hoá DAP và lọ miệng rộng có nắp đậy 50 ml để phân tích Creatinin trong nước tiểu kết quả này dùng để hiệu chỉnh DAP Trong mẫu nước tiểu nồng độ các chất chuyển hoá DAP sẽ bị ảnh hưởng bởi các chất hữu cơ hoà tan trong nước tiểu, những mẫu có nồng độ Creatinin cao (> 300 mg/dl) hoặc những mẫu nước tiểu có nồng độ chất hoà tan quá loãng (< 30 mg/dl), mẫu này sẽ được loại bỏ kết quả DAP, do đó chúng tôi tiến hành định lượng Creatinin trong nước tiểu nhằm mục đích hiệu chỉnh kết quả, thực tế chúng tôi đã loại 20 đối tượng có kết quả Creatinin không đạt yêu cầu Chúng tôi thực hiện định lượng Creatinin theo phương pháp phương pháp Kinetic, phản ứng Jaffe, đo ở bước sóng 450 nm, mẫu nước tiểu pha loãng tỷ lệ (1/20) Thực hiện trên máy sinh hoá bán tự động Humalyzer 3000 Để kiểm soát chất lượng chúng tôi sử dụng mẫu chuẩn (Creatinine standard 2mg/dl) chạy song song trong mỗi lô chạy mẫu
♦ Thu thập 6 chất chuyển hoá DAP nước tiểu:
Quy trình nghiên cứu
2.7.1 Sơ đồ các bước thực hiện khảo sát quy trình phân tích DAP
Chất chuẩn, mẫu thử, thuốc thử
Mẩu đường chuẩn, mẫu kiểm chứng Điều kiện Khối phổ Điều kiện sắc ký
Phương pháp xử lý mẫu nước tiểu
Khảo sát các điều kiện cho quy trình
Tính phù hợp hệ thống
Giới hạn định lượng dưới Độ đặc hiệu Độ đúng và chính xác trong ngày Độ ổn định mẫu
2.7.2 Sơ đồ tiến trình nghiên cứu cắt ngang
Sơ đồ 2.2 Sơ đồ tiến trình nghiên cứu cắt ngang
Phun cho ai Hình thức
Loại OP Pha trộn Đọc HD Chiều phun
Khẩu trang Găng tay Áo, quần Mắt kính Nón bảo hộ
DAP/URINE (DMP, DMTP, DMDTP, DEP, DETP,
TRIỆU CHỨNG Đỏ mắt Ngứa da
3 Tổng số tinh trùng di động (PR+NP)
4 Tinh trùng di động tiến tới nhanh (PR)
5 Tinh trùng bất động (IM)
7 Điểm số chất lượng tinh trùng
8 Tổng số tinh trùng/ 1 lần xuất tinh
2.7.3 Quy trình thực hiện nghiên cứu can thiệp tại cộng đồng
Sơ đồ 2.3 Mô hình nghiên cứu can thiệp ta ̣i tỉnh An Giang
1 Truyền thông giáo dục sức khoẻ
2 Những hiểu biết cơ bản về thuốc BVTV
3 Hướng dẫn sử dụng thuốc BVTV đúng, an toàn và hiệu quả
4 Phát dụng cụ bảo hộ lao động Đánh giá CSHQ
Thay đổi các chỉ số DAP trong nước tiểu, Thay đổi cholinesterase (PChE)/HT Thay đổi thông số tinh dịch đồ
Khảo sát đặc tính mẫu nghiên cứu Xét nghiệm DAP trong nước tiểu Xét nghiệm PChE trong huyết thanh Xét nghiệm tinh dịch đồ
Thời gian can thiệp: 1 năm
Phương pháp phân tích dữ liệu
Nhập liệu: Dữ liệu được nhập bằng EpiData 3.1
Phân tích thống kê bằng phần mềm Stata phiên bản 16.0 Cụ thể như sau:
2.8.1 Phân tích dữ liệu cho mục tiêu 2, 3 Đặc điểm dân số được mô tả tổng trên toàn dân số nghiên cứu và mô tả riêng cho nhóm phơi nhiễm và nhóm chứng kèm kiểm định sự khác biệt giữa hai nhóm Tuổi được mô tả bằng trung bình và độ lệch chuẩn và áp dụng kiểm định bằng T độc lập Nhóm tuổi, trình độ học vấn, thu nhập, sử dụng rượu bia, hút thuốc lá, các tiền sử sức khỏe sinh sản được mô tả bằng tần số và tỷ lệ, và áp dụng kiểm định Fisher’s exact Riêng các đặc điểm về công việc phun thuốc và triệu chứng thường gặp sau phun thuốc chỉ áp dụng cho nhóm phơi nhiễm và được mô tả bằng tần số và tỷ lệ
Tác động của thuốc BVTV thông qua đánh giá PChE, DAP và chất lượng tinh trùng được mô tả cho toàn mẫu và so sánh giữa nhóm phơi nhiễm với nhóm chứng Nồng độ PChE trung bình và độ lệch chuẩn được mô tả và so sánh bằng kiểm định T độc lập Nồng độ DAP và các chỉ số chất lượng tinh trùng được mô tả bằng trung vị và tứ phân vị và kiểm định Mann-Whitney Để đạt được các giả định về phân phối của các phép thống kê, tổng DAP và chất lượng tinh trùng được chuyển đổi sang Ln và mô tả bằng trung bình, độ lệch chuẩn, kiểm định bằng T độc lập Các phân nhóm PChE và bất thường chất lượng tinh trùng cũng được mô tả bằng tần số và tỷ lệ đồng thời áp dụng kiểm định Fisher’s exact
Mối liên hệ giữa PChE và DAP với các thông số chất lượng tinh trùng được đánh giá đơn biến thông qua tương quan Pearson Hồi quy tuyến tính đa biến được sử dụng để xác nhận các yếu tố liên quan độc lập Các biến số độc lập của mô hình được xác định dựa trên phân tích Directed Acyclic Graphs Theo sơ đồ 3.2, mối liên quan giữa phun thuốc BVTV và chất lượng tinh trùng có thể bị ảnh hưởng bởi PChE, DAP, tuổi, sử dụng rượu bia, hút thuốc lá Đây là những yếu tố cần kiểm soát trong hồi quy đa biến Mô hình đa biến tiếp tục được rút gọn để đảm bảo tất cả các biến trong mô hình đều có ý nghĩa thống kê với p
