Báo cáo thí nghiệm phân tích hóa lí thực phẩm

Báo cáo thí nghiệm phân tích hóa lí thực phẩm I. Xác định acid Benzoic và acid Sorbic trong thực phẩm bằng phương pháp HPLC

BÀI BÁO CÁO SỐ 3

Môn: Thí nghiệm phân tích hóa lý thực phẩm 1

Nhóm 8: Nguyễn Thị Phận

Nguyễn Thị Tuyết Vy Huỳnh Ngọc Như Ý

I Xác định acid Benzoic và acid Sorbic trong thực phẩm bằng phương pháp HPLC

1 Mục đích:

 Xác định acid benzoic và acid sorbic trong thực phẩm bằng phương pháp HPLC

 Đọc được kết quả phân tích từ sắc kí đồ

2 Tóm tắt quy trình thực hiện:

- Bước 1: Cân mẫu và xử lý mẫu:

+ Cân trực tiếp vào ống ly tâm khoảng 5g mẫu

(m mẫu cân thực tế=5,8706 g¿ + Thêm 20ml dung dịch đệm format pH = 4,3

+ Vortex trong 1 phút

+ Đánh siêu âm ( Mode: Swep) 20 phút

+ Thêm 5ml dung dịch (CH3COO)2Zn 20% và 5ml Na2HPO4 bão hòa

+ Vortex trong 1 phút → cân biết khối lượng để điều chỉnh trước khi ly tâm + Ly tâm 5000/phút trong 10 phút

+ Gạn phần dung dịch trong → BĐM 100ml

+ Thêm tiếp vào ống ly tâm 40ml nước cất, vortex 2 phút cho tan kết tủa, sau đó

ly tâm thêm một lần nữa, gạn phần dung dịch trong → BĐM 100ml, dùng nước cất định mức tới vạch

+ Lọc

o Lọc lần 1 qua giấy lọc

o Lọc lần 2 qua phin lọc

- Bước 2: Pha chế các dung dịch chuẩn để định tính và định lượng

+ Pha 100ml dung dịch chuẩn acid benzoic 1000ppm từ acid benzoic rắn: cân 0,1000g acid benzoic; hòa tan bằng 10ml CH3OH→ BĐM 100ml → dùng dung dịch đệm pH = 4,3 để định mức

+ Pha chế 100ml dung dịch chuẩn acid sorbic 1000ppm từ acid sorbic rắn: cân 0,1000g acid sorbic; hòa tan bằng 10ml CH3OH→ BĐM 100ml → dùng dung dịch đệm pH = 4,3 để định mức

+ Pha chế 50ml dung dịch chuẩn đơn acid benzoic 20ppm từ 1000ppm Hút 1ml acid benzoic 1000ppm→ BĐM 100ml → dùng dung dịch đệm pH = 4,3 để định mức

+ Pha chế 50ml dung dịch chuẩn đơn acid sorbic 20ppm từ 1000ppm Hút 1ml acid sorbic 1000ppm→ BĐM 100ml → dùng dung dịch đệm pH = 4,3 để định mức

+ Pha chế 100ml dung dịch chuẩn hỗn hợp 100ppm acid benzoic và 100ppm acid sorbic:

Hút 10ml acid benzoic 1000ppm Hút 10ml acid sorbic 1000ppm

- Bước 3: Dựng dãy chuẩn hỗn hợp

3

Chuẩn 4

Chuẩn gốc

Định tính

Định lượng

BĐM 100ml + Đệm pH = 4,3 định mức tới vạch

Từ các bình C1,C2,C3,C4: lọc vào vaio qua phin lọc 0,45µm Rồi đem đo mẫu và chuẩn trên máy HPLC với đầu dò DAD (Diod Array Detector)

- Bước 4: Tính kết quả:

Benzoic (mg/kg) = C X *10 -3 *V đo *(1000m

m )*f

Sorbic (mg/kg) = C Y *10 -3 *V đo *(1000m

m )*f

CX =S X−A1

B1 ; CY =S Y−A2

B2

Với: S X và S Y là diện tích của Benzoic và Sorbic trong mẫu đem đo

f = 1

Acid Benzoic: Diện tích cực đại: λ max=227 nm

Acid Sorbic: Diện tích cực đại: λ max=260 nm

PTHQ: Của Ben →Y = A 1 + B 1 X

Của Sor → Y = A 2 + B 2 X

3 Vai trò dụng cụ, thiết bị

3.1 Dụng cụ:

 Bình định mức 100ml: dùng để định mức dung dịch mẫu và dung dịch chuẩn hỗn hợp acid benzoic + acid sorbic

 Bình định mức 50ml: dùng để định mức dung dịch chuẩn đơn acid benzoic

và acid sorbic

 Pipet vạch 5ml: hút dung dịch (CH3COO)2Zn 20% và Na2HPO4 bão hòa

 Pipet vạch 1ml : hút dung dịch a benzoic 1000 ppm + a.sorbic 1000ppm

 Cốc thủy tinh 100ml: chứa các dung dịch, đựng ống ly tâm

 Cốc thủy tinh 250ml: chứa nước thải

 Bình tia: dùng đựng nước cất 2 lần và tráng các dụng cụ

 Bóp cao su: Hỗ trợ hút dung dịch cần thêm vào cùng với pipet

 Ống nhỏ giọt: thêm nước cất vừa tới vạch chính xác cho quá trình định mức

 Đũa thủy tinh: dùng khuấy dung dịch, điều chỉnh lượng mẫu cho vào

 Ống ly tâm 50ml: chứa mẫu cần ly tâm

 Bơm kim tiêm + xi lanh: dùng hút dung dịch chuẩn cho vào vaio

 Phin lọc 0,45 μmm: lọc dung dịch khi chuyển dung dịch từ bơm kim tiêm vào vaio

 Vaio : chứa dung dịch để đo trong máy HPLC

 Giấy lọc: lọc dung dịch sau khi ly tâm lần 2 vào BĐM

 Phễu thủy tinh: chuyển dung dịch trong ống ly tâm vào bình định mức (lọc lần 1)

3.2 Thiết bị:

 Cân phân tích: cân mẫu rắn để pha chế dung dịch

 Cân kỹ thuật: cân và điều chỉnh khối lượng ống mẫu trước khi cho vào máy

ly tâm

 Máy lắc vortex: dùng để lắc cho mẫu hòa tan vào dung môi

 Máy run siêu âm: dùng sóng siêu âm đâm xuyên qua mẫu làm phá vỡ cấu trúc mẫu

 Máy ly tâm: ly tâm mẫu

 HPLC dùng cột pha đảo và đầu đo DADl: dùng để đo sắc ký đồ của mẫu và chuẩn

4 Vai trò của hóa chất sử dụng:

- Acid Benzoic rắn:1000ppm → pha dung dịch chuẩn

- Acid Sorbic rắn: 1000ppm → pha dung dịch chuẩn

- Dung dịch acid Benzoic: 20ppm→ dung dịch chuẩn

- Dung dịch acid Sorbic: 20ppm → dung dịch chuẩn

- Dung dịch hỗn hợp Ben-Sor: 100ppm → dung dịch chuẩn

- Zn(CH3COO)2 20%: V= 5ml: hỗ trợ tách chiết acid benzoic và acid sorbic trong mẫu thực phẩm, tạo tủa với các protit, lipid, khử tạp trong mẫu

- Na2HPO4 bão hòa: V= 5ml: hỗ trợ tách chiết acid benzoic và acid sorbic trong mẫu thực phẩm, tạo tủa với các protit, lipid, khử tạp trong mẫu

- Dung dịch đệm pH = 4,3: dùng để ổn định pH khi thêm một lượng acid hay base không làm thay đổi đáng kể pH trong dung dịch

- CH3OH 20%: V=10 ml, pha chế dung dịch chuẩn gốc

5 Số liệu thực nghiệm:

(m mẫu cân thực tế=5,8706 g¿

S X=3439,73730

S Y=312,85840

Bảng số liệu đo được thực tế tại các nồng độ 5ppm, 10ppm, 20ppm, 40ppm của hỗn hợp Ben-Sor

Acid Benzoic: Diện tích cực đại: λ max=227 nm

Acid Sorbic: Diện tích cực đại: λ max=260 nm

Acid

Benzoi

c

C (ppm

S 439,73721 901,74023 1737,46387 3480,27417

Acid

Sorbic

C (ppm

S 1214,92236 2493,21191 4815,50049 9621,15039

6 Tính toán kết quả:

- Nhập PTĐC của acid benzoic

Tính được:

A1 = 10,0216 B1 = 86,7881

R = 0,99995

- Nhập PTĐC của acid sorbic

Tính được:

A2 = 29,0923 B2 = 239,99097

R = 0,99995

- Từ các dữ liệu trên, ta có:

CX =S X−A1

B1 ¿

3439,73730−10,0216

CY =S Y−A2

B2 =

312,85840−29,0923

 Benzoic (mg/kg) = CX *10-3 * Vđo * (1000m

m ) * f

= 39,5183 *10-3 * 100 *5,87061000 ∗1

= 673,156 mg/kg

 Sorbic (mg/kg) = CY * 10-3 * Vđo * (1000m

m ) * f

= 1,1824 *10-3 * 100 *5,87061000 ∗1

= 20,141 mg/kg