Báo Cáo Khảo Sát Độ Bền Màng Hồng Cầu.pdf

Các loại môi trường Môi trường nhược trương là môi trường có nồng độ chất tan bên ngoài tế bào nhỏ hơn bên trong tế bào và các phân tử nước thâm thấu vảo trong tế bảo.. Môi trường đẳng

DAI HOC QUOC GIA THANH PHO HO CHi MINH

DAI HOC KHOA HOC SUC KHOE

NGANH RANG HAM MAT

Thành viên: Nguyễn Vũ Bảo Ngoc (L)

Hoàng Quốc Huy

Nguyễn Vũ Lan Anh

Huỳnh Võ Đức Thịnh Ngô Minh Quốc Báo Tháng 03/2023

Jc lục

GIỚI THIỆU TÔNG QUAN 5 Sccccczxsrrrssez

MSSV: 227720501051 MSSV: 227720501033 MSSV: 227720501055 MSSV: 227720501038 MSSV: 227720501031

1 TẾ bào hồng cầu - 1 ST E1 E11 112122111 1 21111 12111 tri 3

a Hình thể s: 222 2221 2211122111221 2 1 2H ra 3

b Thành phần cấu tạo - 52 ST E2 11211212 111211 trung 3

c Số lượng hồng cầu 1S SE 1121121111111 2112111 1 Ẹn 1g Hai 4

d Chức năng của hồng cầu - 5: SE E1 E122 11 1t t1 ng rưey 5

2 Ánh hưởng của các môi trường đối với màng hồng cầu - 5c se: 5

a Áp suất thẩm thấu - c2 11t 1112121211121 ng ren 5

b Các loại môi trường Q01 1212112 11H 1211112112101 111111111 xe 6

c Ánh hưởng của môi trường với tế bào hồng cầu - 2S cv srrrez 6

3 Mật độ hồng cầu 2-1 T1 E121 21 1212121212121 ng rườg 7

a Buong đếm hồng CẦU ST 2E HH1 nn H1 HH ng ng re 7

b Cách đếm hồng cầu - ST 1 11121111211 11212111 1E ng ga 8

c Công thức tính mật độ hồng cầu S9 E1 1 E12 tr He ray 8

II PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM . 25222222221222112221221221211 22121 xe 9

TV THẢO LUẬN VÀ KẾT LUẬN -252:222:222222221222111221122112711 221152 cErrrreg 19

V._ TÀI LIỆU THAM KHẢO 5 c2 1 12122111551 111111115112111 1101111121011 re 22

I _ GIỚI THIỆU TỔNG QUAN

1 Tế bào hồng cầu

a Hình thể

Hồng cầu là những tế bào không nhân, hình đĩa , lỏm 2 mặt

Đường kính của hồng cầu là 7-8 micromet, chiều dài tế bào ở trung tâm là l micromet

và ở ngoại vi là 2-3 micromet

Hình đĩa lỏm 2 mặt thích hợp với khả năng vận chuyên khí của hồng cầu vì

- Nó làm tăng diện tích tiếp xúc của hồng cầu lên 30% so với hồng cầu hình cầu Tổng diện tích tiếp xúc của hồng cầu trong cơ thể là 3000m2

Na‘, Ca’* tham qua rat ít và rat cham, hoac khong qua duoc (Ca**, Mg”")

Thanh phan héng cau

- Lop lipit (lam giữ nguyên hình dạng của hồng cầu) gồm: Phospholipit chiếm 65% chủ yếu có 4 loại sau:

o_ Phosphatidyl ethanolamin

o Phosphatidy] serin

o Phosphatidy] cholin

o Sphingomyelin, trong đó :

Cholesterol 25 phan tram

Glycolipit 10 phan tram

- Lớp trong cùng: là những sợi vi thể, những ống vi thể và những phân tử calmodulin, protein gắn hemoglobin Các phân tử calmodulin điều hòa hoạt động các enzym ở màng

Ngoài ra, trong hồng cầu con co G6PD (Glucose 6-phosphat - dehydro genase), anhydrase cacbonic (carbonic anhydrase)

c Số lượng hồng cầu

Ở người Việt Nam trưởng thành :

- Nam: 4.200.000 + 210.000 mau

- Nữ : 3.800.000 + 160.000 mau

Số lượng hồng cầu trong hệ tuần hoàn luôn được điều hòa một cách thích hợp, dé

cung cấp đủ lượng oxy cho mô

Bắt kì nguyên nhân nào gây nên sự giảm lượng oxy chuyên chở đến mô đều làm tăng

Số lượng hồng cầu phụ thuộc vào sự bài tiết erythroietin, vì erythropoietin tác động lên tủy xương, làm tủy xương tăng sản xuất hồng cầu

Số lượng hồng cầu thay đổi trong các trường hợp bệnh lý :

- _ Hồng cầu tăng trong bệnh đa hồng cầu ( bệnh Vaquez ), trong ngạt, trong tinh trạng mất nước nhiều do tiêu chảy, nôn ói nhiều hoặc do bị phỏng gây mat huyết tương

- _ Số lượng hồng cầu giảm trong các bệnh thiếu máu, xuất huyết

máu ngoại vi giảm, gây thiểu oxy ở mô do đó sẽ tăng sản xuất hồng cầu đề đảm

bảo hô hấp

d Chức năng của hồng cầu

Chức năng hô hấp là chức năng chính của hồng cầu Chức năng này được thực hiện nhờ huyết cầu tô (hemoglobin) chứa trong hồng cầu, giúp vận chuyên khí oxy từ phôi

đến các tế bào trong cơ thể và đồng thời nhận lại khí cacbomic từ các mô lên đào thải ở

phôi

Hồng cầu còn giúp vận chuyển các axit béo, axit amin và glucose từ các vi nhung mao ruột non đến các tế bào và các tô chức trong cơ thê Tiếp đó, máu sẽ mang cặn bã của quá trình chuyền hóa này đến các cơ quan bài tiết

Chức năng điều hòa cân bằng toan — kiềm của cơ thể: Hemoglobin trong hồng cầu thực hiện một hệ thống đệm quan trọng Nhân Imidazol của histidm trong globm có một sự cân bằng giữa dạng axit và dạng kiềm nên pH ít thay đối Tác dụng đệm của

Hb chiém 70% tac dụng đệm của máu toàn phan

Chức năng tạo áp suất keo: Những thành phan cấu tạo của hong cau phần lớn là protein, nên góp phần tạo áp suất keo của máu

2 Ảnh hưởng của các môi trường đối với màng hồng cầu

a Áp suất thẩm thấu

Tham thấu là quá trình vận chuyên dung môi qua màng ngăn cách giữa hai dung dịch

có thành phần khác nhau và chịu tác dụng của các lực Động lực của quá trình này

được gọi là áp suất thẩm thấu Thông thường dung môi sẽ đi từ nơi có áp suất thâm thấu thấp đến nơi có áp suất cao

Áp suất thâm thấu của máu là chỉ số quyết định sự phân phối nước trong cơ thê Nó phụ thuộc chủ yếu vào lượng nước và nồng độ các chất hoà tan trong máu như Na" và glucose

Đối với hồng cầu, áp suất thâm thấu đóng vai trò vô cùng quan trọng Bởi nó giúp tao nên sự cần bằng Khi chúng ta thay đổi mức áp suất này thì hàm lượng nước có trong

tế bào cũng có sự dịch chuyển Từ đó, hiện tượng rối loạn chức năng tế bào xuất hiện

gây nên những vấn đề khác cho sức khỏe

b Các loại môi trường

Môi trường nhược trương là môi trường có nồng độ chất tan bên ngoài tế bào nhỏ hơn bên trong tế bào và các phân tử nước thâm thấu vảo trong tế bảo

Môi trường đẳng trương là môi trường có nồng độ chất tan bên ngoài tế bào bằng nông độ chất tan trong tế bào và các phân tử nước di chuyên ở trang thái cân bằng Môi trường ưu trương là môi trường có nông độ chất tan bên ngoài tế bào lớn hơn và các phân tử nước thâm thấu ra ngoài tế bào

c Ảnh hưởng của môi trường với tế bào hồng cầu

Hồng cầu không thay đôi hình dạng trong dung dịch đăng trương

Trong dung dịch ưu trương, nước trong hồng cầu thâm ra ngoài làm hồng cầu teo lại, nhăn nhúm do chịu tác động của áp suất thâm thấu từ bên ngoài vào

Trong dung dịch nhược trương, dung dịch có áp suất thầm thấu nhỏ hơn nhiều áp suất thâm thấu của hồng cầu, nước từ ngoài thắm vô hồng cầu làm tế bào trương phông lên

và màng của nó bị bung ra do phải chịu tác động của một lực gây ra bởi áp suất thâm thấu từ bên trong làm cho lượng nước trong tế bào ngày cảng tăng cao và cuối cùng, tế bào hồng cầu bị vỡ, giải phóng các chất từ nội bào ra bên ngoài hay còn gọi là hiện tượng tiêu huyết

nên hay gọi là buồng đếm hồng cầu

Ngoài ra, còn có một mạng lưới được khắc vào bên trong phần kính của buồng đếm hồng cầu Lưới này gồm các hình vuông kích thước khác nhau được sắp xếp trật tự, cho phép tính toán dễ dàng các tế bào Bằng cách này, có thê xác định số lượng tế bào trong một thê tích quy định

Cấu tạo

Buông đếm hồng cầu là một phiến kính trong, dày, hình chữ nhật

Thiết kế chia làm 3 phân, ở giữa là phần lõm, phăng, chia làm 2 khoảng nhỏ

Trên mỗi khoảng nhỏ ở phần giữa có kẻ I lưới đếm 25 ô vuông lớn, mỗi ô vuông lớn gồm l6 ô vuông nhỏ, như vậy buồng đếm có 400 ô vuông nhỏ (16x25) có tổng điện

tich 1 mm”

Dién tich | 6 vuéng nho là

Dién tich 1 6 vuông lớn là

Buồng đếm có 2 lá kính (lamen) dày để đậy, rộng 22 mm Độ sâu buồng đếm hồng

cầu (tính từ kính đậy tới mặt buồng đếm) là 0.1mm

Thể tích của buồng đếm =

Phân loại

Có 2 kiểu kẻ chia ô buồng đếm:

- Vạch sáng: Lưới ô đêm có các đường ranh giới được khắc vào một lớp màng kim loại mỏng được tạo bằng hơi trên bề mặt buồng đếm Các vạch ranh giới ô đếm này thường tương phản tốt với nền kim loại tôi hơn nên hiện lên màu sáng rõ dưới kính hiển vi Do đó, việc phân định ranh giới của ô đếm trong loại này thường tốt hơn

- Vạch tôi: Lưới ô vuông có các đường ranh giới được khắc vào bề mặt thuỷ tỉnh của

buồng đếm nên khi nhìn qua kính hiển vi thì các đường ranh giới này có màu tôi

- _ Đếm theo hình zigzag từ trái qua phải, từ trên xuống dưới

- _ Đếm tất cả các hồng cầu nằm bên trong 16 ô nhỏ, những hồng cầu nằm cạnh ngoài của 16 ô đó thì chỉ đếm hồng cầu ở cạnh trên và cạnh trái (và chi những hồng cầu nằm vào phía trong ít nhất )

c Công thức tính mật độ hồng cầu

Bước 1: Tính trung bình: Nếu không đếm tất cả các tế bao trong 1 hình vuông lớn thi cần phải tính trung bình các kết quả trước khi tiếp tục

Bước 2: Tính thể tích: Cần xác định thể tích thể hiện bằng các hình vuông Chiều rong

và chiều dài của hình vuông phải được nhân với chiều cao của mẫu

Bước 3: Nhân hệ số pha loãng: Nếu mẫu được pha loãng trước khi đếm, cần phải tính

đên hệ sô này

Il PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM

1 Mật độ hồng cầu

Các bước thực hiện:

Bước 1: Pha loãng mẫu cần đếm với V = 400 pl: Ding pipet lay 399 ul PBS cho vao ống nghiệm, sau đó lấy l ul máu tươi cho vào ống

Bước 2: Lắc đều ống nghiệm pha loãng mẫu

Bước 3: Dùng lamen phủ vào vị trí cần đếm trên buồng đếm, sử dụng pipct lấy 10 uÏ mẫu, giữ đầu pipet chạm nhẹ vào đầu lamen và nhỏ từ từ để dung dịch chảy đầy vào trong buông đếm

Bước 4: Đặt buồng đếm lên bàn soi dưới kính hiền vi Đếm số lượng tế bào theo quy tắc đếm

2 Khảo sát độ bền hồng cầu

Bước 1 Dùng citrate natri/ heparin để lẫy máu chống đông Li tâm 3000 vòng/phút để

bỏ huyết tương

Bước 2 Thêm 2 mÌ PBS vào ống, trộn đều

Bước 3 Đưa ông mẫu di ly tâm thu cặn ở 2000 vòng/phút trong 3 phút đề rửa tế bảo

hồng cầu Lặp lại 2 — 3 lần

Bước 4 Cho 2 ml PBS vào hồng cầu

Bước 5 Chuẩn bị I1 ống l¡ tâm, đánh số Pha 5 ml dung dịch muối NaCl có các nồng

độ 0%; 0,1%; 0,2%; 0,3%; 0,4%; 0,5%; 0,6%; 0,7%; 0,8%; 0,9%; 2%,

Bước 7 Ú 20-30 phút trong nhiệt độ phòng

Bước 8 L1 tâm 2000 vòng/phút trong 3 phút Quan sát màu của dịch

mau trong, hơi

duc, mau đỏ của

hồng cầu lắng dưới đây ống nghiệm

0.7%

mau trong, hơi

duc, mau đỏ của

hồng cầu lắng dưới đây ống nghiệm

mau trong, hơi

duc, mau đỏ của

hồng cầu lắng dưới đây ống nghiệm

IV THẢO LUẬN VÀ KẾT LUẬN

Ở dung dịch NaC1 0% (nước cất), màng hồng cầu vỡ hoàn toàn, do NaCl 0% là môi

trường nhược trương, dung dịch có áp suất thâm thấu nhỏ hơn nhiều áp suất thâm thầu

của hồng cầu, nước từ ngoài thấm vô hồng cầu làm nó phòng to lên, cuối cùng tất cả hồng cầu bị vỡ gây tan máu, các huyết sắc tô thoát ra làm cho dung dịch có màu đỏ

Hình IV.I: Hồng cầu vỡ hoàn toàn trong dung dịch NaC] 0%

Ở dung dịch NaCl 0.4%, mang héng cầu vỡ không hoàn toàn, do NaCl 4% là môi trường nhược trương, nồng độ chất tan trong dung dịch thấp hơn (ở mức chênh lệch không quá lớn) so nồng độ chất tan bên trong hồng cầu, nước từ ngoài thấm vô hồng

cầu làm nó phông to lên, căng ra nhưng chưa vỡ hoàn toàn làm cho dung dịch có màu hồng nhạt, phần hồng cầu còn lại lắng ở đáy ống nghiệm

Hình IV.2 : Hồng cầu vỡ không hoàn toàn trong dung dịch NaC] 0.4%

Ở dung dich NaCl 0.9%, màng hồng cầu ôn định, do NaCl 0.9% là môi trường đăng trương, nồng độ chất tan trong dung dịch bằng với nồng độ chất tan bên trong hồng cầu, các chất tan ở trạng thái cân bằng nên dung dịch có màu trong, hồng cầu lắng lại

ở đáy ống nghiệm

Hình IV.3 : Hồng cầu 6n dinh trong dung dich NaCl 0.9%

Ở dung dịch NaCl 2%, màng hồng câu co lại, do NaCl 2% là môi trường ưu trương, nồng độ chất tan trong dung dịch cao hơn so với nồng độ chất tan bên trong hồng cầu, nước từ trong hồng cầu thấm ra ngoài, làm hồng cầu teo lại, dung dịch vẫn giữ được màu trong suốt, hồng cầu lắng dưới đáy ống như ở trạng thái đăng trương Trong hình của ống NaCl 2%, màu của dung dịch không được trong như ống 0.9% do trong quá

trình làm thí nghiệm, cầm ông lên ghi hình, người cầm đã không cân thận lắc nhẹ

khiên ông có màu đục hơn một chút

Hình IV.4 : Hồng cầu co lại trong dung dich NaCl 2%

V TAI LIEU THAM KHAO

Luu, P D (2008) Chương 2, Sinh ý h:c y khoa - tập 1 (tr 64-70) TP Hồ Chí Minh:

Nhà xuất bản Y học

Buông đếm hồng cẩu xác định nông độ tế bào (2014) Kính hiển vi optika Truy cập vao 30/03/2023, tr http://kinhhienvioptika.blogspot.com/2014/11/buong-dem-hong- cau-xac-dinh-nong-do-te-bao html

Sơn, T (2021) Buông đêm tế bào là gì? Cách sử dụng và nơi cung cấp buông đếm tế bào tư tín TS Chem Truy cập vào 30/03/2023, từ hffps://tsehem.com.vn/buong-dem- te-bao/

Triều, N V (2018) BUÔNG ĐỀM TE BAO NEUBAUER - CÁCH SỬ DUNG VA

BUONG PEM HONG CAU KHONG TRANG BAC (2019) Techlab Truy cập vào

30/03/2023, tw https://techlab.com vn/vi/san-pham/buong-dem-hong-cau-khong-trang- bac-548 html

Các phương pháp đếm tế bào trong xét nghiệm huyết h:c - Phân 1 - Phương pháp

đếm tế bào trỏ kháng (2020) Phương Đông Truy cập vào 31/03/2023, từ

https://ondinhticuduong.com/ap-suat-tham-thau-cua-mau-la-gi/#:~:text=%C3%81

%20suME1%BA%ASt%20th%E1%BA%AIM™20th%E 1 %BA%ASu%20e%E 1% BB

%ATA%20M%C3%A 1u%201%C3%AN%20ch%E 1%BB%89%20s%E1%BB

%91%20quy%E1%BA%BFt,%C4%9I 1%E1%BB%IIng%2 Otrong%20kho%E1%BA

%6A3ng22200.9atp

Áp suất thâm thấu là gì? Cách tính, vai trò, ý nghĩa (2021) VIETCHEM Truy cập

vao 31/03/2023, tw https://ammonia-vietchem vn/tin-tuc/ap-suat-tham-thau-la-

gi html#:~:text=%C3%8 1p%20su%E1%BA%A51%2 0th%E1%BA%AIM%2 0th