Báo cáo thực hành thí nghiệm sinh học Đại cương

T ế bào nhân sơ – Prokaryotic cell Vi khu n và vi khu ẩ ẩn lam là sinh vt nhân sơ Hình 3.1, và s ự đa dạng của chúng là đáng kể >5000 loài.Sinh vật nhân sơ không chứa nhân có màng hoặ

TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM

1 Nguy ễn Vũ Anh Thư _ H2200138

2 Phạm Châu Tri u Tiên _ H2200142 ề

3 Phan Nguy n C ễ ẩm Trang _ H2200155

4 Trần Nguy ễn Anh Thư _ H2200173

THÍ NGHI M 1: MỆ ỘT S Ố THIẾ T B Ị THÔNG DỤNG VÀ THAO TÁC CƠ BẢN TRONG

THÍ NGHI M SINH H C Ệ Ọ

1 T ng quan ổ

Công vi c hàng ngày c a m t nhà sinh hệ ủ ộ ọc liên quan đến vi c s d ng các thi t b ệ ử ụ ế ị cơ bản trong các thí nghi m sinh h c và các thi t bệ ọ ế ị, kỹ thu t vậ à quy trình đặc biệt Các d ng c và thi t b này ụ ụ ế ịcần thi t cho các nghiên cế ứu cơ bản v sinh hề ọc để:

• Hình dung tế bào và bào quan

• Chuẩn bị mẫu t bào ho c chế ặ ất lỏng để xét nghi m ho c tr c quan, m x b nh ph m hoệ ặ ự ổ ẻ ệ ẩ ặc trộn hóa ch t ấ

• Các kỹ thuật sinh h c phân t tiêu chuọ ử ẩn

• Phân tích DNA thành phần tế bào

2 M t s d ng c thí nghiộ ố ụ ụ ệm

2.1 ng nghiỐ ệm – Test tube

Ống nghiệm là dụng cụ th y tinh dùng trong phòng thí nghiủ ệm để ấ l y m u và th các phẫ ử ản ứng hóa học, còn được gọi là ống đun sôi Đây là những ống thanh mảnh với đáy hình chữ U và phần trên m , có th ở ể chứa một lượng nhỏ chấ ỏng và thường được sử dụng trong các thí nghi m khoa t l ệhọc

dàng đặt trên các b m t phề ặ ẳng như bàn thí nghiệm ho c bặ ếp điện Vòi giúp b n d ạ ễ dàng đổ chất lỏng sang các v t ch a khác ậ ứ

2.3 Bình Erlen – Erlenmeyer Flasks

Loại bình này có c ổ hẹp, đáy phẳng tốt cho việc xoáy, lưu trữ

và làm nóng chất lỏng Chúng có độ chính xác trong khoảng 10%

2.4 Đĩa petri – Petri dish

t lo i th y tinh hình tr c s d ng trong phòng thí nghi nuôi cĐĩa Petri là mộ ạ ủ ụ, nông, đượ ử ụ ệm để ấy các vi sinh v t và t bào khác nhau ậ ế

di chuy n mể ột lượng nhỏ chấ ỏt l ng hoặc khi đo và phân phối chất lỏng theo đơn vị mL Khi đo dưới 1 mL, Micropipette chính xác hơn và thân thiện với người dùng

2.6.1 Pasteur pipettes (unit/mL)

Một pipette làm bằng th y tinh mủ ỏng có đầu thuôn nh n, m t s bọ ộ ố ằng nhựa M t b u cao su ộ ầthường được gắn vào đầu của pipette để hoạt động như một máy bơm để hút và xả chất lỏng Nó thích hợp để di chuy n mể ột lượng nhỏ chất l ng không cỏ ần đo chính xác

2.6.1.2 Measuring pipettes (unit/mL)

Pipette thẳng được làm b ng th y tinh ho c nh a v i th ằ ủ ặ ự ớ ể tích tăng dần, được đánh dấu dọc theo ống và có thể đo chấ ỏng khá chính xác, thường đượt l c sử dụng với bơm pipette tự động hoặc thiết

để không khí bên trong n ở ra đẩy h t ch t l ng còn l i ra ngoài ế ấ ỏ ạ

3 M t s nguyên t c pha hóa chộ ố ắ ất

3.1 Chất lượng c ủa hóa chất là chất lượng dùng cho các thí nghi m sinh h c phân t (molecular ệ ọ ửbiology grade)

3.2 Ti t trùng ệ

Hóa chất được pha với nước c t hai l n và kh trùng ấ ầ ử ở điều kiện thông thường Đối với một số hóa ch t không th thanh trùng b ng nhi t, viấ ể ằ ệ ệc thanh trùng được tiến hành v i nh ng phin l c có ớ ữ ọđường kính l l c là 0,2µm ho c 0,45µm ỗ ọ ặ

3.3 Dung d ch m - Stock solutionị ẹ

Các dung dịch thường được pha và bảo quản dướ ạng đậm đặc (dung dịch mẹ) Dung d ch m i d ị ẹđược pha loãng với nước cất hai lần khử trùng để đạt nồng độ cần mỗi lần s d ng ử ụ

3.4 B o quả ản

Dung dịch đã pha có thể bảo quản ở nhiệt độ phòng thí nghi m, nhiệ ở ệt đô 40oC hoặc nhiệt độlạnh sâu 20oC theo khuy n cáo cho t ng lo i hóa ch t Dung d ch b o qu– ế ừ ạ ấ ị ả ản ở – 20oC thường được phân thành những phân đọan nhỏ (aliquot) M i lỗ ần s dử ụng chỉ c n giầ ải đông một phân đoạn

ẩm và cơ học

4.2 Khu y t ấ ừ

Một d ng c phòng thí nghiụ ụ ệm thường đượ ử ụng để khuấy và làm nóng dung dc s d ịch đồng th i ờĐiều này giúp người thực hi n thí nghiệ ệm tăng tốc độ phản ứng và hòa tan h p lý ch t tan trong ợ ấdung môi

4.3 Máy nước cất

Máy chưng cất nước trong phòng thí nghiệm, làm nóng nước thành pha hơi dễ bay hơi do đó tách

nó khỏi các t p ch t khônạ ấ g bay hơi Trong khi các thuật ngữ khử ion và nước cất thường được sử dụng thay th cho nhau, có s khác biế ự ệt đáng kể ề v các lo i t p chạ ạ ất được lo i b ạ ỏ khỏi m i lo i ỗ ạ

4.4 Máy ti t trùng ệ – Autoclave

Thường được sử dụng cho các ng d ng y t ứ ụ ế hoặc công nghiệp, s dử ụng hơi nước dưới áp suất đểtiêu di t vi khu n, vi rút, n m và bào t có h i trên các v t dệ ẩ ấ ử ạ ậ ụng được đặt bên trong bình áp su t ấ

4.5 B cách thể ủy – Water bath

Một thiết b thí nghiị ệm dùng để ủ ẫu ở nhi m ệt độ không đổi trong thời gian dài N i cách th y là ồ ủnguồn nhiệt được ưa chuộng để đun nóng các hóa chất dễ cháy thay vì dùng ng n l a trọ ử ần để tránh bắt l a ử

4.6 T s ủ ấy – Oven

Tủ sấy còn được gọi là lò thí nghiệm, đượ ử ụng để khử trùng chất thải nguy hi m sinh h c, c s d ể ọdụng cụ m x ổ ẻ hoặc môi trường / thu c thố ử cho các xét nghiệm vô trùng, làm khô, sưởi ấm, kiểm tra các ng suứ ất môi trường, chẳng hạn như sự thay đổi về nhiệt độ, ánh sáng và độ ẩm

4.7 Máy lắc ổn định nhi ệt – Shaking incubator

Tủ m lấ ắc được thiết k ng th i và l c ho c khu y mế để ủ đồ ờ ắ ặ ấ ẫu Chúng lý tưởng cho các thí nghiệm nuôi c y t bào, s c khí và hòa tan t bào ho c các phòng thí nghi m th c hiấ ế ụ ế ặ ệ ự ện các loại nghiên c u này ứ

4.8 T nhiủ ủ ệt – Incubator

Tủ m là mấ ột thiết bị dùng để nuôi cấy và duy trì nuôi c y vi sinh ho c nuôi cấ ặ ấy t bào T m duy ế ủ ấtrì nhiệt độ, độ ẩ m tối ưu và các điều kiện khác như hàm lượng CO2 và oxy c a b u không khí ủ ầbên trong

4.9 T c y vô trùng Clean bench ủ ấ –

Là bàn làm việc khép kín được kiểm soát để ngăn bụ ẩn trong không khí và môi trười b ng xung quanh bám vào ho c làm ô nhi m các v t dặ ễ ậ ụng đang làm việc

4.11 Máy sinh hóa bán t ự động

Là m t d ng c ộ ụ ụ dùng để nghiên c u sinh hóa và chuứ ẩn đoán lâm sàng trong phòng thí nghiệm

4.11 Máy ly tâm – Centrifuge

Là m t thi t b trong phòng thí nghiộ ế ị ệm đượ ử ụng đểc s d tách ch t l ng, khí ho c ch t lấ ỏ ặ ấ ỏng, d a ựtrên t ỷ trọng S phân tách được thực hiện b ng cách quay mự ằ ột bình ch a vứ ật liệu ở ốc độ cao; lực t

ly tâm đẩy các vật li u nệ ặng hơn ra bên ngoài bình

TH NGHI M 2: KỆ NH HI N VI QUANG H C V C CH S D Ọ À Á  ỤNG

1 T ng quan ổ

Nhiều sinh v t v c u tr c sinh h c qu nh ậ à ấ ú ọ á ỏ để ó c thể nh n th y b ng m t th ì ấ ằ ắ ườ ng C c nh á à sinh v t h c th ng s d n ậ ọ ườ ử ụ

ọc để át các mẫu vật như vậy K nh hi í ển vi quang học (light microscope) là một hệ thốn

phối h p c ợ ác thấu k ính đượ ắp x c s ếp để ạo ra h nh t ì ảnh phóng to, có thể l y n ấ ét của mẫu vật K nh hi í ển vi quang họ phóng đạ i (magnifies) một mẫu vật, nghĩa là nó tăng kích thước biểu kiến của nó Ph óng đạ i bằng kính hiển vi quan học thường đi km với c i thi ả ện độ ph n gi â ải (resolution), đó là khả n ng ph n bi ă â ệt hai điểm l c à ác điể m ri ng bi t D ê ệ

đó, độ ph n gi i c â ả àng t t th h nh ố ì ì ảnh hi n th c ng s c n ể ị à ắ ét Khả n ng ph n gi i c a m t kh ng c ă â ả ủ ắ ô ó trợ l c x ự ấp x 0,1 m ỉ (1 inch = 25,4 mm), ngh a l m t ch ng ta c ĩ à ắ ú ó thể ph n bi â ệt hai điể m c ch nhau 0,1 mm K nh hi n vi quang h á í ể ọc, đượ

sử d ụng đú ng c ch, c á ó thể ả c i thi ện độ ph n gi i g p 1000 l n (t c l l n 0,1 â ả ấ ầ ứ à ê μm) Kh n ng ph ả ă ân bi t chi ti t c ng ph ệ ế  thuộc v ào độ ương phản (contrast), là sự khác biệt giữa phần sáng nhất và phần tối nhất của h nh t ì ảnh Do đó , nhi ề mẫu v ật đượ c ki m tra b ng k nh hi n vi quang h ể ằ í ể ọc đượ c nhu m b ng thu c nhu m nh n t o l m t ộ ằ ố ộ â ạ à ăng độ ươ t ng ph ả

và làm cho mẫu vật nh n r h n Vi ì  ơ ệc phát minh ra k nh hi í ển vi quang h c c ọ ó ý ngh a v ĩ ô cùng quan tr ọng đố ớ i v i sin học v n ì ó được s d ử ụng để ây dựng lý thuyết t b x ế ào và nghiên cứu cấu trúc sinh h ọc ở ấp độ ế ào K nh hi c t b í ển quang h ọc đã tiế ộ ộ t l m t th gi i m i r ng l ế ớ ớ ộ ớn đố ớ i v i m t v t m tr con ng ắ à â í ườ i Ng y nay, k nh hi n vi quang h c à í ể ọ công cụ c b ơ ản nhất của nhiều nhà sinh vật học

Các bộ ph n ch ậ ính của k nh hi n vi í ể

1.1 K nh hi n vi quang h c ph c h p

1.2 Nghi ên cứu và t m hi ì ểu các bộ phận của k nh hi í ển vi quang học ph c h ứ ợp điể n h nh tr ì ên Hình dưới Kính hiển

á nh s ng c á ó hai, đôi khi ba, h ệ thố ng: h thố ệ ng chi u s ng, h ế á ệ thố ng ch p nh, v c ụ ả à ó thể à l h ệ thống quan s t v ghi l á à ạ 1.3 1.2 H th ng chi u s ng

Hệ thống chiếu sáng, tập trung ánh sáng vào mẫu vật, thường bao gồm nguồn sáng, thấu k nh t í ụ điện và màng chắn điề u sáng Nguồn sáng là một b óng đ n nằm ở đáy của k nh hi n vi Ngu n s ng chi u s ng m u v t b ng í ể ồ á ế á ẫ ậ ằ cách truyền ánh sáng qua một phần mỏng, gần như trong suốt của mẫu vật Tụ quang, nằm ngay bên dưới mẫu vật,

có kh a ho í ặc cần gạt có thể ng m đó ở để điề u ch nh l ỉ ượ ng nh s ng chi u t i m u v t Khi m á á ế ớ ẫ ậ àng điề u s ng m , á ở hình ảnh s s áng; khi đó ng l ại, h nh ì ảnh s b m ị ờ

1.4 H th ng h nh nh

1.5 H ệ thống h nh ì ảnh cải thi ện độ ph ân giải và ph óng đạ ì i h nh ảnh Nó bao g m v ồ ật k nh v í à thấu k nh m í ắt (th ị kính) và một ống k nh V í ật k nh l í à ba hoặc bố n th u k ấ ính đượ c g ắ n tr n m t m m quay M i v t kính l m t lo t ê ộ ă ỗ ậ à ộ ạ các thấu k nh gi í úp ph óng đạ ì i h nh ảnh, cải thi ện độ ph ân giải và hiệu ch nh quang sai trong h nh ỉ ì ảnh Cấu h nh ph ì ổ biến nhất cho k nh hi í ển vi dành cho học sinh bao gồm bốn vật k ính: độ ph óng đạ i th ấp (4X), độ ph óng đạ i trung bình (10X), độ ph óng đạ i cao (40X) và soi dầu (100X) Sử dụng vật kính soi dầu cần có hướng d ẫn đặ c biệt, như đượ c gi i thích trong S dụng v t kính soi d u (100X) v Thí nghi ả ử ậ ầ à ệm 3 để nghi ê n c u vi khuẩn Để tr nh làm ứ á hỏng k nh hi í ển vi của b n, kh ạ ông sử dụng vật k nh soi d í ầu trong quá nh th trì ực hành n y C ng su t ph à ô ấ óng đạ ủa i c mỗi v t k ậ ính đượ c kh c tr n m t b n c a th u k nh (v ắ ê ặ ê ủ ấ í í d : 4X) Th k ụ ị ính l à thấu kính m b à ạn nh n qua K nh hi n ì í ể

vi c m t th k nh l k nh hi n vi m t m t v k nh hi n vi c hai th k nh l k nh hi n vi hai m t Th k nh th ó ộ ị í à í ể ộ ắ à í ể ó ị í à í ể ắ ị í ườ ng phóng đạ i hình ảnh lên 10 lần Thân kính hiển vi là một vỏ kim lo ại để ánh sáng truyền qua ống nhòm Trong kính hiển vi có ống thân uốn cong và ống nhòm nghiêng, ống thân chứa gương và lăng k nh chuy í ển hướng ánh sáng tới

ố ng nh òm Giai đoạ n n à y c nh t m kính m m u v ố đị ấ à ẫ ật đượ c g ắ n tr ên đó

1.4 H th ng xem v ghi

Hệ thống xem và ghi, n u c ế ó, s chuy ển đổ ức xạ thành h nh i b ì ảnh c ó thể xem đượ c v / ho c v nh vi n H à ặ ĩ ễ ệ thố ng xem v ghi h nh th à ì ườ ng bao g m m t m y nh ho c m n h nh video H u h t c c k nh hi n vi h c sinh kh ng c ồ ộ á ả ặ à ì ầ ế á í ể ọ ô ó

hệ thống quan sát và ghi lại

1.5 S d ng k nh hi n vi ph c h p đ ng (upright compound microscope)

Mặc d ù độ ph óng đạ ối đa củ i t a k nh hi n vi nh s ng kh ng t í ể á á ô ăng đá ng k trong th k ể ế ỷ trước, vi c ch t o v thi ệ ế ạ à ết

kế k nh hi í ển vi ánh s áng đã ải thi c ện độ ph ân giải của các mẫu m i h n ớ ơ

1.6 S d ng v t k nh soi d u (100X)

#Hy đả m bảo s dụng dầu soi được cung cấp

1 T p trung v o m u b ng c ch chuy n v t k nh t c ng su t th p nh t sang c ng su t cao nh t ậ à ẫ ằ á ể ậ í ừ ô ấ ấ ấ ô ấ ấ

2 Tr ước khi đặ ậ í t v t k nh soi d u v ầ ào đườ ng d n nh s ng, h y nh m t gi t d ẫ á á ã ỏ ộ ọ ầu soi đượ c cung c p v i m h nh ấ ớ ô ì kết h p v ợ ật k nh 100X l í ên mẫu vật tại khu vực c n quan s ầ át

3 Xoay m ăm quay để ắ g n v t k nh soi d ậ í ầu, sau đó ấ l y n t b ng n é ằ úm điề u ch nh tinh ỉ

# V b t kh trong d u s ọ  ầ  ả nh hưng đến ch t lấ ượng h nh ả nh, hy đảm b o r ng d u kh ng c bả ằ ầ ô  ọt Để loại

b bong b ng, xoay m ăm quay để di chuy n v t k nh soi d u qua l i m t v i l n ể   ầ ạ ộ à ầ

4 Sau khi s d ng, lo i b d u kh i v t k nh ph a tr ử ụ ạ ỏ ầ ỏ ậ í í ướ c b ng c ch lau b ng g c h ằ á ằ ạ ơi ẩ m v i h n h p ete (70%) / ớ ỗ ợ cồn (30%)

#Thn trọng khi s d ng dụ ầu soi

Nếu dầu SOI thấm vào mắt hoc d nh v ào da, hy áp dụng ngay cách x l sau

Mắt: Ra s ch bạ ằng nước ngọt (trn 15 ph t) Da: R a sạch bằng nước và xà phng Khi biểu hiện c a mủ ắt

ho c da c a b n b ủ ạ ị thay đổi ho c v n ti p t  ế ục đau, hy h i  ế ki n b c s ngay l p t c á ĩ  

1.7 B o qu n k nh hi n vi

Kính hiển vi là công cụ mạnh m để hiểu sinh h c Tuy nhi ọ ên, chúng c ng đắ ền, dễ v v t ti ỡ à cần được chăm sóc

đặ c bi t Khi b n s d ng kính hi n vi, h y lu n th c hi n nh ệ ạ ử ụ ể ã ô ự ệ ững điều sau để đả m b o hi u qu ho ả ệ ả ạt độ ng v à ch m ă sóc t ối ư u:

• Luô n mang kính hi n vi c a b n th ể ủ ạ ẳng đứ ng b ằ ng c hai tay ả — m ột tay đặ ưới đế t d v à tay kia quanh c nh á tay c a k nh hi n vi ủ í ể

• Luô n b ắt đầ u b ằ ng c ch l m s ch thị kính v v t kính b ng gi y th u kính á à ạ à ậ ằ ấ ấ

• Luô n b ắt đầ u quan s á t với v t kính c ng su t th p ậ ô ấ ấ

• Nếu bạn chuyển sang vật k nh c í ông suất cao, hãy xoay vật k nh v í ào đú ng v m ị trí ột cách cẩn

th ậ n Kh ng bao giờ p v t kính v ô é ậ ào đú ng v ị í N u v tr ế ật k nh ti p x c v i m u, h y d ng l í ế ú ớ ẫ ã ừ ại

và b ắt đầ ại quá nh quan s u l trì át của bạn v i v ớ ật k nh c í ông suất thấp

• Sau khi chuy n sang v t k nh c ng su t cao, lu n ch s d ng ng vi c ể ậ í ô ấ ô ỉ ử ụ ố ấp để ấ l y n t h nh nh é ì ả

• Khi b ạn đã ho n th nh c ng vi c c a m nh v i k nh hi n vi, h y lau s ch c c v t k nh b ng à à ô ệ ủ ì ớ í ể ã ạ á ậ í ằ

giấy lau vật k nh, qu í ấn d ây điệ n an to àn xung quanh cánh tay c a k nh hi n vi v ủ í ể à đưa k nh hi í ển vi của bạn

về n i c ơ ất giữ

2 Quy tr nh 1: Quan s t m á u

1 L y k nh hi n vi ra kh i t v mang n ấ í ể ỏ ủ à ó thẳng đứ ng b ng m t tay n m v o c nh tay v ằ ộ ắ à á à tay kia c a b ủ ạn đỡ í k nh hiển vi bên d ưới đế ủa n c ó Đặ í t k nh hi ển vi của bạn trên bàn trước mặt b n Kh ạ ông sử dụng khăn giấy hoặc Kimwipes để lau thấu kính của kính hiển vi; chúng có thể làm xước ống kính Chỉ lau thấu kính bằng giấy lau thấu kính

2 C m k nh hi n vi v b t ngu n s ng ắ í ể à ậ ồ á

3 N u n ế ó chưa ở đú ng v , h y xoay ng k ị trí ã ố ính cho đế n khi v t k nh c c ng su t th p nh t (4X) ph h p v ậ í ó ô ấ ấ ấ ù ợ ới ngu ồn sáng (Vật k nh 4X th í ường được ọi là g “vậ í t k nh qu ét” vì ó cho phép người dùng quét c c khu v n á ực l n c ớ ủa mẫu v t) Lu n b ậ ô ắt đầ u ki m tra c c trang tr ể á ình bày với v t k ậ ính c c ng su t th p nh t ó ô ấ ấ ấ

4 X ác đị nh v ng s c p m t b n c ị trí ố ơ ấ ở ặ ê ủa kính hi n vi T y thu c v o lo ể ù ộ à ại kính hi n vi m b ể à ạn đang sử ụ d ng, ng ố

sơ c p di chuy n ng k nh (c v t k nh) ho c b ấ ể ố í ó ậ í ặ àn để ẫu để ậ m t p trung c c th u k nh v o m u v t Ch xoay m á ấ í à ẫ ậ ỉ ột phần của ống s c ơ ấp s di chuyển ống k nh (c í ó vật k nh) ho í ặc b àn để ẫu một khoảng cách t m ương đố ớ i l n Ch n ỉ ên

sử d ụng điề u ch nh th khi b ỉ ô ạn đang xem mẫ u v t b ng v t k nh 4X ho c 10X ậ ằ ậ í ặ

5 N u k nh hi n vi c a b n l hai m t, h ế í ể ủ ạ à ắ ãy điề u ch nh kho ng c ch gi a hai m ỉ ả á ữ ắt để ph h p v i kho ng c ch gi ù ợ ớ ả á ữa các đồ ng tử của bạn Nếu kính hiển vi của bạn là một mắt, hãy mở cả hai mắt khi sử dụng kính hi ển vi; điề u này s làm gi m c ng th ng cho m t c a b n Sau khi th c h nh m t ch t, b n s b qua h nh nh nh ả ă ẳ ắ ủ ạ ự à ộ ú ạ  ỏ ì ả ận được không nhìn qua th k nh ị í

6 Điề u chỉnh c ường độ ánh s áng để tạo sự thoải mái và chất lượng hình ảnh Lấy nét một mẫu vật bằng cách sử dụng các bước sau:

a C t m t m u gi y b o in c ắ ộ ẫ ấ á ó chữ e Đặ t mi ng gi y tr n lam k nh v c nh b ng mi ng che lamen ế ấ ê í à ố đị ằ ế

b Đặ t lam kính nằm ngay bên dưới vật kính có công suất thấp nhất và ở phía bên phải Nó ph ải được đặ t chính giữa lỗ trên sân khấu

c Xoay ng s c ố ơ ấp để di chuy n v t k nh trong v ng 1 cm so v i b ể ậ í ò ớ àn đặ t m u (1 cm = 0,4 in) ẫ

d Nh n qua th k nh v i c hai m t m ì ị í ớ ả ắ ở

e Xoay ng s c p (t c l n ng v t k nh ho c h ố ơ ấ ứ à â ậ í ặ ạ thấ p ti u c ê ự) cho đế n khi th ấ y ch e N u b n kh ng nhìn th y ữ ế ạ ô ấ hình ảnh, chữ e có thể b l ị ệch t âm Đả m b ảo rằng e nằm ngay bên dưới vật k nh v í à bạn có thể nh n th ì ấy một điểm sáng xung quanh e

f Xoay ng vi c ố ấp để ấ l y n t v é à đạt đượ c h nh nh s c n t nh t ì ả ắ é ấ

g Điề u chỉnh m àng điề u sáng của tụ quang sao cho độ sáng của ánh sáng truyền qua mang lại tầm nhìn tốt nhất

g Quan s t ch c á ữ ái, sau đó xoay m ăm quay để ă c n ch nh v t k ỉ ậ ính 10X để ế k t th c vi c quan s t c a b n Kh ng s ú ệ á ủ ạ ô ử dụng vật k nh ng í âm dầu

3 D n dọ ẹp

• Bỏ m u gi y b o v o t i r c ẫ ấ á à ú á

• Rửa lam k nh v í à miế ng che lamen b ng n ằ ướ c, b v o r nh a ri ng v ỏ à ổ ự ê à để à ủ ấ v o t s y

• Dùng giấy lau vật k nh lau th k nh v í ị í à các vật k nh s í ử dụng

• Cất k nh hi n vi v o v c trong t k nh í ể à ị trí  ủ í

THÍ NGHI M 3: QUAN SÁT T Ệ Ế BÀO NHÂN SƠ VÀ NHÂN THỰ C

I LÍ THUY T Ế

1 T ng quan ổ

Tế bào là đơn vị cơ bả n c ủa cơ thể sống vì chúng thực hiện tất cả các quá trình mà chúng ta gọi chung là “sự ống” s Tất cả các sinh v ật đều đượ c c ấu tạo từ các tế bào M c dù h u h t các t bào riêng l ặ ầ ế ế ẻ chỉ có th nhìn th y v i s h ể ấ ớ ự ỗ trợ c a kính hi n vi, m t s có th dài hàng mét (ví d : t bào th n kinh) ho c l n b ng m t qu cam nh (ví d ủ ể ộ ố ể ụ ế ầ ặ ớ ằ ộ ả ỏ ụ: lòng đỏ c a tr ủ ứng đà điểu) Bất ch p nh ng khác bi t này, t t c các t ấ ữ ệ ấ ả ế bào đều được thi t k gi ng nhau và có chung ế ế ố các tính năng cơ bản

Tế bào học là nghiên c u v c ứ ề ấu trúc và ch ức năg củ ế a t bào Các công c chính c a các nhà t bào h c là kính hi ụ ủ ế ọ ển

vi quang h c, kính hi ọ ển vi điệ ử n t và hóa h c t bào B ng cách nghiên c u c u trúc gi i ph u c a t bào, chúng ta ọ ế ằ ứ ấ ả ẫ ủ ế

có th tìm ra manh m i v cách th c ho ể ố ề ứ ạt độ ng c a t bào ủ ế

Trong phòng thí nghi m hôm nay, b n s nghiên c u m t s ệ ạ  ứ ộ ố tính năng và sự khác bi t gi a các t bào s ệ ữ ế ống Trước khi th c hi n bài t p này, hãy xem l i các nét chung v c u tr c và ch c ự ệ ậ ạ ề ấ ứ ứ năng củ ế a t bào trong sách tham kh o ả

2 T ế bào nhân sơ – Prokaryotic cell

Vi khu n và vi khu ẩ ẩn lam là sinh vt nhân sơ (Hình 3.1), và s ự đa dạng của chúng là đáng kể (>5000 loài).Sinh vật

nhân sơ không chứa nhân có màng hoặc bất kỳ bào quan (organelles) có màng nào khác Các bào quan là nh ng ữ chấ t c u trúc có t ấ ổ chức của các đại phân t có ch ử ức năng chuyên biệt và nằm lơ lửng trong t bào ch t T bào ch ế ấ ế ất của sinh v ật nhân sơ đượ c bao bọc trong một màng sinh chất (màng tế bào, plasma membrance) và đượ c bao b ọc

bởi một thành tế bào (cell wall) nâng đỡ được bao phủ bởi một nang (capsule) sền sệt Các Lông roi (tiên mao, flagella) và lông tơ mọc ra g i là ọ pili thường g p ặ ở sinh vật nhân sơ ; roi được sử d ụng để ển, và pili được s ử

dụng để g n m t s ắ ộ ố loại vi khu n lên b m t ho ẩ ề ặ ặc để trao đổi vật chất di truy n v i các vi khu n khác Bên trong t ề ớ ẩ ế bào ch t là các ấ ribosome (cấu trúc nh tham gia vào quá trình t ng h p protein) và các ỏ ổ ợ vùng nhân (nơi tập trung DNA).Sinh v ật nhân sơ không sinh sả n h ữu tính nhưng chúng có cơ chế tái t h p di truy n ổ ợ ề

Hình 3.1 C u trúc c a t bào vi khu n Vi khu n thi u màng nhân T t c các t ấ ủ ế ẩ ẩ ế ấ ả ế bào nhân sơ (vi khuẩn) đề u có vùng nucleoid, ribosome, màng sinh ch t, t bào ch t và thành t ấ ế ấ ế bào, nhưng không phả ấ ả đề i t t c u có roi (1500X) Nhi u t bà vi khu ề ế ẩn đượ c bao b c b i m t nang s n s ọ ở ộ ề ệt và có pili chũng như lông roi.

H u h t vi khu n nh ầ ế ẩ ỏ hơn nhiề u so v i vi khu n lam và không ch a ch t di p l c S a chua là m t ngu n giàu ch ớ ẩ ứ ấ ệ ụ ữ ộ ồ ất dinh dượng cho vi khu n Các t bào vi khu n t o ra h ẩ ế ẩ ạ ầu h t s a chua là Lactobacillus, m t lo i vi khu n thích nghi ế ử ộ ạ ẩ

để ố s ng nhờ đườ ng s a (lactose) Lactobacillus chuy n s a thành sữa chua S a chua có tính axit và gi ữ ể ữ ữ ữ đượ c lâu hơn sữ a Trong lịch s ử, Lactobacillus đã đượ c sử dụng ở nhi ều nơi trên thế giới bởi nh ững ngườ i thiếu lactase, một loạ i enzyme phân h y lactose Nhi u n ủ ề ền văn hóa Trung Đông và Châu Phi sử d ụ ng s ữa chua để d ễ tiêu hóa hơn trong chế độ ăn uố ng c a h thay vì s ủ ọ ữa.

3 T bào nhân thế ực – Eukaryotic cell

Tế bào nhân thực có cấu trúc phức tạp hơn tế bào nhân sơ Mặc dù một số đặc điểm của tế bào nhân sơ có trong tế bào nhân thực (ví dụ: ribosome, màng tế bào), tế bào nhân thực cng chứa một số bào quan không có trong tế bào nhân sơ

Bảng 3.1 Một vài điểm khác biệt giữa tế bào nhân sơ và tế bào nhân thực và giữa tế bào thự vật và tế bào động

vật

Tế bào nhân

sơ

Tế bào nhân thực Động vt Thực vt Cấu tạo bn ngoài

Thành tế bào

Tồn tại (protein- polysaccharide)

Thiếu vắng Tồn tại Màng tế bào Tồn tại Tồn tại Tồn tại

Lông roi Có thể tồn tại

(mạch đơn) Có thể tồn tại

Thiếu vắng trừ bào tử một vài loài

Cấu tạo bn trong

Lưới nội chất Thiếu vắng Thường tồn tại Thường tồn tại

Trung thể Thiếu vắng Tồn tại Thiếu vắng

Bộ máy Golgy Thiếu văng Tồn tại Tồn tại

Các bào quan khác

Lục lạp Thiếu vắng Thiếu vắng Tồn tại

Nhiễm sắc thể Một mạch đơn

DNA

Nhiều, phức hợp protein

Nhiều, phức hợp protein

DNA-Không bào Thiếu vắng Thiếu vắng hoặc nhỏ Thường 1 không bào to

Tế bào nhân thực chứa nhân có màng và các bào quan khác (Hình 3.2, Hình 3.3) Hạt nhân chứa vật chất di truyền của tế bào và kiểm soát quá trình trao đổi chất Tế bào chất tạo thành chất nền của tế bào và được chứa bởi màng sinh chất Trong tế bào chất có nhiều loại bào quan Lục lạp là bào quan có màu xanh lục hình elip trong tế bào thực vật Lục lạp là nơi thực hiện quá trình quang hợp trong tế bào thực vật và có màu xanh lục vì chúng có chứa chất diệp lục, một số sắc tố quang hợp có khả năng thu nhận năng lượng ánh sáng Ti thể l à bào quan có trong tế bào động thực vật Các bào quan này là nơi diễn ra quá trình hô hấp hiếu khí Khi quan sát bằng kính hiển vi ánh sáng thông thường, ti thể rất nhỏ, tối và thường khó nhìn thấy Tất cả các vật chất và bào quan chứa trong màng sinh chất được gọi chung là nguyn sinh chất

Hình 3.2 Cấu trúc của tế bào động vật Tế bào được bao bọc bởi một màng sinh chất hai lớp chứa phospholipid

và protein Nhân chứa DNA nhiễm sắc thể và được bao bọc bởi một lớp vỏ nhân có màng kép Các trung tâm tổ chức các sợi hình thoi trong quá trình phân chia tế bào Lưới nội chất (ER) là một hệ thống các màng bên trong tế bào ER thô có nhiều ribosome và ER trơn có ít ribosome hơn Mitochrondria là nơi diễn ra quá trình hô hấp oxy hóa và tổng hợp ATP Vi nhung mao là những hình chiếu của tế bào chất làm tăng diện tích bề mặt của một số tế

bà động vật chuyên biệt Các phức hợp Golgi là các túi và túi phẳng có chức năng thu nhập và đóng gói các chất được tạo ra trong tế bào Ribosome là tập hợp của rRNA và protein tạo ra protein Lysosome chứa các enzym

quan trọng trong việc tái chế các mảnh vụn của tế bào

Hình 3.3 Cấu trúc của tế bào thực vật Hầu hết các tế bào thực vật trưởng thàng đều chứa các không bào trung tâm lớn, chiếm phần lớn thể tích của tế bào Tế bào chất thường là một lớp mỏng giữa không bào và màng sinh

chất Tế bào chất chứa các bào quan của tế bào

Nấm men Saccharomyces cerevisiae là một loại sinh vật đơn bào Có kích thước từ 7 10 µm tế bào nấm men có hình cầu hoặc hình trứng Sinh sản vô tính bằng cách nẩy chồi, ngoài ra còn có thể sinh sản hữu tính.Nấm men được ứng dụng trong công nghệ lên men rượu, cồn, bia, bánh mì.Hiện nay chúng được sử dụng như một công cụ đắc lực để mang các DNA tái tổ hợp phục vụ cho sản xuất các sản phẩm thế hệ mới của kỹ thuật di truyền (Artificial chromosomes - Nhiễm sắc thể nhân tạo).

-II THỰC HÀNH

1 Dụng cụ

- Nhỏ m t gi ộ ọt nướ c c t lên lam kính hi n vi ấ ể

- Hơ que cấy trên đn cồn đến khi đầu que đỏ để kh trùng ử

- Dùng que c y ch m vào khóm n m men trong ng nghi ấ ạ ấ ố ệm, sau đó hòa trộ n vào gi ọt nướ c c ất trên lam kính, đặt một lamen lên lam kính và quan sát m u b ng kính hi n vi quang h ẫ ằ ể ọc

- Kiể m tra b ng kính hi n vi v ằ ể ở ật kính 40X để tìm t bào n m men ế ấ

- L ật ngượ ạ c l i và lo i b ph n m ng c a bi ạ ỏ ầ ỏ ủ ểu bì bên trong đượ c hình thành t ại điểm đứt.

- Đặt mô bi u bì này vào m t gi ể ộ ọt nướ c trên lam kính hi ển vi, đặt m t lamen lên lam kính và quan sát m u b ng kính ộ ẫ ằ hiển vi quang học Luôn kiểm tra v ới độ phóng đạ i th ấp nhất

3.4 Nh n xét ậ

- Vách tế bào – m ột đường ngăn cách giữ a hai t ế bào cạnh nhau tạo thành

- Nhân – có thể xuất hiện hình tròn ph ở ần trung tâm của tế bào

- T ế bào chất – nằm ở xung quanh nhân và sát màng t bào ế

- Không bào – là những khoảng trống trong tế bào chất, rất khó nhận bi ết vì không bào thườ ng ch ứa đầ y d ch t ị ế bào nên không phân bi ệt đượ c ranh gi i gi a t bào và t bào ch ớ ữ ế ế ất.

4 Quan sát t bào lá cây L bế ẻ ạn (Tradescantia discolor L’Her) và lụ ạc l p (t bào nhân thế ực – thự c v t)

4.1 V t li u: lá ậ ệ non đầ u cành c a cây L b n ủ ẻ ạ

4.2 Thí nghi m ệ

- L y m t lá non ấ ộ ở đầ u cành c a cây L b n ủ ẻ ạ

- Dùng đầu kim mi mác lách nhẹ và bóc l y m t l p m ng bi u bì m ấ ộ ớ ỏ ể ặt dướ i lá

- Đặ ớ t l p bi u bì trong m t gi ể ộ ọt nướ c lên lam kính hi ển vi, đặ t m t lamen lên lam kính và quan sát b ng kính hi ộ ằ ển

vi quang h c t v ọ ừ ật kính 10X tăng dần đế n v t kính 40X ậ

4.3 K t qu ế ả

Biể u bì m ặt dướ i lá cây L ẻ b ạn dướ i kính hi ể n vi

4.4 Nh n xét 

- Vách tế bào – có hình d ạng đều đặ n mà b ạn nhìn thấy là các tế bào được bao quanh bởi thành tế bào chủ yếu làm b ng xenlulo ằ

- Màng sinh chất – nằm ngay bên trong thành tế bào

- L ục l p ạ – xu t hi ấ ện dưới d ng hình c ạ ầu màu xanh lục có kích thước vừa ph i trong t bào (d ng qu sung) M ả ế ạ ả ột

tế bào là không gian ba chi u và m t s l c l p có th che khu t nh ng t bào khác ề ộ ố ụ ạ ể ấ ữ ế

- Không bào – chi m khoảng 90% th tích c a m t t ế ể ủ ộ ế bào trưởng thành Nó có nhiều chức năng bao gồm lưu trữ các phân t h ử ữu cơ và vô cơ, ion, nước, enzym và các ch t th ấ ải.

- Nhân – có thể dễ dàng nhìn thấy ho ặc không Nhân thường đượ c g ắn vào các thành tế bào như một hình cầu màu xám m ờ có kích thướ c b ng l c l p ho c l ằ ụ ạ ặ ớn hơn Nhuộ m các t bào b ng m t gi t iot có th ế ằ ộ ọ ể tăng cườ ng nhân N u chu n b t ế ẩ ị ốt, ộ m t lõi nhân có th ể đượ c nhìn th ấy dướ ạ i d ng m ột điểm dày đặ c trong nhân

BÀI 4: QUAN SÁT QUÁ TRÌNH NGUYÊN PHÂN VÀ GI M PHÂN Ả

I T NG QUAN Ổ

1 Quá trình nguyên phân