phạm bích ngọc bước đầu nghiên cứu bào chế viên nang berberin clorid với tá dược cyclodextrin

TỔNG QUAN

Tổng quan về bệnh do nhiễm Leishmania (Leishmaniasis)

1.1.1 Giới thiệu chung về bệnh [22]

Leishmaniasis là bệnh do ký sinh trùng đơn bào tử hơn 20 loài Leishmania gây ra Hơn

90 loài ruồi cát được biết là trung gian lây truyền ký sinh trùng Leishmania qua các vết cắn

Bệnh xuất hiện ở 3 dạng chính:

• Leishmaniasis nội tạng, còn được gọi là kala-azar, gây ra bởi phức hợp Leishmania donovani- L donovani sensu stricto, gây tử vong nếu không được điều trị trong hơn 95% trường hợp Nó được đặc trưng bởi những cơn sốt bất thường, sụt cân, lá lách, gan to và thiếu máu Hầu hết các trường hợp xảy ra ở Brazil, Đông Phi và Ấn Độ Ước tính có khoảng 50.000 đến 90.000 trường hợp

VL mới xảy ra trên toàn thế giới hàng năm, chỉ có 25–45% được báo cáo cho WHO Bệnh có khả năng bùng phát và gây tử vong

• Leishmaniasis ở da, là dạng phổ biến nhất, gây tổn thương da, chủ yếu là loét, trên các bộ phận hở của cơ thể Những điều này có thể để lại những vết sẹo suốt đời Khoảng 95% trường hợp CL xảy ra ở Châu Mỹ, lưu vực Địa Trung Hải, Trung Đông và Trung Á Người ta ước tính có khoảng 600.000 đến 1 triệu trường hợp mới xảy ra trên toàn thế giới hàng năm nhưng chỉ có khoảng 200.000 trường hợp được báo cáo cho WHO

• Leishmaniasis ở niêm mạc dẫn đến phá hủy một phần hoặc toàn bộ màng nhầy của mũi, miệng và cổ họng Hơn 90% trường hợp mắc bệnh xảy ra ở Bolivia, Brazil, Ethiopia và Peru

Mục tiêu của khoá luận này hướng tới việc bào chế viên nang để điều trị bệnh Leishmania nội tạng

1.1.2 Các nhóm thuốc điều trị

- Trong nhiều năm, muối antimoni hóa trị V là thuốc được khuyến cáo hàng đầu cho

VL và CL Muối antimoni hóa trị V– meglumine antimoniate – có hiệu quả khác nhau đối với VL và CL, có thể tiêm tĩnh mạch (IV), tiêm bắp (IM) hoặc tiêm mạch bạch huyết (IL) [24], [25], [26] Hiện đang có những nỗ lực nhằm giảm độc tính và cải thiện việc cung cấp antimoni (Frezard và cộng sự, 2009) bao gồm các công thức dựa trên liposome để điều trị VL (Schettini và cộng sự, 2006) và công thức dựa trên

CD để dùng đường uống (Demicheli và cộng sự, 2004) [24]

- Amphotericin B deoxycholate (Fungizone) là một loại thuốc chống nấm toàn thân và có hoạt tính chống Leishmania cao Do khả năng kháng kháng sinh ngày càng tăng nên nó được sử dụng làm thuốc thay thế để điều trị VL Amphotericin B đã thay thế thuốc antimonials thành liệu pháp điều trị đầu tay đối với VL ở một số khu vực trên thế giới, nơi tỷ lệ thất bại trong điều trị đối với thuốc antimonials đạt >60% Nó có độc tính cao, đòi hỏi phải tiêm tĩnh mạch cẩn thận và chậm rãi Sốt liên quan đến truyền dịch, ớn lạnh và rét run là những tác dụng phụ hầu như phổ biến sau khi điều trị bằng amphotericin B Tác dụng phụ đe dọa tính mạng như hạ kali máu, độc tính trên thận và sốc phản vệ liều đầu tiên không phải là hiếm Hơn nữa, thuốc đắt tiền và đòi hỏi một phác đồ phức tạp [24], [25], [26]

- Miltefosine (Impavido), còn được gọi là hexadecylphosphocholine, là một dẫn chất alkylphospholipid, được phát hiện đồng thời dưới dạng thuốc chống ung thư và thuốc chống bệnh giun đũa (Croft và cộng sự, 1987, Scherf và cộng sự, 1987) Đây là loại thuốc điều trị bằng đường uống hiệu quả đầu tiên chống lại VL, được khuyến cáo là thuốc hàng đầu cho trẻ em nhiễm VL (Bhattacharya và cộng sự, 2004) Hiệu quả chống bệnh leishmania của nó được coi là một sự kiện mang tính bước ngoặt vì đây là lần đầu tiên điều trị bằng miệng hiệu quả cho VL, trong đó có Sbv trường hợp kháng thuốc [24], [26] Tuy vậy, miltefosine cũng có nhiều tác dụng phụ như nhiễm độc đường tiêu hóa nghiêm trọng và tăng đáng kể nồng độ aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase và creatinine trong huyết thanh Miltefosine là chất gây quái thai do đó bị nghiêm cấm sử dụng ở phụ nữ mang thai hoặc ở những phụ nữ có khả năng mang thai trong vòng hai tháng điều trị [25], [26] Nhược điểm của Miltefosine liệu pháp điều trị là thời gian bán hủy dài (150–200 giờ), điều này có thể khuyến khích sự phát triển của tình trạng kháng thuốc và tái phát khi được sử dụng làm thuốc đơn trị liệu, đặc biệt là trong các khóa học không đầy đủ Ngoài ra, bằng miệng điều trị và cải thiện triệu chứng sớm có xu hướng nó để điều trị không đầy đủ mà không có sự giám sát chặt chẽ [26]

- Sitamaquine là thuốc dùng đường uống thứ hai đang được phát triển để điều trị bệnh Leishmania, sau miltefosine và gần đây đã được thử nghiệm lâm sàng (Jha và cộng sự, 2005) Nó là dẫn chất của 8-amino-quinoline và các nghiên cứu lâm sàng sơ bộ ở Kenya và Brazil cho thấy hiệu quả khả quan đối với các loài Leishmania khác nhau (Sherwood và cộng sự, 1994, Dietze và cộng sự, 2001) Một nghiên cứu gần đây cho thấy rằng nó tấn công succinate dehydrogenase, gây ra stress oxy hóa ở L donovani prosastigotes (Carvalho et al., 2011) [24] Các tác dụng phụ bao gồm nhiễm độc thận

4 (viêm thận), đau bụng và nhức đầu, chủ yếu có thể quan sát được ở những bệnh nhân dùng liều cao hơn [26]

Tóm lại, tất cả các loại thuốc nêu trên nếu sử dụng riêng lẻ để điều trị bệnh Leishmania đều có những hạn chế Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), sau cuộc họp năm 2010, khuyến khích các nước áp dụng chính sách dựa trên kết hợp các liệu pháp có sẵn (WHO, 2010) Tuy nhiên, việc hạn chế về đường dùng trên thị trường, các vấn đề về độc tính và kháng thuốc của các liệu pháp hiện tại làm nổi bật sự cần thiết của các loại thuốc mới cho bệnh nhân VL [24]

Gần đây, BBR, một dược chất có nguồn gốc thiên nhiên nhưng kém tan và kém hấp thu khi dùng qua đường uống, đang thu hút được sự chú ý để phát triển các dạng thuốc mới kháng Leishmania Bên cạnh đó, các dẫn chất CDs cũng cho thấy đây là 1 nhóm tá dược có tiềm năng trong việc phát triển các dạng thuốc đường uống để điều trị Leishmania Các đặc tính đáng chú ý và tiềm năng của BBR và CDs trong việc phát triển dạng thuốc dùng đường uống kháng leishmania được trình bày dưới đây.

Tổng quan về Berberin clorid

Hình 1.1 Công thức cấu tạo của berberin clorid 1.2.1.2 Công thức phân tử: C20H18NO4C1.2H2O [2]

1.2.1.4 Tên khoa học: 5,6 dihydro-8,9-dimethoxy-1,3-dioxa-6a-azoniaindeno (5,6-a) anthracen clorid dihydrat

Berberin là một alkaloid thuộc nhóm isoquinolin Trong tự nhiên ở Việt Nam, BBR được tìm thấy trong rễ, thân rễ, thân và vỏ cây một số loài thực vật như Vàng Đằng (Cosinium usitatum Pierre), Hoàng liên gai (Berberis wallichiana DC), Hoàng liên gai (Maholia

5 bealii Carr) Hiện nay BBR được chiết xuất chủ yếu từ thân và rễ cây Vàng Đằng (Coscinium fenestratum), với hàm lượng 1,5 -2,3 % [1]

Cảm quan: Tinh thể hay bột kết tinh màu vàng, không mùi, có vị rất đắng [2] Độ tan: Tan trong nước nóng, khó tan trong ethanol và nước, rất khó tan trong cloroform, không tan trong ether [2]

BBR không có carbon bất đối nên không có đồng phân quang học

BBR là một base có tính kiềm yếu do có một phân tử N, có khả năng tác dụng với acid tạo muối berberin clorid, berberin sulfat( các dạng dược dụng)

BBR kém ổn định trong môi trường kiềm mạnh, dễ hỗ biến mở vòng isoquinolin cho chức aldehyd gọi là berberinal

Liên kết đôi C=N của vòng isoquinolin tham gia phản ứng khử nối đôi

BBR theo y học cổ truyền được sử dụng để điều trị các bệnh nhiễm trùng, nhiễm khuẩn khác nhau về tai, mắt và miệng; ký sinh trùng đường ruột; chữa lành vết thương; chữa bệnh trĩ, khó tiêu, lỵ; hoặc điều trị rối loạn tử cung và âm đạo [18], [36] BBR và các dẫn xuất của nó đã được báo cáo là một tác nhân tiềm năng để điều trị cả bệnh Leishmania ở nội tạng và da (Ghosh và cộng sự, 1985; Vennerstrom J L và cộng sự, 1990) [43] Các nghiên cứu khác cũng đã chứng minh rằng BBR có hoạt tính diệt ký sinh trùng Leishmania, bằng cách tạo ra sự mất cân bằng oxy hóa khử và khử cực của màng ty thể, dẫn đến cái chết của tế bào theo chương trình độc lập với caspase (De Sarkar và cộng sự, 2019) [37] Theo (Alamzeb và cộng sự, 2021), các alkaloid berberine bao gồm berberine, columbamine, jatrorrhizine, palmatine và 8- trichloromethyldihydroberberine có đặc tính diệt Leishmania mạnh, chống lại L tropica với độc tính thấp trên tế bào động vật có vú [38], [39], [42] Gần đây, đã có những báo cáo về tiềm năng cao của các công thức chứa BBR đối với bệnh Leishmania ở nội tạng và da [41] Ví dụ, BBR liposome đã được báo cáo là có khả năng giảm lượng ký sinh trùng một cách hiệu quả trong mô hình chuột mắc bệnh Leishmania nội tạng (Calvo và cộng sự, 2020) [40] Hơn nữa, các tác giả cũng đã phát hiện ra rằng sử dụng kem BBR hai lần một ngày không độc hại và có thể ngăn chặn sự phát triển của ký sinh trùng cũng như cải thiện sự xuất hiện của các tổn thương của CL (Calvo và cộng sự, 2022) Khi kết

6 thúc điều trị, lượng ký sinh trùng trên da giảm 99,9% (4 log) và các gen liên quan đến quá trình chữa lành vết thương tăng so với chuột không được điều trị

Bên cạnh đó, đã có một số nghiên cứu cho thấy các thuốc hạ lipid máy, chẳng hạn như các statins, cũng góp phần trong điều trị bệnh leishmania Trong khi đó, một số nghiên cứu đã cho thấy BBR làm giảm đáng kể TG huyết thanh, cholesterol toàn phần (TC) và nồng độ lipoprotein-cholesterol tỷ trọng thấp (LDL-C) và làm tăng nồng độ lipoprotein- cholesterol tỷ trọng cao (HDL-C) trong huyết thanh Chẳng hạn Wang và cộng sự nhận thấy rằng việc sử dụng BBR bằng đường uống trong 7 ngày (100 mg/kg/ngày) có thể làm giảm đáng kể TG, TC huyết thanh và LDL-C ở chuột đồng bị tăng lipid máu [18], [19] Cơ chế hạ lipid máu của BBR có thể liên quan đến nhiều khía cạnh Trong một nghiên cứu in vitro, BBR ức chế tổng hợp lipid bằng cách kích hoạt AMPK trong tế bào ung thư gan người HepG2 BBR có thể làm tăng tính ổn định của LDLR mRNA thông qua con đường ERK và tăng cường hoạt động phiên mã của LDLR mRNA bằng cách kích hoạt con đường JNK/c-Jun [18]

1.2.5 Đặc tính dược động học

Hấp thu: Một trong những nhược điểm chính của BBR là sinh khả dụng qua đường uống kém do khả năng hòa tan trong nước thấp (Zhang và cộng sự, 2013) Độ hòa tan của BBR phụ thuộc vào nhiệt độ và pH, tăng khi nhiệt độ tăng (Battu và cộng sự, 2010) Độ tan trong nước của thuốc ở 25 và 37°C được báo cáo lần lượt là 5,27 ± 0,29 và 8,50 ± 0,40 mM và độ tan tối đa của thuốc được quan sát thấy trong dung dịch đệm phosphat pH 7,0 (lần lượt là 4,05 ± 0,09 và 9,69 ± 0,37 mM ở 25 và 37°C) [10]

Phân bố: Mặc dù nồng độ BBR rất thấp trong máu (Huaet al., 2007) và sinh khả dụng của nó được báo cáo là dưới 1% (Kheir và cộng sự, 2010; Liu và cộng sự, 2010), tác dụng dược lý của BBR có thể tương quan với sự phân bố cao của nó trong mô Báo cáo trước đây rằng BBR có thể dễ dàng xâm nhập vào hàng rào máu não, sau đó thải trừ chậm (Wang và cộng sự, 2005) Hơn nữa, nồng độ BBR cũng như các chất chuyển hóa có hoạt tính sinh học của nó được phát hiện là cao hơn trong các cơ quan so với nồng độ của nó trong máu sau khi uống Sự phân bố của BBR vào các cơ quan diễn ra nhanh chóng với phân bố tối đa ở gan, tiếp theo là thận, cơ, phổi, não, tim, tuyến tụy và có ít phân bố nhất trong mỡ (Tan và cộng sự, 2013) [10]

Như vậy, BBR là một dược chất nhiều tiềm năng trong việc phát triển các dạng thuốc điều trị Leishmania, đặc biệt là VL Tuy vậy, với các đặc tính dược động học như trên làm cho BBR có sinh khả dụng rất thấp qua đường uống nên cần phải có biện pháp phù hợp để làm tăng sinh khả dụng qua đường uống

1.2.6 Một số hướng tiếp cận để cải thiện sinh khả dụng của berberin clorid qua đường uống

Nhược điểm lớn đối với các tác dụng dược lý của BBR là sinh khả dụng rất thấp, chủ yếu là do độ tan và sự hấp thu kém Vì vậy, đã có rất nhiều phương pháp để làm tăng sinh khả dụng của BBR đã được nghiên cứu và phát triển:

- Cyclodextrin, là một tá dược tạo phức phổ biến hiện nay CD có thể tương tác với các phân tử kích thước thích hợp dẫn đến sự hình thành các phức chất, mang lại nhiều lợi ích về mặt hóa lý bao gồm độ tan và độ ổn định của dung dịch Tốc độ hòa tan của BBR in vitro và sự hấp thu BBR in vivo ở ruột được tăng cường nhờ sự tạo thành phức hợp [7]

- Một vi nhũ tương chứa BBR được báo cáo là có sinh khả dụng gấp 6,47 lần so với hỗn dịch dạng viên (Gui và cộng sự, 2008) Một hệ thống mixen đảo ngược của BBR cũng đã được báo cáo cho thấy nâng cao được sinh khả dụng và hiệu quả chống bệnh tiểu đường(Wang và cộng sự, 2011) [10]

- Hỗn hợp BBR và chitosan đã được điều chế và sự tăng cường hấp thu đã được nghiên cứu ở chuột Kết quả cho thấy sự tăng cường hấp thu phụ thuộc vào liều lượng do chitosan dẫn đến cải thiện giá trị AUC0-36h Khả năng tăng cường hấp thu của chitosan có thể là do khả năng cải thiện vận chuyển tế bào của BBR trong đường ruột [15]

- Sinh khả dụng thấp của BBR có thể liên quan đến hoạt động của P-glycoprotein, một chất bơm thuốc ra ngoài và natri caprate đã được báo cáo là có tác dụng ức chế chức năng của P-glycoprotein Do đó, natri caprate có thể làm tăng đáng kể sự hấp thu BBR ở ruột non [16]

- Tetrandrine cũng được nghiên cứu làm tăng nồng độ cực đại (Cmax) và diện tích dưới đường cong (AUC0-24h) của BBR ở chuột Ngoài ra, tetrandrine có tác dụng ức chế vừa phải đối với enzym CYP3A4, enzym này đóng vai trò trong quá trình chuyển hóa của BBR ở gan và điều này cũng có thể góp phần cải thiện dược động học của BBR [17]

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Nguyên vật liệu, thiết bị

Bảng 2.1 Nguyên vật liệu được sử dụng

STT Nguyên liệu Nguồn gốc Tiêu chuẩn

1 Berberin clorid Alfa Aesar - Đức Tinh khiết hóa học

2 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin Alfa Aesar - Đức Tinh khiết hóa học

3 2-Hydroxypropyl-γ-cyclodextrin Alfa Aesar - Đức Tinh khiết hóa học

4 Methyl-β-cyclodextrin Alfa Aesar - Đức Tinh khiết hóa học

5 Sulfobutylether-β-cyclodextrin Alfa Aesar - Đức Tinh khiết hóa học

6 Propylen glycol Trung Quốc TCCS

9 Neusilin Trung Quốc Tinh khiết hóa học

10 Prosolv 90 Trung Quốc Tinh khiết hóa học

11 Fluorite Trung Quốc Tinh khiết hóa học

12 Avicel Trung Quốc Tinh khiết hóa học

13 Aerosil 200 Evonik – Đức Tinh khiết hóa học

14 Nước tinh khiết Việt Nam TCCS

Bảng 2.2 Thiết bị nghiên cứu

STT Thiết bị Xuất xứ

1 Cân phân tích Sartorius BP121S Đức

2 Tủ sấy tĩnh Memmert Đức

3 Máy ly tâm HermLe Z206A Đức

4 Máy quang phổ U-5100 UV/VIS Hitachi Nhật Bản

5 Máy lắc Vortex 3-IKA Đức

6 Máy đo độ hòa tan Erweka Đức

7 Máy khuấy từ Hotplate Stirrer, 600W Hàn Quốc

8 Tủ ấm đối lưu tự nhiên Binder BD Đức

Nội dung nghiên cứu

- Đánh giá ảnh hưởng của hệ dung môi có chứa tỷ lệ CD khác nhau tới khả năng làm tăng độ tan của BBR và bào chế một số hệ BBR trong hệ dung môi chứa CD

- Khảo sát và lựa chọn tá dược hoá rắn phù hợp cho dung dịch BBR trong hệ dung môi chứa CD nói trên để hướng tới việc bào chế các dạng thuốc rắn dùng đường uống để điều trị Leishmania.

Phương pháp nghiên cứu

2.3.1 Bào chế các hệ dung môi

Chuẩn bị các hệ dung môi:

Các nguyên liệu được sấy trong tủ ấm 50-60 o C khoảng 1-2 giờ để tránh nhiễm ẩm Các thành phần được cho vào 1 bình thủy tinh theo công thức nghiên cứu, khuấy từ liên tục ở nhiệt độ 25 o C cho đến khi chất lỏng trong suốt, đồng nhất được hình thành

Bảng 2.3 Công thức các hệ dung môi tiến hành nghiên cứu

Công thức Tỷ lệ mol

2.3.2 Khảo sát ảnh hưởng của hệ dung môi có chứa tá dược CD đến phương pháp đo quang phổ hấp thụ UV-VIS

2.3.2.1 Khảo sát ảnh hưởng của hệ dung môi pha loãng là ethanol 96%: nước (1:1) có chứa tá dược CD đến phương pháp đo quang phổ hấp thụ UV-VIS

17 Chuẩn bị các dung dịch:

- Pha dung dịch chuẩn BBR trong dung môi ethanol 96%: nước (1:1) có nồng độ 5 àg/mL

- Pha các dung dịch thử BBR trong các hệ dung môi có chứa CD với các công thức bào chế khác nhau, pha loãng bằng dung môi ethanol 96%: nước (1:1) để thu được dung dịch cú nồng độ khoảng 5 àg/mL

- Tiến hành đo quang phổ hấp thụ của cả ba loại dung dịch tại bước sóng 348 nm Lựa chọn hệ dung môi pha loãng dựa trên tỷ lệ thu hồi (%) được tính theo công thức:

• mtt là khối lượng BBR trong dung dịch thử thực tế tính được dựa theo đường chuẩn (mg)

• mc là khối lượng BBR cân được trên cân phân tích (mg)

2.3.2.2 Khảo sát ảnh hưởng của hệ dung môi pha loãng là ethanol 96%: nước (7:3) có chứa tá dược CD đến phương pháp đo quang phổ hấp thụ UV-VIS

Chuẩn bị các dung dịch:

- Pha dung dịch chuẩn BBR trong dung môi ethanol 96%: nước (7:3) có nồng độ 5 àg/mL

- Pha các dung dịch thử BBR trong các hệ dung môi có chứa CD với các công thức bào chế khác nhau, pha loãng bằng dung môi ethanol 96%: nước (7:3) để thu được dung dịch cú nồng độ khoảng 5 àg/mL

- Tiến hành đo quang phổ hấp thụ của cả ba loại dung dịch tại bước sóng 348 nm Lựa chọn hệ dung môi pha loãng dựa trên tỷ lệ thu hồi (%) được tính theo công thức:

• mtt là khối lượng BBR trong dung dịch thử thực tế tính được dựa theo đường chuẩn (mg)

• mc là khối lượng BBR cân được trên cân phân tích (mg)

2.3.3 Phương pháp định lượng hoạt chất Định lượng BBR bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ UV-VIS

Tiến hành định lượng BBR bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ UV-VIS

- Xây dựng đường chuẩn định lượng BBR:

18 Chuẩn bị dung dịch BBR chuẩn gốc: cân một lượng chính xác khoảng 50 mg BBR chuẩn (cân trên cân phân tích), hòa tan lượng chuẩn trên với ethanol 96%: nước, lắc siêu âm cho tan hết, định múc bằng dung môi đến vạch 100 mL thu được dung dịch chuẩn gốc S

Pha dãy dung dịch chuẩn từ dung dịch chuẩn gốc S thành các nồng độ 4, 5, 6, 8, 10 àg/mL bằng hỗn hợp ethanol 96%: nước

Quột phổ dung dịch BBR nồng độ 8 àg/mL, xỏc định bước súng hấp thụ cực đại Đo độ hấp thụ của dãy dung dịch chuẩn với mẫu trắng là ethanol 96%: nước và xây dựng đường chuẩn biểu thị mối tương quan giữa độ hấp thụ và nồng độ BBR bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ UV-VIS

- Mẫu thử: Tiến hành pha loãng mẫu cần đo trong dung môi ở tỷ lệ nhất định để thu được dung dịch thử cú nồng độ trong khoảng 4-10 àg/mL

- Mẫu trắng: dung môi ethanol 96%: nước Đo độ hấp thụ của mẫu thử và mẫu chuẩn tại bước sóng hấp thụ cực đại đã xác định và tính nồng độ BBR của mẫu thử theo công thức:

• Ct và Cc lần lượt là nồng độ của mẫu thử và mẫu chuẩn (àg/mL)

• At và Ac lần lượt là độ hấp thụ của mẫu thử và mẫu chuẩn

2.3.4 Xác định độ tan của BBR trong các hệ dung môi Để xác định độ tan của BBR trong các hệ dung môi cụ thể, bằng cách tạo dung dịch quá bão hòa của BBR trong các hệ dung môi: một lượng dư BBR được thêm vào bình thủy tinh chứa hệ dung môi đã bào chế, sau đó khuấy từ ở tốc độ và nhiệt độ khuấy thích hợp

Sau 24h, mẫu được đem ly tâm 6000 vòng/phút trong vòng 20 phút đảm bảo lượng dư BBR nằm lại hoàn toàn ở đáy ống nghiệm Tiến hành pha loãng các mẫu thử sao cho khi đem đi đo quang thu được độ hấp thụ quang nằm trong khoảng tuyến tính của đường chuẩn

Nồng độ BBR được đo bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ trên máy quang phổ U-5100 UV-VIS Hitachi với phương pháp đo được mô tả ở mục 2.3.3

2.3.5 Đánh giá khả năng hút của tá dược để hóa rắn dung dịch

- Chuẩn bị dung dịch thử: 1 mL dung dịch thử với các nồng độ được xây dựng dựa trên độ tan bão hòa được xác định ở mục 2.3.4

- Tiến hành cho từ từ tá dược hút vào lọ thủy tinh chứa dung dịch thử, lắc đều bằng máy lắc Vortex 3-IKA cho đến khi tạo thành bột tơi, xốp, đều màu, có thể dễ dàng trơn chảy toàn bộ ra khỏi lọ mà không cần vét hoặc tác động lực rung lắc

2.3.6 Phương pháp đánh giá khả năng giải phóng BBR từ mẫu chứa hệ dung môi

CD sau khi hóa rắn

Sử dụng máy đo độ hòa tan kiểu giỏ quay với các thông số sau:

- Môi trường hòa tan: 1000 mL nước cất

- Nhiệt độ môi trường hòa tan: 37 ± 0,5 o C

- Tốc độ quay: 120 vòng/phút

- Mẫu thử: các mẫu bột được bào chế bằng phương pháp được mô tả ở mục 2.3.5

- Tại các thời điểm 15, 30, 45 phút, hút 5 mL lấy mẫu đồng thời bổ sung ngay 5 mL môi trường giải phóng Xác định nồng độ BBR giải phóng bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ UV-VIS tại bước sóng 348nm, pha loãng đến nồng độ thích hợp bằng hệ dung môi ethanol 96%: nước

Nồng độ BBR trong mẫu thử tại thời điểm t:

• At và Ac lần lượt là độ hấp thụ của mẫu thử và mẫu chuẩn

• Ct là nồng độ BBR giải phúng trong mụi trường tại thời điểm t (àg/mL)

• Cc là nồng độ của mẫu chuẩn (àg/mL)

Lượng hoạt chất đã giải phóng ra tại thời điểm t: mt = Ct x V + v x Ci

• mt là tổng lượng BBR đó giải phúng ra tại thời điểm t (àg)

• Ct là nồng độ BBR giải phúng trong mụi trường tại thời điểm t (àg/mL)

• Ci là nồng độ BBR giải phóng trong môi trường tại các thời điểm trước đó (àg/mL)

• V là thể tích môi trường hòa tan (mL)

• v là thể tích mẫu thử mỗi lần đã lấy ra (mL)

Phần trăm BBR đã giải phóng ra môi trường tích lũy theo thời gian:

% BBR giải phóng = mt mo x 100%

• mt là tổng lượng BBR đó giải phúng ra tại thời điểm t (àg)

• mo là lượng BBR đó cõn (àg)

KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

Kết quả đánh giá độ tan của BBR

Các hệ dung môi được bào chế với công thức như bảng 2.3 Phương pháp xác định độ tan của các hệ được trình bày ở mục 2.3.4

Bảng 3.5 Độ tan của BBR trong hệ dung môi HPβCD/PG với các tỷ lệ mol khác nhau

Công thức Tỷ lệ mol Độ tan của BBR trong dung dịch (mg/mL), (GTTB ± SD), (n=3)

Bảng 3.6 Độ tan của BBR trong hệ dung môi HPγCD/PG với các tỷ lệ mol khác nhau

Công thức Tỷ lệ mol Độ tan của BBR trong dung dịch (mg/mL), (GTTB ± SD), (n=3)

Bảng 3.7 Độ tan của BBR trong hệ dung môi MβCD/PG với các tỷ lệ mol khác nhau

Công thức Tỷ lệ mol Độ tan của BBR trong dung dịch (mg/mL), (GTTB ± SD), (n=3)

Bảng 3.8 Độ tan của BBR trong hệ dung môi SBECD/PG với các tỷ lệ mol khác nhau

Công thức Tỷ lệ mol Độ tan của BBR trong dung dịch (mg/mL), (GTTB ± SD), (n=3)

Hình 3.3 Đồ thị biểu diễn độ tan của BBR trong hệ dung môi PG và các loại CD với tỷ lệ khác nhau Bảng 3.9 Độ tan của BBR trong hệ dung môi MβCD/Glycerol với các tỷ lệ mol khác nhau (GTTB ± SD), (n=3)

Công thức Tỷ lệ mol Độ tan của BBR trong dung dịch (mg/mL),

Bảng 3.10 Độ tan của BBR trong hệ dung môi SBECD/Glycerol với các tỷ lệ mol khác nhau (GTTB ± SD), (n=3)

Công thức Tỷ lệ mol Độ tan của BBR trong dung dịch (mg/mL),

Hình 3.4 Đồ thị biểu diễn độ tan của BBR trong hệ dung môi Glycerol và các loại CD với tỷ lệ khác nhau

Kết quả cho thấy độ tan trong các hệ dung môi chứa tá dược CD được cải thiện so với độ tan của BBR trong dung môi PG và Glycerol Trong đó hệ MβCD/PG tỷ lệ mol 1:200, SBECD/PG tỷ lệ mol 1:200 có độ tan tăng tốt hơn so với PG lần lượt là 127,35%; 285,12% lần Hệ MβCD/Glycerol tỷ lệ mol 1:150, SBECD/Glycerol tỷ lệ mol 1:200 làm tăng độ tan 366,18% và 782,47% lần so với Glycerol

Do việc khảo sát hoá rắn với toàn bộ các hệ trên là không khả thi và không cần thiết, bước đầu chúng tôi lựa chọn một số hệ để khảo sát dựa theo một tiêu chí duy nhất là độ tan của BBR, mặc dù kết quả độ tan cho thấy chênh lệch giữa nhiều hệ là không lớn Như vậy, lựa chọn các hệ MβCD/PG tỷ lệ mol 1:200, SBECD/PG tỷ lệ mol 1:200, MβCD/Glycerol tỷ lệ mol 1:150 và SBECD/Glycerol tỷ lệ mol 1:200, là các hệ làm tăng độ tan của BBR đáng kể, để tiến hành các nghiên cứu tiếp theo

3.3 Đánh giá khả năng hút của tá dược và giải phóng dược chất

3.3.1 Kết quả đánh giá khả năng hút của tá dược

Bảng 3.11 Lượng tá dược hút ứng với các hệ dung môi

Công thức Lượng tá dược sử dụng (g) (GTTB ± SD), (n=3)

Fluorite Neusilin Prosolv Aerosil 200 Avicel

Hình 3.5 Đồ thị biểu diễn mối liên hệ giữa khả năng hút của tá dược đối với các hệ dung môi Nhận xét:

Kết quả thu được cho thấy tá dược Aerosil 200 có khả năng hút tốt nhất (trung bình 0,25 gam cho 1 mL dung dịch thử), trong khi đó tá dược Prosolv hút kém nhất (trung bình 1,37 gam cho 1 mL dung dịch thử) Tá dược Fluorite và Neusilin cũng có khả năng hút tốt hơn so với Avicel và Prosolv

29 Với một khối lượng thích hợp để đóng viên nang cứng thì các tá dược Fluorite, Neusilin và Aerosil 200 đều cho kết quả có tiềm năng lớn nhất Do đó lựa chọn các mẫu thử chứa các tá dược này và khảo sát thêm Prosolv để tiến hành nghiên cứu tiếp theo

3.3.2 Kết quả lượng BBR được giải phóng ra từ các mẫu bột

Bảng 3.12 Tỷ lệ BBR giải phóng từ mẫu chứa hệ dung môi MβCD/PG (GTTB ± SD),

% BBR giải phóng từ mẫu (%) (GTTB ± SD), (n=3) Fluorite Neusilin Prosolv Aerosil 200

Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn mối liên hệ giữa % BBR giải phóng từ mẫu chứa hệ dung môi MβCD/PG theo thời gian Bảng 3.13 Tỷ lệ BBR giải phóng từ mẫu chứa hệ dung môi SBECD/PG (GTTB ± SD),

% BBR giải phóng từ mẫu (%) (GTTB ± SD), (n=3) Fluorite Neusilin Prosolv Aerosil 200

Hình 3.7 Đồ thị biểu diễn mối liên hệ giữa % BBR giải phóng từ mẫu chứa hệ dung môi SBECD/PG theo thời gian Bảng 3.14 Tỷ lệ BBR giải phóng từ mẫu chứa hệ dung môi MβCD/Glycerol (GTTB ±

% BBR giải phóng từ mẫu (%) (GTTB ± SD), (n=3) Fluorite Neusilin Prosolv Aerosil 200

Hình 3.8 Đồ thị biểu diễn mối liên hệ giữa % BBR giải phóng từ mẫu chứa hệ dung môi MβCD/Glycerol theo thời gian Bảng 3.15 Tỷ lệ BBR giải phóng từ mẫu chứa hệ dung môi SBECD/Glycerol (GTTB ±

% BBR giải phóng từ mẫu (%) (GTTB ± SD), (n=3) Fluorite Neusilin Prosolv Aerosil 200

Hình 3.9 Đồ thị biểu diễn mối liên hệ giữa % BBR giải phóng từ mẫu chứa hệ dung môi SBECD/Glycerol theo thời gian

Kết quả cho thấy cả 4 loại tá dược đều giải phóng gần như hoàn toàn lượng BBR có trong các hệ dung môi ngay từ thời điểm 15 phút đầu Sau 45 phút thì tá dược Neusilin giải phóng lượng BBR ra khỏi các hệ dung môi là lớn nhất (99,9% với hệ MβCD/PG; 99,47% với hệ SBECD/PG; 100,09% với hệ MβCD/Glycerol ; trong đó hệ SBECD/Glycerol cho kết quả lớn nhất là 105,78%) Khả năng giải phóng BBR của tá dược Aerosil 200 cũng cho kết quả tốt sau Neusilin với 99,84% lượng BBR giải phóng từ hệ MβCD/Glycerol Lượng BBR giải phóng ra từ tá dược Prosolv là ít nhất trong thời gian khảo sát

Với khối lượng sử dụng để hóa rắn hệ dung môi chứa BBR phù hợp (trung bình lần lượt là 0,41 gam và 0,25 gam) và % BBR giải phóng ra khỏi mẫu là lớn nhất (105,78% và 99,84%), tá dược Neusilin và Aerosil 200 có tiềm năng lớn nhất trong số các tá dược đã khảo sát cho việc bào chế viên nang cứng để điều trị bệnh Leishmania nội tạng trong tương lai

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Kết luận

Sau khi thực hiện đề tài “Bước đầu nghiên cứu bào chế viên nang berberin clorid với tá dược cyclodextrin”, chúng tôi đã thu được một số kết quả như sau:

1 Đề tài đã đánh giá ảnh hưởng của tỷ lệ CD trong thành phần hệ dung môi tới khả năng làm tăng độ tan của BBR và bào chế một số hệ BBR trong hệ dung môi chứa

CD Kết quả thu được cho thấy với hệ dung môi PG và Glycerol có chứa MβCD và SBECD hòa tan nhiều BBR hơn so với các hệ dung môi có chứa các loại CD khác và so với hệ chỉ chứa mỗi PG và Glycerol

2 Đề tài đã khảo sát và lựa chọn tá dược hoá rắn phù hợp cho dung dịch BBR trong hệ dung môi chứa CD nói trên để hướng tới việc bào chế các dạng thuốc rắn dùng đường uống để điều trị Leishmania ở nội tạng Tá dược hóa rắn Neusilin và Aerosil

200 cho kết quả phù hợp về khối lượng bột đóng nang cứng và giải phóng lượng BBR nhanh và nhiều ra khỏi hệ dung môi chứa CD Vì vậy, Neusilin và Aerosil có tiềm năng là tá dược hóa rắn trong việc bào chế thuốc để điều trị bệnh Leishmania nội tạng

Từ kết quả đạt được, đề tài xin đưa ra một số kiến nghị sau đây để tiếp tục phát triển và hoàn thiện nghiên cứu:

1 Tiếp tục bào chế bột thuốc đóng nang chứa phức hợp BBR-CD trong dung môi và viên nang

2 Đánh giá tác dụng kháng Leishmania của bột thuốc đóng nang

TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt

1 Đỗ Tất Lợi (2006), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất bản Y học, tr.195

2 Bộ Y tế (2017), Dược điển Việt Nam V, tr.142-143

3 Đồng Quang Huy (2014), “Nghiên cứu chiết xuất berberin từ vàng đắng bằng dung dịch kiềm”, Luận văn Thạc sĩ dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội

4 Dược điển Châu Âu 11.0, tr.1897-1898, 2080-2082

5 Tổ chức Y tế Thế giới-WHO, leishmaniasis

6 Raymond C Rowe, Paul J Sheskey, “Handbook of pharmaceutical excipients 6th edition”, pp.210-214

7 Dominique Duchene, Thorsteinn Loftsson (2007), “Cyclodextrins and their pharmaceutical applications”, International Journal of Pharmaceutics 329, pp.1-

8 Roger A Rajewski, Valentino J Stella (1996), “Pharmaceutical Applications of Cyclodextrins 2 In Vivo Drug Delivery”, Journal of Pharmaceutical Sciences Vol

9 Nisar Ahmad Khan, Mohi Durakshan (2013), “Cyclodextrin: an overview,

International Journal of Bioassays”, pp.858-865

10 Thorsteinn Loftsson, Mar Masson (2001), “Cyclodextrins in topical drug formulations: theory and practice”, International Journal of Pharmaceutics, pp.15-

11 Anil Kumar, Ekavali (2015), “Current knowledge and pharmacological profile of berberine: An update”, European Journal of Pharmacology 761, pp.288-297

12 Xinchi Feng, Kun Wang (2017), “The metabolism of berberine and its contribution to the pharmacological effects”, Drug Metabolism Reviews, pp.139-157

13 Ru feng, Jing-yi ma (2013), “Excretion of berberine and Its Metabolites in Oral Administration in Rats”, Journal of Pharmaceutical Sciences, pp.4181-4192

14 Wei Chen, Dongjiao Fan (2011), “Enhancing effects of chitosan and chitosan hydrochloride on intestinal absorption of berberine in rats”, Drug Development and Industrial Pharmacy, 38(1), pp.104-110

15 Xiao-Yan Lv, Jing Li (2010), “Enhancement of Sodium Caprate on Intestine

Absorption and Antidiabetic Action of berberin”, AAPS PharmSciTech11 (1), pp.372-382

16 Yong-Qiang Shan, Yan-Ping Zhu (2013), “Tetrandrine Potentiates the

Hypoglycemic Efficacy of berberine by Inhibiting P-Glycoprotein Function”, Biol

17 Xinmei Xu, Huan Yi (2021), “Therapeutic effect of berberine on metabolic diseases: Both pharmacological data and clinical evidence”, Biomedicine &

18 Pharm D, Laura M Koppen(2017), “Efficacy of berberine Alone and in

Combination for the Treatment of Hyperlipidemia: A Systematic Review”, Journal of Evidence-Based Complementary & Alternative Medicine Vol 22 (4), pp.956-

19 Sheng Fu, Minzhong Ye (2009), “Neuropharmacological and pharmacokinetic properties of berberine: a review of recent research”, Journal of Pharmacy and

20 European Medicines Agency (2014), “Background review for cyclodextrins used as excipients”, pp.1-17

21 Naomi Aronson, Barbara L Herwaldt (2016), “Diagnosis and Treatment of

Leishmaniasis: Clinical Practice Guidelines by the Infectious Diseases Society of America (IDSA) and the American Society of Tropical Medicine and Hygiene (ASTMH)*”, Clinical Infectious Diseases, pp.1539-1557

22 Eric Chatelain, Lucio H Freitas-Junior (2012), “Visceral leishmaniasis treatment: What do we have, what do we need and how to deliver it?”, The International

Journal for Parasitology – Drugs and Drug Resistance Volume 2, pp.11-19

23 Francois Chappuis, Shyam Sundar (2007), “Visceral leishmaniasis: what are the needs for diagnosis, treatment and control?”, Nature reviews | Microbiology

24 Pradyot Bhattacharya, Smriti Mondal(2010), “Current diagnosis and treatment of visceral leishmaniasis”, Expert Rev Anti Infect Ther 8(8), pp.919-944

25 Cynthia Demicheli, Frédéric Frézard (2009), “Pentavalent Antimonials: New Perspectives for Old Drugs”, Molecules, 14, pp.2317-2336

26 Carine S F Marques, Nathalia S Barreto (2020), “β-Cyclodextrin/Isopentyl Caffeate Inclusion Complex: Synthesis, Characterization and Antileishmanial Activity”, Molecules 25, pp.1-17

27 Elgte Elmin B De Paulaa, Frederico B De Sousa (2012), “Insights into the multi- equilibrium, superstructure system based on β-cyclodextrin and a highly water soluble guest”, International Journal of Pharmaceutics 439, pp.207-215

28 Thorsteinn Loftssona, Maria D Moya-Ortega (2015), “Pharmacokinetics of cyclodextrins and drugs after oral and parenteral administration of drug/cyclodextrin complexes”, Journal of Pharmacy and Pharmacology 68, pp.544-555

29 Kaiwen Jiang, Kunqian Mu (2022), “The Biological Fate of Pharmaceutical Excipient β-Cyclodextrin: Pharmacokinetics, Tissue Distribution, Excretion, and Metabolism of β-Cyclodextrin in Rats”, Molecules 27, pp.1-14

30 Quanren He, Valentino J Stella (2008), “Cyclodextrins”, Toxicologic Pathology Volume 36, Issue 1, pp.30-42

31 J Szejtli, L Szente (2005), “Elimination of bitter, disgusting tastes of drugs and foods by cyclodextrins”, European Journal of Pharmaceutics and

32 Rajeswari Challa,1 Alka Ahuja (2005), “Cyclodextrins in Drug Delivery: An Updated Review”, AAPS PharmSciTech; 6 (2), Article 43, pp.E329-E357

33 N.Kanaka Durga Devi, A.Prameela Rani (2010), “Cyclodextrins in pharmacy- an overview”, Pharmacophore, Vol.1(3), pp.155-165

34 Tien An Nguyen, Benguo Liu (2013), “An investigation into the supramolecular structure, solubility, stability and antioxidant activity of rutin/cyclodextrin inclusion complex”, Food Chemistry 136, pp.186-192

35 V.B Chaudhary, J K Patel (2013), “Cyclodextrin inclusion complex to enhance solubility of poorly water soluble drugs: a review”, International Journal of

Pharmaceutical Sciences and Research vol 4(1), pp.68-76

36 Hossein Mahmoudvand, Fariba Sharififar (2014), “In Vitro Inhibitory Effect of Berberis vulgaris (Berberidaceae) and Its Main Component, Berberine against Different Leishmania Species”, Iran J Parasitol 9(1), pp.28-36

37 Piu Saha, Rupashree Sen (2009), “Berberine chloride causes a caspase- independent, apoptotic-like death in Leishmania donovani promastigotes”, Free