THỰC NGHIỆM VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Nguyên liệu, hóa chất và dụng cụ thí nghiệm
Nguyên liệu được sử dụng trong luận văn là hoa Cúc La Mã được nhập khẩu từ Mỹ Nguyên liệu sau khi nhập được xay thành bột với độ ẩm 10% Hóa chất được sử dụng cho chiết tách và định tính thành phần dược liệu trong hoa Cúc La Mã:
+ Ethanol 96%, Trung Quốc + H2SO4 96%, Trung Quốc + Petroleum ether, Trung Quốc + Anhydric acetic, Trung Quốc + Ethyl acetate, Trung Quốc + Cloroform, Trung Quốc
+ KOH 96%, Trung Quốc + HCl 96%, Trung Quốc
+ Acid tricloroacetic, Trung Quốc + FeCl3.
Các dụng cụ thiết bị cần thiết cho nghiên cứu:
+ Máy quang phổ UV-vis
+ Máy cô quay chân không
+ Máy lọc hút chân không
+ Máy khuấy từ gia nhiệt+ cá từ
Phương pháp nghiên cứu
2.2.1 Nghiên cứu tối ưu hóa hiệu suất chiết tách bằng phương pháp chưng ninh
Quy trình thực nghiệm: quá trình chiết tách thành phần dược liệu bằng phương pháp chưng ninh thể hiện trên sơ đồ sau:
Hình 2.1 Quy trình chiết tách dược liệu bằng phương pháp chưng ninh a) Nghiên cứu khảo sát ảnh hưởng của nồng độ etanol tới hiệu suất chiết
Mục đích: khảo sát ảnh hưởng của nồng độ dung môi lên mật độ quang khi thực hiện chiết bằng phương pháp ngâm ninh, nhằm tìm ra được nồng độ dung môi tối ưu để tối ưu hóa quy trình tách chiết
Kế hoạch: thí nghiệm được tiến hành ở cùng một khối lượng nguyên liệu, với các thông số không đổi về nhiệt độ, thời gian, tỷ lệ nguyên liệu- dung môi, khi ta thay đổi nồng độ dung môi dẫn đến sự thay đổi mật độ quang của dịch chiết
Thực nghiệm: Cân 1,5g hoa cúc cho vào bình cầu 2 cổ có lắp nhiệt kế để đo nhiệt độ Lắp hệ thống sinh hàn hồi lưu Thực hiện chưng ninh trên bếp khuấy từ với 3 nồng độ cồn ( 96 o , 70 o , 50 o ) trong 3 giờ ở nhiệt độ 60 o C Tỷ lệ dung môi/ nguyên liệu (20/1) Tháo hệ thống sinh hàn sau khi kết thúc thí nghiệm Dịch chiết được làm lạnh bằng nước đá sau đó đem đi lọc bằng máy lọc hút chân không Pha loãng mẫu và đo quang ở bước sóng 390nm Lặp lại thí nghiệm 3 lần b) Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ tới hiệu suất chiết
Mục đích: khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ lên mật độ quang khi thực hiện chiết bằng phương pháp ngâm ninh, nhằm tìm ra được nhiệt độ tối ưu để tối ưu hóa quy trình tách chiết
Kế hoạch: thí nghiệm được tiến hành ở cùng một khối lượng nguyên liệu, với các thông số không đổi về nồng độ dung môi (thông số tối ưu), thời gian, tỷ lệ nguyên liệu- dung môi, khi ta thay đổi nhiệt độ dẫn đến sự thay đổi mật độ quang của dịch chiết
Thực nghiệm: Cân 1,5g hoa cúc cho vào bình cầu 2 cổ có lắp nhiệt kế để đo nhiệt độ Lắp hệ thống sinh hàn hồi lưu Thực hiện chưng ninh trên bếp khuấy từ ở các nhiệt độ (50 o C, 60 o C, 70 o C, 78 o C) trong 3 giờ với nồng độ dung môi tối ưu như đã khảo sát ở trên Tỷ lệ dung môi/ nguyên liệu (20/ 1) Tháo hệ thống sinh hàn sau khi kết thúc thí nghiệm Dịch chiết được làm lạnh bằng nước đá sau đó đem đi lọc bằng máy lọc hút chân không Pha loãng mẫu và đo quang ở bước sóng 390 nm Lặp lại thí nghiệm 3 lần c) Nghiên cứu tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi ảnh hưởng tới hiệu suất chiết
Mục đích: khảo sát ảnh hưởng của tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi lên mật độ quang khi thực hiện chiết bằng phương pháp ngâm ninh, nhằm tìm ra được tỷ lệ tối ưu để tối ưu hóa quy trình tách chiết
Kế hoạch: thí nghiệm được tiến hành ở cùng một khối lượng nguyên liệu, với các thông số không đổi về nồng độ dung môi, nhiệt độ (tối ưu như đã khảo sát ở trên), thời gian, khi ta thay đổi tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi dẫn đến sự thay đổi mật độ quang của dịch chiết
Thực nghiệm: Cân 1,5g hoa cúc cho vào bình cầu 2 cổ có lắp nhiệt kế để đo nhiệt độ Lắp hệ thống sinh hàn hồi lưu Thực hiện chưng ninh trên bếp khuấy từ ở các tỷ lệ dung môi và nguyên liệu (1/ 10 ; 1/ 20 ; 1/ 30 ; 1/ 40 ; 1/ 50) trong 3 giờ ở nhiệt độ tối ưu với nồng độ dung môi tối ưu như đã khảo sát ở trên Tháo hệ thống sinh hàn sau khi kết thúc thí nghiệm Dịch chiết được làm lạnh bằng nước đá sau đó đem đi lọc bằng máy lọc hút chân không Pha loãng mẫu và đo quang ở bước sóng 390 nm Lặp lại thí nghiệm 3 lần d) Nghiên cứu ảnh hưởng của thời gian tới hiệu suất chiết
Mục đích: khảo sát ảnh hưởng thời gian lên mật độ quang khi thực hiện chiết bằng phương pháp ngâm ninh, nhằm tìm ra được thời gian tối ưu để tối ưu hóa quy trình tách chiết
Kế hoạch: thí nghiệm được tiến hành ở cùng một khối lượng nguyên liệu, với các thông số không đổi về nồng độ dung môi, nhiệt độ, tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi (tối ưu như đã khảo sát ở trên), khi ta thay đổi thời gian dẫn đến sự thay đổi mật độ quang của dịch chiết
Thực nghiệm: Cân 1,5g hoa cúc cho vào bình cầu 2 cổ có lắp nhiệt kế để đo nhiệt độ Lắp hệ thống sinh hàn hồi lưu Thực hiện chưng ninh trên bếp khuấy từ ở các thời gian (1h, 2h, 3h, 4h) ở nhiệt độ tối ưu với nồng độ dung môi tối ưu và tỷ lệ tối ưu như đã khảo sát ở trên Tháo hệ thống sinh hàn sau khi kết thúc thí nghiệm Dịch chiết được làm lạnh bằng nước đá sau đó đem đi lọc bằng máy lọc hút chân không Pha loãng mẫu và đo quang ở bước sóng
390 nm Lặp lại thí nghiệm 3 lần
2.2.2 Chiết tách thành phần dược liệu bằng phương pháp chưng ninh
Quy trình thực nghiệm: Quy trình chiết tách thành phần dược liệu bằng phương pháp chưng ninh thể hiện trên sơ đồ sau:
Hình 2.2 Sơ đồ khảo sát chiết cao cồn bằng phương pháp chưng ninh Mục đích: khảo sát nhằm thu hiệu suất cao etanol hoa cúc La Mã
Kế hoạch: tiến hành chiết thành phần dược liệu bằng dung môi etanol với điều kiện tối ưu về nồng độ, tỷ lệ dung môi trên nguyên liệu, nhiệt độ thời gian đã khảo sát
Thực nghiệm: Cân hoa cúc cho vào bình cầu 2 cổ có lắp nhiệt kế để đo nhiệt độ Lắp hệ thống sinh hàn hồi lưu Thực hiện chưng ninh trên bếp khuấy từ ở các thời gian, nhiệt độ với nồng độ dung và tỷ lệ tối ưu như đã khảo sát ở trên Tháo hệ thống sinh hàn khi kết thúc thì nghiệm, dịch chiết được làm lạnh bằng nước đá sau đó đem đi lọc bằng máy lọc hút chân không và tiếp tục đưa
30 đi cô quay chân không để loại dung môi thu được cao ethanol chứa các thành phần của dược liệu
2.2.3 Chiết tách thành phần dược liệu bằng phương pháp ngấm kiệt
Quy trình thực nghiệm: Quy trình chiết tách theo phương pháp ngấm kiệt được thực hiện theo sơ đồ sau:
Hình 2.3 Sơ đồ khảo sát chiết cao cồn bằng phương pháp ngấm kiệt Mục đích: khảo sát nhằm thu hiệu suất cao etanol hoa cúc La Mã
Kế hoạch: tiến hành chiết thành phần dược liệu bằng dung môi ethanol tối ưu với quy trình theo phương pháp ngấm kiệt
Thực nghiệm: Cân 100g hoa cúc, xay nhỏ đến độ mịn thích hợp và cho vào bình chiết, đổ dung môi vào ngập dược liệu khoảng 2-3cm và để ngâm trong 24 giờ Sau đó tiến hành mở van rút dịch chiết cho sản phẩm ra đồng thời bổ sung thêm dung môi từ bình lóng vào bình chiết Điều chỉnh sao cho