xác định hàm lượng dexamethasone trong thuốc đông y dược

Trong lĩnh vực tây y bác sĩ đã sử dụng Dexamethasone để điều trị bệnh viêm khớp, Dexamethasone có tác dụng kháng viêm , tuy nhiên việc điều trị bệnh viêm khớp bằng loại thuốc chỉ dừng ở

Nội dung

- Tìm hiểu vai trò và cách sử dụng làm thuốc kháng viêm của Dexamethasone

- Thu thập một số mẫu thuốc đông y trên địa bàn TPHCM

- Tiến hành phân tích nhằm định tính và định lượng Dexamethasone

- Đưa ra những khuyến cáo về những tác hại của Dexamethasone.

TOÅNG QUAN 1 Toồng quan veà Dexamethasone

ẹũnh nghúa

Dexamethasone là corticoid tổng hợp, tương tự như hormon Glucocorticoid sản xuất bởi tuyến thượng thận Nó có tác dụng chính của Glucocorticoid

Glucocorticoid là một trong hai nhóm hormon được tiết ra ở vỏ thượng thận, có vai trò quan trọng trong điều hòa chuyển hóa các chất Glucocorticoid được coi là nhóm hormon có liên quan trực tiếp đến các hoạt động có tính chất sinh mạng của cơ thể vì sự suy giảm mức hormon hoặc suy giảm hoạt động của tuyến sẽ đe dọa sự sống Hormon thiên nhiên do cơ thể tiết ra thuộc nhóm này là Hydrocortison

Bên cạnh vai trò chuyển hóa chất, hormone nhóm này còn có nhiều tác dụng khác như chống viêm, chống dị ứng, ức chế miễn dịch Công nghệ tổng hợp hóa dược đã tạo ra các dẫn xuất có hiệu quả chống viêm và ức chế miễn dịch cao hơn so với chế phẩm từ thiên nhiên Dexamethasone là một chế phẩm tổng hợp tiêu biểu hiện có mặt trên thị trường thuốc.

- Dexamethasone có tác dụng kháng viêm, đặc biệt những trường hợp đe dọa tính mạng như viêm nắp thanh quản ở trẻ sơ sinh, phù não, phù phổi cấp hoặc các trạng thái viêm có liên quan đến cơ chế miễn dịch – dị ứng như viêm khớp

- Tác dụng đến những bệnh liên quan đến cơ địa dị ứng như hen, dị ứng

Dexamethasone không chỉ được sử dụng trong điều trị ung thư mà còn có tác dụng chống viêm Trong quá trình điều trị ung thư, bệnh nhân thường phải dùng thuốc giảm đau mạnh như morphin Thuốc Dexamethasone cũng có tác dụng giảm đau và chống viêm, giúp kiểm soát tình trạng viêm do bệnh ung thư gây ra.

Bên cạnh những tác dụng có lợi đối với con người, thì Dexamethasone còn có những tác hại rất nghiêm trọng

1.3 Tác dụng phụ của Dexamethasone

- Tác dụng trên sự tăng trưởng ở trẻ em

- Gây xốp xương là do Dexamethasone tăng cường sự hủy xương nhưng lại ức chế quá trình tạo xương, do đó ngăn cản sự đổi mới của mô xương và làm tăng quá trỡnh tieõu xửụng

- Gây loét dạ dày và tá tràng

- Gây béo phì: Dexamethasone giữ Na + và H2O dẫn đến tình trạng béo phì và tăng huyết áp…

- Aûnh hưởng đến thần kinh : nếu sử dụng với hàm lượng nhiều sẽ dẫn đến tình trạng rối loạn thần kinh dẫn đến tình trạng mất trí

Dexamethasone là thuốc được sử dụng để điều trị các tình trạng dị ứng, bệnh thấp khớp, hen phế quản và suy vỏ thượng thận cấp Liều dùng thường là 3 mg/ngày, liều duy trì từ 0,5 - 1 mg/ngày Đối với trẻ em, liều dùng thường khuyến cáo là 0,25 - 2 mg/ngày.

- Không được dùng đối với phụ nữ có thai và nuôi con bú

1.6 Các dạng hoạt chất của Dexamethasone

1.7 Các dẫn xuất của Dexamethasone

- Dexamethasone linoleat - Dexamethasone natri sulfat

2 PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH DEXAMETHASONE

- Định tính Dexamethasone bằng các phương pháp: UV, IR, NMR, GCMS, HPLC

- Định lượng Dexamethasone bằng các phương pháp: IR, GCMS, HPLC

2.1 Phương pháp xác định Dexamethasone trong thuốc và trong hương liệu làm thuốc theo tiêu chuẩn của Mỹ AOAC 21.4.03 (2000)

Hàm lượng Dexamethasone trong thuốc và trong mỹ phẩm được xác định bằng phương pháp sắc ký lỏng sử dụng pha động gồm 4 phần với sự điều khiển của nước, đầu dò UV ở bước sóng 254 nm và cortisone được dùng như chất chuẩn nội Việc xác định thuốc, mỹ phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng, quang phổ hồng ngoại , và có liên quan đến thời gian lưu đối với phương sắc ký lỏng

PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG

• Sắc ký lỏng : - Đầu dò UV

- Máy ghi sắc ký đồ

- Hệ thống bơm pha động với vận tốc 1,2 mL/phút ở nhiệt độ môi trường

• Cột sắc ký : - Được làm bằng thép mỏng (25cm x 4,6mm), có chứa những phân tử silic đioxyt xốp cú đường kớnh 5àm Thanh thộp mỏng này bao quanh cột (3cm x 4,6mm), bờn trong cột cú chứa những phõn tử silic đioxyt cú đường kớnh 10 àm Nếu cần thiết có thể làm khô cột bằng việc tách rửa với 20 mL CH2CL2-CH3COOH- 2,2dimethoxypropane theo tỷ lệ (90 :2:2) cho đến khi đường nền ổn định

❖ HÓA CHẤT - Dung môi : CH3COOH băng, Cồn được đo UV và CH2Cl2, H2O

- Dung môi cồn : Dùng pipet hút 5mL H2O đưa vào bình định mức 100 mL và pha loãng với cồn

• Pha động : Dùng pipet hút 10 mL CH3COOH băng và 45 mL cồn cho vào bình định mức 1 L và pha loãng bằng CH2Cl2 Đuổi khí hổn hợp Điều chỉnh hàm lượng cồn để đạt được thời gian lưu trong khoảng 6 và 9 đối với Cortisone và Dexamethasone Thời gian lưu của Cortisone trong pha động phụ thuộc vào sự điều chỉnh hàm lượng cồn, nếu tăng hàm lượng cồn làm giảm thời gian lưu

• Dung dòch NaHCO3 1 M : Hoà tan 8,4 NaHCO3 trong 100 mL H2O

• Chất chuẩn nội : Hòa tan 30 mg Cortisone trong trong 4 mL cồn và pha loãng thành 100 mL bằng CH2Cl2

• Chuaồn Dexamethasone 4 mg/100mL Chuyển chính xác 25 mg chất chuẩn Dexamethasone ( sấy ở 105 0 C trong 30 / ) vào bình định mức 25 mL hoà tan và pha loãng bằng cồn Chuyển 2 mL dung dịch ở trên vào bình định mức 50 mL có chứa sẵn 6 mL chuẩn nội, và pha loãng bằng CH2Cl2 Không lọc qua màng lọc

❖ CHUAÅN BÒ MAÃU KIEÅM TRA

Chuẩn bị tương tự như dung dịch Dexamethasone chuẩn, sử dụng 25 mg Dexamethasone Không dùng màng lọc

• Myừ phaồm : Chuyển chính xác 10 ml dung dịch Dexamethasone trong mỹ phẩm, chứa sẵn 10 mg Dexamethasone, rót qua phiểu 125 ml, thêm 5 mL NaHCO3 và trích ly 4 lần bằng 20 mL dung môi CH2Cl2 Rót chất đã trích qua phiểu 250 mL chứa sẵn 5 mL H2O Rửa lại dung dịch đã trích bằng CH2Cl2 và lọc qua bông ẩm cho vào bêse Rửa lại bằng nước và rót qua phiểu 125 mL với CH2Cl2 Lọc và cho vào bêse Cô cạn bằng đun cách thủy sau cho dung dịch đạt xấp xỉ 10 mL và thêm vào CH2Cl2 đưa vào bình định mức 25 mL chứ a sẵn 1 ml cồn và 3 mL chất chuẩn nội Pha loãng thể tích bằng CH2Cl2 Không lọc qua màng Điều chỉnh pha động trong cột với vận tốc 1,2 mL/phút Bước sóng 254 nm

Chích dung dịch chuẩn 3 lần giống nhau Tính diện tích pic hoặc chiều cao của pic sau mỗi lần chích, tính hệ số biến thiên (CV) là tỷ lệ giữa pic Dexamethasone và chất chuẩn nội Hệ thống thích hợp, khi CV ≤ 2,5%, thông số Rs được xác định giữa pic Dexamethasone và chất chuẩn nội sao cho Rs ≥ 3 Tỷ lệ thời gian lưu của Dexamethasone và chất chuẩn nội dao động trong khoảng ± 2% Nếu thời gian lưu

> 2%, thì cần làm khô cột như đã trình bày ở phần thiết bị

Hàm lượng Dexamethasone được tính như sau:

C : Nồng độ chất chuẩn (mg/mL)

RR và RR’: Tỷ lệ diện tích pic của chất kiểm tra và chất chuẩn nội

2.2 Phương pháp xác định Dexamethason Acetate trong thuốc viên và trong thuốc nước theo tiêu chuẩn của Mỹ AOAC 21.4.04 (2000)

Thuốc viên hoặc thuốc nước được trích ly trong CH3CN và đệm phốt phát 0,025 M có pH = 6 (theo tỷ lệ 1:1) và được phân tích bằng chất chuẩn ngoại

Dexamethasone acetate được phân tích bằng pháp sắc ký lỏng pha ngược và độ dò ở bước sóng 254 nm

• Sắc ký lỏng - Trang bị hệ thống bơm với đầu dò UV ở bước sóng 254 nm

- Tiến hành ở nhiệt độ thường

• Đệm Potassium phosphate pH = 6 Trộn 3 ml NaOH 1M, 138 ml KCl 0,5M, và 50 ml KH2PO4 0,5M chuyển vào bình định mức 1 L Pha loãng thể tích bằng nước

• Dung dịch pha loãng Trộn CH3CN và đệm phosphate 0,025M có pH = 6 (1:1) Để hổn hợp vừa trộn ở nhiệt độ thường

• Pha động Đuổi khí hổn hợp gồm 450 ml CH3CN và 550 ml H2O Điều chỉnh thể tích CH3CN nhằm cần đạt được thời gian lưu thích hợp

❖ CHUAÅN BÒ CHAÁT CHUAÅN Sấy Dexamethasone Acetate chuẩn trong 2 h ở 105 0 C Cân chính xác 30 mg chất chuẩn đã sấy khô và chuyển vào bình định mức 100 ml Đưa chất chuẩn vào bồn siêu âm nhằm tạo thành dạng đồng nhất và pha loãng dung dịch từ 10 ml thành 50 ml, 10 ml thành 25 ml, 5 ml thành 10ml (đây là ba dung dịch chuẩn cần chuẩn bị)

• Thuoác vieân Cân chính xác 25 mg thuốc viên đã được sấy ở 105 0 C trong 2 h và đưa vào bình định mức 250 ml Hòa tan và sau đó pha loãng bằng dung dịch pha loãng

• Thuốc nước Lấy chất cần kiểm tra 1 lọ hoặc hơn lọ nhỏ và tiến hành theo các bước sau đây:

Lắc lọ nhỏ cho đến khi sản phẩm đồng nhất ( yêu cầu ≥ 15 s) Dùng ống tiêm hút dung dịch trong lọ Tiếp đó đọc thể tích Chuyển dung dịch trong ống tiêm vào bình định mức Rửa tất cả dụng cụ thủy tinh bằng dung dịch pha loãng Cô cạn dung dịch nhưng không nên vượt quá 0,8 mg/ml Lọc qua màng lọc trước khi phân tích bằng sắc ký lỏng

Cho pha động qua hệ thống đã có cột thấy đường nền ổn định (thẳng) Pic Dexamethasone Axetate phụ thuộc vào các yếu tố sau :

Cột ≥ 1500 dĩa lý thuyết, không đối xứng hay kéo đuôi (5% chiều cao pic), độ lệch chuẩn < 1% cho 5 lần chớch, mỗi lần chớch với thể tớch 20 àL

Tác dụng phụ của Dexamethasone

- Tác dụng trên sự tăng trưởng ở trẻ em

- Gây xốp xương là do Dexamethasone tăng cường sự hủy xương nhưng lại ức chế quá trình tạo xương, do đó ngăn cản sự đổi mới của mô xương và làm tăng quá trỡnh tieõu xửụng

- Gây loét dạ dày và tá tràng

- Gây béo phì: Dexamethasone giữ Na + và H2O dẫn đến tình trạng béo phì và tăng huyết áp…

- Aûnh hưởng đến thần kinh : nếu sử dụng với hàm lượng nhiều sẽ dẫn đến tình trạng rối loạn thần kinh dẫn đến tình trạng mất trí.

Lieàu duứng

Dexamethasone dùng để trị dị ứng, bệnh thấp khớp, hen phế quản, suy vỏ thượng thận cấp… với liều 3 mg/ngày, liều duy trì 0,5 – 1 mg/ngày, trẻ em 0,25 – 2 mg/ngày.

Choỏng chổ ủũnh

- Không được dùng đối với phụ nữ có thai và nuôi con bú

Các dạng hoạt chất của Dexamethasone

Các dẫn xuất của Dexamethasone

- Dexamethasone linoleat - Dexamethasone natri sulfat

Phương pháp phân tích Dexamethasone

- Định tính Dexamethasone bằng các phương pháp: UV, IR, NMR, GCMS, HPLC

- Định lượng Dexamethasone bằng các phương pháp: IR, GCMS, HPLC

2.1 Phương pháp xác định Dexamethasone trong thuốc và trong hương liệu làm thuốc theo tiêu chuẩn của Mỹ AOAC 21.4.03 (2000)

Hàm lượng Dexamethasone trong thuốc và mỹ phẩm được xác định bằng phương pháp sắc ký lỏng pha động 4 thành phần, sử dụng bước sóng UV 254 nm và cortisone làm chất chuẩn nội Phương pháp xác định thuốc, mỹ phẩm dựa trên thời gian lưu trong sắc ký lỏng và phổ hồng ngoại đặc trưng của Dexamethasone.