Xác định hàm lượng dexamethasone trong thuốc Đông y để đảm bảo hiệu quả điều trị

TOÅNG QUAN VEÀ DEXAMETHASONE ẹũnh nghúa

Glucocorticoid là một trong hai nhóm hormon được tiết ra ở vỏ thượng thận, có vai trò quan trọng trong điều hòa chuyển hóa các chất. Glucocorticoid được coi là nhóm hormon có liên quan trực tiếp đến các hoạt động có tính chất sinh mạng của cơ thể vì sự suy giảm mức hormon hoặc suy giảm hoạt động của tuyến sẽ đe dọa sự sống. Ngoài vai trò trên chuyển hóa các chất, hormon nhóm này còn có nhiều tác dụng khác như tác dụng chống viêm, chống dị ứng, ức chế miễn dịch… Công nghệ tổng hợp hóa dược đã tạo ra được những dẫn xuất loại này có tác dụng chống viêm và ức chế miễn dịch mạnh hơn chế phẩm thiên nhiên.

- Dexamethasone có tác dụng kháng viêm, đặc biệt những trường hợp đe dọa tính mạng như viêm nắp thanh quản ở trẻ sơ sinh, phù não, phù phổi cấp hoặc các trạng thái viêm có liên quan đến cơ chế miễn dịch – dị ứng như viêm khớp. - Ngoài ra Dexamethasone có tác dụng trong việc điều trị bệnh ung thư, bệnh nhân bị ung thư các tổ chức viêm phát triển rất mạnh vì thế trong quá trình điều trị bác sĩ đã cho bệnh nhân sử dụng những loại thuốc kháng viêm, giảm đau cực mạnh : morphin, Dexamethasone. Bên cạnh những tác dụng có lợi đối với con người, thì Dexamethasone còn có những tác hại rất nghiêm trọng.

- Gây xốp xương là do Dexamethasone tăng cường sự hủy xương nhưng lại ức chế quá trình tạo xương, do đó ngăn cản sự đổi mới của mô xương và làm tăng quá trỡnh tieõu xửụng. - Aûnh hưởng đến thần kinh : nếu sử dụng với hàm lượng nhiều sẽ dẫn đến tình trạng rối loạn thần kinh dẫn đến tình trạng mất trí.

PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH DEXAMETHASONE

Điều chỉnh hàm lượng cồn để đạt được thời gian lưu trong khoảng 6 và 9 đối với Cortisone và Dexamethasone. Thời gian lưu của Cortisone trong pha động phụ thuộc vào sự điều chỉnh hàm lượng cồn, nếu tăng hàm lượng cồn làm giảm thời gian lưu. Chuyển chính xác 10 ml dung dịch Dexamethasone trong mỹ phẩm, chứa sẵn 10 mg Dexamethasone, rót qua phiểu 125 ml, thêm 5 mL NaHCO3 và trích ly 4 lần bằng 20 mL dung môi CH2Cl2.

Rửa lại dung dịch đã trích bằng CH2Cl2 và lọc qua bông ẩm cho vào bêse. Tính diện tích pic hoặc chiều cao của pic sau mỗi lần chích, tính hệ số biến thiên (CV) là tỷ lệ giữa pic Dexamethasone và chất chuẩn nội. Hệ thống thích hợp, khi CV ≤ 2,5%, thông số Rs được xác định giữa pic Dexamethasone và chất chuẩn nội sao cho Rs ≥ 3.

Tỷ lệ thời gian lưu của Dexamethasone và chất chuẩn nội dao động trong khoảng ± 2%. Phương pháp xác định Dexamethason Acetate trong thuốc viên và trong thuốc nước theo tiêu chuẩn của Mỹ AOAC 21.4.04 (2000). Dexamethasone acetate được phân tích bằng pháp sắc ký lỏng pha ngược và độ dò ở bước sóng 254 nm.

Điều chỉnh thể tích CH3CN nhằm cần đạt được thời gian lưu thích hợp. Cân chính xác 30 mg chất chuẩn đã sấy khô và chuyển vào bình định mức 100 ml. Phương pháp xác định Dexamethasone phosphate bằng phương pháp quang phổ theo tiêu chuẩn của Mỹ AOAC 21.4.02 (2000).

Dùng pipet hút 3 mL dung dịch mẫu và dung dịch chuẩn cho vào máy trích. Chuẩn bị mẫu trắng bằng cách cô cạn 5 mL CH2Cl2 và pha loãng phần rắn còn lại bằng 25 mL cồn. Trong khỏang thời gian 1 – 3 phút lặp lại tương tự thí nghiệm trên khi tiến hành làm 10 mL mẫu kiểm tra và mẫu chuẩn.

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phương pháp lấy mẫu

- Quan tâm đến những loại thuốc chuyên trị bệnh: viêm khớp, nhức xương, taêng caân. - Ngoài ra, trong quá trình lấy mẫu tôi còn lấy mẫu có chứa sẵn Dexamethasone làm đối chứng. • Chỉ Định : Chuyên trị phong tê thấp, đau lưng, nhức mỏi, suy nhược cơ thể.

• Chỉ định : Các chứng bệnh đau nhức khớp xương, bắp thịt, gân cốt ủau lửng. - Phân tích định tính Dexamethasone bằng phương pháp Quang phổ hồng ngoại hay sắc ký lỏng cao áp.

NỘI DUNG

Do dung môi được sử dụng trong trường hợp này là cồn và Acetone (dung môi rất dễ bay hơi) nên điều chỉnh nhiệt độ khoảng 55oC – 60oC. • Đảm bảo nguồn nước vào và ra của hệ thống phải được lưu thông liên tục, nếu trong quá trình trích ly nguồn nước bị ngắt quãng thì rất nguy hiểm (hệ thống có thể bị nổ). • Dung môi khi sôi thì bắt đầu bốc hơi lên, sau đó gặp hệ thống lạnh ở phía trên (nguồn nước vào) ngưng tụ lại nhỏ xuống thiết bị chứa sẵn mẫu, lôi cuốn các chất có trong mẫu xuống bình cầu.

• Việc trích ly đã hoàn tất ta tiến hành cô cạn hỗn hợp chứa trong bình cầu, tiếp đó ta cho vào erlen và tiến hành phân tích mẫu bằng phương pháp quang phổ hồng ngoại. ⮚ Trong quá trình trích ly các chất trong mẫu, ta nhận thấy dung môi có màu vàng và đến khi màu vàng này nhạt dần thì ta ngưng quá trình trích ly. ⮚ Trong quá trình trích ly các chất trong mẫu, ta nhận thấy dung môi có màu vàng và đến khi màu vàng này nhạt dần thì ta ngưng quá trình trích ly.

Tất cả các mẫu sau khi hoàn tất quá trình trích ly thì tiến hành cô cạn, và cho vào các erlen, đem phân tích bằng phương pháp quang phổ hồng ngoại. Sự hấp thụ phổ hồng ngoại của các nhóm nguyên tử được thể hiện bởi những vân phổ với các đỉnh phổ ở các số sóng hay độ dài sóng xác định. Đem chất chuẩn đo phổ hồng ngoại để lập đồ thị chuẩn J = f(T), dùng đồ thị này căn cứ vào các vân hấp phụ của các nhóm nguyên tử rồi từ đó có thể định tính Dexamethasone trong các mẫu thí nghiệm.

Đọc kết quả: Mẫu có vân hấp thụ hoàn toàn giống với vân hấp thụ của chất chuẩn thì kết luận mẫu đó có Dexamethasone. • Dựa vào tính chất của Dexamethasone dễ hoà tan trong dung môi nào (thông thường sử dụng dung môi Acetonitrile). Trong quá trình phân tích này ta sử dụng dung dịch để hoà tan Dexamethasone trong mẫu là: Acetonitrile (CH3CN) và dung.

Dựa vào sắc ký đồ tính được diện tích pic của mỗi chất chuẩn, và từ đó ta dựng được đồ thị của chất chuẩn (nồng độ phụ thuộc diện tích pic). Các mẫu phân tích khi chạy HPLC qua máy ghi sắc ký phổ (máy vi tính) ta được sắc ký đồ của 5 dung dịch mẫu. So sánh với sắc ký đồ của dung dịch chuẩn (dựa vào thời gian lưu) ta có thể định tính Dexamethasone có trong mẫu phân tích.