(Luận án tiến sĩ) Phát Hiện Một Số Đột Biến Gen Và Đối Chiếu Kiểu Gen Với Kiểu Hình Của Bệnh Nhi Thalassemia Tại Bệnh Viện Trẻ Em Hải Phòng

Bä GIÁO DĀC VÀ ĐÀO T¾O Bä Y T¾ TR¯èNG Đ¾I HâC Y-D¯þC HÀI PHÒNG

Đâ THà QUþNH MAI

ĐÞI CHI¾U KIÂU GEN VæI KIÂU HÌNH

LU¾N CN TI¾N S夃̀ Y HâC

HÀI PHÒNG - 2022

Bä GIÁO DĀC VÀ ĐÀO T¾O Bä Y T¾ TR¯èNG Đ¾I HâC Y-D¯þC HÀI PHÒNG

Đâ THà QUþNH MAI

ĐÞI CHI¾U KIÂU GEN VæI KIÂU HÌNH

HÀI PHÒNG - 2022

LèI CAM ĐOAN

D°ợc HÁi Phòng, chuyên ngành Nhi, xin cam đoan:

đ°ợc công bá t¿i Viãt Nam

khách quan, đã đ°ợc xác nhÁn và chÃp thuÁn cÿa c¢ sã n¢i nghiên cāu

Hải Phòng, ngày 08 tháng 11 năm 2022

Đã Thá Quÿnh Mai

LèI CÀM ¡N

Để hoàn thành luận án này, tr°ớc hết tôi xin bày tỏ lòng kính trọng, sự biết ¡n sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Ngọc Sáng và TS Bạch Thị Nh° Quỳnh, những ng°ời thầy đã tận tụy dạy dỗ, chỉ bảo và hết lòng h°ớng dẫn giúp đỡ, động viên tôi trong quá trình học tập và nghiên cứu

Tôi cũng xin bày tỏ lòng biết Đảng uỷ, Ban Giám hiệu Tr°ờng Đại học Y D°ợc Hải Phòng, các Thầy, các Cô của Bộ môn Nhi, các Thầy, Cô và các cán bộ, nhân viên Phòng quản lý Đào tạo Sau Đại học, Tr°ờng Đại học Y D°ợc Hải Phòng đã dành mọi sự thuận lợi, giúp đỡ tận tình và dành cho tôi sự động viên quý giá trong quá trình học tập và nghiên cứu và hoàn thành luận án

Tôi xin bày tỏ lòng biết ¡n Ban Giám đốc, phòng Kế hoạch Tổng hợp, các Thầy, Cô, các cán bộ, nhân viên khoa Thận – Máu – Nội tiết, Khoa Sinh hóa, Huyết học và các phòng, ban của Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng đã nhiệt tình tạo mọi điều kiện thuận lợi và giúp đỡ tôi trong quá trình nghiên cứu và hoàn thành luận án

Tôi xin bày tỏ lòng biết ¡n sâu sắc đối với các Giáo s°, Phó giáo s°, Tiến sỹ, các thầy, cô là thành viên Hội đồng bảo vệ luận án cấp Bộ môn, cấp Tr°ờng, đã cho tôi những ý kiến góp ý và chỉ bảo quý báu để tôi hoàn thiện luận án

Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng kính trọng và biết ¡n sâu sắc tới gia đình bao gồm cha và mẹ, những ng°ời đã có công sinh thành, chồng và các con thân yêu của tôi đã động viên tôi rất nhiều, các anh chị em và bạn bè đồng nghiệp cũng đã chia sẻ, giúp đỡ, động viên và giành cho tôi rất nhiều tình cảm trong quá tình làm việc, học tập và nghiên cứu

Hải Phòng, ngày 08 tháng 11 năm 2022

Đã Thá Quÿnh Mai

DANH MĀC CH¯ VI¾T TĂȁT

polymerase)

MCH Mean Corpuscular Hemoglobin (L°ợng huyÁt sắc tá trung bình hãng cÅu)

1.2 ĐÁc đißm lâm sàng và xét nghiãm 16

1.3 Tßng quan ph°¢ng pháp lÁp và phân tích phÁ hã bãnh Thalassemia 28

Ch°¢ng 2: ĐÞI T¯þNG VÀ PH¯¡NG PHCP NGHIÊN CĄU 34

2.1 Đái t°ợng, đáa đißm và thái gian nghiên cāu 34

2.2 Ph°¢ng pháp nghiên cāu 35

Ch°¢ng 3: K¾T QUÀ NGHIÊN CĄU 49

3.1 Đột biÁn gen gây bãnh Thalassemia ã bãnh nhi t¿i Bãnh viãn Trẻ em HÁi Phòng 49

3.2 Đái chiÁu kißu gen vßi kißu hình cÿa các bãnh nhi Thalassemia ã Bãnh viãn Trẻ em HÁi Phòng 60

3.3 Mô tÁ đÁc đißm lâm sàng và cÁn lâm sàng theo gen đột biÁn và b°ßc đÅu xây dựng 1 sá phÁ hã 67

K¾T LU¾N 113

NH¯NG ĐÓNG GÓP MæI CĂA LU¾N ÁN 115

NH¯NG H¾N CH¾ CĂA ĐÀ TÀI 116

KHUY¾N NGHà 117

PH¯¡NG H¯æNG NGHIÊN CĄU TI¾P THEO 117

TÀI LIÆU THAM KHÀO 118

DANH SÁCH BÆNH NHÂN 136

DANH MĀC BÀNG

Trang

BÁng 1.1 Tÿ lã ng°ái mang gen Thalassemia t¿i Viãt Nam 5

BÁng 1.2 Đột biÁn trên gen Hb (tßng hợp từ nhiÃu nghiên cāu) 6

BÁng 1.3 Tß lã ng°ái mang gen ã n°ßc ta (tßng hợp từ nhiÃu nghiên cāu) 7

BÁng 1.4 CÃu trúc globin cÿa Hb sinh lý 8

BÁng 1.5 Các lo¿i allen đột biÁn cÿa bãnh ³-Thalassemia 11

BÁng 1.6 Các đột biÁn gây bãnh ³-Thalassemia 13

BÁng 1.7 Các kißu gen và kißu hình cÿa bãnh ³-Thalassemia 17

BÁng 2.1 Trình tự mãi và kích th°ßc cÿa 5 đột biÁn th°áng gÁp 40

BÁng 2.2 Các thông sá cÿa phÁn āng GAP-PCR cÿa 5 đột biÁn th°áng gÁp 41

BÁng 2.3 Trình tự mãi và kích th°ßc cÿa 2 đột biÁn đißm th°áng gÁp 42

BÁng 2.4 Các thông sá cÿa phÁn āng ARMS-PCR 43

BÁng 3.1 ĐÁc đißm và tußi vào viãn và tußi phát hiãn bãnh 49

BÁng 3.2 Phân bá bãnh nhi ³ và ³-Thalassemia theo nhóm tußi vào viãn 49

BÁng 3.3 Phân bá bãnh nhân theo tußi phát hiãn bãnh 50

BÁng 3.4 ĐÁc đißm và gißi cÿa đái t°ợng nghiên cāu 50

BÁng 3.5 ĐÁc đißm và đáa d° cÿa đái t°ợng nghiên cāu 51

BÁng 3.6 Phân bá đột biÁn gen hemoglobin ã bãnh nhân ³-Thalassemia 52

BÁng 3.7 Phân lo¿i bãnh nhân ³-Thalassemia theo kißu đột biÁn gen 52

BÁng 3.8 Phân bá đột biÁn gen ³-globin ã bãnh nhân ³-Thalassemia 55

BÁng 3.9 Phân lo¿i đột biÁn ³-globin theo vá trí gen bá đột biÁn 57

BÁng 3.10 Phân bá bãnh nhân ³-Thalassemia theo chāc nng gen bá đột biÁn 58 BÁng 3.11 Phân bá bãnh nhân ³-Thalassemia theo kißu gen đột biÁn 59

BÁng 3.12 Phân bá đái t°ợng nghiên cāu theo lý do vào viãn 60

BÁng 3.13 Phân bá đái t°ợng nghiên cāu theo triãu chāng lâm sàng khi vào viãn 61

BÁng 3.14 Phân bá đái t°ợng nghiên cāu theo māc độ lách to khi vào viãn 62

BÁng 3.15 Phân bá đái t°ợng nghiên cāu theo triãu chāng bộ mÁt

Thalassemia 62

BÁng 3.16 ĐÁc đißm niêm m¿c lợi cÿa đái t°ợng nghiên cāu khi vào viãn 63

BÁng 3.17 Phân bá bãnh nhân theo tußi bắt đÅu truyÃn máu 63

BÁng 3.18 Phân bá bãnh nhân theo sá lÅn truyÃn máu mái nm 64

BÁng 3.19 ĐÁc đißm lã thuộc truyÃn máu cÿa bãnh nhân Thalassemia 64

BÁng 3.20 ĐÁc đißm huyÁt hãc cÿa đái t°ợng nghiên cāu 65

BÁng 3.21 ĐÁc đißm sắt và ferritin huyÁt thanh ã bãnh nhân Thalassemia 66

BÁng 3.22 ĐÁc đißm GOT, GPT, ure, creatinin ã bãnh nhân Thalassemia 67

BÁng 3.23 Hội chāng tán huyÁt theo gen đột biÁn ³-Thalassemia 68

BÁng 3.24 ĐÁc đißm lâm sàng theo gen đột biÁn ³-Thalassemia 68

BÁng 3.25 ĐÁc đißm huyÁt hãc theo sá l°ợng gen đột biÁn ³-Thalassemia (n=27) 69

BÁng 3.26 ĐÁc đißm điãn di huyÁt sắc tá theo sá l°ợng gen đột biÁn 69

BÁng 3.27 ĐÁc đißm lâm sàng theo đột biÁn gen HBB ã ³-Thalassemia 70

BÁng 3.28 ĐÁc đißm huyÁt hãc theo đột biÁn gen HBB ã ³-Thalassemia 71

DANH MĀC HÌNH

Trang

Hình 1.1 Gen ³ và ³ globin (trên nhiám sắc thß 16 và 11) 14

Hình 3.1 Phân bá đái t°ợng nghiên cāu theo kißu hình bãnh (n=83) 51

Hình 3.2 Hình Ánh điãn di thu đ°ợc cÿa đột biÁn SEA, 3.7 53

Hình 3.3 Hình Ánh điãn di thu đ°ợc cÿa đột biÁn c2delT 53

Hình 3.4 Hình Ánh điãn di thu đ°ợc cÿa đột biÁn HbCs 54

Hình 3.5 Phân lo¿i bãnh nhân ³-Thalassemia theo sá l°ợng gen đột biÁn (n=27) 54

Hình 3.6 Hình Ánh điãn di thu đ°ợc cÿa đột biÁn CD17, CD41/42 55

Hình 3.7 Hình Ánh điãn di thu đ°ợc cÿa đột biÁn CD95 56

Hình 3.8 Hình Ánh điãn di thu đ°ợc cÿa đột biÁn CD26 56

Hình 3.9 Hình Ánh điãn di thu đ°ợc cÿa đột biÁn CD71/72 57

Hình 3.10 Hình Ánh điãn di đột biÁn IVS1.1 57

Đ¾T VÂN ĐÀ

tên dựa theo chuái globin bá Ánh h°ãng, th°áng gÁp nhÃt trong lâm sàng là

Liên đoàn Thalassemia thÁ gißi °ßc tính hiãn có khoÁng 7% dân sá thÁ gißi mang gen bãnh Hàng nm có 300 đÁn 400 nghìn đāa trẻ sinh ra bá thiÁu

có sự khác biãt đáng kß ngay cÁ trong các khu vực đáa lý nhß [3] Tr°ßc đây,

Âu và Bắc Mā, chÿ yÁu do di c° [4]

đang là một trong nhāng quác gia có tÿ lã ng°ái mắc bãnh Thalassemia cao nhÃt thÁ gißi Hội tan máu bẩm sinh Viãt Nam (VITA) nm 2014 °ßc tính có khoÁng 10 triãu ng°ái mang gen bãnh Thalassemia, bao gãm khoÁng 20.000 bãnh nhân cÅn đ°ợc điÃu trá và 44% trong sá đó là trẻ em

T¿i HÁi Phòng, vÃn đà chẩn đoán và điÃu trá bãnh Thalassemia đã và đang đ°ợc thực hiãn rÃt tích cực, song còn ch°a đ¿t hiãu quÁ nh° mong đợi Chúng ta ch°a thực sự kháng chÁ và kißm soát đ°ợc bãnh, nguyên nhân chÿ yÁu vì nguãn gen bãnh ch°a đ°ợc quÁn lý một cách chÁt ch¿ Từ đó d¿n đÁn viãc lan truyÃn nguãn gen gây bãnh từ thÁ hã này sang thÁ hã khác, làm suy thoái giáng nòi và mang l¿i nhiÃu hÁu quÁ nÁng nà cho gia đình và xã hội

Hiãn nay đã có nhiÃu tiÁn bộ trong điÃu trá Thalassemia, kß cÁ liãu pháp ghép tÁ bào gác, nh°ng quá trình điÃu trá s¿ cực kì khó khn và tán kém Do đó giÁi pháp tát nhÃt vßi bãnh Thalassemia là dự phòng, t° vÃn di truyÃn nhằm không sinh ra thÁ hã bá thß bãnh nÁng [5]

Nh° vÁy, nhāng đột biÁn gen gây bãnh Thalassemia ã trẻ em HÁi

Đây là viãc rÃt cÅn thiÁt và tái quan trãng, góp phÅn t¿o nÃn móng cho viãc phát hiãn sßm, phòng ngừa chÿ động, lÃy giÁi pháp phòng bãnh làm chiÁn l°ợc giÁi quyÁt vÃn đà Thalassemia, tiÁn tßi có thß b°ßc đÅu lo¿i bß và giÁm

đåt bi¿n gen và đßi chi¿u kiÃu gen vçi kiÃu hình căa bÇnh nhi Thalassemia t¿i BÇnh viÇn TrÁ em HÁi Phòng= vßi 3 mục tiêu sau:

1, Xác định một số đột biến gen của các bệnh nhi Thalassemia tại Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng từ 01/01/2016 đến 31/12/2020

2, Đối chiếu kiểu gen với kiểu hình của các bệnh nhi Thalassemia ở Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng

3, Mô tả đặc điểm lâm sàng và cận lâm sàng theo gen đột biến và bước đầu xây dựng 1 số phả hệ của bệnh nhi Thalassemia tại Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng

Hi vãng vßi kÁt quÁ thu đ°ợc s¿ góp phÅn vào chẩn đoán, điÃu trá, tiên l°ợng và phòng bãnh Thalassemia, một bãnh rÃt th°áng gÁp ã trẻ em n°ßc ta

Ch°¢ng 1: TàNG QUAN 1.1 Đ¿c điÃm dách tÅ hãc bÇnh Thalassemia

1.1.1 Dịch tễ học

Đông, Đông Nam Á và Bắc Phi [4], [6] Theo báo cáo cÿa Liên đoàn

â Đông Nam Á, tÿ lã ng°ái mang gen bãnh Thalassemia rÃt cao Theo Suthat Fucharoen (2011), vùng biên gißi giāa các n°ßc Thái Lan, Lào và

ng°ái mang gen bãnh ³-Thalassemia; 50 - 60% mang gen bãnh HbE [8] Tÿ

ã QuÁng Tây là 19,8% [10]

tộc Viãt Nam, tÿ lã ng°ái mang gen bãnh khác và đÁc biãt cao ã các tßnh miÃn núi [11]

từ 1-5 tußi mang gen bãnh ñ-Thalassemia ã 2 dân tộc Êđê và M’nông là

(63,9%), Ê đê (32,2%), M’Nông (24,2%), M°áng (22,6%), Kinh (19,5%), Thái (16,6%), Nùng, Dán Dìu (14,3%), RacLay (14,5%), Tày (12,5%), Dao (12,1%) [12]

Do điÃu kiãn khó khn và kā thuÁt nên không có nhiÃu nghiên cāu tr°ßc đây và tÿ lã l°u hành ng°ái mang gen ñ-Thalassemia ã Viãt Nam Tuy

nhiên, theo D°¢ng Bá Trực nghiên cāu máu cuáng rán ã trẻ s¢ sinh có

Tháng kê t¿i Bãnh viãn Phụ sÁn Trung °¢ng nm 2019 thÃy tß lã mẹ mang gen alpha Thalassemia là 78%, trong đó có đÁn 73,2% là ng°ái mang

98,7% bãnh ñ-Thalassemia do 4 lo¿i alen đột biÁn: ñSEA,-ñ3.7, ñCS và -ñ.4.2

chiÁm tß lã khá cao, nh° nghiên cāu cÿa Bùi Vn Viên và CS [16], khi khÁo

một tác giÁ khác tháng kê đ°ợc tÅn suÃt ng°ái mang gen Thalassemia/huyÁt

Bên c¿nh ò-Thalassemia thì sự l°u hành HbE ã Viãt Nam vßi tß lã cao Bùi Vn Viên thÃy tÿ lã l°u hành HbE ã ng°ái M°áng - Hòa Bình là 12,3%

dân tộc Thái - M°áng là 18,4% [17]

nên đã t¿o ra nhiÃu thß lâm sàng nÁng Theo Lâm Thá Mā tháng kê t¿i bãnh viãn Nhi đãng I thÃy trẻ ³-Thalassemia/HbE chiÁm 42,8%; ³-Thalassemia

Bãnh viãn Nhi Trung °¢ng thÃy tß lã Thalassemia/HbE là 35,6% và

dao động từ 10 - 30 % dân sá Đông Nam Á gãm 10 n°ßc và có khoÁng 400

Bảng 1.1 Tỷ lệ người mang gen Thalassemia tại Việt Nam (tổng hợp nhiều nghiên cứu)

T¿i Bãnh viãn đa khoa Thái Nguyên, Nguyán Vn S¢n thÃy rằng có 3 alen đột biÁn chiÁm tß lã cao là CD41/42 (35,29%), CD17 (25,10%), và CD26

IVS 1-5

CD 71/72

Nhāng nghiên cāu ã n°ßc ta gÅn đây cho thÃy, thalassemia/bãnh huyÁt

toàn quác °ßc tính là 13,8% (khoÁng 13- 14 triãu ng°ái); sự phân bß cÿa

Bảng 1.3 Tỉ lệ người mang gen ở nước ta (tổng hợp từ nhiều nghiên cứu)

1.1.2 Nhắc lại cấu trúc Hb bình thường

tÿ Hb còn có 2,3 diphosphoglycerat có tác động tßi ái lực cÿa Hb đái vßi Oxy

Globin gãm 4 m¿ch polypeptid, 2 m¿ch lo¿i ³, 2 m¿ch lo¿i ³, liên kÁt

polypeptide và thành phÅn các Hb sinh lý thay đßi qua các thái kÿ và lāa tußi khác nhau

Bảng 1.4 Cấu trúc globin của Hb sinh lý

*Nguồn: theo Gamal Abdul Hamid (2013) [31]

Nh° vÁy, sau khi sinh, ã ng°ái bình th°áng chß còn l¿i 3 lo¿i hemoglobin, đó là HbA1, HbA2, HbF Hemoglobin chÿ yÁu, nhiÃu nhÃt thÃy trong hãng cÅu

amin

1.1.3 Cơ chế bệnh sinh của Thalassemia

chÃt di truyÃn do giÁm hoÁc mÃt tßng hợp chuái alpha globin hay beta globin trong globin cÿa nhân hem

Tác giÁ Valentin và Neel cho rằng, Thalassemia là một bãnh di truyÃn gen lÁn trên nhiám sắc thß th°áng Nhāng thay đßi gen kißm soát sự tßng hợp hemoglobin nh° đột biÁn đißm, đāt đo¿n, trao đßi đo¿n d¿n đÁn thay đßi sá l°ợng hoÁc chÃt l°ợng các chuái polypeptid cÿa globin [1]

Một hiãn t°ợng chung nhÃt trong nhóm bãnh Thalassemia là sự thiÁu hụt một lo¿i chuái polypeptid cÿa globin, d¿n đÁn d° thừa t°¢ng đái lo¿i chuái kia [32] Tr°áng hợp thiÁu hụt chuái ³ globin gãi là bãnh ³-

t°ợng này xÁy ra ã các māc độ khác nhau phụ thuộc vào từng thß bãnh, song hÁu quÁ chung cÿa nó là:

Hậu quả thứ nhất: Giảm tổng hợp Hb

Đây là hÁu quÁ trực tiÁp cÿa viãc thiÁu hụt tßng hợp phÅn globin Do thiÁu một lo¿i chuái polypeptid nào đó mà viãc tßng hợp globin bá giÁm Bißu hiãn cÿa viãc giÁm tßng hợp Hb này là hãng cÅu nh°ợc sắc và tng sinh các hãng cÅu non trong tÿy â thß nhẹ, sự mÃt cân bằng giāa các chuái alpha và beta không nÁng nà thì hÁu quÁ cÿa sự giÁm tßng hợp Hb là bißu hiãn rõ rãt cÿa Thalassemia â nhāng ng°ái dá hợp tÿ thì bißu hiãn chÿ yÁu là hãng cÅu nhß nh°ợc sắc và tng sinh hãng cÅu non trong tÿy â các thß dá hợp tÿ, bißu hiãn này ã máu ngo¿i vi không thÃy có sự khác biãt giāa alpha và beta Thalassemia: hãng cÅu nhß, nh°ợc sắc, thiÁu máu nhẹ Còn bißu hiãn tng sinh hãng cÅu non trong tÿy th°áng nhẹ không có ý nghĩa trên lâm sàng [1]

Hậu quả thứ hai: Mất cân bằng giữa hai loại chuỗi globin

Đây là hÁu quÁ thā hai gây ra do thiÁu hụt một lo¿i chuái globin nào đó Viãc thiÁu hụt một lo¿i chuái globin s¿ gây ra d° thừa t°¢ng đái lo¿i kia Trong ³-Thalassemia do thiÁu hụt chuái ³ gây ra d° thừa chuái alpha Trong ³-Thalassemia do thiÁu chuái ³ gây ra d° thừa các chuái gamma, beta, delta

Các chuái alpha và không alpha khác nhau và tính chÃt lý hóa, nên nhāng rái lo¿n gây ra do các chuái thừa d° gây ra cjng khác nhau Các chuái alpha thừa d° s¿ t¿o thành nhāng h¿t tÿa xuáng màng hãng cÅu, nguyên sinh

Đái vßi các hãng cÅu ã máu ngo¿i vi các tÿa này làm cho màng hãng cÅu mÃt độ mÃm dẻo, hãng cÅu trã thành một tÁ bào cāng đá nên khó v°ợt qua các <màng lãc= ã lách MÁt khác các h¿t tÿa này ã màng hãng cÅu làm cho màng này tng diãn tích tiÁp xúc và dá bá các tác nhân oxy hóa, phá hÿy màng hãng cÅu Các h¿t tÿa này còn làm cho tính thÃm màng hãng cÅu thay đßi gây nên mÃt kali ã bên trong tÁ bào ra ngoài huyÁt t°¢ng Nhāng tác h¿i

cÿa các h¿t tÿa làm cho các hãng cÅu có các h¿t do các chuái d° thừa này bá vỡ sßm gây nên hiãn t°ợng tan máu

Trong tÿy x°¢ng, các h¿t tÿa trên gắn lên nguyên sinh chÃt, màng cÿa các hãng cÅu non, làm cho các hãng non này bá chÁt tr°ßc khi tr°ãng thành ĐiÃu này làm tng sinh m¿nh các hãng cÅu non trong tÿy, gây lên các biÁn d¿ng x°¢ng, tng hÃp thu sắt gây ra nhiám sắt cho c¢ thß Hiãn t°ợng hãng cÅu non bá chÁt sßm không đÁn đ°ợc giai đo¿n tr°ãng thành nh° trên gãi là hiãn t°ợng sinh hãng cÅu không hiãu quÁ Hiãn t°ợng sinh hãng cÅu không hiãu quÁ chính là c¢ chÁ chÿ yÁu gây ra nhāng biÁn đßi lâm sàng và huyÁt hãc ã trẻ ³-Thalassemia thß nÁng [33]

1.1.4 Cơ chế di truyền bệnh Thalassemia

1.1.4.1 Bệnh α-Thalassemia Khái niệm:

Do đột biÁn cÿa gen mã hóa tßng hợp chuái ³ globin làm giÁm hoÁc không có chuái ³ globin trong phân tÿ hemoglobin, gây bãnh ³-Thalassemia Sự suy giÁm tßng hợp này d¿n đÁn sự tng tßng hợp quá māc cÿa chuái ³

HbH (trong thái kÿ tr°ãng thành) [34] Chuái ³ globin đ°ợc tßng hợp từ 4 gen, trong đó có 2 gen HbA1 và 2 gen HbA2 Sá l°ợng chuái ³-globin phụ thuộc vào sá gen ho¿t động Ng°ái càng có ít gen ho¿t động thì chuái ³ globin càng ít, càng mắc thß bãnh ³-Thalassemia nÁng h¢n Sự kÁt hợp giāa các d¿ng allen đột biÁn khác nhau cÿa bãnh ³-Thalassemia, cjng nh° giāa bãnh ³-Thalassemia và ³-Thalassemia, đã t¿o ra nhiÃu kißu hình phong phú cÿa bãnh

Bãnh ³-Thalassemia là một trong nhāng bãnh huyÁt sắc tá phß biÁn nhÃt thÁ gißi Bãnh gÁp vßi tÅn suÃt cao t¿i vùng Đáa Trung HÁi, Trung Đông, Đông Nam Á, Nam Thái Bình D°¢ng, và miÃn Nam Trung Quác Đây là một trong nhāng nguyên nhân hàng đÅu, chiÁm tßi 60 - 90% các nguyên nhân gây phù thai ã các n°ßc Đông Nam Á [35]

C¡ sở phân tử:

Vùng gen gây bãnh ³-Thalassemia nằm trên nhánh ngắn cÿa nhiám sắc thß 16 (16p13.3), mái nhiám sắc thß có 1 gen HbA1 (gen alpha 1) và 1 gen HbA2 (gen alpha 2) Gen HbA1 có chiÃu dài 840bp bao gãm 3 exon và 2 intron Gen HbA2 có chiÃu dài 830bp bao gãm 3 exon và 2 intron [36], [37]

Dựa vào lo¿i đột biÁn trên gen HbA mà chia các lo¿i allen đột biÁn cÿa

đÁn giÁm sÁn xuÃt chuái ³-globin)

Bảng 1.5 Các loại allen đột biến của bệnh α-Thalassemia

Allen ³0Thalassemia ( )

-MÃt cÁ 2 gen HBA trên cùng 1 nhiám sắc thß d¿n đÁn không

tßng hợp chuái ³ globin

SEA, MED, THAI, FIL

-³3.7, -³4.2, -³HbCs, -³HbQs

*Nguồn: theo Cornelis L.H và Douglas R.H (2010) [38]

MÃt đo¿n lßn d¿ng SEA (Đông Nam Á) chiÁm khoÁng trên 90% D¿ng

3-4% Đột biÁn đißm HbQs, HbCs chß chiÁm 3-4% T¿i Viãt Nam, nghiên cāu cÿa Nguyán Khắc Hân Hoan [14] ã Bãnh viãn Từ Dj cho thÃy 98,7% bãnh ³-Thalassemia do 4 lo¿i alen đột biÁn gây ra: ³SEA, -³3.7, ³CS và -³ 4.2

nh°ng do trình tự khãi động (promoter) cÿa 2 gen khác nhau nên khÁ nng bißu hiãn cÿa gen HbA2 m¿nh h¢n gen HbA1 từ 2 đÁn 3 lÅn Vì vÁy, các đột biÁn xÁy ra ã gen HbA2 th°áng có hÁu quÁ nÁng nà h¢n nhāng đột biÁn ã gen HbA1 [39]

Quy luật di truyền:

Bãnh ³-Thalassemia di truyÃn theo quy luÁt alen lÁn trên nhiám sắc thß th°áng C¢ chÁ di truyÃn: bãnh có thß do gen bãnh truyÃn từ bá, mẹ cho con

hoÁc do đột biÁn mßi phát sinh qua quá trình t¿o giao tÿ ã bá hoÁc mẹ đi vào thÁ hã con Con s¿ nhÁn 1 NST 16 mang 2 gen HbA từ mẹ và nhÁn 1 NST 16 mang 2 gen HbA từ bá, do đó nguy c¢ mắc bãnh alpha Thalassemia ã con tùy thuộc vào sá gen bá đột biÁn con nhÁn đ°ợc từ bá mẹ

Theo tháng kê thÃy một sá nguyên nhân d¿n đÁn không tßng hợp hoÁc giÁm tßng hợp chuái ³ globin:

- Do kÁt quÁ trao đßi chéo không cân bằng d¿n tßi mÃt một gen HbA

HbA

chāc nng cÿa gen HbA

Hiãn nay, vßi kā thuÁt di truyÃn phân tÿ phát trißn đã phát hiãn đ°ợc h¢n 300 lo¿i đột biÁn trên vùng gen HbA, bao gãm các đột biÁn mÃt đo¿n lßn - mÃt đo¿n cÁ 2 gen (mÃt 1 phÅn hoÁc toàn bộ cÁ 2 gen HbA), đột biÁn mÃt đo¿n nhß - mÃt đo¿n 1 gen (mÃt 1 phÅn hay toàn bộ gen HbA1/ HbA2) và đột biÁn đißm [40]

1.1.4.2 Bệnh β-Thalassemia Khái niệm

Bãnh ³-Thalassemia xÁy ra do đột biÁn đißm trên các locus t¿o chuái ³ làm giÁm hoÁc mÃt chāc nng cÿa gen mã hóa cho viãc tßng hợp ³ globin, d¿n đÁn giÁm hoÁc không tßng hợp đ°ợc chuái ³ globin

Theo Liên đoàn Thalassemia quác tÁ, nm 2005 °ßc tính có khoÁng 80

gißi mang gen ³-Thalassemia Mái nm có thêm 60.000 tr°áng hợp mßi sinh mang gen bãnh

T¿i Viãt Nam nói riêng và khu vực Đông Nam Á nói chung, °ßc tính sá ng°ái mang gen ³-Thalassemia chiÁm tßi 50% tßng sá ng°ái mang gen toàn cÅu TÅn sá mang gen ³-Thalassemia rÃt cao ã nhiÃu n°ßc Đáa Trung HÁi nh° ã À rÁp Xê út là 10%, Hy L¿p là 8%, Italia là 4,8% [41]

C¡ sở phân tử

Vùng gen HbB quy đánh tßng hợp chuái beta globin nằm trên nhánh ngắn nhiám sắc thß 11 (11p15.5) dài 1600bp, gãm 3 exon và 2 intron Khi có đột biÁn gen HbB s¿ gây giÁm hoÁc không sÁn xuÃt chuái ³ globin cÿa hemoglobin, gây nên bãnh ³-Thalassemia Các d¿ng đột biÁn khác nhau còn đ°ợc thß hiãn ã māc độ bÃt ho¿t gen tßn th°¢ng, tng ho¿t động cÿa các gen khác trong cụm xung quanh, kÁt quÁ là làm thay đßi tß lã tßng hợp các chuái globin [42]

Ngày nay có h¢n 300 đột biÁn đã đ°ợc tìm thÃy trên gen HbB gãm 2 nhóm: nhóm làm mÃt hoàn toàn chāc nng cÿa gen HbB d¿n đÁn không sÁn xuÃt đ°ợc chuái ³ globin và nhóm làm giÁm sÁn xuÃt chuái ³ globin Trong sá đó có khoÁng 250 là đột biÁn đißm, còn l¿i là đāt đo¿n ngắn và một sá lo¿i hiÁm gÁp khác; có khoÁng 20 đột biÁn hay gÁp chiÁm 80% các đột biÁn trên gen HbB khắp thÁ gißi

Bảng 1.6 Các đột biến gây bệnh β-Thalassemia thường gặp ở người Việt Nam

thÁ hã con Locus gen HbB nằm trên nhiám sắc thß sá 11 Con s¿ nhÁn 1 NST

mắc bãnh ³-Thalassemia ã con tùy thuộc vào sá gen đột biÁn nhÁn đ°ợc từ bá mẹ

NÁu ng°ái mang một trong hai gen HbB bá đột biÁn không ho¿t động, một gen còn ho¿t động v¿n sÁn xuÃt một l°ợng nhß ³ globin thì gãi là ng°ái

thß nhẹ

NÁu cÁ hai gen đÃu bá đột biÁn mÃt chāc nng hoàn toàn, không sÁn xuÃt đ°ợc ³-globin thì ng°ái bãnh có kißu gen đãng hợp tÿ và bißu hiãn kißu hình là bãnh ³-Thalassemia thß nÁng hoÁc thß trung gian Nhāng ng°ái này nhÁn một nhiám sắc thß 11 mang gen bãnh từ bá và một nhiám sắc thß 11

ng°ái mang gen bãnh Nhāng tr°áng hợp đột biÁn 2 gen HbB ã nhāng locus khác nhau nh°ng lo¿i đột biÁn đó cùng d¿n đÁn không sÁn xuÃt đ°ợc ³ globin thì kißu gen là dá hợp tÿ kép nh°ng bißu hiãn kißu hình cÿa ng°ái mang đột biÁn đãng hợp tÿ

*Nguồn: Ghosh K và CS (năm 2014) [43]

1.1.5 Lịch sử nghiên cứu bệnh Thalassemia

Từ nhāng nm đÅu thÁ kÿ XX, các tác giÁ Jame Henrick (1910) hay Lee và Coolay (1925) đã nghiên cāu và mô tÁ lÅn đÅu tiên bãnh beta

Thalassemia Nhāng bißu hiãn lâm sàng đ°ợc coi nh° nhāng chāng cß phát hiãn đÅu tiên cÿa bãnh, hai ông đã miêu tÁ 5 trẻ bá thiÁu máu, kèm theo có lách to và gan to giáng nh° bãnh mà Von Jaksch mô tÁ nm 1989 Nm 1927, Cooley phát hiãn thêm 2 tr°áng hợp khác, ngoài triãu chāng thiÁu máu, lách to, gan to, còn thÃy da bá nhiám sắc tá, x°¢ng sã dÅy lên, có biÁn đßi sāc bÃn hãng cÅu Đó là nhāng tr°áng hợp beta Thalassemia mô tÁ đÅu tiên, sau này

đ°ợc gãi là thiÁu máu Cooley Sau đó, đã có rÃt nhiÃu nghiên cāu và lâm sàng

đ°¢c công bá nh° nghiên cāu ã Italia cÿa Rietti (1925), Greppi (1928), Michcheli (1935)& Nm 1936, Whipple và Bradford đã đà nghá gãi bãnh mà

Cooley mô tÁ bằng thuÁt ngā <Thalassemia= [1] Từ đây, thuÁt ngā

Thalassemia chính thāc đ°ợc sÿ dụng

Nm 1944, Valentine và Neel phân tích và di truyÃn gia đình đã đà nghá từ <major= và <minor= cho hai thß <nÁng= và <nhẹ= cÿa Thalassemia Vecchio (1948) đã chāng minh có tng hemoglobin F trong bãnh Thalassemia Nm 1955, Stugerol và cộng tác viên đã mô tÁ thß Thalassemia trung gian giāa thß nÁng và nhẹ trên lâm sàng Cho tßi nay các tác giÁ đÃu tháng nhÃt có 3 thß lâm sàng cÿa ò-Thalassemia, đó là thß nÁng (major), thß nhẹ (minor), và thß trung gian (intermedia) [1]

Bãnh ³-Thalassemia đ°ợc phát hiãn và mô tÁ muộn h¢n khá nhiÃu so vßi bãnh ò-Thalassemia Nm 1954, Minich và cộng sự đã có b°ßc nghiên cāu đÅu tiên và ³-Thalassemia Đó là một bãnh thiÁu máu ã ng°ái Thái Lan vßi một đÁc đißm là có nhiÃu thß vùi trong hãng cÅu Ngoài đÁc đißm trên Minich còn phát hiãn bãnh nhân này có hãng cÅu biÁn d¿ng kißu Thalassemia, nhiÃu hãng cÅu hình bia và một sá hãng cÅu mÁnh [15]

Nm 1955, Rigar cùng Gouttas đã tìm đ°ợc HbH trong thành phÅn Hb cÿa bãnh nhi trên Tuy nhiên lúc đó các tác giÁ còn gãi bãnh HbH nh° một bãnh Hb riêng biãt Qua nhiÃu công trình nghiên cāu và bãnh, Rigar và cộng sự (1955), Gouttas (1956), Ramot (1959), Huehns (1960)& đÁc biãt Dance và cộng sự đã phát hiãn ra c¢ chÁ t¿o thành HbH gãm 4 chuái ³ 4 chuái ³ này

do nhāng chuái ³ thừa d° (trong khi các chuái ³ bá giÁm) các chuái ³ thừa d° này kÁt hợp vßi nhau, t¿o thành phÅn Globin cÿa HbH [15]

ĐÅu nhāng nm 1960, ngoài một sá quan sát lâm sàng các tác giÁ còn bắt đÅu nghiên cāu cÃu t¿o gen di truyÃn đã đ°a ra 2 mô hình gen di truyÃn cÿa ³-Thalassemia, điÃu đó đã giÁi thích đ°ợc các bißu hiãn phong phú cÿa các thß ³-Thalassemia nói chung và HbH là một thß bãnh cÿa nó [44]

1.2 Đ¿c điÃm lâm sàng và xét nghiÇm

1.2.1 Phân loại Thalassemia

và · mà phân lo¿i là ³-Thalassemia, ³-Thalassemia, ·³-Thalassemia

1.2.1.1 Bệnh ñ-Thalassemia:

- ñ-Thalassemia thß ẩn (dá hợp tÿ ñ-Thalassemia 2): MÃt 1 trong 4 gen alpha, không có bißu hiãn lâm sàng và huyÁt hãc

gen alpha, bißu hiãn lâm sàng và huyÁt hãc nhẹ hoÁc rÃt nhẹ

gian

1.2.1.2 Bệnh β-Thalassemia:

- ò-Thalassemia thß nÁng hay bãnh Cooley hay ò-Thalassemia đãng

1.2.2 BiÃu hiÇn lâm sàng và xét nghiÇm Thalassemia

1.2.2.1 Bệnh α-Thalassemia

Bảng 1.7 Các kiểu gen và kiểu hình của bệnh α-Thalassemia

KiÃu hình Gen α1 và α2 KiÃu gen

Thể α+-Thalassemia

trên Phân tích gen ³ globin mßi cho phép chẩn đoán xác đánh

Thể α0-Thalassemia

đo¿n một gen trên hai NST t°¢ng đãng (-³/-³)

Đây là ³-Thalassemia thß nhẹ, th°áng không có triãu chāng lâm sàng,

nh°ợc sắc māc độ từ nhẹ đÁn trung bình Các dÃu hiãu khác liên quan đÁn

Hội chứng phù thai do Hb Bart’s

Đây là thß bãnh nÁng nhÃt cÿa ³-Thalassemia,mÃt cÁ 4 gen ³ globin (đãng hợp tÿ ³0-Thalassemia), gây nên tình tr¿ng suy giÁm hoàn toàn khÁ nng sÁn xuÃt chuái ³ globin

Thành phÅn Hb chÿ yÁu là lo¿i Hb không có chāc nng ´4 và ³4 Tuy

Bart’s có phù nÃ, suy tim, thiÁu máu kéo dài, gan lách to, não chÁm phát trißn, x°¢ng và hã tim m¿ch phát trißn bÃt th°áng, bánh rau dày HÅu hÁt Hb Bart’s

1.2.2.2 Bệnh ò-Thalassemia

ò-Thalassemia thể nặng

Ng°ái bãnh th°áng là ng°ái mang gen kißu đãng hợp tÿ

+ Vàng da nhẹ hay không rõ + Lách to

Các chß sá hãng cÅu cho thÃy thiÁu máu nÁng, Hb < 6g/dl, hãng cÅu

Thay đßi thành phÅn Hb trên điãn di là đÁc hiãu cho ò-Thalassemia

+ HbF tng

+ HbA2 tng

ò-Thalassemia thể trung gian

Lâm sàng: Bãnh nhân có thiÁu máu māc độ vừa hoÁc nhẹ mà v¿n

Là một thß bãnh t°¢ng đái nhẹ, hÅu nh° không có bißu hiãn lâm sàng, c¢ thß bãnh nhân phát trißn bình th°áng, không có biÁn d¿ng x°¢ng, thiÁu máu th°áng nhẹ (90 - 110 g/l)

+ HbF tng từ 1-10%

cÅu giÁm Hãng cÅu biÁn d¿ng nÁng, to nhß không đÃu, nhiÃu hãng cÅu hình

- Ferritin máu tng khi có nhiám sắt Chß sá bão hòa transferrin tng > 80%

1.2.2 Một số hậu quả hay gặp của bệnh Thalassemia

1.2.2.1 Quá tải sắt

Hiãn t°ợng quá tÁi sắt đ°ợc mô tÁ lÅn đÅu tiên vào nm 1865 bãi tác

đãng sắt cÿa các tß chāc Tuy vÁy đÁn đÅu nhāng nm 1970, ng°ái ta mßi tìm ra đ°ợc ph°¢ng pháp chẩn đoán bãnh bằng cách dựa vào tình tr¿ng tng l°ợng sắt dự trā ã gan, tng māc bão hòa transferin huyÁt thanh và tng ferritin huyÁt thanh [48]

Ā sắt xÁy ra khi l°ợng sắt cung cÃp tng trong một thái gian kéo dài do

đÃu xÁy ra ã bãnh Thalassemia, truyÃn máu là nguyên nhân chính gây quá tÁi

nguyên nhân quan trãng h¢n ã bãnh Thalassemia thß trung gian

không đ°ợc điÃu trá ā sắt s¿ có nguy c¢ tÿ vong cao vào khoÁng tußi thanh

nh° tißu đ°áng, suy giáp và suy tuyÁn cÁn giáp cjng xÁy ra Kißm soát lâu dài

đÁc biãt nh° gan hoÁc tim, đánh giá tát nhÃt bằng cách đo sắt trong các chính c¢ quan cÅn khÁo sát hoÁc qua chß sá sắt l°u hành trong máu và l°ợng sắt dự trā trong c¢ thß

Các ph°¢ng pháp điÃu trá quá tÁi sắt đang ngày đ°ợc phát trißn và đem

l°ợng sắt thừa trong c¢ thß là trích máu tĩnh m¿ch ĐÁn đÅu nhāng nm 70

Deferiprone (1984) và ICL 670 (deferasirox) (2004) [49], [50] Chelat hóa là ph°¢ng pháp điÃu trá vßi c¢ chÁ chung các chÃt chelat trên là các phân tÿ có

các vá trí gắn kim lo¿i, cho phép t¿o phāc hợp chÁt ch¿ vßi sắt tự do Phāc

yÁu tá giúp kéo dài thái gian sáng và cÁi thiãn cuộc sáng cÿa bãnh nhân Thalassemia

1.2.2.2 Biến dạng x°¡ng trong Thalassemia

tÿy â tußi lßn h¢n, có quá trình thay đßi tÿy đß thành tuÿ vàng ã các x°¢ng

thay đßi x°¢ng chß còn xÁy ra chÿ yÁu ã các x°¢ng trục

Trên hộp sã, khoang tuÿ rộng, các bè x°¢ng thô, có hình Ánh <bàn

tr°ßc rng cÿa trên làm lãch khßp cắn t¿o khuôn mÁt đißn hình giáng loài

1.2.2.3 Biến chứng tim mạch

áp động m¿ch phßi và tng dòng máu chÁy ng°ợc qua van 3 lá Khi đó, tâm

điÃu lý t°ãng nhÃt là phòng ngừa, đißm nhÃn cÿa vÃn dà là chúng ta phÁi tiÁn

lã sáng s¿ giÁm chß còn 50% Tr°áng hợp suy tim do ā sắt thì chāc nng c¢

các c¢ quan, trong đó có tim là c¢ quan nhiám sắt hàng đÅu

1.2.2.4 Tổn th°¡ng gan

đ°ợc tìm thÃy ã gan KhoÁng 98% sắt trong gan ã các tÁ bào gan, hình thành

Đái vßi bãnh nhân ³-Thalassemia, nãng độ ng°ỡng sắt trong gan dián

độ sắt trong gan vßi quá trình nhiám độc tÁ bào gan do sắt Nãng độ sắt trong

máu Đây đ°ợc coi chÃt chß đißm cho thÃy hiãu quÁ cÿa điÃu trá thÁi sắt và tiên l°ợng

1.2.2.5 Nhiễm khuẩn

bào CD8 gây độc, sự hiãn diãn cÿa đ¿i thực bào, hóa h°ßng động, thực bào và

meningitides; nhiám khuẩn gram âm nh° E.coli, Klebsiella sp và

Pseu.aeroginosa; Salmonella và Mucor sp có thß gây nhiám khuẩn nÁng ã các

bãnh nhân Thalassemia không điÃu trá tát Nhiám đ¢n bào do Babesia gây

(HPV B19), Parvovirus B-19 là một mÅm bãnh phß biÁn gây bãnh ban đß

1.2.2.6 Cắt lách

xét khi l°ợng máu cÅn truyÃn hàng nm gÃp 1,5 lÅn so vßi bãnh nhân cắt lách hay khi l°ợng hãng cÅu lắng cÅn truyÃn lßn h¢n 200 - 220 ml/kg/nm đß duy

hoãn cắt lách cho đÁn khi bãnh nhân đ°ợc ít nhÃt 5 tußi vì nguy c¢ nhiám

1.2.3 Tổng quan các phương pháp phát hiện đột biến gen gây bệnh Thalassemia

1.2.3.1 RE-PCR (Restrict enzyme – PCR)

Ph°¢ng pháp RE-PCR dựa trên nguyên lý khi một đột biÁn t¿o ra có

đißm đột biÁn hiãn diãn ¯u đißm cÿa ph°¢ng pháp phân tích bằng enzyme

đột biÁn xÁy ra nh°ng không làm mÃt hoÁc không t¿o ra vá trí nhÁn biÁt cho

1.2.3.2 MLPA (Multiplex ligation-dependent amplification)

biÁn mÃt đo¿n Ph°¢ng pháp này dựa trên phÁn āng multiplex-PCR phái hợp

đo¿n cjng nh° các thay đßi và sá bÁn copy cÿa gene ¯u đißm cÿa ph°¢ng pháp này là độ đÁc hiãu cao, có khÁ nng phát hiãn các thay đßi và sá bÁn sao

āng nhằm phát hiãn cùng lúc nhiÃu d¿ng đột biÁn [56] Tuy nhiên MLPA yêu

điãn di mao quÁn (capillary electrophoresis), mÁt khác giá thành cho mái xét nghiãm khá cao

1.2.3.3 Lai DNA

Đây là kā thuÁt phái hợp giāa multiplex-PCR vßi lai DNA đß phát hiãn

đ°ợc khuÁch đ¿i, sau đó các sÁn phẩm PCR này s¿ đ°ợc lai vßi đÅu dò đÁc

DNA đ°ợc phát hiãn bằng các c¢ chÁ t¿o màu KÁt quÁ lai DNA sau cùng s¿ đ°ợc đái chiÁu vßi thang chuẩn đß xác đánh lo¿i đột biÁn và tình tr¿ng đãng

đÅu tát, mÁt khác yêu cÅu kā nng thực hành cao và giá thành cjng cao

1.2.3.4 Realtime PCR

Realtime PCR là dựa trên c¢ sã phÁn āng huÿnh quang trong đó sự gia tng và sá l°ợng DNA t°¢ng āng vßi sự tng cÿa tín hiãu huÿnh quang Tín

các đÁc đißm này có thß xác đánh sá bÁn sao DNA đích có trong m¿u nghiên

này có °u đißm là tiÁn hành nhanh, không đòi hßi các kā thuÁt phân tích sau

PCR nh°ng giá thành chi phí cho từng xét nghiãm cao, đòi hßi các trang thiÁt bá đắt tiÃn.

1.2.3.5 Giải trình tự DNA (DNA sequencing)

đánh Tùy các hã tháng phân tích khác nhau, mái đo¿n đãc có thß có độ dài từ 50-600 nucleotide (máy thÁ hã 2-NextSeq) hoÁc 800-900 nucleotide (máy thÁ

cao, phân tích đ°ợc nhiÃu m¿u cùng lúc và phân tích chính xác các bÃt th°áng đã biÁt cjng nh° ch°a biÁt trên gene Tuy nhiên ph°¢ng pháp này có h¿n chÁ là đÅu t° ban đÅu cao, giá xét nghiãm khá đắt đß đÁc biãt khi sá m¿u không đÿ lßn, quy trình dài, phāc t¿p và đòi hßi c¢ sã có nng lực cao MÁc dù vÁy, kā thuÁt này v¿n cÅn đ°ợc thực hiãn cuái cùng sau khi các kā thuÁt khác

1.2.3.6 Gap-PCR

Gap-PCR là kā thuÁt cho phép xác đánh đột biÁn mÃt đo¿n hoÁc sự sắp

āng dụng đß phát hiãn đột biÁn mÃt đo¿n Kā thuÁt này sÿ dụng ít nhÃt 3 mãi (2

DNA bá mÃt, mãi còn l¿i đ°ợc thiÁt kÁ bß sung trong vùng mÃt đo¿n

¯u đißm cÿa ph°¢ng pháp này là ít tán kém, tiÁn hành nhanh, đ¢n giÁn,

đo¿n bằng Gap-PCR trong một phÁn āng Multiplex-PCR Tuy vÁy, Gap-PCR cjng có h¿n chÁ là cÅn phÁi đ°ợc biÁt đißm kÁt thúc cÿa đột biÁn mÃt đo¿n đß

đißm, do vÁy cÅn sự há trợ cÿa các ph°¢ng pháp khác

1.2.3.7 ARMS-PCR (Amplification refractory mutation system)

ARMS-PCR lÅn đÅu tiên đ°ợc mô tÁ bãi Newton và cộng sự Kā thuÁt này th°áng đ°ợc phát trißn đß phát hiãn nhāng đột biÁn đißm ARMS dựa

khác có thß phái hợp các cÁpmãi đß phát hiãn nhiÃu d¿ng đột biÁn đißm khác

đÁc hiãu do hiãn t°ợng mãi thoái hóa H¢n nāa, kā thuÁt này đòi hßi ng°ái làm cÅn có kinh nghiãm đß giÁm tß lã âm tính giÁ

1.2.3.8 Multiplex-PCR

nhóm nghiên cāu khác nhau Đái vßi lĩnh vực phát hiãn đột biÁn, kā thuÁt kā

các alen đột biÁn đ°ợc bißu hiãn bằng sÁn phẩm DNA khuÁch đ¿i vßi các kích th°ßc khác nhau đã biÁt

Theo một nghiên cāu gÅn đây, các kā thuÁt sinh hãc tÿ đã đ°ợc áp

nh°: ARMS-PCR, GAP-PCR, lai ADN đß xác đánh nhāng đột biÁn phß biÁn đã biÁt Nhāng đột biÁn gen hiÁm gÁp hoÁc đột biÁn mßi thì kā thuÁt giÁi trình

tự gen xác đánh đột biÁn đißm và kā thuÁt MLPA xác đánh đột biÁn mÃt đo¿n [58]

1.3 Táng quan ph°¢ng pháp l¿p và phân tích phÁ hÇ bÇnh Thalassemia

1.3.1 Ý nghĩa của phương pháp nghiên cứu phả hệ

thuộc quy luÁt di truyÃn nào PhÁ hã đ°ợc sÿ dụng nhằm theo dõi một tính

khuyên và di truyÃn chính xác, hāu ích mà không tán kém giúp các gia đình đang mong muán sinh con hoÁc sàng lãc tiÃn hôn nhân

Đái vßi các bãnh lý di truyÃn thì phÁ hã thÁt sự rÃt có ý nghĩa PhÁ hã

đánh các xét nghiãm di truyÃn cho bãnh nhân và các thành viên trong gia đình có nguy c¢ [59]

Theo tháng kê cÿa nhāng nm gÅn đây, Viãt Nam hiãn đang có khoÁng 3% dân sá mang gen bãnh Thalassemia t°¢ng đ°¢ng vßi khoÁng 5 triãu ng°ái N°ßc ta đã và đang là một n°ßc có tß lã mắc bãnh cao trên bÁn đã Thalassemia thÁ gißi Tß lã này còn lên đÁn h¢n 50% trong các dân tộc ít ng°ái Một câu hßi lßn đ°ợc đÁt ra là làm thÁ nào đß dự phòng Thalassemia?

Bãnh thalassemia là gánh nÁng cÁ và vÁt chÃt và tinh thÅn đái vßi ng°ái bãnh và ng°ái thân cÿa hã Do vÁy viãc phòng ngừa và quÁn lý cn bãnh này

cách sàng lãc và chẩn đoán xác đánh nhāng ng°ái lành mang gen bãnh đß t° vÃn trong hôn nhân, tr°ßc và trong khi mang thai Ph°¢ng pháp này giúp

ngành y tÁ quÁn lý nguãn gen hiãu quÁ, giÁm nguy c¢ xuÃt hiãn cá thß bãnh

Nh° vÁy, phÁ hã dù ph°¢ng pháp kinh đißn đã đ°ợc sÿ dụng từ rÃt lâu, nh°ng nó l¿i là một ph°¢ng pháp phß thôngvà hiãu quÁ trong nghiên cāu, tiên đoán bÃt cā một tính tr¿ng/ bãnh tÁt di truyÃn nào, trong đó có cÁ bãnh thalassemia

1.3.2 Phương pháp lập phả hệ

ng°ái mang gen bãnh lÁn hay không

S¢ đã phÁ hã th°áng đ°ợc v¿ theo hình bÁc thang, từ trên xuáng theo

đó, bác sĩ s¿ tiÁn hành khai thác và tìm hißu dÅn đÁn các thành viên còn l¿i

hã riêng

1.3.3 Phân tích phả hệ

Tr°ßc khi tiÁn hành phân tích phÁ hã, bác sĩ cÅn biÁt chi tiÁt và tÃt cÁ

đoán khÁ nng xuÃt hiãn bãnh tÁt cho thÁ hã tiÁp theo Từ đó, đ°a ra lái

khuyên t° vÃn cho gia đình muán sinh con hoÁc các cÁp đôi sàng lãc tr°ßc hôn nhân

1.3.4 Tiến hành sàng lọc

là đái vßi các thß nÁng cÿa bãnh xÁy ra ã các khu vực có tÅn suÃt cao

Một sá đái t°ợng đ°ợc °u tiên sàng lãc và nên đ°ợc sàng lãc, bao gãm:

• TÃt cÁ các phụ nā chuẩn bá mang thai hoÁc đang mang thai

• Tr°áng hợp, nÁu đã biÁt có ng°ái hã hàng cÿa chãng hoÁc vợ, gia đình có con mắc bãnh Thalassemia hoÁc đã đ°ợc xác đánh là ng°ái lành mang

tr°ßc khi sinh con lÅn kÁ tiÁp

• ĐÁc biãt là hôn nhân cÁn huyÁt, đãng huyÁt (làm tng nguy c¢ sinh con mắc các bãnh di truyÃn do gen lÁn)