BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC HẢI PHÒNG ĐỖ THỊ QUỲNH MAI PHÁT HIỆN MỘT SỐ ĐỘT BIẾN GEN VÀ ĐỐI CHIẾU KIỂU GEN VỚI KIỂU HÌNH CỦA BỆNH NHI THALASSEMIA TẠI BỆNH VIỆN TRẺ EM HẢI PHÒN[.]
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y-DƯỢC HẢI PHÒNG ĐỖ THỊ QUỲNH MAI PHÁT HIỆN MỘT SỐ ĐỘT BIẾN GEN VÀ ĐỐI CHIẾU KIỂU GEN VỚI KIỂU HÌNH CỦA BỆNH NHI THALASSEMIA TẠI BỆNH VIỆN TRẺ EM HẢI PHÒNG LUẬN ÁN TIẾN SỸ Y HỌC HẢI PHÒNG - 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y-DƯỢC HẢI PHÒNG ĐỖ THỊ QUỲNH MAI PHÁT HIỆN MỘT SỐ ĐỘT BIẾN GEN VÀ ĐỐI CHIẾU KIỂU GEN VỚI KIỂU HÌNH CỦA BỆNH NHI THALASSEMIA TẠI BỆNH VIỆN TRẺ EM HẢI PHÒNG LUẬN ÁN TIẾN SỸ Y HỌC Chuyên ngành : Nhi Mã số : 97.20.106 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS NGUYỄN NGỌC SÁNG TS BẠCH THỊ NHƯ QUỲNH HẢI PHÒNG - 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi Đỗ Thị Quỳnh Mai, nghiên cứu sinh khóa Trường Đại học Y Dược Hải Phòng, chuyên ngành Nhi, xin cam đoan: Đây luận án thân trực tiếp thực hướng dẫn của: PGS.TS Nguyễn Ngọc Sáng TS Bạch Thị Như Quỳnh Cơng trình không trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thơng tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết Hải Phòng, ngày 08 tháng 11 năm 2022 Đỗ Thị Quỳnh Mai LỜI CẢM ƠN Để hồn thành luận án này, trước hết tơi xin bày tỏ lịng kính trọng, biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Ngọc Sáng TS Bạch Thị Như Quỳnh, người thầy tận tụy dạy dỗ, bảo hết lòng hướng dẫn giúp đỡ, động viên tơi q trình học tập nghiên cứu Tơi xin bày tỏ lòng biết Đảng uỷ, Ban Giám hiệu Trường Đại học Y Dược Hải Phòng, Thầy, Cô Bộ môn Nhi, Thầy, Cô cán bộ, nhân viên Phòng quản lý Đào tạo Sau Đại học, Trường Đại học Y Dược Hải Phòng dành thuận lợi, giúp đỡ tận tình dành cho động viên quý giá q trình học tập nghiên cứu hồn thành luận án Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn Ban Giám đốc, phịng Kế hoạch Tổng hợp, Thầy, Cơ, cán bộ, nhân viên khoa Thận – Máu – Nội tiết, Khoa Sinh hóa, Huyết học phịng, ban Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng nhiệt tình tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi q trình nghiên cứu hồn thành luận án Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc Giáo sư, Phó giáo sư, Tiến sỹ, thầy, cô thành viên Hội đồng bảo vệ luận án cấp Bộ môn, cấp Trường, cho ý kiến góp ý bảo quý báu để tơi hồn thiện luận án Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới gia đình bao gồm cha mẹ, người có cơng sinh thành, chồng thân yêu động viên nhiều, anh chị em bạn bè đồng nghiệp chia sẻ, giúp đỡ, động viên giành cho nhiều tình cảm tình làm việc, học tập nghiên cứu Hải Phòng, ngày 08 tháng 11 năm 2022 Đỗ Thị Quỳnh Mai DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT A Adenosine ARMS-PCR Amplification Refractory Mutation System – Polymerase Chain Reaction (Hệ thống khuyếch đại đột biến trơ - Phản ứng chuỗi polymerase) ASO Allele-specific Oligonucleotide (Oligonucleotide đặc trưng alen) β0 Không tổng hợp chuỗi Beta β+ Giảm tổng hợp chuỗi Beta β++ BC Giảm nhẹ tổng hợp chuỗi Beta BVTEHP Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng C Cytidine CS Cộng DNA Desoxyribonucleic acid ĐBG Đột biến gen G Guanin GAP-PCR GAP-Polymerase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi polymerase Bạch cầu cách đoạn) Hb Hemoglobin HBA Gen quy định tổng hợp chuỗi alpha globin HBB Gen quy định tổng hợp chuỗi beta globin HC Hồng cầu HbE Hemoglobin E HbF Hemoglobin Fetal HbCs Hemoglobin Constant Spring IVS Intervening sequence (Trình tự chèn hay Intron) LIC Liver iron concentration (Nồng độ sắt gan) mRNA message Ribonucleotic acid (RNA thông tin) MCH Mean Corpuscular Hemoglobin (Lượng huyết sắc tố trung bình hồng cầu) MCHC Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration (Nồng độ hemoglobin trung bình hồng cầu) MCV Mean Corpuscular Volume (Thể tích trung bình hồng cầu) MLPA Multiplex Ligationdependent Probe Amplification (Khuếch đại đa đoạn dò) NST Nhiễm sắc thể PCR Polymerase Chain Reaction (Phản ứng khuyếch đại chuỗi) RNA RNA: Ribonucleic acid TIF Thalassemia Intermedia Federation (Liên đoàn Thalassemia quốc tế) T Thymidine TC Tiểu cầu TVDT Tư vấn di truyền 3’ UTR 3’ Untranscriptional Region (Vùng 3’ không mã) 5’ UTR 5’ Untranscriptional Region (Vùng 5’ không mã) MỤC LỤC Trang ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm dịch tễ học bệnh Thalassemia 1.2 Đặc điểm lâm sàng xét nghiệm 16 1.3 Tổng quan phương pháp lập phân tích phả hệ bệnh Thalassemia 28 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34 2.1 Đối tượng, địa điểm thời gian nghiên cứu 34 2.2 Phương pháp nghiên cứu 35 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 49 3.1 Đột biến gen gây bệnh Thalassemia bệnh nhi Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng .49 3.2 Đối chiếu kiểu gen với kiểu hình bệnh nhi Thalassemia Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng 60 3.3 Mô tả đặc điểm lâm sàng cận lâm sàng theo gen đột biến bước đầu xây dựng số phả hệ .67 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN .80 4.1 Xác định đột biến gen gây bệnh Thalassemia bệnh nhi Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng 80 4.2 Đối chiếu kiểu gen với kiểu hình bệnh nhi Thalassemia Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng Error! Bookmark not defined 4.3 Đặc điểm lâm sàng cận lâm sàng theo gen đột biến bước đầu xây dựng số phả hệ 107 KẾT LUẬN 113 NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN .115 NHỮNG HẠN CHẾ CỦA ĐỀ TÀI 116 KHUYẾN NGHỊ 117 PHƯƠNG HƯỚNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO .117 TÀI LIỆU THAM KHẢO .118 DANH SÁCH BỆNH NHÂN 136 DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 1.1 Tỷ lệ người mang gen Thalassemia Việt Nam .5 Bảng 1.2 Đột biến gen Hb (tổng hợp từ nhiều nghiên cứu) Bảng 1.3 Tỉ lệ người mang gen nước ta (tổng hợp từ nhiều nghiên cứu) .7 Bảng 1.4 Cấu trúc globin Hb sinh lý Bảng 1.5 Các loại allen đột biến bệnh α-Thalassemia .11 Bảng 1.6 Các đột biến gây bệnh β-Thalassemia .13 Bảng 1.7 Các kiểu gen kiểu hình bệnh α-Thalassemia 17 Bảng 2.1 Trình tự mồi kích thước đột biến thường gặp .40 Bảng 2.2 Các thông số phản ứng GAP-PCR đột biến thường gặp 41 Bảng 2.3 Trình tự mồi kích thước đột biến điểm thường gặp .42 Bảng 2.4 Các thông số phản ứng ARMS-PCR 43 Bảng 3.1 Đặc điểm tuổi vào viện tuổi phát bệnh 49 Bảng 3.2 Phân bố bệnh nhi α β-Thalassemia theo nhóm tuổi vào viện .49 Bảng 3.3 Phân bố bệnh nhân theo tuổi phát bệnh 50 Bảng 3.4 Đặc điểm giới đối tượng nghiên cứu .50 Bảng 3.5 Đặc điểm địa dư đối tượng nghiên cứu 51 Bảng 3.6 Phân bố đột biến gen hemoglobin bệnh nhân α-Thalassemia 52 Bảng 3.7 Phân loại bệnh nhân α-Thalassemia theo kiểu đột biến gen .52 Bảng 3.8 Phân bố đột biến gen β-globin bệnh nhân β-Thalassemia .55 Bảng 3.9 Phân loại đột biến β-globin theo vị trí gen bị đột biến 57 Bảng 3.10 Phân bố bệnh nhân β-Thalassemia theo chức gen bị đột biến 58 Bảng 3.11 Phân bố bệnh nhân β-Thalassemia theo kiểu gen đột biến .59 Bảng 3.12 Phân bố đối tượng nghiên cứu theo lý vào viện 60 Bảng 3.13 Phân bố đối tượng nghiên cứu theo triệu chứng lâm sàng vào viện 61 Bảng 3.14 Phân bố đối tượng nghiên cứu theo mức độ lách to vào viện 62 Bảng 3.15 Phân bố đối tượng nghiên cứu theo triệu chứng mặt Thalassemia .62 Bảng 3.16 Đặc điểm niêm mạc lợi đối tượng nghiên cứu vào viện .63 Bảng 3.17 Phân bố bệnh nhân theo tuổi bắt đầu truyền máu 63 Bảng 3.18 Phân bố bệnh nhân theo số lần truyền máu năm 64 Bảng 3.19 Đặc điểm lệ thuộc truyền máu bệnh nhân Thalassemia 64 Bảng 3.20 Đặc điểm huyết học đối tượng nghiên cứu .65 Bảng 3.21 Đặc điểm sắt ferritin huyết bệnh nhân Thalassemia .66 Bảng 3.22 Đặc điểm GOT, GPT, ure, creatinin bệnh nhân Thalassemia 67 Bảng 3.23 Hội chứng tán huyết theo gen đột biến α-Thalassemia 68 Bảng 3.24 Đặc điểm lâm sàng theo gen đột biến α-Thalassemia .68 Bảng 3.25 Đặc điểm huyết học theo số lượng gen đột biến α-Thalassemia (n=27) 69 Bảng 3.26 Đặc điểm điện di huyết sắc tố theo số lượng gen đột biến 69 Bảng 3.27 Đặc điểm lâm sàng theo đột biến gen HBB β-Thalassemia 70 Bảng 3.28 Đặc điểm huyết học theo đột biến gen HBB β-Thalassemia .71 Bảng 3.29 Đặc điểm điện di HST theo đột biến gen HBB β-Thalassemia 71 DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1.1 Gen α β globin (trên nhiễm sắc thể 16 11) .14 Hình 3.1 Phân bố đối tượng nghiên cứu theo kiểu hình bệnh (n=83) 51 Hình 3.2 Hình ảnh điện di thu đột biến SEA, 3.7 .53 Hình 3.3 Hình ảnh điện di thu đột biến c2delT 53 Hình 3.4 Hình ảnh điện di thu đột biến HbCs 54 Hình 3.5 Phân loại bệnh nhân α-Thalassemia theo số lượng gen đột biến (n=27) 54 Hình 3.6 Hình ảnh điện di thu đột biến CD17, CD41/42 55 Hình 3.7 Hình ảnh điện di thu đột biến CD95 56 Hình 3.8 Hình ảnh điện di thu đột biến CD26 56 Hình 3.9 Hình ảnh điện di thu đột biến CD71/72 .57 Hình 3.10 Hình ảnh điện di đột biến IVS1.1 57 Hình 11 Phả hệ gia đình số 72 Hình 12 Phả hệ gia đình số 72 Hình 13 Phả hệ gia đình số 73 Hình 14 Phả hệ gia đình số 74 Hình 15 Phả hệ gia đình số 74 Hình 16 Phả hệ gia đình số 75 Hình 17 Phả hệ gia đình số 76 Hình 18 Phả hệ gia đình số 76 Hình 19 Phả hệ gia đình số 77 Hình 20 Phả hệ gia đình số 10 78 Hình 21 Phả hệ gia đình số 11 78 Hình 22 Phả hệ gia đình số 12 79 Hình 4.1 Kết phát đột biến CD95 gia đình phả hệ số 11 108 ... đột biến gen đối chiếu kiểu gen với kiểu hình bệnh nhi Thalassemia Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng? ?? với mục tiêu sau: 1, Xác định số đột biến gen bệnh nhi Thalassemia Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng từ... 49 3.1 Đột biến gen gây bệnh Thalassemia bệnh nhi Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng .49 3.2 Đối chiếu kiểu gen với kiểu hình bệnh nhi Thalassemia Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y-DƯỢC HẢI PHÒNG ĐỖ THỊ QUỲNH MAI PHÁT HIỆN MỘT SỐ ĐỘT BIẾN GEN VÀ ĐỐI CHIẾU KIỂU GEN VỚI KIỂU HÌNH CỦA BỆNH NHI THALASSEMIA TẠI BỆNH VIỆN TRẺ EM HẢI PHÒNG