Tiểu luận thu nhận và khảo sát một số đặc tính của enzyme protease từ vi khuẩn bacillus subtilis

Hình 2.1 : Đường chuẩn Tyrosin.2.2 Khảo sát hoạt độ protease trong canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis:Cân 20 g canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis, tiến hành như mục II.3.1, phầnd

Tiểu luận Thu nhận và khảo sát một số đặc tính của enzyme protease từ vi khuẩn

Bacillus subtilis

MỤC LỤC

1 KHẢO SÁT HIỆU SUẤT THU NHẬN CHẾ PHẨM

ENZYME PROTEASE TỪ CANH TRƯỜNG VI

KHUẨN BACILLUS SUBTILIS VỚI CÁC LOẠI TÁC

……… 1

2 KHẢO SÁT HOẠT ĐỘ PROTEASE

………2

3 KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG PROTEIN THEO

PHƯƠNG PHÁP LOWRY

……….3

3.5 Khảo sát hàm lượng protein của CPE protease được tủa

……….4

1 KHẢO SÁT HIỆU SUẤT THU NHẬN CHẾ PHẨM

BACILLUS SUBTILIS VỚI CÁC LOẠI TÁC NHÂN TỦA KHÁC

NHAU

Bảng 1.1: Lượng chế phẩm enzyme protease thu được và hiệu suất thu nhận

với các loại tác nhân tủa khác nhau

Tác nhân tủa

enzyme

Khối lượng canh trường (g)

Khối lượng tủa (g) Khối

lượng tủa trung bình (g)

Hiệu suất thu nhận (%)

Nhận xét : Lượng chế phẩm enzyme thu được và hiệu suất thu nhận enzyme

cao nhất là trong trường hợp tác nhân tủa là cồn.

2 KHẢO SÁT HOẠT ĐỘ PROTEASE

2.1 Đường chuẩn Tyrosin :

Bảng 2.1: Đường chuẩn Tyrosin

Lượng

Hình 2.1 : Đường chuẩn Tyrosin.

2.2 Khảo sát hoạt độ protease trong canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis:

Cân 20 g canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis, tiến hành như mục II.3.1, phần

dịch thu được 200 ml, pha loãng 2 lần, đem 0,5ml tiến hành xác định hoạt độ theo phương pháp Anson cải tiến như mục II.3.2

Bảng 2.2: Hoạt độ protease của canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis.

Lần ODM ODĐC OD = ODM- ODĐC

µmol Tyrosin

Hoạt độ (UI/g CT)

Hoạt độ trungbình (UI/g CT)

1,63

Nhận xét : Hoạt độ protease của canh trường vi khuẩn là 1,63 UI/g CT (giá trị trung bình)

2.3 Khảo sát hoạt độ protease của chế phẩm enzyme được tủa bằng cồn 96 0 :

Cân 1g chế phẩm enzym protease hòa tan trong 100ml nước cất, sau đó pha loãng 2 lần, lấy 0,5ml tiến hành xác định hoạt độ theo phương pháp Anson cải tiến như mục II.3.2

Bảng 2.3: Hoạt độ protease của chế phẩm enzyme được tủa bằng cồn 960

Lần ODM ODĐC OD = ODM- ODĐC

µmol Tyrosin

Hoạt độ (UI/g CPE)

Hoạt độ trung bình (UI/g CPE)

22,61

Nhận xét : Hoạt độ của chế phẩm enzyme protease được tủa bằng cồn 960là 22,61 UI/g CPE (giá trị trung bình)

2.4 Khảo sát hoạt độ protease của chế phẩm enzyme được tủa bằng aceton :

Cân 1g chế phẩm enzym protease hòa tan trong 100ml nước cất, sau đó pha loãng 2 lần, lấy 0,5ml tiến hành xác định hoạt độ theo phương pháp Anson cải tiến như mục II.3.2

Bảng 2.4: Hoạt độ protease của chế phẩm enzyme được tủa bằng acetone.

Lần ODM ODĐC OD = ODM- ODĐC

µmol Tyrosin

Hoạt độ (UI/g CPE)

Hoạt độ trung bình (UI/g CPE)

14,29

Nhận xét : Hoạt độ của chế phẩm enzyme protease được tủa bằng aceton là 14,29 UI/g CPE (giá trị trung bình)

2.5 Khảo sát hoạt độ protease của chế phẩm enzyme được tủa bằng

amoni sulfat:

Cân 1g chế phẩm enzym protease hòa tan trong 100ml nước cất, sau đó pha loãng 2 lần, lấy 0,5ml tiến hành xác định hoạt độ theo phương pháp Anson cải tiến như mục II.3.2

Bảng 2.5: Hoạt độ protease của chế phẩm enzyme được tủa bằng Amoni sulfat.

Lần ODM ODĐC OD = ODM- ODĐC

µmol Tyrosin

Hoạt độ (UI/g CPE)

Hoạt độ trung bình (UI/g CPE)

6,93

Nhận xét : Hoạt độ của chế phẩm enzyme protease được tủa bằng muối amoni sulfat là 6,93 UI/g CPE (giá trị trung bình)

2.6 Sự so sánh hoạt độ các CPE protease tủa bởi các tác nhân khác nhau:

Bảng 2.6: So sánh hoạt độ của các CPE protease với tác nhân tủa khác nhau.

Cồn 960

22,24

22,61 20,80

24,80 Acetone

14,56

14,29 15,84

12,48 Amoni sulfat

10,24

6,93 4,32

6,24

Nhận xét : Trong các loại chế phẩm protease, chế phẩm có hoạt độ cao nhất là chế phẩm enzyme được tủa bằng cồn (22,61 UI/g CPE)

3 KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG PROTEIN THEO PHƯƠNG PHÁP LOWRY

3.1 Đường chuẩn Albumin :

Bảng 3.1: Đường chuẩn Albumin

Nồng độ

Hình 3.1: Đường chuẩn Albumin

3.2 Khảo sát hàm lượng protein trong canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis :

Cân 20 g canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis, tiến hành như mục II.3.1, phần

dịch thu được 200 ml, pha loãng 50 lần, đem1ml tiến hành thí nghiệm theo phương pháp Lowry như mục II.3.3

Bảng 3.2: Hàm lượng protein của canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis :

= ODM- ODĐC

Nồng độ protein tương ứng (µg/ml)

Hàm lượng protein (mg/g CT)

Hàm lượng protein trung bình (mg/g CT)

94,92

Nhận xét : Hàm lượng protein của canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis là

94,92 mg/g CT (giá trị trung bình)

3.3 Khảo sát hàm lượng protein của CPE protease được tủa bằng cồn 96 0 :

Cân 1g chế phẩm enzyme protease hòa tan trong 100ml nước cất, sau đó pha loãng 20 lần, lấy 1ml xác định hàm lượng protein theo phương pháp Lowry như mục II.3.3

Bảng 3.3: Hàm lượng protein của chế phẩm enzyme được tủa bằng cồn 960

=ODM-ODĐC

Nồng độ protein tương ứng (µg/ml)

Hàm lượng protein (mg/g CPE)

Hàm lượng protein trung bình (mg/g CPE)

318,60

Nhận xét : Hàm lượng protein của chế phẩm enzyme protease được tủa bằng cồn 960là 318,60 mg/g CPE (giá trị trung bình)

3.4 Khảo sát hàm lượng protein của CPE protease được tủa bằng aceton:

Cân 1g chế phẩm enzyme protease hòa tan trong 100ml nước cất, sau đó pha loãng 20 lần, lấy 1ml xác định hàm lượng protein theo phương pháp Lowry như mục II.3.3

Bảng 3.4: Hàm lượng protein của chế phẩm enzyme được tủa bằng cồn Acetone.

= ODM- ODĐC

Nồng độ protein tương ứng (µg/ml)

Hàm lượng protein (mg/g CPE)

Hàm lượng protein trung bình

(mg/g CPE)

284,63

Nhận xét : Hàm lượng protein của chế phẩm enzyme protease được tủa bằng aceton là 284,63 mg/g CPE (giá trị trung bình)

3.5 Khảo sát hàm lượng protein của CPE protease được tủa bằng muối amoni sulfat :

Cân 1g chế phẩm enzyme protease hòa tan trong 100ml nước cất, sau đó pha loãng 20 lần, lấy 1ml xác định hàm lượng protein theo phương pháp Lowry như mục II.3.3

Bảng 3.5: Hàm lượng protein của chế phẩm enzyme được tủa bằng amoni sulfat.

= ODM- ODĐC

Nồng độ protein tương ứng (µg/ml)

Hàm lượng protein (mg/g CPE)

Hàm lượng protein trung bình

(mg/g CPE)

203,44

Nhận xét : Hàm lượng protein của chế phẩm enzyme protease được tủa bằng aceton là 203,44 mg/g CPE (giá trị trung bình)

3.6 Sự so sánh hàm lượng protein của chế phẩm protease tủa bởi các tác nhân khác nhau :

Bảng 3.6: So sánh hàm lượng protein của các loại chế phẩm enzyme protease

với tác nhân tủa khác nhau

Tác nhân tủa Hàm lượng protein

(mg/g CPE)

Hàm lượng protein trung bình

(mg/g CPE)

Cồn 960

338,31

318,60 306,51

310,97 Aceton

285,49

284,63 283,44

284,97 Amoni sulfat

212,67

203,44 191,13

206,51 Nhận xét : Hàm lượng protein cao nhất ở chế phẩm enzyme protease được tủa bằng cồn 960là 307,85 mg/g CPE (giá trị trung bình )

4 HOẠT ĐỘ RIÊNG CỦA PROTEASE

Hoạt độ protease (UI/g CT)

Hàm lượng protein (mg protein/g CT)

Hoạt độ riêng (UI/mg Pr)

Bảng 4.2: So sánh hoạt độ riêng của từng loại chế phẩm enzyme protease với

tác nhân tủa khác nhau

Tác nhân tủa Hoạt độ protease

(UI/g CPE)

Hàm lượng protein (mg Pr/g CPE)

Hoạt độ riêng (UI/mg Pr)

Nhận xét : Hoạt độ riêng của chế phẩm enzyme protease được tủa bằng cồn là cao nhất 0,072 UI/mg CPE (giá trị trung bình)

5 KHẢO SÁT SỰ PHỤ THUỘC HOẠT ĐỘ CỦA CÁC CHẾ PHẨM ENZYME PROTEASE VÀO NHIỆT ĐỘ.

5.1 Khảo sát sự phụ thuộc hoạt độ của CPE protease (tủa bằng cồn) theo nhiệt độ:

Cân 1g chế phẩm enzym hòa tan trong 100ml nước cất, sau đó pha loãng 2 lần,

ở mỗi nhiệt độ khảo sát từ 300C đến 800 C, lấy 0,5ml tiến hành xác định hoạt độ theo Anson cải tiến như mục II.3.2

Bảng 5.1: Khảo sát sự phụ thuộc hoạt độ protease của CPE (tủa bằng cồn) theo

nhiệt độ

Nhiệt

độ

(oC)

Lần ODM ODĐC OD

= ODM- ODĐC

µmol Tyrosin

Hoạt độ (UI/g CPE)

Hoạt độ trung bình (UI/g CPE)

30

22,61

40

28,59

50

41,71

55

63,40

60

61,55

70

13,55

80

2,99

Nhận xét : Ở 550C, chế phẩm enzyme protease được tủa bằng cồn 960có hoạt

độ cao nhất là 63,40 UI/g CPE (giá trị trung bình)

Hình 5.1: Sự phụ thuộc của hoạt độ chế phẩm protease (tủa bằng cồn) theo nhiệt

độ

5.2 Khảo sát sự phụ thuộc hoạt độ enzyme vào nhiệt độ đối với CPE (tủa bằng aceton) :

Cân 1g chế phẩm enzym protease hòa tan trong 100ml nước cất, sau đó pha loãng 2 lần, ở mỗi nhiệt độ khảo sát từ 300C đến 800 C, lấy 0,5ml tiến hành xác định hoạt độ theo Anson cải tiến như mục II.3.2

Bảng 5.2: Khảo sát sự phụ thuộc hoạt độ enzyme vào nhiệt độ đối với CPE

(tủa bằng aceton) :

độ

(oC)

Lần ODM ODĐC OD

= ODM- ODĐC

µmol Tyrosin

Hoạt độ (UI/g CPE)

Hoạt độ trung bình (UI/g CPE)

30

14,29

40

21,60

50

36,11

55

42,88

60

30,03

70

1,87

80

0,69

Nhận xét : Ở 550C, chế phẩm enzyme protease được tủa bằng aceton có hoạt

độ cao nhất là 42,88 UI/g CPE (giá trị trung bình)

Hình 5.2: Sự phụ thuộc của hoạt độ chế phẩm protease (tủa bằng aceton) theo nhiệt

độ

5.3 Khảo sát sự phụ thuộc hoạt độ enzyme vào nhiệt độ đối với CPE (tủa bằng amoni sulfat) :

Cân 1g chế phẩm enzym protease hòa tan trong 100ml nước cất, sau đó pha loãng 2 lần, ở mỗi nhiệt độ khảo sát từ 300C đến 800 C, lấy 0,5ml tiến hành xác định hoạt độ theo Anson cải tiến như mục II.3.2