(Luận văn thạc sĩ) phân lập và khảo sát một số đặc tính sinh học của vi khuẩn ornithobacterium rhinotracheale gây bệnh hô hấp trên đàn gà ở một số tỉnh phía bắc

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMN NÔNG NGHIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMP VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMT NAM NGUYỄN THỊ ÁI PHÂN LẬP VÀ KHẢO SÁT MỘT SỐ ĐẶC TÍNHP VÀ KHẢO SÁT MỘT SỐ ĐẶC TÍNHO SÁT MỘT SỐ ĐẶC TÍNHT SỐ ĐẶC TÍNH ĐẶC TÍNHC TÍNH SINH HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAMC CỦA VI KHUẨN A VI KHUẨN N ORNITHOBACTERIUM RHINOTRACHEALE GÂY BỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMNH HÔ HẤP TRÊNP TRÊN ĐÀN GÀ Ở MỘT SỐ TỈNH PHÍA BẮC MỘT SỐ ĐẶC TÍNHT SỐ ĐẶC TÍNH TỈNH PHÍA BẮCNH PHÍA BẮCC Chuyên ngành : Thú y Mã số : 60 64 01 01 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Chu Đức Thắng NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2016 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tơi xin cam đoan thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Ái i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, cố gắng thân, nhận quan tâm giúp đỡ tổ chức, quan, nhà khoa học, thầy cô giáo, bạn bè đồng nghiệp người thân gia đình Nhân dịp này, tơi xin cảm ơn giúp đỡ giảng viên khoa Thú y - Học viện Nông nghiệp Việt Nam giảng dạy suốt thời gian học tập Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc hướng dẫn, giúp đỡ chân tình, đầy trách nhiệm hết lịng khoa học PGS.TS Chu Đức Thắng Tơi xin gửi lời cảm ơn tới sâu sắc tới ban lanh đạo, đồng nghiệp, đặc biệt phòng vi trùng – Trung tâm Kiểm nghiệm thuốc thú y TWI nơi làm việc tạo điều kiện giúp đỡ cho tơi hồn thành luận văn Cuối tơi xin gửi lời cảm ơn tới người thân gia đình ln quan tâm, động viên giúp tơi hồn thành luận văn Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Ái ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn .ii Mục lục iii Danh mục từ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Trích yếu luận văn .ix Thesis abstract xi Phần Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề .1 1.2 Mục tiêu nghiên cứu .2 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Phần Tổng quan tài liệu .3 2.1 Lịch sử tình hình nghiên cứu bệnh ort 2.1.1 Tình hình nghiên cứu ORT giới 2.1.2 Tình hình nghiên cứu ORT Việt Nam 2.2 Căn bệnh 2.2.1 Phân loại 2.2.2 Hình thái cấu trúc vi khuẩn 2.2.3 Tính chất ni cấy 2.2.4 Đặc tính sinh hóa 2.2.5 Cấu trúc kháng nguyên độc lực 2.2.6 Sức đề kháng 2.3 Truyền nhiễm học 2.3.1 Loài mắc bệnh 2.3.2 Chất chứa mầm bệnh 10 2.3.3 Phương thức truyền lây .10 2.3.4 Định serotype phân loại chủng 11 2.3.5 Khả gây bệnh .11 2.3.6 Khả miễn dịch 12 iii 2.4 Triệu chứng bệnh tích 12 2.4.1 Triệu chứng gà mắc bệnh ORT 12 2.4.2 Bệnh tích gà mắc bệnh ORT .13 2.5 Chẩn đoán .14 2.5.1 Chẩn đoán lâm sàng 14 2.5.2 Phân lập, nuôi cấy vi khuẩn 14 2.5.3 Phát kháng nguyên 15 2.5.4 Huyết học 15 2.5.5 Chẩn đoán phân biệt 16 2.6 Biện pháp phòng trị bệnh 18 2.6.1 Phòng bệnh 18 2.6.2 Điều trị 18 Phần Nội dung phương pháp nghiên cứu 20 3.1 Địa điểm nghiên cứu 20 3.2 Đối tượng nghiên cứu 20 3.3 Nội dung nghiên cứu 20 3.4 Nguyên vât liệu 20 3.4.1 Mẫu bệnh phẩm 20 3.4.2 Các loại mơi trường, hố chất 21 3.4.3 Máy móc, giống vi khuẩn 22 3.4.4 Dụng cụ 22 3.5 Phương pháp nghiên cứu 22 3.5.1 Phương pháp quan sát triệu chứng lâm sàng 22 3.5.2 Phương pháp mổ khám 22 3.5.3 Phương pháp lấy mẫu bảo quản mẫu 23 3.5.4 Phương pháp nuôi cấy phân lập vi khuẩn 23 3.5.5 Phương pháp nhuộm Gram .24 3.5.6 Phương pháp thử đặc tính sinh hố chủng vi khuẩn phân lập 25 3.5.7 Phương pháp PCR 26 3.5.8 Phương pháp xác định khả mẫn cảm vi khuẩn với kháng sinh 27 3.5.9 Phương pháp xư lý số liệu 29 iv Phần Kết thảo luận .30 4.1 Tình hình mắc bệnh đường hơ hấp đàn gà nói chung tình hình mắc bệnh ort nói riêng tỉnh hà nội, bắc ninh, bắc giang Hưng Yên từ tháng năm 2015 đến tháng năm 2016 4.1.1 30 Tình hình mắc số bệnh đường hơ hấp đàn gà tỉnh Hà Nội, Bắc Ninh, Bắc Giang Hưng Yên 30 4.1.2 Tình hình mắc số bệnh đường hô hấp theo lứa tuổi .32 4.1.3 Tình hình mắc số bệnh đường hô hấp theo mùa vụ 35 4.1.4 Tình hình mắc nghi mắc bệnh ORT tỉnh Hà Nội, Bắc Ninh, Bắc Giang Hưng Yên 4.1.5 37 Kết nghiên cứu biểu triệu chứng lâm sàng bệnh tích đại thể gà mắc nghi mắc bệnh ORT 38 4.2 Kết phân lập vi khuẩn ORT 46 4.2.1 Kết giám định vi khuẩn ORT kĩ thuật PCR 46 4.2.2 Kết phân lập vi khuẩn ORT 48 4.2.3 Kết xác định tỷ lệ phân lập vi khuẩn ORT số quan gà mắc bệnh 4.3 Kết giám định số đặc tính sinh hóa vi khuẩn ort phân lập gà 4.4 51 53 Kết xác định tính mẫn cảm vi khuẩn với số loại kháng sinh .56 Phần Kết luận kiến nghị 60 5.1 Kết luận 60 5.2 Kiến nghị 61 Tài liệu tham khảo 62 v DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Tên viết tắt Nghĩa tiếng Việt AGP Accelerated Graphics Port BEAs Boiled Extract Antigens BHB Brain Heart Infusion Broth CBA Columbia Blood Agar CRD Chronic Respiratory Disease DIA Dot Immunobinding Assay DNA Deoxyribonucleic Acid ELISA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay GAP Agar Gel Precipitation IB Infectious Bronchitis ILT Infectious Laryngo Tracheitis IgM Immunoglobulin M ORT Ornithobacterium rhinotracheale PAP Peroxidase - Anti Peroxidase PB Pasteurella Broth PBS Phosphate Saline Buffer PCR Polymerase Chain Reaction PGNR Pleomorphic Gram Negative Rod rRNA Ribosomal Ribonucleic Acide RT-PCR Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction TBE Tris-borate-EDTA SPAT Standard Plate Agglutination Test vi DANH MỤC BẢNG Bảng 21 Phản ứng enzyme O.Rhinotrachaele Bảng 3.1 Bảng tiêu chuẩn nhà cung cấp giấy tẩm kháng sinh 28 Bảng 4.1 Tình hình mắc số bệnh đường hô hấp gà tỉnh Hà Nội, Bắc Ninh, Bắc Giang Hưng Yên 31 Bảng 4.2 Tình hình mắc số bệnh đường hơ hấp theo lứa tuổi 33 Bảng 4.3 Tình hình mắc số bệnh đường hơ háp theo mùa vụ 36 Bảng 4.4 Kết thu thập mẫu bệnh phẩm nghi mắc bệnh ORT tỉnh 38 Bảng 4.5 Triệu chứng lâm sàng gà mắc nghi bệnh ORT 38 Bảng 4.6 Phân biệt triệu chứng lâm sàng gà mắc bệnh đường hô hấp 41 Bảng 4.7 Kết mổ khám kiểm tra bệnh tích đại thể 110 gà mắc nghi mắc bệnh ORT 42 Bảng 4.8 Kết giám định vi khuẩn ORT kĩ thuật PCR 47 Bảng 4.9 Kết phân lập vi khuẩn từ mẫu bệnh phẩm theo nhóm gà .49 Bảng 4.10 Kết phân lập vi khuẩn ORT từ mẫu bệnh phẩm 52 Bảng 4.11 Kết phản ứng sinh hóa ORT .56 Bảng 4.12 Bảng tổng hợp kết thử tính mẫn cảm ORT với số loại kháng sinh vii 57 DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Hình ảnh nhuộm gram Hình 3.1 Hình ảnh thạch máu có bổ sung gentamycin 21 Hình 4.1 Tỷ lệ gà mắc số bệnh đường hô hấp tỉnh Hà Nội, Bắc Ninh, Bắc Giang Hưng Yên 32 Hình 4.2 Tình hình mắc số bệnh đường hơ hấp gà theo lứa tuổi 34 Hình 4.3 Tình hình mắc số bệnh hô hấp theo mùa vụ 37 Hình 4.4 Tỷ lệ gà mắc nghi mắc bệnh ORT 39 Hình 4.5 Triệu chứng gà khó thở, lông xơ xác 40 Hình 4.6 Trứng méo mó, sần sùi 40 Hình 4.7 Triệu chứng sưng mặt, chảy nước mắt .40 Hình 4.8 Phổi viêm đỏ sẫm 43 Hình 4.9 Khí quản viêm – có dịch nhầy 44 Hình 4.10 Khí quản xuất huyết 44 Hình 4.11 Phổi viên – có mủ 45 Hình 4.12 Phổi viêm – có mủ nhánh phế quản .45 Hình 4.13 Túi khí dày, đục màu 46 Hình 4.14 Kết giám định có mặt vi khuẩn ORT kỹ thuật PCR 46 Hình 4.15 Kết giám định vi khuẩn kĩ thuật PCR theo nhóm gà .47 Hình 4.16 Khuẩn lạc ORT ni cấy thạch máu sau 48 .48 Hình 4.17 Kết phân lập vi khuẩn theo nhóm gà 49 Hình 4.18 Tỷ lệ phân lập vi khuẩn theo nhóm gà 50 Hình 4.19: Hình ảnh vi khuẩn ORT kính hiển vi 51 Hình 4.20 Tỷ lệ phân lập ORT từ mẫu bệnh phẩm 52 Hình 4.21 Phản ứng catalase ORT 54 Hình 4.22: Phản ứng Oxidase ORT 54 Hình 4.23 Phản ứng Indol ORT .55 Hình 4.24 Phản ứng Urease 55 Hình 4.25 Tỷ lệ mẫn cảm tỷ lệ kháng vi khuẩn ORT với số loại kháng sinh .57 Hình 4.26 Kết kiểm tra tính mẫn cảm vi khuẩn ORT loại kháng sinh thạch 58 viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Nguyễn Thị Ái Tên luận văn: Phân lập khảo sát số đặc tính sinh học vi khuẩn Ornithobacterium rhinotracheale gây bệnh hô hấp đàn gà số tỉnh phía Bắc Ngành: Thú y Mã số: 60 64 01 01 Tên sở đào tạo: Học viện Nơng nghiệp Việt Nam I Mục đích nghiên cứu - Phân lập vi khuẩn ORT từ gà mắc bệnh đường hơ hấp - Xác định hình thái, tính chất ni cấy, đặc tính sinh hố vi khuẩn ORT - Xác định tính mẫn cảm vi khuẩn với số kháng sinh II Phương pháp nghiên cứu - Phương pháp quan sát triệu chứng lâm sàng pháp mổ khám - Phương pháp lấy mẫu bảo quản mẫu - Phương pháp nuôi cấy phân lập vi khuẩn - Phương pháp thực phản ứng nhận biết - Phương pháp PCR phân lập Phương pháp kiểm tra khả mẫn cảm kháng sinh chủng vi khuẩn ORT III Kết thu kết luận đề tài - Bắc Giang tỉnh có số gà mắc bệnh đường hơ hấp cao (51,37%) - Giai đoạn gà 3-6 tuần tuổi có tỷ lệ mắc bệnh đường hơ hấp cao (49,81%) - Vụ đơng xn có tỷ lệ mắc số bệnh đường hô hấp cao vụ hè thu (46,59% > 44,02) Triệu chứng bệnh tích chủ yếu gà mắc ORT: sốt, thở gấp, ủ rũ, giảm/bỏ ăn, khó thở, phân lỗng, mặt sưng, phù, gầy, lơng xơ xác, mũi, miệng có nhớt, chậm lớn, giảm tỷ lệ đẻ, trứng méo mó, tập trung chủ yếu gà giai đoạn 3-6 tuần tuổi Giám định vi khuẩn ORT kĩ thuật PCR: số mẫu dương tính với vi khuẩn ORT chiếm tỷ lệ 45,45% Trong gà – tuần tuần tuổi có tỷ lệ nhiễm cao 54,35%, gà đẻ 41,86% gà thịt có tỷ lệ nhiễm thấp 33,33% Vi khuẩn ORT phát triển tốt mơi trường thạch Columbia Blood Agar (có bổ sung 5% máu thỏ, 10µg/ml Gentamycin, ni điều kiện 37°C, 5% CO2) Khuẩn lạc nhỏ, to đầu đinh gim, trịn, đục, có mầu xám đến xám trắng, gây dung ix