Luận văn thạc sĩ phân lập và đánh giá hoạt động của promoter chuyên biệt hạt phấn từ cây lúa (oryza sativa l

i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu có nguồn gốc rõ ràng tuân thủ quy tắc Kết trình bày luận văn thu thập trình nghiên cứu trung thực, chưa công bố trước Thái Nguyên, tháng năm 2019 Tác giả Trần Phú Cường ii LỜI CẢM ƠN Luận văn thực môn Sinh Học Phân Tử, Viện khoa học Sự sống, Trường Đại học Nơng lâm- Đại học Thái Ngun Để hồn thành luận văn em nhận động viên, giúp đỡ tận tình nhiều cá nhân tập thể Lời đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Phạm Bằng Phương người trực tiếp hướng dẫn em tận tình q trình thực đề tài, giúp em hồn thành tốt luận văn Em xin cảm ơn thầy cô giáo Khoa Công nghệ sinh học- Công nghệ thực phẩm, cán Trường ĐH Nông Lâm- ĐH Thái Nguyên giúp đỡ, tạo điều kiện cho em trình học tập Cuối em xin cảm ơn đến gia đình, bạn bè người thân giúp đỡ động viên tạo điều kiện cho em suốt trình học tập thực đề tài Xin chân thành cảm ơn! iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN .i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CỤM TỪ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG .vi DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ vii MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan đối tượng nghiên cứu 1.1.1 Nguồn gốc dê .3 1.1.2 Vị trí phân loại dê 1.1.3 Một số đặc điểm sinh học dê .5 1.1.4 Giới thiệu dê Nản 1.2 Tình hình chăn ni dê giới Việt nam 1.2.1 Tình hình chăn ni dê giới 1.2.2 Tình hình chăn nuôi dê Việt Nam 1.2.3 Phương hướng phát triển chăn nuôi dê Việt Nam .10 1.3 Cơ sở khoa học đề tài 11 1.3.1 Khái niệm đa hình gen 11 1.3.2 Gene POU1F1 12 1.3.3 Đa hình gen mối tương quan với tính trạng sinh trưởng dê 15 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.16 2.1 Đối tượng, địa điểm thời gian nghiên cứu 16 2.2 Dụng cụ, thiết bị hóa chất nghiên cứu 16 2.2.1 Dụng cụ nghiên cứu 16 2.2.2 Thiết bị hóa chất nghiên cứu .16 iv 2.3 Nội dung nghiên cứu 17 2.3.1 Nội dung 17 2.3.2 Nội dung 17 2.3.3 Nội dung 17 2.3.4 Nội dung 18 2.4 Phương pháp nghiên cứu .18 2.4.1 Nội dung 18 2.4.2 Nội dung 18 2.4.3 Nội dung 21 2.4.4 Nội dung 22 2.5 Các phương pháp xử lý số liệu 22 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .23 3.1 Kết nghiên cứu đặc điểm hình thái dê địa phương Định Hóa 23 3.2 Kết phân tích đa hình chiều dài đoạn gene POU1F1 .24 3.2.1 Kết tách chiết ADN tổng số số mẫu dê địa phương Định Hóa 24 3.2.2 Kết PCR khuếch đại gene POU1F1 cặp mồi đặc hiệu 26 3.2.3 Kết Cắt đoạn gene POU1F1 enzyme DdeI .27 3.3 Kết Phân tích mối tương quan đa hình di truyền gen POU1F1 liên quan đến tính trạng sinh trưởng dê 31 3.4 Kết giải trình tự xác định sai khác di truyền dê Nản Định Hóa số giống dê khác 34 3.4.1 Kết giải trình tự gene POU1F1 34 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37 Kết luận .39 Kiến nghị 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO 40 v DANH MỤC CỤM TỪ VIẾT TẮT Từ - Thuật ngữ viết tắt Nghĩa từ - thật ngữ DNA: Deoxyribonucleic acid RNA: Ribonucleic acid PCR: Polymerase chain Reaction RFLP: Reaction Fragment Length Polymorphism DNA bp: Base paire Kb: Kilo base Taq: Thermus aquaticus Rpm: Revolutions Per Minute dNTP: Deoxyribonucleotide Triphosphate vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Số lượng Dê giới nước khu vực Bảng 2.1: Danh mục thiết bị 16 Bảng 2.2: Danh mục hóa chất 17 Bảng 2.3: Trình tự cặp mồi sử dụng phản ứng PCR 20 Bảng 2.4:Thành phần phản ứng PCR 20 Bảng 2.5: Thành phẩn phản ứng cắt gene POU1F1 enzyme DdeI 21 Bảng 2.6: Vị trí cắt enzyme giới hạn 21 Bảng 2.7: Tỷ lệ kiểu gene POU1F1 dê Nản 21 Bảng 3.1 Kích thước số chiều đo dê địa Định Hóa 23 Bảng 3.2: Tỷ lệ kiểu gene POU1F1 dê Nản 29 Bảng 3.3: Sự khác tần số allele gene POU1F1 giống dê 30 Bảng 3.4: Ảnh hưởng đa hình gen POU1F1 đến sinh trưởng dê địa phương Định Hóa 31 Bảng 3.5: Ảnh hưởng đa hình gen POU1F1 đến sinh trưởng dê đực dê địa phương Định Hóa 32 vii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình 1.1: Một số hình ảnh Dê Hình 1.2: Tập tính ăn uống Dê Hình 1.3: Dê Nản xã Bộc Nhiêu huyện Định Hóa Hình 1.4: sơ đồ mơ allele gene POU1F1 13 Hình 1.5: Sơ đồ mô kiểu gene gene POU1F1 14 Hình 1.6: Đoạn gene POU1F1 vị trí cắt enzyme DdeI 14 Hình 2.1: Chu kì nhiệt độ phản ứng PCR khuyếch đại đoạn gene POU1F1 20 Hình 3.1: Kết tách chiết DNA tổng số 10 mẫu dê Nản 24 Hình 3.2: Kết tách chiết DNA tổng số 15 mẫu dê Nản 25 Hình 3.3: Kết tách chiết DNA tổng số mẫu dê Nản 25 Hình 3.3: Sản phẩm PCR khuyếch đại từ cặp mồi POU1F1 26 Hình 3.4: Sản phẩm PCR khuyếch đại từ cặp mồi POU1F1 26 Hình 3.5: Sản phẩm PCR khuyếch đại từ cặp mồi POU1F1 27 Hình 3.6: Kết phân tích đa hình đoạn gene POU1F1 enzyme DdeI 27 Hình 3.7: Kết phân tích đa hình đoạn gene POU1F1 enzyme DdeI 28 Hình 3.8: Kết phân tích đa hình đoạn gene POU1F1 enzyme DdeI 28 Biểu đồ 1: Biểu đồ tỷ lệ phần trăm kiểu gene POU1F1 29 Biểu đồ 2: Biểu đồ tần số allele gene POU1F1 30 Biểu đồ 3: Biểu đồ kết so sánh tần số allele gene POU1F1 dê Nản loài dê Trung Quốc 31 Biểu đồ 4: Biểu đồ khối lượng dê đực số 2,dê số kiểu Gene D1D1 qua giai đoạn tuổi (ss, 1, 3, 6, 12 tháng tuổi) 33 Biểu đồ 5: Biểu đồ khối lượng nhóm dê đực số 1, dê số 12 kiểu Gene D1D2 qua giai đoạn tuổi (ss, 1, 3, 6, 12) 33 MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Chăn nuôi dê ngành có vị trí quan trọng ngành chăn ni gia súc nước ta nay, nguồn cung cấp thực phẩm với tỷ trọng tương đối cao chất lượng tốt cho người, nguồn cung cấp phân bón cho ngành trồng trọt nguồn cung cấp sản phẩm phụ sữa, da, mỡ, thịt cho ngành công nghiệp chế biến khác.` Chăn ni dê Việt Nam có từ lâu đời chủ yếu theo phương thức nhỏ lẻ, khơng tập trung, quy mơ hộ gia đình Theo số liệu Tổng Cục thống kê năm 2000: Tổng đàn dê nước 525.000 con, chủ yếu giống dê nuôi lấy thịt, phân bố chủ yếu tỉnh trung du miền núi phía Bắc Một số giống dê địa phương kể đến giống dê Nản vùng núi đá huyện Định Hóa, tỉnh Thái Nguyên Định Hóa huyện miền núi phía tây bắc tỉnh Thái Nguyên với địa hình chiếm phần lớn đồi núi dãy núi đá vôi hiểm trở, phù hợp với việc chăn thả dê, đặc biệt với dê Cỏ Chính huyện Định Hóa hay nói xác khu vực quanh dãy núi Nản người dân có truyền thống lâu đời chăn ni dê, nên hình thành giống dê Nản mang thương hiệu riêng khu vực Về giá trị thương phẩm, chất lượng thịt dê Nản tốt, thơm ngon, tỷ lệ nạc cao, giá trị dinh dưỡng cao, hàm lượng Cholesterol thấp, tốt cho sức khỏe người Tuy nhiên số lượng dê Nản chủng giảm mạnh xuống mức đáng lo ngại, cần có biện pháp để cải thiện nguồn gene sinh trưởng, sinh sản phát triển loài dê nhằm mục đích bảo tồn phát triển quy mô chăn nuôi để đáp ứng nhu cầu tiêu thụ thị trường Trên giới có nhiều nghiên cứu việc chọn lọc giống vật ni thị phân tử Trong có nghiên cứu gene POU1F1 tính tương quan mật thiết gene với mức độ sinh trưởng phát triển loài dê lồi động vật có vú khác Xuất phát từ vấn đề thực tiễn trên, tiến hành nghiên cứu đề tài “Nghiên cứu mối tương quan đa hình di truyền gene POU1F1 đến tính trạng sinh trưởng Dê Nản Định Hóa phương pháp PCR- RFLP” Mục tiêu 2.1 Mục tiêu chung Phân tích đa hình di truyền gene POU1F1 dê Nản Định Hóa 2.2 Mục tiêu cụ thể - Đánh giá đặc điểm hình thái dê Nản Định Hóa - Phân tích đa hình chiều dài đoạn gene POU1F1 dê Nản - Phân tích mối tương quan gene POU1F1 với tính trạng sinh trưởng dê Nản Định Hóa - Giải trình tự gene POU1F1 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học - Đánh giá đa hình kiểu gene POU1F1 dê Nản Định Hóa - Đánh giá mối tương quan gene POU1F1 với tính trạng sinh trưởng dê Nản Định Hóa 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Kết phân tích đa hình di truyền tạo tiền đề cho nghiên cứu sau nhằm ứng dụng kĩ thuật – cơng nghệ đại, tiên tiến vào công tác chọn lọc giống vật ni có khả đem lại giá trị lợi nhuận kinh tế cao, trì giống chủng, phục vụ nhu cầu thị trường phát triển kinh tế khu vực toàn quốc Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan đối tượng nghiên cứu 1.1.1 Nguồn gốc dê Dê lồi động vật hóa từ lâu đời người nuôi cách hai vạn năm, nước Trung Đông, Ấn Độ nuôi từ sớm Các tác giả Trần Kiên cs (1995) cho dê hóa từ trung tâm - Trung tâm cổ trung tâm Cận Á - Ấn Độ, giống dê giống với dê sừng xoắn (Capra Falconeri) cịn sống miền tây Hymalaya, Kasơmia, Afganistan, lồi dê có sừng xoắn lên - Trung tâm Cận Á có giống dê với nguồn gốc từ lồi dê rừng (Capra Aegagrus), sống miền Tây Ấn Độ, Cáp Ca, Tiểu Á quần đảo Hy Lạp Lồi có sừng dẹp xi xuống bên vai cong phía sau - Trung tâm Đơng Nam Á trung tâm nhất, việc nuôi dê thời kỳ đồ đồng Nơi nguồn gốc loài dê núi (Capra Prisca) Sừng lồi dê cong phía sau, sang hai bên xoắn chút Giống dê sau hóa ni phổ biến Châu Âu, Châu Á Châu Phi [2] Hình 1.1: Một số hình ảnh Dê 39 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Dựa vào kết nghiên cứu dê Nản thuộc địa phương định hóa tơi đưa kết sau: Khối lượng dê địa phương (Dê Nản) Định Hóa tương đối nhỏ (Lúc 12 tháng tuổi đạt trung bình 19,115 kg/con khối lượng dê đực thường cao dê (Lúc 12 tháng tuổi dê đực đạt 20,71 kg/con; dê đạt 17,52 kg/con, sai khác khối lượng lúc 12 tháng tuổi dê đực dê có ý nghĩa thống kê (P