NGUYÊN TẮC VÀ MỘT SỐ ỨNG DỤNG CỦA CÁC KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ CƠ BẢN

Lai tại chỗ gắn huỳnh quang: một kiểu lai phân tử thực hiện ngay trong tế bào mà không cần tách chiết nucleic acid ra khỏi tế bào Cung cấp thông tin chính xác về vị trí và phân bố của đoạn DNA quan tâm trên NST nhờ một mẫu dò (probe) chuyên biệt

NGUYÊN TẮC VÀ MỘT SỐ ỨNG DỤNG CỦA CÁC KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ CƠ BẢN TS.BS Hoàng Anh Vũ Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh 1 Nội dung: 1.Các kỹ thuật khảo sát nhiễm sắc thể 2.Các kỹ thuật khảo sát nucleic acid 3.Các kỹ thuật khảo sát protein Mục tiêu: 1.Nhận diện được kỹ thuật tương ứng mức độ phân tử 2.Nêu được cơ chế phân tử và cách phát hiện bất thường 3.Liệt kê ứng dụng của PCR và giải trình tự DNA 2 Cơ thể người Cơ quan/hệ thống Mô Tế bào Các phân tử sinh học (nucleic acid, protein) 3 Nhiễm sắc thể Nhiễm sắc thể đồ FISH Deoxyribonucleic acid (DNA) (+ Histone) Southern blot (DNA) Northern blot (RNA) Ribonucleic acid (RNA) PCR DNA sequencing Protein Hóa mô miễn dịch Western blot 4 Nhiễm sắc thể đồ (karyotype)  Bản đồ của bộ nhiễm sắc thể của một cá thể  Nam bình thường: 46,XY  Nữ bình thường: 46,XX 5 Nhiễm sắc thể đồ: Quy trình kỹ thuật Cấy tế bào Cytokines (tủy: 1 – 2 ngày, máu: 2 -3, ối: 5 -7) Thu hoạch Thu hoạch tế bào 0.075 M KCl Cố định (Acid acetic: methanol) Chuẩn bị slide Nhuộm băng • G-banding Phân tích • Q-banding • (R, C, T, NOR) 20- 30 metaphase 6 Bất thường số lượng: Hội chứng Down (Trisomy 21) 7 Bất thường cấu trúc: Bệnh bạch cầu mạn dòng tủy 8 Hạn chế của nhiễm sắc thể đồ  Chỉ khảo sát được khi nuôi cấy bệnh phẩm thành công  Không phát hiện được những bất thường nhỏ  Tốn nhiều thời gian và nhân lực 9 FISH (fluorescence in situ hybridization)  Lai tại chỗ gắn huỳnh quang: một kiểu lai phân tử thực hiện ngay trong tế bào mà không cần tách chiết nucleic acid ra khỏi tế bào  Cung cấp thông tin chính xác về vị trí và phân bố của đoạn DNA quan tâm trên NST nhờ một mẫu dò (probe) chuyên biệt 10