An Giang, ngày 30 tháng 05 năm 2023 Sinh viên thực hiện Trang 6 TÓM TẮT Nghiên cứu đƣợc thực hiện với mục tiêu phân lập và tuyển chọn dòng nấm men có hoạt tính lên men cao, để lên men
ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƢỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP – TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VÀ ĐỊNH DANH NẤM MEN TRONG LÊN MEN DỊCH QUẢ HỒNG QUÂN (Flacourtia jangomas (Lour.) Raeusch) TRẦN THỊ MINH ANH AN GIANG, THÁNG 05 NĂM 2023 ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƢỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP – TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VÀ ĐỊNH DANH NẤM MEN TRONG LÊN MEN DỊCH QUẢ HỒNG QUÂN (Flacourtia jangomas (Lour.) Raeusch) TRẦN THỊ MINH ANH MSSV: DSH192618 GIẢNG VIÊN HƢỚNG DẪN GIẢNG VIÊN HƢỚNG DẪN ThS Lê Hoàng Bảo Ngọc TS Đoàn Thị Minh Nguyệt AN GIANG, THÁNG 05 NĂM 2023 CHẤP NHẬN CỦA HỘI ĐỒNG Khóa luận “Phân lập, tuyển chọn định danh nấm men lên men dịch Hồng quân (Flacourtia jangomas (Lour.) Raeusch)”, sinh viên Trần Thị Minh Anh thực dƣới hƣớng dẫn ThS Lê Hoàng Bảo Ngọc TS Đoàn Thị Minh Nguyệt Tác giả báo cáo nghiên cứu đƣợc Hội đồng khoa học thông qua ngày…………………………………… Phản biện Phản biện TS Nguyễn Hữu Thanh ThS Lý Thị Thanh Thảo Cán hƣớng dẫn TS Đoàn Thị Minh Nguyệt ThS Lê Hoàng Bảo Ngọc i LỜI CẢM TẠ Lời đầu tiên, xin gửi lời cảm ơn đến cha mẹ chăm sóc, ni dƣỡng tạo điều kiện tốt để đƣợc nhƣ ngày hôm nay, cảm ơn yêu thƣơng động viên nhiều từ cha mẹ ngƣời thân gia đình Cảm ơn quý thầy/cô Bộ môn Công nghệ Sinh học – Trƣờng Đại học An Giang cho kiến thức vô quý báu nhƣ kinh nghiệm, kỹ suốt trình học tập trƣờng Để hồn thành khóa luận này, tơi chân thành cảm ơn Công ty TNHH BillDoan Consultation tạo điều kiện hỗ trợ tơi mặt kinh phí suốt thời gian thực nghiên cứu Đặc biệt, tơi chân thành cảm ơn đến TS Đồn Thị Minh Nguyệt Ths Lê Hồng Bảo Ngọc ln quan tâm, tận tình hƣớng dẫn, giúp đỡ truyền đạt kinh nghiệm, kiến thức vô quý báu cho Tôi xin gửi lời cảm ơn đến anh chị khóa 19 chun ngành Cơng Nghệ Sinh Học Vi Sinh, bạn lớp DH20SH nhiệt tình giúp đỡ tơi hồn thành tốt đề tài tốt nghiệp Một lần xin chúc tất quý thầy cô bạn bè dồi sức khỏe thành công đƣờng nghiệp Chúc Công ty TNHH BillDoan Consultation ngày phát triển mở rộng Xin chân thành cảm ơn! An Giang, ngày 30 tháng 05 năm 2023 Sinh viên thực Trần Thị Minh Anh ii LỜI CAM KẾT Tôi cam đoan công trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu cơng trình nghiên cứu có xuất sứ rõ ràng Những kết luận khóa luận này, chƣa cơng bố bất kí cơng trình khác An Giang, ngày 30 tháng 05 năm 2023 Sinh viên thực Trần Thị Minh Anh iii TÓM TẮT Nghiên cứu đƣợc thực với mục tiêu phân lập tuyển chọn dòng nấm men có hoạt tính lên men cao, để lên men dịch hồng quân chất lƣợng Kết phân lập đƣợc năm dòng nấm men từ dịch hồng quân lên men tự nhiên, đƣợc thu mua huyện Tịnh Biên, Tri Tôn, tỉnh An Giang Sau phân lập tiến hành quan sát mơ tả hình thái dòng nấm men Dòng nấm men M4 đƣợc phân lập từ hồng quân đƣợc tuyển chọn có khả lên men nhanh, cho độ cồn cao (11,50% v/v) lƣợng đƣờng sót thấp (7,17 oBrix) Định danh dòng nấm men M4 phƣơng pháp giải trình tự Sanger xác định đƣợc dịng M4 tƣơng đồng 99,64% với Saccharomyces cerevisiae Từ khóa: Quả hồng quân, nấm men, phân lập, tuyển chọn, định danh, Saccharomyces cerevisiae iv MỤC LỤC CHẤP NHẬN CỦA HỘI ĐỒNG i LỜI CẢM TẠ ii LỜI CAM KẾT iii TÓM TẮT iv MỤC LỤC v DANH SÁCH HÌNH vii DANH SÁCH BẢNG viii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ix CHƢƠNG GIỚI THIỆU 1.1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 1.3 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 1.4 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 1.5 NHỮNG ĐÓNG GÓP CỦA ĐỀ TÀI CHƢƠNG TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 2.1 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU LIÊN QUAN 2.1.1 Những nghiên cứu nƣớc 2.1.2 Những nghiên cứu nƣớc 2.2 CÂY HỒNG QUÂN 2.2.1 Phân loại 2.2.2 Hình thái cấu tạo 2.2.3 Tác dụng dƣợc lý Hồng quân 2.2.4 Các sản phẩm ứng dụng đời sống 2.3 NẤM MEN 2.3.1 Hình thái cấu tạo tế bào nấm men 2.3.2 Sinh sản sinh trƣởng nấm men 2.3.3 Những yếu tố ảnh hƣởng đến trình lên men 2.3.4 Những đặc điểm nấm men cần tuyển chọn 10 2.3.5 Vi khuẩn có hại cho nấm men 11 2.3.6 Nấm men sản xuất rƣợu vang 11 2.4 ĐỊNH DANH BẰNG PHƢƠNG PHÁP SINH HỌC PHÂN TỬ 14 2.4.1 Các phƣơng pháp ly trích DNA 14 2.4.2 PCR định danh vi sinh vật 16 v 2.4.3 Xây dựng phát sinh loài 16 CHƢƠNG PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 3.1 PHƢƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 18 3.1.1 Thời gian địa điểm tiến hành thí nghiệm 18 3.1.2 Vật liệu thí nghiệm 18 3.1.3 Dụng cụ nghiên cứu 18 3.1.4 Thiết bị nghiên cứu 18 3.1.5 Hóa chất, mơi trƣờng nghiên cứu 19 3.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 3.2.1 Thí nghiệm 1: Phân lập định danh sơ số nấm men từ dịch lên men nƣớc Hồng quân 19 3.2.2 Thí nghiệm 2: Tuyển chọn dịng nấm men lên men sinh khí CO2 ống Durham 20 3.2.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát khả lên men dòng nấm men tuyển chọn 21 3.3 THỐNG KÊ VÀ PHÂN TÍCH SỐ LIỆU 22 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23 4.1 KẾT QUẢ PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN CÁC CHỦNG NẤM MEN TỪ DỊCH HỒNG QUÂN LÊN MEN 23 4.2 KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG LÊN MEN SINH KHÍ CO2 CỦA CÁC DỊNG NẤM MEN PHÂN LẬP 25 4.3 KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG LÊN MEN CỦA CÁC DÒNG NẤM MEN ĐÃ ĐƢỢC TUYỂN CHỌN 28 4.4 ĐÁNH GIÁ CHẤT LƢỢNG SẢN PHẨM LÊN MEN TỪ HỒNG QUÂN 30 4.5 KẾT QUẢ ĐỊNH DANH DÒNG NẤM MEN PHÂN LẬP M4 BẰNG PHƢƠNG PHÁP GIẢI TRÌNH TỰ SANGER 31 4.6 XÂY DỰNG CÂY PHÁT SINH LOÀI 32 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 33 5.1 KẾT LUẬN 33 5.2 KIẾN NGHỊ 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO 34 PHỤ LỤC A MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRONG QUÁ TRÌNH NGHIÊN CỨU 39 PHỤ LỤC B CÁC PHƢƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 42 PHỤ LỤC C PHƢƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ CHẤT LƢỢNG SẢN PHẨM 44 PHỤ LỤC D PHƢƠNG PHÁP GIẢI TRÌNH TỰ SANGER 47 PHỤ LỤC E KẾT QUẢ THỐNG KÊ 49 vi DANH SÁCH HÌNH Hình Quả Hồng quân Hình Saccharomyces cerevisiae (Lƣơng Đức Phẩm, 2005) 12 Hình Saccharomyces uvarum (Lƣơng Đức Phẩm, 2005) 12 Hình Saccharomyces chevalieri (Lƣơng Đức Phẩm, 2005) 13 Hình Saccharomyces oviformis (Lƣơng Đức Phẩm, 2005) 13 Hình Hình dạng khuẩn lạc hình dạng tế bào (X40) dịng nấm men M1 24 Hình Hình dạng khuẩn lạc hình dạng tế bào (X40) dòng nấm men M2 24 Hình Hình dạng khuẩn lạc hình dạng tế bào (X40) dòng nấm men M3 24 Hình Hình dạng khuẩn lạc hình dạng tế bào (X40) dòng nấm men M4 25 Hình 10 Hình dạng khuẩn lạc hình dạng tế bào (X40) dịng nấm men M5 25 Hình 11 So sánh trình tự gen ITS1 dịng M4 chủng Saccharomyces cevevisiae với số đăng ký CP006454.1 32 Hình 12 Cây phả hệ di truyền ITS1 dòng M4 với dòng Saccharomyces cerevisiae 32 Hình 13 Nấm men sau tăng sinh 39 Hình 14 Mẫu thí nghiệm đo chiều cao cột khí CO2 ống Durham 39 Hình 15 Độ Brix trƣớc lên men đƣợc đo Brix kế 39 Hình 16 Các nghiệm thức thí nghiệm 40 Hình 17 Đo độ cồn sau chƣng cất cồn kế 40 Hình 18 Chƣng cất rƣợu 41 Hình 19 Kết định danh dòng nấm men M4 41 vii DANH SÁCH BẢNG Bảng Phân loại khoa học Hồng quân Bảng Thành phần môi trƣờng thạch PDA 19 Bảng Đặc điểm khuẩn lạc tế bào dòng nấm men phân lập 23 Bảng Chiều cao cột khí ống Durham (cm) dịng nấm men phân lập – Đƣờng Glucose 26 Bảng Chiều cao cột khí ống Durham (cm) dòng nấm men phân lập – Đƣờng Saccharose 26 Bảng Độ Brix trƣớc sau lên men dòng nấm men phân lập ống Durham 27 Bảng Độ Brix trƣớc sau lên men dòng nấm men tuyển chọn 28 Bảng Độ pH trƣớc sau lên men dòng nấm men tuyển chọn29 Bảng Độ cồn sau lên men dòng nấm tuyển chọn 30 Bảng 10 Điểm đánh giá cảm quan dòng nấm men tuyển chọn 30 viii