Báo cáo thực hành thiết bị và kỹ thuật cnsh

Hội chứng này sẽ làm giảm dần sức chống đỡ của cơ thể mỗi khi bị những loại kýsinh trùng, vi trùng hay là virus tấn công và lúc này cơ thể dễ mắc phải những bệnh nhiễmtrùng và một số loạ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC

BÁO CÁO TIỂU LUẬN

PHƯƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN NHIỄM HIV – XÉT NGHIỆM PCR HIV

Sinh viên thực hiện : NHÓM 8

TP.Thủ Đức, 10/2023

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC

BÁO CÁO TIỂU LUẬN

PHƯƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN NHIỄM HIV – XÉT NGHIỆM PCR HIV

TS Huỳnh Văn Biết Đinh Thị Mỹ Huyền – 21126362

KS Trương Quang Toản Nguyễn Hoàng Uyên Thy – 21126533

Niên khóa Đỗ Thị Thủy Tiên – 21126534

MỤC LỤC

Danh sách các từ viết tắt 1

CHƯƠNG 1 MỞ ĐẦU 2

Đặt vấn đề 2

CHƯƠNG 2 PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM PCR HIV 3

2.1.Thiết bị, dụng cụ 3

2.1.1 Máy PCR 3

2.1.2 Tủ an toàn sinh học cấp 2 (BSC Cấp 2) 3

2.2 Ứng dụng kỹ thuật PCR trong phát hiện HIV 4

2.3 Xét nghiệm PCR HIV 5

CHƯƠNG 3 KẾT LUẬN 6

TÀI LIỆU THAM KHẢO 7

Danh sách các từ viết tắt

PCR Polymerase Chain Reaction

HIV Human Immunodeficiency Virus

BSC Biological Safety Cabinet

1

CHƯƠNG 1 MỞ ĐẦU

Đặt vấn đề

Vi-rút gây suy giảm miễn dịch ở người hay HIV là loại vi-rút hình thành nên căn bệnh thế kỷ và gia tăng ngày càng chóng mặt ở các nước đang phát triển Virus HIV xâm nhập vào trong cơ thể con người chủ yếu bằng đường máu và đường tình dục không an toàn Hội chứng này sẽ làm giảm dần sức chống đỡ của cơ thể mỗi khi bị những loại ký sinh trùng, vi trùng hay là virus tấn công và lúc này cơ thể dễ mắc phải những bệnh nhiễm trùng và một số loại bệnh ung thư khác Một khi người bệnh đã bị nhiễm HIV thì hiện chưa có cách nào để loại bỏ chúng, có nghĩa là bạn phải sống chung với nó cả đời Nếu không được phát hiện và ngăn chặn kịp thời thì tốc độ lây lan trong cộng đồng càng khó kiểm soát

Việc nhận biết được HIV sớm giúp cho việc điều trị và phòng chống lây nhiễm HIV hiệu quả hơn Có một số loại xét nghiệm phát hiện sàng lọc người nhiễm HIV, một trong

số đó là PCR HIV Đây là loại xét nghiệm dựa trên máu để phát hiện vật liệu di truyền của HIV, được gọi là RNA, dựa trên nguyên lý phản ứng khuếch đại, nhân lên nhiều lần vật liệu di truyền của sinh vật để nhận dạng chính xác Vì thế, xét nghiệm này cho phép chẩn đoán bệnh do virus sớm hơn rất nhiều khi số lượng virus có mặt trong máu rất ít so với các xét nghiệm kháng thể hay kháng nguyên thông thường

2

CHƯƠNG 2 PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM PCR HIV

2.1.Thiết bị, dụng cụ

Thiết bị: máy PCR, tủ an toàn sinh học cấp 2, máy ly tâm tốc độ cao, máy vortex, máy hút với bình bẫy, máy điều nhiệt

Dụng cụ: ống tube ( thể tích 0.2, 0.5 và 1.5 mL), pipet (thể tích 2-20 L, 20-200 L, 200-1000 L), đầu típ pipet, hộp đựng đầu típ pipet, găng tay phẫu thuật không bột

2.1.1 Máy PCR

Máy Realtime PCR, là một thiết bị được dùng để kiểm soát diễn biến của một phản ứng PCR theo thời gian thực Thiết bị hoạt động dựa trên sự phát hiện huỳnh quang tạo ra một phân tử báo cáo, tích tụ sản phẩm PCR theo từng chu kỳ khuếch đại

Thiết bị gồm 3 thành phần cơ bản đó là bộ phận điều khiển, bộ phận luân nhiệt, nguồn điện Với máy Realtime PCR còn có bộ phận phát huỳnh quang

2.1.2 Tủ an toàn sinh học cấp 2 (BSC Cấp 2)

BSC Cấp 2 là loại tủ được tạo ra để thực hiện các công việc phù hợp với mức độ

an toàn sinh học cấp 2 Tủ có khả năng bảo vệ người sử dụng và bảo vệ mẫu vật thí nghiệm, tất cả không khí đều đi qua màng lọc HEPA

3

Hình 2.1 Máy Realtime PCR.

BSC Cấp 2 có 4 loại là A1, A2, B1 và B2 Mỗi loại sẽ có kết cấu cũng như ứng dụng khác nhau để phù hợp cho từng ứng dụng Chúng được phân loại theo tỷ lệ phần trăm của không khí thải ra ngoài so với phần không khí được tuần hoàn từ bầu không khí chung

2.2 Ứng dụng kỹ thuật PCR trong phát hiện HIV

PCR là từ viết tắt của cụm từ Polymerase Chain Reaction, một kỹ thuật được phát minh vào năm 1985 bởi nhà khoa học người Mỹ tên là Kary Mullis

Từ một đoạn DNA chọn lọc sẽ được nhân lên gấp hàng triệu lần hoặc hơn, nhằm tạo ra một lượng lớn các bản sao DNA dựa vào chu kì nhiệt độ Bằng kỹ thuật PCR, từ một lượng khuôn DNA rất nhỏ người ta có thể khuếch đại chính xác, trật tự một lượng lên đến hàng triệu bản nhằm phục vụ cho các quá trình khảo sát trong phản ứng

Nguyên lý cơ bản của kỹ thuật PCR/ Real-time PCR là dựa vào sự khuếch đại đặc hiệu của enzyme Taq Polymerase trên cơ sở sự bắt cặp chính xác của primer vào DNA trong mẫu và các dNTP tự do và sự phát quang của các probe huỳnh quang và tự đó bộ phận ghi nhận tín hiệu sẽ ghi nhận được tín hiệu phát ra từ các probe Kỹ thuật real-time

4

Hình 2.2 Tủ an toàn sinh học cấp 2.

PCR cũng bao gồm các thành phần cơ bản như dNTP, DNA Polymerase, DNA mạch khuôn, cặp mồi và dung dịch đệm

Quá trình gồm ba giai đoạn:

Giai đoạn biến tính, sự tách các đoạn gen HIV thành hai chuỗi đơn

Giai đoạn bắt cặp, đoạn nguyên liệu được gắn vào chuỗi đơn này để tạo nên một

mô hình làm mẫu cho việc sao chép

Giai đoạn kéo dài, bằng cách sử dụng enzyme polymerase, đoạn nguyên liệu này được sao chép lại thành chuỗi đôi

Các giai đoạn này được thực hiện thông qua sự luân chuyển nhiệt độ giữa các chu

kỳ Qua mỗi chu kỳ, tín hiệu huỳnh quang sẽ được ghi nhận có sự gia tăng tương ứng với lượng bản sao DNA nhân lên theo cấp số lũy thừa

2.3 Xét nghiệm PCR HIV

Xét nghiệm tải lượng virus HIV tìm kiếm RNA bằng việc sử dụng huyết thanh để đếm số lượng bản sao của HIV

Phương pháp được triển khai dựa trên quá trình sao chép ngược RNA của virus, sau đó là khuếch đại PCR cDNA thu được

Hỗn hợp PCR chứa các phân tử mang đầu dò và chất khử chất xúc tác dành riêng cho mục tiêu Sau khi được lai với trình tự mục tiêu, các đầu dò sẽ được kích hoạt Kết quả của việc kích hoạt huỳnh quang tăng tỷ lệ thuận với sự khuếch đại trình tự mục tiêu Cường độ huỳnh quang được đo ở mỗi chu kỳ phản ứng bằng bộ thu thập dữ liệu máy quay vòng nhiệt PCR thời gian thực và được phân tích bằng phần mềm được cung cấp

5

CHƯƠNG 3 KẾT LUẬN

Nhiễm virus thể ẩn là tình trạng người bệnh nhiễm virus trong thời gian dài song chúng tồn tại tiềm tàng trong các tế bào, do đó cơ thể người bệnh không sản xuất kháng thể Vì thế mà xét nghiệm kháng thể hay kháng nguyên không thể phát hiện bệnh Lúc này chỉ xét nghiệm PCR HIV có khả năng kiểm tra được lượng vật chất di truyền rất nhỏ của virus trong máu mới phát hiện được bệnh

Dù có ý nghĩa lớn trong phát hiện bệnh sớm song xét nghiệm PCR HIV ít được ứng dụng trong khám chữa bệnh thông thường do đây là xét nghiệm khó, phức tạp nhiều quy trình và có chi phí lớn

6

TÀI LIỆU THAM KHẢO

https://dna-technology.com/sites/default/files/311-2_hiv_un_ivd_b_en_2021-07-05.pdf

hiv-aids/diagnosis/pcr.html

xet-nghiem-pcr-la-xet-nghiem-gi/

7