Hội chứng này sẽ làm giảm dần sức chống đỡ của cơ thể mỗi khi bị những loại kýsinh trùng, vi trùng hay là virus tấn công và lúc này cơ thể dễ mắc phải những bệnh nhiễmtrùng và một số loạ
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC BÁO CÁO TIỂU LUẬN PHƯƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN NHIỄM HIV – XÉT NGHIỆM PCR HIV Ngành học : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực : NHÓM Nhóm : THỨ CA CHIỀU Niên khóa : 2021 – 2025 TP.Thủ Đức, 10/2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC BÁO CÁO TIỂU LUẬN PHƯƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN NHIỄM HIV – XÉT NGHIỆM PCR HIV Hướng dẫn khoa học Sinh viên TS Huỳnh Văn Biết Đinh Thị Mỹ Huyền – 21126362 KS Trương Quang Toản Nguyễn Hồng Un Thy – 21126533 Niên khóa Đỗ Thị Thủy Tiên – 21126534 MỤC LỤC Danh sách từ viết tắt CHƯƠNG MỞ ĐẦU Đặt vấn đề .2 CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM PCR HIV 2.1.Thiết bị, dụng cụ 2.1.1 Máy PCR .3 2.1.2 Tủ an toàn sinh học cấp (BSC Cấp 2) .3 2.2 Ứng dụng kỹ thuật PCR phát HIV 2.3 Xét nghiệm PCR HIV .5 CHƯƠNG KẾT LUẬN TÀI LIỆU THAM KHẢO Danh sách từ viết tắt PCR Polymerase Chain Reaction HIV Human Immunodeficiency Virus BSC Biological Safety Cabinet CHƯƠNG MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Vi-rút gây suy giảm miễn dịch người hay HIV loại vi-rút hình thành nên bệnh kỷ gia tăng ngày chóng mặt nước phát triển Virus HIV xâm nhập vào thể người chủ yếu đường máu đường tình dục khơng an tồn Hội chứng làm giảm dần sức chống đỡ thể bị loại ký sinh trùng, vi trùng virus công lúc thể dễ mắc phải bệnh nhiễm trùng số loại bệnh ung thư khác Một người bệnh bị nhiễm HIV chưa có cách để loại bỏ chúng, có nghĩa bạn phải sống chung với đời Nếu khơng phát ngăn chặn kịp thời tốc độ lây lan cộng đồng khó kiểm sốt Việc nhận biết HIV sớm giúp cho việc điều trị phòng chống lây nhiễm HIV hiệu Có số loại xét nghiệm phát sàng lọc người nhiễm HIV, số PCR HIV Đây loại xét nghiệm dựa máu để phát vật liệu di truyền HIV, gọi RNA, dựa nguyên lý phản ứng khuếch đại, nhân lên nhiều lần vật liệu di truyền sinh vật để nhận dạng xác Vì thế, xét nghiệm cho phép chẩn đốn bệnh virus sớm nhiều số lượng virus có mặt máu so với xét nghiệm kháng thể hay kháng nguyên thông thường CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM PCR HIV 2.1.Thiết bị, dụng cụ Thiết bị: máy PCR, tủ an toàn sinh học cấp 2, máy ly tâm tốc độ cao, máy vortex, máy hút với bình bẫy, máy điều nhiệt Dụng cụ: ống tube ( thể tích 0.2, 0.5 1.5 mL), pipet (thể tích 2-20 L, 20-200 L, 200-1000 L), đầu típ pipet, hộp đựng đầu típ pipet, găng tay phẫu thuật không bột 2.1.1 Máy PCR Máy Realtime PCR, thiết bị dùng để kiểm soát diễn biến phản ứng PCR theo thời gian thực Thiết bị hoạt động dựa phát huỳnh quang tạo phân tử báo cáo, tích tụ sản phẩm PCR theo chu kỳ khuếch đại Thiết bị gồm thành phần phận điều khiển, phận luân nhiệt, nguồn điện Với máy Realtime PCR cịn có phận phát huỳnh quang Hình 2.1 Máy Realtime PCR 2.1.2 Tủ an toàn sinh học cấp (BSC Cấp 2) BSC Cấp loại tủ tạo để thực công việc phù hợp với mức độ an toàn sinh học cấp Tủ có khả bảo vệ người sử dụng bảo vệ mẫu vật thí nghiệm, tất khơng khí qua màng lọc HEPA BSC Cấp có loại A1, A2, B1 B2 Mỗi loại có kết cấu ứng dụng khác để phù hợp cho ứng dụng Chúng phân loại theo tỷ lệ phần trăm không khí thải ngồi so với phần khơng khí tuần hồn từ bầu khơng khí chung Hình 2.2 Tủ an toàn sinh học cấp 2.2 Ứng dụng kỹ thuật PCR phát HIV PCR từ viết tắt cụm từ Polymerase Chain Reaction, kỹ thuật phát minh vào năm 1985 nhà khoa học người Mỹ tên Kary Mullis Từ đoạn DNA chọn lọc nhân lên gấp hàng triệu lần hơn, nhằm tạo lượng lớn DNA dựa vào chu kì nhiệt độ Bằng kỹ thuật PCR, từ lượng khuôn DNA nhỏ người ta khuếch đại xác, trật tự lượng lên đến hàng triệu nhằm phục vụ cho trình khảo sát phản ứng Nguyên lý kỹ thuật PCR/ Real-time PCR dựa vào khuếch đại đặc hiệu enzyme Taq Polymerase sở bắt cặp xác primer vào DNA mẫu dNTP tự phát quang probe huỳnh quang tự phận ghi nhận tín hiệu ghi nhận tín hiệu phát từ probe Kỹ thuật real-time PCR bao gồm thành phần dNTP, DNA Polymerase, DNA mạch khuôn, cặp mồi dung dịch đệm Quá trình gồm ba giai đoạn: Giai đoạn biến tính, tách đoạn gen HIV thành hai chuỗi đơn Giai đoạn bắt cặp, đoạn nguyên liệu gắn vào chuỗi đơn để tạo nên mơ hình làm mẫu cho việc chép Giai đoạn kéo dài, cách sử dụng enzyme polymerase, đoạn nguyên liệu chép lại thành chuỗi đôi Các giai đoạn thực thông qua luân chuyển nhiệt độ chu kỳ Qua chu kỳ, tín hiệu huỳnh quang ghi nhận có gia tăng tương ứng với lượng DNA nhân lên theo cấp số lũy thừa 2.3 Xét nghiệm PCR HIV Xét nghiệm tải lượng virus HIV tìm kiếm RNA việc sử dụng huyết để đếm số lượng HIV Phương pháp triển khai dựa trình chép ngược RNA virus, sau khuếch đại PCR cDNA thu Hỗn hợp PCR chứa phân tử mang đầu dò chất khử chất xúc tác dành riêng cho mục tiêu Sau lai với trình tự mục tiêu, đầu dị kích hoạt Kết việc kích hoạt huỳnh quang tăng tỷ lệ thuận với khuếch đại trình tự mục tiêu Cường độ huỳnh quang đo chu kỳ phản ứng thu thập liệu máy quay vòng nhiệt PCR thời gian thực phân tích phần mềm cung cấp CHƯƠNG KẾT LUẬN Nhiễm virus thể ẩn tình trạng người bệnh nhiễm virus thời gian dài song chúng tồn tiềm tàng tế bào, thể người bệnh khơng sản xuất kháng thể Vì mà xét nghiệm kháng thể hay kháng nguyên phát bệnh Lúc xét nghiệm PCR HIV có khả kiểm tra lượng vật chất di truyền nhỏ virus máu phát bệnh Dù có ý nghĩa lớn phát bệnh sớm song xét nghiệm PCR HIV ứng dụng khám chữa bệnh thơng thường xét nghiệm khó, phức tạp nhiều quy trình có chi phí lớn TÀI LIỆU THAM KHẢO https://dna-technology.com/sites/default/files/311-2_hiv_un_ivd_b_en_2021-0705.pdf https://stanfordhealthcare.org/medical-conditions/sexual-and-reproductive-health/ hiv-aids/diagnosis/pcr.html https://www.vinmec.com/vi/tin-tuc/thong-tin-suc-khoe/te-bao-goc-cong-nghe-gen/ xet-nghiem-pcr-la-xet-nghiem-gi/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12270656/