Báo cáo thực hành thiết bị tuần 9,10

Tổng quan về các hợp chất polyphenol và một số polyphenol trong vỏ Măng cụt..32.2.1.. Đặc biệt, trong Măng cụt còn chứarất nhiều chất chống oxy hóa giúp giảm tốc độ lão hoá, căng mịn da

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC BÁO CÁO THỰC HÀNH THIẾT BỊ VÀ KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ SINH HỌC Ngành học : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chun ngành : CƠNG NGHỆ SINH HỌC Nhóm thực : NHĨM Niên khóa : 2021 – 2025 TP Thủ Đức, 11/2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC BÁO CÁO THỰC HÀNH THIẾT BỊ VÀ KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ SINH HỌC Hướng dẫn khoa học Sinh viên thực TS TRỊNH THỊ PHI LY NGUYỄN LAN ANH ThS NGUYỄN THỊ VÂN ANH NGUYỄN THỊ LAN ANH ĐỖ NGỌC BẢO CHÂN NGÔ NGỌC HẢI PHẠM THỊ MỸ HẠNH LÊ HOÀNG PHÚC TP Thủ Đức, 11/2023 MỤC LỤC Trang MỤC LỤC i DANH SÁCH CÁC BẢNG .iii DANH SÁCH CÁC HÌNH iv CHƯƠNG MỞ ĐẦU .1 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu .1 1.3 Nội dung thực .1 CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu Măng cụt vỏ Măng cụt 2.1.1 Giới thiệu chung Măng cụt 2.1.2 Thành phần hóa học vỏ Măng cụt 2.1.3 Ứng dụng vỏ Măng cụt 2.2 Tổng quan hợp chất polyphenol số polyphenol vỏ Măng cụt 2.2.1 Định nghĩa hợp chất polyphenol .3 2.2.2 Polyphenol vỏ Măng cụt 2.2.3 Tác dụng tốt polyphenol 2.3 Tổng quan quang phổ bước sóng nhìn thấy 2.4 Hệ thống quang phổ hấp thu phân tử UV – Vis CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 3.2 Vật liệu 3.2.1 Đối tượng nghiên cứu 3.2.2 Thiết bị dụng cụ 3.2.3 Hóa chất sử dụng nghiên cứu 3.3 Phương pháp nghiên cứu 3.4 Phương pháp xử lí số liệu .7 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ KẾT LUẬN 10 4.1 Kết hàm lượng polyphenol 10 4.2 Kết luận 11 TÀI LIỆU THAM KHẢO 12 DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 4.1 Độ hấp thu dịch chiết vỏ Măng cụt 715 nm .10 Bảng 4.2 Hàm lượng polyphenol tổng dịch chiết vỏ Măng cụt sau pha loãng 11 DANH SÁCH CÁC HÌNH Hình 2.1 Bước sóng (nanometers) Hình 2.2 Vùng sóng phổ phân tử UV - VIS Hình 3.1 Dịch chiết vỏ Măng cụt .8 Hình 3.2 Đường chuẩn gallic acid Hình 4.1 Đường chuẩn gallic acid 10 CHƯƠNG MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Q trình sản xuất tích lũy mức gốc tự thể ngun nhân dẫn đến lão hóa bệnh thối hóa bệnh đái tháo đường, ung thư, xơ vữa động mạch, bệnh tim mạch biến chứng nguy hiểm khác Ngoài ra, chất kháng oxy hóa tổng hợp sử dụng rộng rãi ngành công nghiệp thực phẩm butylated hydroxyanisol butylated hydroxytoluen Các hợp chất chứng minh có hại cho sức khỏe độc tính tiềm tàng tác nhân gây ung thư Do đó, ngày có nhiều mối quan tâm việc tìm kiếm hợp chất kháng oxy hóa có nguồn gốc tự nhiên nhóm polyphenol flavonoid, thành phần dinh dưỡng quan trọng thực vật có khả kháng oxy hóa cao, có mặt tất phận Vỏ Măng cụt chứa lượng lớn chất phytonutrients xanthone, polyphenol, quinones Những hoạt chất quan trọng giúp hỗ trợ tổng hợp DNA, chữa lành vết thương, miễn dịch truyền tín hiệu thần kinh Đặc biệt, Măng cụt cịn chứa nhiều chất chống oxy hóa giúp giảm tốc độ lão hoá, căng mịn da nhờ vào hàm lượng flavonoid polyphenol Măng cụt tương đối lớn, chiết xuất Măng cụt thường ứng dụng với mục đích làm đẹp Nó sử dụng trực tiếp làm nguyên liệu sản xuất sản phẩm mỹ phẩm 1.2 Mục tiêu nghiên cứu Đánh giá hàm lượng polyphenol mẫu xuất Măng cụt kỹ thuật quang phổ hấp thu phân tử UV - VIS 1.3 Nội dung thực Nội dung 1: ly trích hợp chất polyphenol vỏ Măng cụt Nội dung 2: xác định hàm lượng polyphenol tổng số phương pháp quang phổ hấp thu phân tử CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu Măng cụt vỏ Măng cụt 2.1.1 Giới thiệu chung Măng cụt Cây Măng cụt (Garcinia mangostana L.) loài nhiệt đới thuộc họ Bứa (Clusiaceae) Măng cụt trồng rộng rãi vùng Nam Bộ Việt Nam trồng số nước khác Philippin, Indonesia Malaysia Măng cụt loại lâu năm, cao trung bình – 12 m cao đến 20 - 25m Thân có vỏ màu nâu đen sậm, có nhựa màu vàng Lá Măng cụt dày, dai cứng, bóng, mọc đối, màu lục sẫm Mặt có màu sậm mặt dưới, hình thn dài 15 – 25 cm, rộng - 11cm, cuống dài – cm Quả có hình cầu trịn, đường kính khoảng – cm, chia làm phần vỏ thịt quả, phía có đài, phía đỉnh có đầu nhuỵ Mỗi có khối lượng trung bình 60 – 80 g Vỏ Măng cụt chiếm phần lớn khối lượng thành phần nghiên cứu nhiều nhờ chứa hợp chất có tính ứng dụng cao nhiều ngành công nghiệp công nghiệp dệt, mỹ phẩm, y học sinh học Vỏ Măng cụt (Pericarpium Garciniae mangostanae) lấy già chín, dùng tươi phơi khơ Bột vỏ Măng cụt có màu nâu, không mùi, vị chát Vỏ Măng cụt bao gồm nhiều tế bào mô cứng từ – tế bào riêng lẻ hay dính có hình dạng kích thước thay đổi, vách dày, ống trao đổi rõ Mảnh mơ mềm gồm tế bào hình đa giác, có chứa hạt tinh bột Hạt tinh bột hình cầu có kích thước – 10 µm, nằm riêng lẻ hay tụ lại thành đám Mảnh mạch gồm mạch xoắn mạch vạch Khối nhựa có màu vàng, vàng nâu, cam 2.1.2 Thành phần hóa học vỏ Măng cụt Vỏ Măng cụt có chứa từ 3,2% tanin (S Melia ctv, 2019) Măng cụt nguồn cung cấp xanthones dồi Đây loại hợp chất polyphenolic với hệ thống vòng thơm ba vịng đặc trưng, có hàm lượng 37,5 mg/g (S Melia ctv, 2019) Trong số khoảng 40 loại xanthone có vỏ quả, loại có giá trị α – mangostin chiếm 24,68% (Trang ctv, 2023) γ – mangostin chiếm 3,95% (Trang ctv, 2023) Chúng có tinh thể hình phiến nhỏ, màu vàng tươi, không vị, tan rượu, ether chất kiềm, không tan nước 2.1.3 Ứng dụng vỏ Măng cụt Ở Việt Nam, vỏ Măng cụt dùng để điều trị tiêu chảy, ngộ độc thức ăn vàng da Hiện nay, Bộ Y tế cho phép sử dụng hoạt chất xanthone chiết xuất từ vỏ Măng cụt vào sản xuất thuốc chữa bệnh tiêu chảy, bệnh lỵ 2.2 Tổng quan hợp chất polyphenol số polyphenol vỏ Măng cụt 2.2.1 Định nghĩa hợp chất polyphenol Polyphenol hay phenolic hợp chất tự nhiên tìm thấy chủ yếu trái cây, rau, ngũ cốc đồ uống Các hợp chất chất chuyển hóa thứ cấp thực vật, tham gia vào việc bảo vệ chống lại xạ cực tím xâm nhập mầm bệnh Ở số loại rau củ, chúng góp phần tạo vị đắng, vị chát Các nhà nghiên cứu khám phá phân tử chất chống oxy hóa tốt vơ hiệu hóa phản ứng khơng mong muốn loại oxygen/nitrogen tạo sản phẩm phụ trình trao đổi chất thể Các nghiên cứu dịch tễ học cho biết polyphenol cung cấp bảo vệ đáng kể chống lại phát triển số bệnh mãn tính như: bệnh tim mạch (CVD), ung thư, tiểu đường, nhiễm trùng, lão hóa, hen suyễn (Li ctv, 2014) Polyphenol nhóm hệ thống phenolic đặc trưng hai vịng phenyl nhiều nhóm hydroxyl (Rajeev ctv, 2019) Chúng đại diện cho nhóm lớn gồm 10.000 hợp chất khác có chứa nhiều nhóm hydroxyl (OH) gắn trực tiếp vào vòng benzen (Li ctv, 2014) Dựa số lượng vòng phenol thành phần liên kết vòng, polyphenol chia thành bốn loại: phenolic acids, flavonoids, stilbenes lignans (Pandey ctv, 2009) 2.2.2 Polyphenol vỏ Măng cụt Trong vỏ Măng cụt có chứa lượng lớn polyphenol có hàm lượng 195,05 mg GAE/g (Thắm ctv, 2023) Polyphenol vỏ măng cụt đa dạng, phong phú Với mục tiêu tách chiết polyphenol để ứng dụng làm phụ gia thực phẩm, nhóm hợp chất đáng ý xanthone với khả kháng khuẩn, chống oxi hóa mạnh mẽ có tiềm sử dụng làm chất bảo quản, anthocyanin với khả tạo màu tốt có tiềm sử dụng làm chất màu thực phẩm tannin với khả kết tủa protein, có tiềm sử dụng làm chất trợ lắng 2.2.3 Tác dụng tốt polyphenol Hầu hết polyphenol hoạt động chất chống oxy hóa thể, có nghĩa chúng chống lại tác hại môi trường tổn thương tia cực tím nhiễm Polyphenol chứng minh chất chống oxy hóa mạnh vơ hiệu hóa gốc tự cách cho electron nguyên tử hydro (Rice-Evans ctv, 1996) Nhóm 3-hydroxy flavonol coi quan trọng hoạt động chống oxy hóa Polyphenol ngăn chặn hình thành gốc tự do, làm giảm tốc độ oxy hóa cách ức chế hình thành vơ hiệu hóa lồi hoạt động tiền chất gốc tự Polyphenol đóng vai trị chất loại bỏ gốc tự trực tiếp phản ứng chuỗi peroxide hóa lipid (chất phá vỡ chuỗi) Những chất phá vỡ chuỗi cho electron cho gốc tự do, vơ hiệu hóa gốc thân chúng trở thành gốc ổn định (Guo ctv, 2009) Tiêu thụ polyphenol giúp hạn chế tỷ lệ mắc bệnh tim mạch vành (Renaud ctv, 1992) Polyphenol chất ức chế mạnh q trình oxy hóa LDL loại oxy hóa coi chế phát triển chứng xơ vữa động mạch Các chế khác mà polyphenol bảo vệ chống lại bệnh tim mạch tác dụng chống oxy hóa, chống tiểu cầu, chống viêm tăng HDL cải thiện chức nội mô (Aviram ctv, 2000) Tác dụng polyphenol dịng tế bào ung thư người thường có tác dụng bảo vệ làm giảm số lượng khối u phát triển chúng Những tác động quan sát thấy nhiều vị trí khác nhau, bao gồm miệng, dày, tá tràng, đại tràng, gan, phổi, tuyến vú da Nhiều polyphenol, chẳng hạn quercetin, catechin, isoflavone, lignan, flavanone, axit ellagic, polyphenol rượu vang đỏ, resveratrol curcumin thử nghiệm; tất chúng cho thấy tác dụng bảo vệ số mơ hình chế hoạt động chúng phát khác (Johnson ctv, 1994) Polyphenol ảnh hưởng đến đường huyết thông qua chế khác nhau, bao gồm ức chế hấp thụ glucose ruột hấp thu mơ ngoại biên Tác dụng hạ đường huyết anthocyanin diacetyl hóa liều lượng 10 mg/kg phần ăn quan sát thấy với maltose nguồn glucose, không thấy với sucrose glucose (Matsui ctv, 2002) Polyphenol có lợi việc cải thiện tác động bất lợi q trình lão hóa lên hệ thần kinh não Tầm quan trọng tối cao liên quan polyphenol thực phẩm việc bảo vệ não lão hóa khả hợp chất vượt qua hàng rào máu não (BBB), hàng rào kiểm sốt chặt chẽ dịng chất chuyển hóa chất dinh dưỡng thuốc vào não (Harikumar ctv, 2008) 2.3 Tổng quan quang phổ bước sóng nhìn thấy Quang phổ vạch tối sáng (trong quang phổ liên tục đồng dạng) phát xạ hấp thụ ánh sáng dải tần hẹp, so với tần số lân cận Quang phổ chứa vạch quang phổ gọi quang phổ vạch Quang phổ ánh sáng khả kiến phần quang phổ điện từ mà mắt người nhìn thấy Đơn giản hơn, dải bước sóng gọi ánh sáng khả kiến Thông thường, mắt người phát bước sóng từ 380 đến 700 nm Tất xạ điện từ ánh sáng, nhìn thấy phần nhỏ xạ – phần gọi ánh sáng khả kiến Các tế bào hình nón mắt đóng vai trị thu điều chỉnh bước sóng dải quang phổ hẹp Các phần khác quang phổ có bước sóng lớn nhỏ tràn đầy lượng so với hạn chế sinh học nhận thức Khi toàn quang phổ ánh sáng nhìn thấy truyền qua lăng kính, bước sóng tách thành màu cầu vồng màu bước sóng khác Màu tím có bước sóng ngắn nhất, khoảng 380 nm, màu đỏ có bước sóng dài nhất, khoảng 700 nm Hình 2.1 Bước sóng (nanometers) Nguồn: Internet 2.4 Hệ thống quang phổ hấp thu phân tử UV – Vis Quang phổ hấp thu phân tử UV - VIS phổ đám (phổ băng) có cực đại cực tiểu phổ nằm bước sóng xác định tùy thuộc vào cấu trúc loại liên kết phân tử hay nhóm nguyên tử Vùng sóng phổ phân tử UV - VIS từ 200 – 800 nm Hình 2.2 Vùng sóng phổ phân tử UV – VIS Nguồn: Internet CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu Thời gian thực nghiên cứu từ ngày 03/11/2023 đến ngày 17/11/2023 Địa điểm thực phòng chuẩn bị mẫu (RIBE 304) Viện nghiên cứu Công nghệ Sinh học Môi trường, Trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh 3.2 Vật liệu 3.2.1 Đối tượng nghiên cứu Bột vỏ Măng cụt phòng chuẩn bị mẫu (RIBE 304) Viện nghiên cứu Công nghệ Sinh học Môi trường, Trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh 3.2.2 Thiết bị dụng cụ Thiết bị: cân phân tích, hệ thống quang phổ hấp thụ phân tử, bể siêu âm Dụng cụ: bình định mức loại (10, 20, 50 mL), ống nghiệm, micro pipet loại (100 L 1000 L), đầu tip, cốc thủy tinh, pipet pasteur thủy tinh, phễu thủy tinh, giấy lọc, bình tia 3.2.3 Hóa chất sử dụng nghiên cứu Gallic acid, Sodium carbonate, Ethanol, Folin-ciocalteu, mẫu bột vỏ Măng cụt 3.3 Phương pháp nghiên cứu Định lượng hợp chất polyphenol kỹ thuật quang phổ hấp thu phân tử UV Vis 3.4 Phương pháp xử lí số liệu Chuẩn bị dịch chiết: cân 0,5g mẫu bột vỏ Măng cụt hịa với 30 mL dung mơi ethanol 50% (cas#64-17-5, Trung Quốc) với tỉ lệ nguyên liệu dung mơi 1:10, tiến hành ly trích có hỗ trợ sóng siêu âm lần 10 phút Mẫu dịch chiết lọc qua giấy lọc để thu lại dịch chiết Dịch chiết định mức đến thể tích 50 mL Hình 3.1 Dịch chiết vỏ Măng cụt Hàm lượng polyphenol tổng số phương pháp quang phổ hấp thu phân tử xác định dựa phản ứng với thuốc thử Folin-Ciocalteu Hút 0,1 mL dịch chiết thu từ trình trên, thêm 0,1 mL thuốc thử Folin-Ciocalteu (cas#1090010100, Đức) để yên phút Thêm 0,3 mL Na 2CO3 20% (cas#497-19-8, Trung Quốc) lắc định mức đến vạch mL nước cất Để yên 60 phút tiến hành đem đo mẫu bước sóng 715 nm Mẫu đối chứng thực quy trình thay dịch chiết nước cất Chất chuẩn sử dụng gallic acid (cas#149-91-7, Đức) với dãy nồng độ từ 50 - 300 mg/L Các mẫu chuẩn tiến hành tương tự quy trình Từ mối tương quan nồng độ gallic acid độ hấp thu đo bước sóng 715 nm xây dựng thành đồ thị chuẩn Hàm lượng polyphenol tổng số tính theo cơng thức: W= C( mg/L)× F ×V ( mL) m( g) Trong đó: W: hàm lượng polyphenol mẫu (mg/kg) C: nồng độ mẫu (mg/L) V: thể tích dịch chiết mẫu (mL) m: khối lượng mẫu (g) F: hệ số pha loãng (để đảm bảo mẫu nằm đường chuẩn, pha loãng hệ số hấp thu lớn so với đường chuẩn, cao điểm cao đường chuẩn, trường hợp khơng pha lỗng F=1) Hình 3.2 Đường chuẩn gallic acid CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ KẾT LUẬN 4.1 Kết hàm lượng polyphenol Thí nghiệm xác định hàm lượng polyphenol tổng số thực kĩ thuật quang phổ hấp thu phân tử dựa phản ứng màu đặc trưng với thuốc thử FolinCiocalteu Hình 4.1 Đường chuẩn gallic acid Kết Hình 4.1 cho thấy mối tương quan nồng độ độ hấp thu gallic acid Phương trình đường chuẩn đo bước sóng λ= 715 nm Phương trình hồi quy tuyến tính y = 0,0025x + 0,0092 với hệ số tương quan R = 0,9993 Trong đó: y độ hấp thu dung dịch chuẩn, x nồng độ gallic acid Bảng 4.1 Độ hấp thu dịch chiết vỏ Măng cụt 715 nm Nghiệm thức Lần lặp lại Nồng độ gốc 1,320 1,357 1,297 Pha loãng lần 0,773 0,757 0,781 Bảng 4.2 Hàm lượng polyphenol tổng dịch chiết vỏ Măng cụt sau pha loãng lần 10 Lần lặp lại Polyphenol tổng (mgGAE/kg) 61 104 59 824 61 744 Trung bình 60 890 ± 711 Từ kết Bảng 4.2 cho thấy vỏ Măng cụt có với hàm lượng polyphenol tổng số trong lần lặp lại 61104; 59824 61744 mgGAE/kg 4.2 Kết luận Hàm lượng polyphenol có vỏ Măng cụt khảo sát 60 890 ± 711 (mg GAE/ kg) 11 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Phạm, T P., Liêu, H M T., Lê, T H V., Huỳnh, N T (2023) Khảo sát cà đắng (Solanum incanum L.) Thu hái Đắk Lắk theo hướng tác dụng chống oxy hóa Tạp chí Y học Việt Nam, 526(1B) Đặng Gia Lệ, Lê Thị Gấm, Phạm Đoan Vi Huỳnh Ngọc Trung Dung (2020) Khảo sát hàm lượng polyphenol, flavonoid, hoạt tính kháng oxy hóa từ hoa ba lồi Sao nhái (Họ Cúc – Asteraceae) Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô 09: 259-269 Nguyễn Thị Quỳnh Hoa (2018) Nghiên cứu tách chiết số hợp chất polyphenol vỏ măng cụt (Garcinia mangostana L.) để ứng dụng làm phụ gia thực phẩm: Luận văn ThS Sinh học Đại học Bách khoa Hà Nội Võ, M T., Nguyễn Trần, X P (2023) Bào chế đánh giá hoạt tính sinh học cao khơ vỏ măng cụt (Garcinia mangostana L.) Việt Nam Tạp Chí Y Dược học Quân sự, 48(7), 5-14 Tài liệu tiếng nước Pandey, K B., and Rizvi, S I (2009) Plant polyphenols as dietary antioxidants in human health and disease Oxidative medicine and cellular longevity, 2(5), 270–278 Rajeev, K S., Ashok, K D., Arun, G., Ramesh, K S., Marco, F., Sara, M A., Moawiya, A H., Masnat, A H (2019) Natural Polyphenols: Chemical Classification, Definition of Classes, Subcategories, and Structures, Journal of AOAC INTERNATIONAL,102(5), 1397–1400 Li, A N., Li, S., Zhang, Y J., Xu, X R., Chen, Y M., & Li, H B (2014) Resources and biological activities of natural polyphenols Nutrients, 6(12), 6020-6047 Renaud, S., de Lorgeril, M (1992) Wine, alcohol, platelets, and the French paradox for coronary heart disease Lancet, 339: 1523–1526 Aviram, M., Dornfeld, L., Rosenblat, M., Volkova, N., Kaplan, M., Coleman, R., Hayek, T., Presser, D., Fuhrman, B (2000) Pomegranate juice consumption reduces oxidative stress, atherogenic modifications to LDL, and platelet aggregation: Studies in humans and in atherosclerotic apolipoprotein E-deficient mice Am J Clin Nutr, 71: 1062–1076 10 Johnson, IT., Williamson, G., Musk, SRR (1994) Anticarcinogenic factors in plant foods: A new class of nutrients? Nutr Res Rev, 7: 175–204 11 Matsui, T., Ebuchi, S., Kobayashi, M., Fukui, K., Sugita, K., Terahara, N., Matsumoto, K (2002) Anti-hyperglycemic effect of diacylated anthocyanin derived from Ipomoea batatas cultivar Ayamurasaki can be achieved through the alpha-glucosidase inhibitory action J Agric Food Chem, 50: 7244–7248 12 Harikumar, K B., Aggarwal, B B (2008) Resveratrol: a multitargeted agent for age-associated chronic diseases Cell Cycle, 7: 1020–1035 13 Tsao R (2010) Chemistry and biochemistry of dietary polyphenols Nutrients, 2(12), 1231–1246 12 14 Rice-Evans, C A., Miller, N J., Paganga, G (1996) Structure-antioxidant activity relationships of flavonoids and phenolic acids Free Radic Biol Med 20: 933–956 15 Guo, J J., Hsieh, H Y., Hu, C H (2009) Chain-breaking activity of carotenes in lipid peroxidation: A theoretical study J Phys Chem B, 113: 15699–15708 16 Melia, S., Novia, D., Juliyarsi, I., and Purwati, E (2019) The characteristics of the pericarp of garcinia mangostana (mangosteen) extract as natural antioxidants in rendang IOP Conference Series: Earth and Environmental Science, 1, 012028 17 National Aeronautics and Space Administration, Science Mission Directorate (2010) Visible Light Retrieved [insert date - e.g August 10, 2016], from NASA Science website: http://science.nasa.gov/ems/09 visibleligh 13