Khóa luận tốt nghiệp đại học nghiên cứu so sánh khả năng hấp thụ thuốc diclofenac natri của vật liệu cellulose tạo ra từ gluconacetobacter xylinus nuôi cấy trong một số môi trường

Trang 1 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI 2 KHOA: SINH - KTNN TRẦN MỸ LINH NGHIÊN CỨU SO SÁNH KHẢ NĂNG HẤP THỤ THUỐC DICLOFENAC NATRI CỦA VẬT LIỆU CELLULOSE TẠO RA TỪ GLUCONACETOBACTER XYLIN

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI 2

KHOA: SINH - KTNN

TRẦN MỸ LINH

NGHIÊN CỨU SO SÁNH KHẢ NĂNG HẤP THỤ THUỐC DICLOFENAC NATRI CỦA VẬT LIỆU CELLULOSE TẠO

RA TỪ GLUCONACETOBACTER XYLINUS NUÔI CẤY

TRONG MỘT SỐ MÔI TRƯỜNG

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC

Chuyên ngành: Sinh lý học người và động vật

Khóa luận tốt nghiệp đại học

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI 2

KHOA: SINH - KTNN

TRẦN MỸ LINH

NGHIÊN CỨU SO SÁNH KHẢ NĂNG HẤP THỤ THUỐC DICLOFENAC NATRI CỦA VẬT LIỆU CELLULOSE TẠO

RA TỪ GLUCONACETOBACTER XYLINUS NUÔI CẤY

TRONG MỘT SỐ MÔI TRƯỜNG

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC

Chuyên ngành: Sinh lý học người và động vật

Người hướng dẫn: Th.S Phạm Thị Kim Dung

Khóa luận tốt nghiệp đại học

Tiếp sau nữa tôi xin gửi lời cảm ơn đến các thầy cô làm việc tại khoa Sinh – KTNN nói chung và các thầy cô ở Viện Nghiên cứu Khoa học và Ứng dụng trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2 nói riêng đã nhiệt tình giúp đỡ cũng như tạo điều kiện giúp tôi hoàn thành khóa luận tốt nghiệp của mình

Sau cùng tôi xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè đã luôn động viên, giúp

đỡ tôi trong quá trình làm khóa luận

Xin chân thành cảm ơn!

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi dưới sự hướng dẫn của Th.S Phạm Thị Kim Dung Các thông số, số liệu trong bài đều được lấy từ thực nghiệm và được xử lý thống kê bằng các phần mềm Mọi thông tin trích dẫn được sử dụng trong bài khóa luận đều được nêu rõ nguồn gốc

MỤC LỤC

MỞ ĐẦU 1

1 Lý do chọn đề tài 1

2 Mục đích 1

3 Nội dung nghiên cứu 2

4 Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn 2

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

1.1 Đặc điểm của Gluconacetobacter Xylinus 3

1.1.1 Phân loại Gluconacetobacter xylinus 3

1.1.2 Hình thái của Gluconacetobacter Xylinus 3

1.1.3 Đặc điểm sinh lí sinh hóa của Gluconacetobacter 3

1.2 Cellulose vi khuẩn 3

1.2.1 Đặc điểm cấu trúc của cellulose vi khuẩn 3

Hình 1.1: Cấu trúc hóa học của cellulose vi khuẩn 4

1.2.2 Các tính chất đặc biệt 4

1.2.3 Quá trình tạo màng cellulose vi khuẩn từ vi khuẩn Gluconacetobacter 4

1.2.4 Ứng dụng của màng cellulose vi khuẩn 4

1.3 Lịch sử nghiên cứu 4

1.3.1 Trên thế giới 4

1.3.2 Tại Việt Nam 5

1.4 Thuốc Diclofenac Natri 5

1.4.1 Tính chất 6

1.4.2 Tác dụng dược lí và cơ chế tác dụng 6

1.4.3 Chỉ định 6

1.4.4 Chống chỉ định 6

1.4.5 Tác dụng không mong muốn của thuốc 6

CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 8

2.1 Nguyên vật liệu dùng trong nghiên cứu 8

Khóa luận tốt nghiệp đại học

2.1.1 Chủng vi sinh vật 8

2.1.2 Vật liệu nghiên cứu 8

2.1.3 Thiết bị và dụng cụ 8

2.2 Phương pháp nghiên cứu 9

2.2.1 Bố trí thí nghiệm 9

2.2.2 Phương pháp nghiên cứu 9

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 13

3.1 Kết quả tạo màng cellulose từ vi khuẩn Gluconacetobacter Xylinus 13

3.1.1 Kết quả tạo chủng vi khuẩn Gluconacetobacter từ dịch trà 13

3.1.2 Kết quả tạo màng cellulose vi khuẩn từ 3 môi trường 13

3.2 Kết quả thu màng thô từ 3 môi trường 14

3.3 Kết quả xử lý màng trước khi hấp thụ 14

3.4 Kết quả quét phổ hấp thụ thuốc diclofenac 15

3.5 Kết quả dựng đường chuẩn thuốc diclofenac 16

3.6 Kết quả khảo sát khả năng hấp thụ thuốc của màng 17

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 23

I KẾT LUẬN 23

II KIẾN NGHỊ 23

TÀI LIỆU THAM KHẢO 24

* Tài liệu nước ngoài 25

Khóa luận tốt nghiệp đại học

DANH MỤC HÌNH

Hình 1.1 Cấu trúc hóa học của cellulose vi khuẩn 4

Hình 1.2 Công thức hóa học 5

Hình 3.1 Dịch giống lên men sau 7 -10 ngày 13

Hình 3.2 Màng cellulose vi khuẩn 14

Hình 3.5 Xử lý màng 15

Hình 3.6 Phổ hấp thụ của thuốc 16

Hình 3.7 Phương trình đường chuẩn của diclofenac 16

Hình 3.8 Đưa màng vào hấp thụ 17

Hình 3.9 Thu mẫu đo OD sau thời gian hấp thụ 17

Hình 3.10 Biểu đồ so sánh khả năng hấp thụ thuốc của màng không ép nước trong 3 môi trường 21

Hình 3.11 Biểu đồ so sánh hiệu suất hấp thụ của màng ép nước trong 3 môi trường 21

Hình 3.12 Biểu đồ so sánh hiệu suất hấp thụ của màng có độ dày 0,5cm ở 3 môi trường khác nhau 22

Hình 3.13 Biểu đồ so sánh hiệu suất hấp thụ thuốc của màng 1cm trong 3 môi trường khác nhau 22

DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Danh sách vật liệu sử dụng trong nghiên cứu 8

Bảng 2.2 Danh sách các thiết bị dùng trong nghiên cứu 8

Bảng 2.3 Thành phần của môi trường lên men tạo màng 9

Bảng 3.1 Nồng độ diclofenac và giá trị OD tương ứng (n = 3) 16

Bảng 3.2 Giá trị OD hấp thụ thuốc của màng 18

Bảng 3.3 Lượng thuốc hấp thụ vào màng sau thời gian 2 giờ 19

Bảng 3.4 Hiệu suất thuốc hấp thụ vào các loại màng trong 2 giờ 20

Khóa luận tốt nghiệp đại học

MỞ ĐẦU

1 Lý do chọn đề tài

Thấp khớp là một bệnh lý mà rất nhiều người dân trong các quốc gia trên thế giới mắc phải và Việt Nam của chúng ta cũng không ngoại lệ Tỉ lệ người Việt Nam mắc bệnh cao chiếm khoảng 20% số người mắc bệnh trên thế giới ở bất cứ độ tuổi và nghề nghiệp nào

Diclofenac – dạng thuốc chống viêm không steroid dùng chủ yếu dưới dạng muối Natri, dẫn chất của acid phenylacetic có thể chống viêm, giảm sốt và giảm đau.[2] Diclofenac ức chế mạnh hoạt tính của COX (cyclooxygenase), do đó làm giảm sự tạo thành các chất trung gian của quá trình tiêu viêm như: prostaglandin, prostacyclin và thromboxan[2]

Cũng như một số loại thuốc chống viêm không steroid hiện nay, diclofenac natri

có ảnh hưởng không tốt đến đường tiêu hóa vì chúng giảm khả năng tổng hợp prostaglandin dẫn đến tạo mucin có thể gây một vài chứng bệnh về thận như viêm thận kẽ hay viêm cầu thận ngoài ra có thể gây hoại tử nhú và một số bệnh liên quan khác[2]

Cellulose vi khuẩn được tạo thành từ các chuỗi không phân nhánh, gồm nhiều sợi siêu nhỏ kết hợp với nhau tạo thành bó có bản chất là hemicellulose được gọi là chuỗi polimer β – 1,4 glucopyranose khác cellulose thực vật về cấu trúc đại thể Cellulose vi khuẩn có các tính chất như độ bền cao, bị phân hủy sinh học, đàn hồi tốt, không độc, đặc biệt là có khả năng ngăn cản vi khuẩn tốt Vì có những đặc tính

ưu việt như vậy mà cellulose vi khuẩn được ứng dụng nhiều trong các ngành công nghiệp đời sống như thực phẩm, công nghiệp, mĩ phẩm và đặc biệt là y học[7,12,21] Với mục đích nhằm khảo sát các đặc tính của vật liệu cellulose trước khi cho hấp thụ và sau khi cho hấp thụ thuốc Diclofenac natri ở các môi trường khác nhau và so sánh khả năng hấp thụ thuốc Diclofenac natri của vật liệu cellulose được tạo ra từ

Gluconacetobacter xylinus trong một số môi trường nuôi cấy chúng tôi thực hiện đề

tài: “ Nghiên cứu so sánh khả năng hấp thụ thuốc Diclofenac Natri của vật liệu

Cellulose tạo ra từ Gluconacetobacter xylinus nuôi cấy trong một số môi trường”

- So sánh sự hấp thụ thuốc thuốc Diclofenac Natri từ 3 môi trường khác nhau: môi trường chuẩn,môi trường nước dừa, môi trường nước vo gạo từ đó tìm ra môi trường nào có khả năng hấp thụ được nhiều hơn

3 Nội dung nghiên cứu

- Chế tạo màng cellulose vi khuẩn từ Gluconacetobacter Xylinus được nuôi dưỡng

và lên men trong 3 môi trường: môi trường chuẩn, môi trường nước dừa và môi trường nước vo gạo

- Tiến hành hấp thụ thuốc Diclofenac Natri vào màng cellulose vi khuẩn trong các khoảng thời gian cố định,xác định được màng đã hấp thụ được bao một lượng thuốc

là bao nhiêu và hiệu suất hấp thu của màng ở các môi trường đó là bao nhiêu

- So sánh lượng thuốc được màng hấp thụ và hiệu suất mà màng hấp thụ được ở cả

- Tăng nhận thức về vi khuẩn Gluconacetobacter Xylinus trong việc tạo màng

cellulose và từ đó tìm ra môi trường có khả năng hấp thu thuốc tốt hơn

- Ứng dụng kiến thức về Gluconacetobacter Xylinus để tạo màng cellulose vi khuẩn

ứng dụng vào trong các nghiên cứu để khắc phục điểm hạn chế của một số loại thuốc hiện nay

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Đặc điểm của Gluconacetobacter Xylinus

1.1.1 Phân loại Gluconacetobacter xylinus

Tên: Gluconacetobacter Xylinus

Chi: Gluconacetobacter

Họ: Acetobacteraceaea

1.1.2 Hình thái của Gluconacetobacter Xylinus

Gluconacetobacter là chủng vi khuẩn không thể di chuyển có cấu tạo tế bào

dạng hình que, thường đứng riêng lẻ hoặc có đôi lúc thành chuỗi, có tế bào dạng thẳng hoặc cong, kích thước khoảng 2 µm, không sinh bào tử Chúng là vi khuẩn gram âm hóa dị dưỡng và hiếu khí.Khi nồng độ acid vượt quá giới hạn thì vi khuẩn

sẽ bị ức chế hoạt động [7]

Khi được nuôi cấy trong môi trường lỏng thì vi khuẩn Gluconacetobacter hình thành một lớp màng phía trên bề mặt môi trường Còn nếu nuôi ở môi trường lắc thì

sẽ tạo thành các hạt nhỏ kích thước không đồng đều và phân tán khắp mọi nơi [7]

Gluconacetobacter xylinus có thể sản xuất cellulose khi được phát triển trong

điều kiện hiếu khí Cellulose do sinh vật này sản xuất rất tinh khiết và có tiềm năng

sử dụng trong ngành y sinh

1.1.3 Đặc điểm sinh lí sinh hóa của Gluconacetobacter Xylinus

Ngưỡng nhiệt thuận lợi cho sự phát triển của Gluconacetobacter từ 25 -35 độ C

Có khả năng chịu được pH ở nồng độ thấp [9]

1.2 Cellulose vi khuẩn

1.2.1 Đặc điểm cấu trúc của cellulose vi khuẩn

A.J.Brown đã trình bày sự tổng hợp cellulose của vi khuẩn Gluconacetobacter

vào năm 1886 Nhưng cellulose vi khuẩn thật sự được quan tâm và được nghiên cứu nhiều là vào những năm đầu của thế kỉ XX [17]

Màng cellulose vi khuẩn có thể được tạo ra bởi một số chi vi khuẩn phổ biến:

Khóa luận tốt nghiệp đại học

Hình 1.1 Cấu trúc hóa học của cellulose vi khuẩn

1.2.2 Các tính chất đặc biệt

- Màng cellulose có độ tinh sạch cao hơn các màng khác có khả năng phục hồi và tái sinh

- Có độ bền cơ học cao, trọng lượng thấp, lực căng tốt và kích thước màng ổn định

- Khả năng giữ nước tốt hơn các màng khác, độ ẩm cao

1.2.3 Quá trình tạo màng cellulose vi khuẩn từ vi khuẩn Gluconacetobacter

Vi khuẩn Gluconacetobacter hấp thụ chất dinh dưỡng từ môi trường bên ngoài

vào bên trong cơ thể để trao đổi chất Điều này chỉ xảy ra trong môi trường nhiều chất dinh dưỡng như carbonhydrate, các loại vitamin như B1, B12, B2, và các chất kích thích sinh trưởng Một phần tổng hợp cellulose thải ra môi trường bên ngoài tạo thành màng [7]

Gluconacetobacter Xylinus sẽ thực hiện trao đổi chất bằng việc hấp thụ đường và

các acid béo trong môi trường lỏng để tạo thành tiền chất tiết ra ngoài nhờ hệ thống

lỗ nằm ở trên màng tế bào cùng với một enzyme

1.2.4 Ứng dụng của màng cellulose vi khuẩn

Màng cellulose vi khuẩn được ứng dụng nhiều trong các lĩnh vực của cuộc sống

và đặc biệt là y học khi màng cellulose vi khuẩn có thể dùng để che phủ vết thương, chế tạo màng trị bỏng vào năm 2012 có tẩm dung dịch Becberin clorid 0,1%, không gây đau, dị ứng hay kích ứng da.[1,7,11 - 13,15 - 17,21- 23]

1.3 Lịch sử nghiên cứu

1.3.1 Trên thế giới

Công trình nghiên cứu tạo màng cellulose vi khuẩn được tổng hợp từ

Gluconacetobacter Xylinus được quan tâm đến từ khá sớm trên thế giới Tuy nhiên

phải đến thế kỉ thứ XX thì vấn đề này mới được quan tâm một cách rõ nét hơn nhờ vào các công trình nghiên cứu nổi trội ở thời điểm đó Một trong những công trình

Khóa luận tốt nghiệp đại học

nghiên cứu đó không thể không kể đến công trình nghiên cứu khả năng tổng hợp

cellulose của vi khuẩn Gluconacetobacter Xylinus của Hestrin et al vào năm 1954

Đây được coi là viên gạch đầu tiên đặt nền móng cho những nghiên cứu sau này về

sự lên men tạo màng của vi khuẩn Gluconacetobacter Xylinus [26]

Tiếp theo công trình nghiên cứu của Hestrin vào năm 1957, Next và Colvin đã đưa ra được minh chứng cho việc trong môi trường có ATP và đường thì

Gluconacetobacter Xylinus có thể tự tổng hợp được Ngoài ra việc nghiên cứu sử

dụng màng để kiểm soát in vitro của thuốc Becberine được Huang et al nghiên cứu

và cho ra kết quả rằng thuốc đã được giải phóng chậm hơn, thí nghiệm này của ông còn được thực hiện ở trên dạ dày và ruôt cũng cho kết quả tương tự [3]

1.3.2 Tại Việt Nam

Việc nghiên cứu và ứng dụng màng cellulose trong các nghành công nghiệp, y tế

ở Việt Nam hiện nay vẫn còn khá mới lạ và mới thu hút được sự quan tâm của các nhà nghiên cứu trong vài năm trở lại đây Các nghiên và đề tài này vẫn còn khá ít chủ yếu là nghiên cứu dừng lại ở việc tạo màng trị bỏng, hay liên quan đến ngành thực phẩm.[7][11]

1.4 Thuốc Diclofenac Natri

Diclofanac là một dẫn xuất của acid 2 – amino benzen acetic, có sinh khả dụng thấp do kém tan Vì vậy, dạng được dùng thường là muối của nó có độ tan lớn hơn,

ổn định hơn như muối: Na+, K+, diethylamin, N- ( 2- hydroxy ethyl) pyrrolidin Trong đó muối Natri Diclofenac được sử dụng nhiều hơn cả [2]

Hình 1.2 Công thức hóa học

- Công thức phân tử: C14H10Cl2NNaO2

- Loại chống viêm không steroid

- Tồn tại ở nhiều loại khác nhau như viên nén, thuốc tiêm, thuốc đạn, gel bôi, [2]

Khóa luận tốt nghiệp đại học

Diclofenac gây hại cho đường tiêu hóa, ức chế sự tổng hợp prostaglandin do đó

có thể gây nên những bệnh liên quan đến thận như viêm thận, thận hư hay một số căn bệnh khác như hoại tử nhú, suy tim thận [2]

Diclofenac hấp thụ qua đường tiêu hóa và hấp thụ nhanh vào lúc đói.Sau 2 giờ khi uống nồng độ đạt tối đa ở huyết tương, sau 4-6 giờ nồng độ trong bao hoạt dịch đạt mức cao nhất Tác dụng của thuốc xuất hiện sau tiêm bắp từ 20- 30 phút, sau khi cho thuốc vào trực tràng từ 30-60 phút, sau khi uống từ 60-120 phút [2][4]

- Viêm loét dạ dày

- Bệnh nhân bị hen suyễn, co thắt phế quản, chảy máu, bệnh tim,ứ máu, suy gan suy thận và những bệnh nhân mẫn cảm với các thành phần khác như aspirin hay các thuốc chống viên không steroid khác

- Người đang dùng thuốc chống đông Coumarin [2], [4]

1.4.5 Tác dụng không mong muốn của thuốc

- Tác dụng phụ thường gặp:

+ Đau nhức đầu, trong người cảm giác bồn chồn khó chịu

Khóa luận tốt nghiệp đại học

+ Đau bụng trên, mất cảm giác muốn ăn, tiêu chảy, muốn nôn và nôn, khó tiêu, đầy bụng,

+ Tăng các transaminase ở gan

+ Dị ứng toàn thân, phù toàn thân,

+ Viêm màng não vô khuẩn

+ Giảm số lượng bạch cầu, giảm số lượng bạch cầu trung tính, giảm số lượng tiểu cầu, , tăng số lượng bạch cầu ái toan,…

+ Rối loạn các chức năng của gan

+ Suy giảm một số chức năng của thận [4]

Khóa luận tốt nghiệp đại học

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Nguyên vật liệu dùng trong nghiên cứu

2.1.1 Chủng vi sinh vật

Vi khuẩn được tạo ra từ lên men dịch trà xanh nuôi cấy tại phòng thí nghiệm của viện Nghiên cứu Khoa học và Ứng dụng, Trường ĐHSP Hà Nội 2

2.1.2 Vật liệu nghiên cứu

Bảng 2.1 Danh sách vật liệu sử dụng trong nghiên cứu

1 Thuốc Diclofenac Trung Quốc

2 Acid Acetic Việt Nam

3 D - Glucose Trung Quốc

4 Amoni sulfat Trung Quốc

5 Disodium photphate Trung Quốc

6 Acid Citric Trung Quốc

7 Cao nấm men Mỹ

8 Peptone European Union

9 Natri hidroxit Việt Nam

10 Nước cất 2 lần Viện NDKH&ƯD

11 Methanol Trung Quốc

12 Nước dừa già Viện NCKH&ƯD

13 Nước vo gạo Viện NCKH&ƯD

2.1.3 Thiết bị và dụng cụ

Bảng 2.2 Danh sách các thiết bị dùng trong nghiên cứu

1 Nồi hấp khử trùng HV- 110/HIRAIAMA Nhật Bản

2 Máy đo quang phổ UV – Vis 2450 Shimardu – Nhật Bản

3 Cân phân tích Sartorius – Thụy Sỹ

4 Buồng cấy vô trùng Haraeus

5 Tủ sấy, tủ ấm Binder – Đức

6 Khuấy từ gia nhiệt IKA – Đức

Dụng cụ nghiên cứu: Bình định mức, pipet, micropipet, erlen, thiết bị lên men tạo

màng kích thước 1,5cmx0,5cm và 1,5cmx1cm, buồng nuôi cấy, bình tam giác, ống nghiệm, becher,…

Khóa luận tốt nghiệp đại học

2.2 Phương pháp nghiên cứu

2.2.1 Bố trí thí nghiệm

- Thí nghiệm 1: Tạo màng cellulose từ ba môi trường: môi trường chuẩn, môi trường nước dừa và môi trường nước gạo

- Thí nghiệm 2: Xử lý màng và kiểm tra độ sạch của màng

- Thí nghiệm 3: Tính toán xác định phổ hấp thụ của thuốc Diclofenac

- Thí nghiệm 4: Dựng đường chuẩn thuốc Diclofenac

- Thí nghiệm 5: Cho màng nạp thuốc trong 2 giờ

- Thí nghiệm 6: So sánh khả năng hấp thụ thuốc ở 3 loại màng

2.2.2 Phương pháp nghiên cứu

2.2.2.1 Chế tạo hệ mạng lưới cellulose vi khuẩn

Bước 1: Chuẩn bị môi trường [5,6,8,13,20]

Bảng 2.3 Thành phần của môi trường lên men tạo màng

Bước 2: Hấp khử trùng ở nhiệt độ 115⁰C trong 15 phút

Bước 3: Khử trùng môi trường bằng tia UV trong 15 phút

Bước 4: Cho thêm vào môi trường 10% dịch giống, lắc đều tay

Khóa luận tốt nghiệp đại học

Bước 5: Chuyển dịch sang dụng cụ nuôi cấy, bịt kín miệng bằng gạc đã được khử

trùng, đặt trong nơi tĩnh khoảng 7 – 14 ngày trong nhiệt độ 28⁰C

Bước 6: Thu hoạch màng, xử lý màng

2.2.2.2 Xử lý màng trước khi hấp thụ và đánh giá độ sạch của màng

Mục đích:Loại bỏ các chất bẩn, độc hại có trong môi trường nuôi cấy

Phương pháp: Vi khuẩn lên men tạo màng trên bề mặt môi trường nuôi cấy + Để giải phóng các độc tố và phá vỡ tế bào vi khuẩn đem màng đi hấp trong NaOH 3% trong thời gian 15 phút

+ Vớt màng đã ngâm NaOH đặt dưới vòi nước chảy đến khi màng trắng trong Thử quỳ tìm đến khi đạt trung tính ta thu được màng sạch [13,6]

2.2.2.2.2 Đánh giá độ sạch của màng

Mục đích: Đảm bảo có thể loại bỏ vi khuẩn có hại

* Tìm sự hiện diện của protein trong màng tinh chế

Nguyên tắc: Xác định lượng protein còn lại trong màng bằng cách tạo kết tủa Tiến hành: Cắt nhỏ màng sạch bỏ vào 50ml nước cất và rung trong máy rung siêu âm 10 phút Acid triclor acetic 1% sẽ phát hiện sự có mặt của protein trong dịch chiết Mẫu dương ở đây là pepton còn mẫu âm là nước cất 2 lần Phản ứng dương sẽ cho kết tủa đục So sánh với mẫu âm không chứa protein [24,11]

Màng cellulose vi khuẩn đã được làm sạch dùng để tạo màng hấp thụ thuốc phải đạt được những tính chất:

+ Mềm, dẻo, áp sát vào da và có độ che phủ tốt

+ Có khả năng hút nước và dịch mô, độ ẩm thích hợp [18]

2.2.2.3 Tìm phổ hấp thụ của thuốc diclofenac

Nguyên lí: Để tìm bước sóng mà thuốc diclofenac natri hấp thụ tối đa ta dùng máy đo UV – 2450

Thực hiện: Cân 0,025g thuốc diclofenac rồi pha trong 90ml dung dịch đệm Methanol Methanol chính là dung dịch mẫu trắng dùng để hòa tan thuốc Giới hạn bước sóng ở khoảng 200 – 800nm, tiến hành đo 3 lần để có kết quả có độ tin cậy

Khóa luận tốt nghiệp đại học