Khóa luận tốt nghiệp đại học nghiên cứu so sánh khả năng giải phóng thuốc của vật liệu cellulose nạp diclofenac natri tạo ra từ gluconacetobacter xylinus trong một số môi trường nuôi cấy

Trang 1 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI 2 KHOA SINH – KTNN --- NGUYỄN THỊ PHƯƠNG CHI NGHIÊN CỨU SO SÁNH KHẢ NĂNG GIẢI PHÓNG THUỐC CỦA VẬT LIỆU CELLULOSE NẠP DICLOFENAC NATRI TẠO RA TỪ GLUC

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI 2

KHOA SINH – KTNN -

NGUYỄN THỊ PHƯƠNG CHI

NGHIÊN CỨU SO SÁNH KHẢ NĂNG

GIẢI PHÓNG THUỐC CỦA VẬT LIỆU

CELLULOSE NẠP DICLOFENAC NATRI TẠO RA

TỪ GLUCONACETOBACTER XYLINUS TRONG

MỘT SỐ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY

KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC

Chuyên ngành: Sinh lý học người và động vật

HÀ NỘI, 5/ 2019

Khóa luận tốt nghiệp đại học

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI 2

KHOA SINH – KTNN -

NGUYỄN THỊ PHƯƠNG CHI

NGHIÊN CỨU SO SÁNH KHẢ NĂNG

GIẢI PHÓNG THUỐC CỦA VẬT LIỆU

CELLULOSE NẠP DICLOFENAC NATRI TẠO RA

TỪ GLUCONACETOBACTER XYLINUS TRONG

MỘT SỐ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY

KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC

Chuyên ngành: Sinh lý học người và động vật

Người hướng dẫn khoa học ThS NGÔ THỊ HẢI YẾN

HÀ NỘI, 5/ 2019

Khóa luận tốt nghiệp đại học

Tôi xin gửi lời cảm ơn đến các thầy cô trong Viện Nghiên cứu Khoa học và Ứng dụng của Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2 đã tạo điều kiện, truyền đạt kiến thức quý báu giúp tôi hoàn thành khóa luận

Tôi xin cảm ơn Ban chủ nhiệm khoa Sinh – KTNN, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2 Đặc biệt, xin cảm ơn gia đình và bạn bè đã quan tâm, giúp đỡ trong suốt quá trình học tập và hoàn thành khóa luận Do bước đầu làm quen với công việc nghiên cứu khoa học nên không thể tránh những sai sót, rất mong nhận được sự góp ý của quý thầy cô để khóa luận hoàn chỉnh hơn

Một lần nữa, tôi xin trân trọng cảm ơn!

Hà Nội, ngày 20/05/2019

Sinh viên

Nguyễn Thị Phương Chi

Khóa luận tốt nghiệp đại học

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan những điều viết trong khóa luận “Nghiên cứu so sánh khả năng giải phóng thuốc của vật liệu cellulose nạp Diclofenac natri tạo ra

từ Gluconacetobacter xylinus trong một số môi trường nuôi cấy”là kết quả

nghiên cứu của cá nhân, được hoàn thành tại “Viện Nghiên cứu Khoa học và Ứng dụng trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2”, dưới sự hướng dẫn trực tiếp của ThS Ngô Thị Hải Yến Các số liệu và kết quả nghiên cứu trong khóa luận

là trung thực, khách quan và không trùng lặp với bất kì khóa luận nào Trong

đó có tham khảo một số tài liệu của các tác giả nhằm bổ sung cho các số liệu trong khóa luận của mình

Nếu sai, tôi xin chịu trách nhiệm hoàn toàn trước hội đồng bảo vệ

Hà Nội, ngày 20/05/2019

Sinh viên

Nguyễn Thị Phương Chi

Khóa luận tốt nghiệp đại học

6 UV-vis Ultraviolet visible

Khóa luận tốt nghiệp đại học

MỤC LỤC

MỞ ĐẦU 1

1 Lý do chọn đề tài 1

2 Mục đích nghiên cứu 2

3 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu 2

4 Nội dung nghiên cứu 2

5 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn 2

NỘI DUNG 3

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

1.1 Cellulose vi khuẩn (BC) 3

1.1.1 Vị trí phân loại của vi khuẩn G xylinus 3

1.1.2 Đặc điểm sinh lý 3

1.1.3 Đặc điểm nuôi cấy 3

1.1.4 Tính chất của màng BC 5

1.2 Thuốc Diclofenac natri 6

1.2.2 Công thức 6

1.2.3 Tác dụng dược lý và cơ chế tác dụng 6

1.2.4 Dược động học 7

1.2.5 Chỉ định 7

1.2.6 Tác dụng phụ 8

1.3 Tổng quan tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước 9

1.3.1 Tình hình ngiên cứu trên thế giới 9

1.3.2 Tình hình nghiên cứu ở Việt Nam 9

CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 10

2.1 Đối tượng nghiên cứu 10

2.2 Vật liệu nghiên cứu 10

2.2.1 Chủng vi khuẩn 10

2.2.2 Nguyên liệu và hóa chất 10

Khóa luận tốt nghiệp đại học

2.2.3 Các thiết bị 11

2.3 Nội dung nghiên cứu 11

2.4 Phương pháp nghiên cứu 11

2.4.1 Bố trí thí nghiệm 11

2.4.2 Phương pháp chế tạo màng BC 12

2.4.3 Đánh giá độ tinh khiết của màng BC 13

2.4.5 Xác định lượng thuốc được hấp thụ vào vật liệu BC 18

2.4.6 Môi trường pH dùng để xác định lượng thuốc giải phóng 18

2.4.8 Xử lý thống kê 20

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 21

3.1 Tạo màng BC lên men từ 3 loại môi trường (MT chuẩn, MT gạo, MT dừa) 21

3.2 Hấp thụ thuốc Diclofenac natri 22

3.3 Xác định lượng thuốc giải phóng ra khỏi màng BC 23

3.3.1 Xác định lượng thuốc Diclofenac natri giải phóng từ màng BC lên men từ môi trường chuẩn 25

3.3.2 Xác định lượng thuốc Diclofenac natri giải phóng từ màng BC lên men từ môi trường dừa 32

3.4 So sánh khả năng giải phóng thuốc Diclofenac natri của màng BC lên men từ 3 loại môi trường khác nhau tại môi trường có pH=6,8 36

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 40

1 Kết luận 40

2 Kiến nghị 40

TÀI LIỆU THAM KHẢO 41

Khóa luận tốt nghiệp đại học

DANH MỤC BẢNG

Bảng 1.1: Thành phần dinh dưỡng của nước vo gạo 4 Bảng 1.2: Thành phần dinh dưỡng của nước dừa già 4 Bảng 2.1: Thành phần trong trong 3 loại môi trường nuôi cấy vi khuẩn 12 Bảng 2.2: Giá trị OD của dung dịch diclofenac natri ở các nồng độ khác

chuẩn (Màng BC không ép nước) 25

Bảng 3.3: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng của màng BC tạo ra từ môi trường

chuẩn (Màng BC ép nước 50%) 26

Bảng 3.4: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng của màng BC tạo ra từ môi trường

gạo (Màng BC không ép nước) 29

Bảng 3.5: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng của màng BC tạo ra từ môi trường

gạo (Màng BC ép nước 50%) 30

Bảng 3.6: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng của màng BC tạo ra từ môi trường

dừa (Màng BC không ép nước) 33

Bảng 3.7: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng của màng BC tạo ra từ môi trường

dừa (Màng BC ép nước 50%) 34

Bảng 3.8: Khả năng giải phóng thuốc của màng BC (không ép nước) với

độ dày khác nhau trong 24 giờ 37

Bảng 3.9: Khả năng giải phóng thuốc của màng BC (ép nước 50%) với độ

dày khác nhau trong 24 giờ 38

Khóa luận tốt nghiệp đại học

DANH MỤC HÌNH

Hình 2.1: Thuốc Diclofenac natri dạng tinh khiết 10

Hình 2.2: Phương trình đường chuẩn của thuốc Diclofenac natri tại bước sóng 276nm 15

Hình 2.4: Phương trình đường chuẩn của thuốc Diclofenac natri tại bước sóng 281nm 17

Hình 3.1: Nuôi cấy màng BC trong 3 loại môi trường 21

Hình 3.2: Màng BC thu được sau quá trình nuôi cấy 22

Hình 3.3: Màng BC thu được sau quá trình hấp thụ thuốc 23

Hình 3.4: Màng được cho vào máy giải phóng 24

Hình 3.5: Mẫu được rút ra để đo quang phổ 24

Hình 3.6: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng của màng BC tạo ra từ môi trường chuẩn (Màng BC không ép nước) 27

Hình 3.7: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng của màng BC tạo ra từ môi trường chuẩn (Màng BC ép nước 50%) 27

Hình 3.8: Khả năng giải phóng thuốc của màng BC tạo ra từ MT chuẩn trong các môi trường có pH khác nhau ở 24h 28

Hình 3.9 Tỉ lệ giải phóng thuốc tại các nồng độ pH khác nhau trong các thời điểm khác nhau đối với màng gạo chưa ép nước 31

Hình 3.10 Tỉ lệ giải phóng thuốc tại các nồng độ pH khác nhau trong các thời điểm khác nhau đối với màng gạo ép 50% nước 31

Hình 3.11: Khả năng giải phóng thuốc của màng BC tạo ra từ MT gạo trong các môi trường có pH khác nhau ở 24h 32

Hình 3.12: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng của màng BC tạo ra từ môi trường dừa (Màng BC không ép nước) 35

Hình 3.13: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng của màng BC tạo ra từ môi trường dừa (Màng BC ép nước 50%) 35

Khóa luận tốt nghiệp đại học

Hình 3.14: Khả năng giải phóng thuốc của màng BC tạo ra từ MT dừa

trong các môi trường có pH khác nhau ở 24h 36

Hình 3.15: Khả năng giải phóng thuốc của màng BC (không ép nước) với

độ dày khác nhau trong 24 giờ 37

Hình 3.16: Khả năng giải phóng thuốc của màng BC (ép nước 50%) với

độ dày khác nhau trong 24 giờ 38

Khóa luận tốt nghiệp đại học

Trong số các thuốc giảm đau được sử dụng nhằm giảm nhẹ triệu chứng, đưa lại sự thoải mái dễ chịu hơn cho bệnh nhân, các thuốc giảm đau chống viêm không steroit (NSAID), đặc biệt là Diclofenac natri được sử dụng nhiều

vì vừa giảm đau và kháng viêm Tác dụng điều trị chủ yếu dựa vào ức chế tổng hợp Prostaglandin, chất trung gian hóa học quan trọng trong các phản ứng viêm và đau, được hấp thu dễ dàng qua đường tiêu hóa sau khi uống [12]

Cellulose vi khuẩn (BC) được tạo thành từ G xylinum có cấu trúc hóa

học rất giống của cellulose thực vật nhưng có một số tính chất hóa lý đặc biệt như: độ bền cơ học, khả năng thấm hút nước cao, đường kính sợi nhỏ, độ tinh khiết cao, độ polymer hóa lớn, có khả năng phục hồi độ ẩm ban đầu, Vì vậy,

BC được ứng dụng trong rất nhiều lĩnh vực như: thực phẩm, công nghiệp dệt, công nghiệp giấy, mỹ phẩm, y học, đáng chú ý nhất trong sự kiểm soát các

hệ thống vận chuyển thuốc BC đã được sử dụng như trong một vài hệ thống

để phân phối thuốc Amin et al đã báo cáo việc sử dụng vật liệu BC làm màng bọc cho paracetamol bằng cách sử dụng kĩ thuật phun phủ Kết quả cho thấy vật liệu BC giúp cho thuốc được giải phóng một cách kéo dài làm tăng hiệu quả sử dụng của thuốc Gần đây hơn, Huang et al nghiên cứu việc sử

dụng màng BC cho việc kiểm soát in vitro của Berberine Ngoài thẩm thấu

qua da, thí nghiệm kiểm soát sự giải phóng thuốc qua màng BC còn được thử nghiệm mô phỏng trong dạ dày, ruột Các kết quả thu được cho thấy rằng thuốc đã được giải phóng với một tốc độ chậm

Với mục đích nghiên cứu để bổ sung dẫn chứng về khả năng giải phóng

của thuốc Diclofenac natri của vật liệu BC, tôi đã chọn đề tài:“Nghiên cứu so

sánh khả năng giải phóng thuốc của vật liệu cellulose nạp Diclofenac natri tạo ra từ Gluconacetobacter xylinus trong một số môi trường nuôi cấy”

Khóa luận tốt nghiệp đại học

2

2 Mục đích nghiên cứu

- Nuôi cấy màng BC được lên men từ 3 loại môi trường (MT chuẩn,

MT gạo, MT dừa)

- Nghiên cứu so sánh khả năng giải phóng thuốc của vật liệu BC trong

3 loại môi trường nuôi cấy trên

3 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu

- Đối tượng nghiên cứu: So sánh khả năng giải phóng thuốc Diclofenac natri của màng BC lên men từ 3 loại môi trường (MT chuẩn, MT gạo, MT dừa)

- Địa điểm nghiên cứu: Viện nghiên cứu khoa học và ứng dụng, Trường Đại học sư phạm Hà Nội 2

- Phạm vi nghiên cứu: Được thực hiện ở quy mô trong phòng thí nghiệm

4 Nội dung nghiên cứu

- Nuôi cấy và thu màng từ 3 loại môi trường khác nhau (MT chuẩn, MT gạo, MT dừa)

- Hấp thụ thuốc Diclofenac natri vào màng BC

- Xác định khả năng giải phóng của các loại màng ở các môi trường có

+ Cung cấp thêm thông tin về màng BC

+ Tìm hiểu tiềm năng của màng BC trong việc giải phóng thuốc

- Ý nghĩa thực tiễn

+ Xây dựng dược quy trình tạo màng từ chủng vi khuẩn G xylinus

+ Xây dựng hệ thống giải phóng của thuốc Diclofenac natri

Khóa luận tốt nghiệp đại học

3

NỘI DUNG CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Cellulose vi khuẩn (BC)

1.1.1 Vị trí phân loại của vi khuẩn G xylinus

Theo hệ thống phân loại của nhà khoa học Bergey thì G xylinus thuộc:

1.1.3 Đặc điểm nuôi cấy

Trên môi trường nuôi cấy, vi khuẩn G xylinus hình thành khuẩn lạc có

bề mặt nhẵn hoặc xù xì, khuẩn lạc bằng phẳng hoặc có thể lồi lên nên dễ tách

ra khỏi môi trường nuôi cấy Khi được nuôi cấy trong môi trường lỏng ở điều kiện tĩnh, chúng sẽ hình thành trên bề mặt môi trường một lớp màng BC

Trong thực nghiệm, tiến hành nuôi cấy vi khuẩn G xylinus trong 3 loại

môi trường tự nhiên sau:

- Môi trường chuẩn (sử dụng nước cất hai lần)

- Môi trường nước vo gạo: là môi trường thích hợp để nuôi cấy do trong đó có chứa các chất dinh dưỡng với hàm lượng cần thiết cho sự sinh trưởng của vi khuẩn như các loại vitamin, khoáng chất, protein,…

Khóa luận tốt nghiệp đại học

4

Lưu ý: Sử dụng nước vo gạo sau khi vo không quá 2h, đảm bảo hàm lượng chất dinh dưỡng được đảm bảo Không sử dụng nước vo gạo đã bị chua

Bảng 1.1: Thành phần dinh dưỡng của nước vo gạo

- Môi trường nước dừa già: là môi trường có chứa nhiều chất dinh dưỡng và các chất kích thích tố tăng trưởng như hexitol, sorbitol, cytolunin, myoinositol,…

Lưu ý: Sử dụng nước dừa già sau khi thu hoạch không quá 2 ngày và được bảo quản thích hợp để đảm bảo hàm lượng các chất dinh dưỡng Không

sử dụng nước dừa già đã bị chua hoặc có mùi lạ

Bảng 1.2: Thành phần dinh dưỡng của nước dừa già

Một số tính chất đáng chú ý của màng BC:

- Độ tinh khiết cao

- Kích thước ổn định, độ bền cơ học lớn

- Có khả năng chịu nhiệt tốt

- Khả năng thấm hút nước cao, có thể bị thủy phân bởi enzyme,

- Có thể bị một số vi sinh vật tác động làm phân hủy hoàn toàn nên đây

có thể coi là nguồn tài nguyên có khả năng tự phục hồi được

- Màng BC được nuôi cấy trực tiếp từ các loại môi trường tự nhiên, không cần can thiệp bởi các bước trung gian

Do đó, màng BC được ứng dụng trong rất nhiều lĩnh vực công nghệ khác nhau như:

- Công nghệ thực phẩm: sản xuất thịt nhân tạo, các món tráng miệng (salad, kem,…)

- Mỹ phẩm: sản xuất móng nhân tạo, các loại mặt nạ,…

- Công nghệ dệt may: sản xuất các loại vải khác nhau, sợi tơ nhân tạo,

- Đặc biệt trong y học: màng được nghiên cứu và sử dụng làm da nhân tạo Ở Brazil, màng BC ướt tinh sạch được sản xuất và bán ra thị trường như một loại da nhân tạo dùng để đắp lên vết thương Trường Đại học Y dược Thành phố Hồ Chí Minh cũng nghiên cứu sử dụng màng BC có tẩm dầu mù u làm màng trị bỏng được thực nghiệm ở thỏ Kết quả cho thấy rằng màng BC giúp vết thương mau lành và ngăn không cho vết thương nhiễm trùng Ngoài

Khóa luận tốt nghiệp đại học

6

ra, sản phẩm BC còn được ứng dụng trong phẫu thuật, ghép mô, cơ quan hoặc làm màng băng vết thương [4]

1.2 Thuốc Diclofenac natri

1.2.1 Tổng quan vè Diclofenac natri

Diclofenac natri là thuốc được sử dụng nhiều vì vừa giảm đau và kháng viêm Tác dụng điều trị chủ yếu dựa vào ức chế tổng hợp Prostaglandin, chất trung gian hóa học quan trọng của phản ứng viêm và đau, được hấp thu dễ dàng qua đường tiêu hóa sau khi uống [12]

1.2.2 Công thức

- Công thức phân tử

C14H10Cl2NNaO2 [11]

- Công thức cấu tạo

Hình 1.1: Công thức cấu tạo của Diclofenac natri

- Tên IUPAC hệ thống: Natri 2-[(2,6-dicloriphenyl)amino]phenyl]acetat 1.2.3 Tác dụng dược lý và cơ chế tác dụng

Diclofenac natri, dẫn chất của acid phenylacetic là thuốc chống viêm không steroid Thuốc có tác dụng chống viêm, giảm đau và giảm sốt mạnh Các thuốc chống viêm không steroid ức chế tổng hợp prostaglandin nên có thể gây viêm thận kẽ, viêm cầu thận, hoại tử nhú và hội chứng thận hư đặc biệt ở những người bị bệnh thận hoặc suy tim mạn tính Với những người bệnh này, các thuốc chống viêm không steroid có thể làm tăng suy thận cấp

và suy tim cấp [2]

Khóa luận tốt nghiệp đại học

7

Diclofenac là một chất ức chế mạnh hoạt tính của cyclooxygenase, do

đó làm giảm đáng kể sự tạo thành prostaglandin, prostacyclin và thromboxan

là những chất trung gian của quá trình viêm Diclofenac cũng điều hòa con đường lipoxygenase và sự kết tụ tiểu cầu Giống như các thuốc chống viêm không steroid khác, diclofenac gây hại đường tiêu hóa do giảm tổng hợp prostaglandin dẫn đến ức chế tạo DICLOFENAC mucin (chất có tác dụng bảo

vệ đường tiêu hóa) [2]

1.2.4 Dược động học

Dạng uống:

Diclofenac ở dạng viên bao tan trong ruột được hấp thu nhanh và hoàn toàn Thuốc ở dạng viên phóng thích chậm được hấp thu hoàn toàn Do hoạt chất được phóng thích chậm nên nồng độ tối đa trong huyết tương thấp hơn so với liều lượng dùng nhưng nồng độ diclofenac huyết tương có thể duy trì trong nhiều giờ sau khi uống Sự hấp thu thuốc xảy ra chậm hơn nếu uống thuốc trong bữa ăn hay sau bữa ăn so với uống lúc đói nhưng không ảnh hưởng gì đến lượng hoạt chất hấp thu [20]

Dạng tiêm:

Nồng độ tối đa trong huyết tương trung bình là 2,5 mg/ml (8 mmol/l) đạt được khoảng 20 phút sau khi tiêm bắp 75 mg diclofenac Nồng độ trong huyết tương có liên quan tuyến tính với liều dùng [20]

1.2.5 Chỉ định

Điều trị dài hạn các triệu chứng trong :Viêm thấp khớp mạn tính, nhất

là viêm đa khớp dạng thấp, viêm xương khớp và viêm cứng khớp cột sống hay trong những hội chứng liên kết như hội chứng Fiessiger-Leroy-Reiter và thấp khớp trong bệnh vẩy nến; bệnh cứng khớp gây đau và tàn phế [20]

Điều trị triệu chứng ngắn hạn các cơn cấp tính của: Bệnh thấp khớp và tổn thương cấp tính sau chấn thương của hệ vận động như viêm quanh khớp vai cẳng tay, viêm gân, viêm bao hoạt dịch, viêm màng hoạt dịch, viêm gân bao hoạt dịch; viêm khớp vi tinh thể [20]

Khóa luận tốt nghiệp đại học

8

1.2.6 Tác dụng phụ

Đường tiêu hóa: Đau thượng vị, có những rối loạn tiêu hóa như nôn, mửa, tiêu chảy, đau bụng, khó tiêu, đầy hơi, chán ăn Có thể xảy ra xuất huyết tiêu hóa, nôn ra máu, tiêu ra máu, loét đường tiêu hóa với xuất huyết hay thủng, tiêu chảy ra máu [20]

Hệ thần kinh trung ương (và ngoại biên): Nhức đầu, choáng váng, chóng mặt Có thể gây ra rối loạn cảm giác kể cả dị cảm, rối loạn trí nhớ, mất định hướng, rối loạn thị giác (giảm thị lực, song thị), giảm thính lực, ù tai, mất ngủ, dễ bị kích thích, co giật, trầm cảm, lo âu, ác mộng, run rẩy, phản ứng tâm thần, rối loạn vị giác [20]

1.2.7 Quá liều

Một số biểu hiện khi quá liều: Đau ngực, suy nhược, khó thở; ho ra máu hoặc nôn mửa ra giống bã cà phê; buồn nôn, đau tức ngực, vùng bụng phía trên, chán ăn; phản ứng da nghiêm trọng - sốt, đau họng, sưng mặt hoặc lưỡi,… [21]

1.2.8 Tương tác thuốc

Diclofenac natri có thể làm tăng hay ức chế tác dụng của các thuốc khác

Không nên dùng thuốc phối hợp với:

- Thuốc chống đông theo đường uống và heparin: Có thể gây xuất huyết nặng

- Kháng sinh nhóm quinolon: Có thể làm tăng tác dụng phụ lên hệ thần kinh trung ương, dẫn đến co giật

- Aspirin hoặc Glucocorticoid: Làm giảm nồng độ Diclofenac natri trong huyết tương và làm tăng nguy cơ tổn thương đối với dạ dày và ruột

- Diflunisal: Có thể làm tăng nồng độ Diclofenac trong huyết tương, làm giảm độ thanh lọc Diclofenac natri và có thể gây chảy máu nặng ở đường tiêu hóa [2]

Khóa luận tốt nghiệp đại học

9

1.3 Tổng quan tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước

1.3.1 Tình hình ngiên cứu trên thế giới

Đã có những công trình nghiên cứu về thuốc Diclofenac natri như:

- Srikanth A ABSTRACT, Nagaveni, SaravanaKumar, Prasanna Raju Y(2013) đã nghiên cứu đặc tính và chế tạo DICLOFENAC SODIUM loại MICROCAPSULES LOADED

- Laila Hassanein Emara, Nesrin Fouad Taha, Rania Mohamed Badr , Nadia Mohamed Mursi (2012) đã nghiên cứu phát triển hệ thống bơm thẩm thấu để phân phối có kiểm soát Diclofenac natri

- Mitra Jelvehgari , Hadi Valizadeh , Ramin Jalali Motlagh, Hassan Montazam (2014) đã nghiên cứu xây dựng và đặc tính hóa lý của Buccoadhesive Microspheres chứa Diclofenac Sodium

1.3.2 Tình hình nghiên cứu ở Việt Nam

Ở Việt Nam việc nghiên cứu BC làm tác nhân vận chuyển thuốc còn là một hướng đi mới, chưa có nhiều nghiên cứu về vấn đề này

Năm 2015, Phan Thị Thu Hồng và cộng sự đã nghiên cứu về “Sử dụng cellulose tổng hợp vi khuẩn Acetobacter xylinum để chế tạo vật liệu nhựa composite sinh học trên nền nhựa polyvinyl alcohol” [4]

Năm 2005, Huỳnh Thị Ngọc Lan, Nguyễn Văn Thanh đã nghiên cứu về

“Các đặc tính màng cellulose vi khuẩn từ Acetobacter xylinum sử dụng làm màng trị bỏng”

Năm 2012, Đinh Thị Kim Nhung, Nguyễn Thị Thùy Vân, Trần Như

Quỳnh đã nghiên cứu về“Vi khuẩn A xylinum tạo màng Bacteril Cellulose ứng dụng trong điều trị bỏng” [9]

Khóa luận tốt nghiệp đại học

10

CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Đối tượng nghiên cứu

- Khả năng giải phóng của màng BC được lên men từ ba loại môi trường: MT chuẩn, MT nước vo gạo, MT nước dừa già

2.2 Vật liệu nghiên cứu

2.2.1 Chủng vi khuẩn

Chủng vi khuẩn dùng lên men thu vật liệu BC được nuôi cấy tại Viện nghiên cứu Khoa học và Ứng dụng, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2

2.2.2 Nguyên liệu và hóa chất

• Nguyên liệu: nước dừa già, nước vo gạo, nước cất 2 lần

• Hóa chất:

- Thuốc Diclofenac natri dạng tinh khiết

Hình 2.1: Thuốc Diclofenac natri dạng tinh khiết

- Đường glucose, acid acetic, acid citric, peptone, amoni sunfat, kali dihidrophotphat, cao nấm men, axit clohidric,…

Khóa luận tốt nghiệp đại học

11

2.2.3 Các thiết bị

- Máy đo quang phổ UV – Vis 2450 (Shimadru – Nhật Bản)

- Cân phân tích, cân kỹ thuật (Sartorius – Thụy Sỹ)

- Nồi hấp khử trùng HV-110/HIRAIAMA (Nhật Bản)

- Tủ sấy, tủ ấm (Binder – Đức)

- Buồng cấy vô trùng (Haraeus)

- Máy khuấy từ gia nhiệt (IKA – Đức)

- Tủ lạnh Daewoo, tủ lạnh sâu

- Và các dụng cụ hóa sinh thông dụng khác

2.3 Nội dung nghiên cứu

- Thí nghiệm 4: Dựng đường chuẩn Diclofenac natri

- Thí nghiệm 5: Cho màng nạp thuốc Diclofenac natri trong 2 giờ (tiến hành thu các dung dịch mẫu ở các khoảng thời gian 0,5h; 1h; 1,5h; 2h)

- Thí nghiệm 6: Cho màng đã nạp thuốc Diclofenac natri giải phóng thuốc trong 24h ở các loại pH khác nhau

Khóa luận tốt nghiệp đại học

12

- Thí nghiệm 7: Nghiên cứu so sánh khả năng giải phóng thuốc vào màng ở ba loại môi trường

2.4.2 Phương pháp chế tạo màng BC

2.4.2.1 Lên men thu màng BC

Màng BC được tạo từ 3 môi trường khác nhau ở bảng: từ nước vo gạo (MTG), môi trường chuẩn (MTC), nước dừa già (MTD)

Bước 1: Sấy các bình đựng và dụng cụ ở 200 độ C, sau khi sấy xong lấy ra và để nguội

Bước 2: Chuẩn bị 3 loại môi trường theo Bảng 2.1

Bảng 2.1: Thành phần trong trong 3 loại môi trường nuôi cấy vi khuẩn

Bước 6: Chuyển dịch sang dụng cụ nuôi cấy theo kích thước nghiên cứu, dùng gạc vô trùng bịt miệng dụng cụ, đặt tĩnh trong khoảng 4 – 14 ngày trong điều kiện nhiệt độ ở 280C

Bước 7: Thu màng BC thô, rửa sạch chúng dưới vòi nước (xả nước nhẹ)

- Sau đó, ngâm màng BC trong dung dịch HCl 3% (trong khoảng 48h)

để trung hòa lượng NaOH

- Để màng dưới vòi nước chảy nhẹ để trung hòa lượng acid, đến khi màng chuyển sang màu trắng trong Thử quỳ tím để kiểm tra, nếu môi trường

bề mặt vật liệu là trung tính, ta thu được màng BC đạt tiêu chuẩn

2.4.3 Đánh giá độ tinh khiết của màng BC

Mục đích: Kiểm tra sự có mặt của đường glucose trong màng nhằm

đảm bảo màng BC đã được loại bỏ các chất chất độc hại và các tạp chất

Khóa luận tốt nghiệp đại học

14

Nguyên tắc: Sử dụng thuốc thử Fehling Nếu trong màng có glucose, sẽ xuất hiện kết tủa màu nâu đỏ

Tiến hành:

- Mẫu đối chứng là nước cất 2 lần và dung dịch D-glucose

- Thu các dịch thử của các loại màng khác nhau

- Cho 1ml thuốc thử Fehling vào mỗi ống nghiệm có chứa mẫu thử, đun dưới ngọn lửa đèn cồn 10 phút

- Quan sát hiện tượng trong ống nghiệm (chú ý có kết tủa hay không)

2.4.4 Phương pháp dựng đường chuẩn của thuốc Diclofenac natri

Sử dụng máy đo quang phổ UV- 2450 (Shimadru - Nhật Bản) để đo phổ vùng tử ngoại và khả kiến Máy bao gồm hệ thống quang học có khả năng cung cấp ánh sáng đơn sắc trong dải từ 200 – 800nm Sử dụng hai cuvet

đo dùng cho dung dịch thử và dung dịch đối chiếu được làm từ chất liệu thạch anh, dung sai về độ dài quang trình của cốc đo là ± 0,005cm [14]

Pha dung dịch Diclofenac natri trong HCl 0,1N với các nồng độ (mg/ml) khác nhau: 10%, 20%, 40%, 60%, 80%, 100%

Sử dụng máy đo quang phổ để đo độ hấp thụ của các dung dịch chuẩn

bị theo dãy trên tại các bước sóng 276nm, 278nm, 281nm

Tiến hành đo 3 lần, lấy giá trị trung bình quang phổ của thuốc Diclofenac natri để xây dựng đường chuẩn của thuốc Phương trình tuyến tính biểu diễn mối quan hệ giữa nồng độ Diclofenac natri và độ hấp thụ

Phương trình biểu diễn mối quan hệ giữa nồng độ và độ hấp thụ có dạng:

y = ax + b với R2 là hệ số tương quan

Trong đó: y: độ hấp thu của dung dịch tại λmax

x: nồng độ của dung dịch Giá trị OD của dung dịch thuốc ở các nồng độ khác nhau được thể hiện

ở bảng sau:

- Ở bước sóng 276nm

Khóa luận tốt nghiệp đại học