Giáo trình Thực hành Mô học

- Nhận biết cấu trúc và thành phần cấu tạo bình th-ờng của tế bào, của các mô và các cơ quan trong cơ thể ng-ời và động vật ở mức độ hiển vi.. Yêu cầu: Nhận biết đ-ợc đặc điểm cấu tạo củ

tr-ờng đại học Y Hà nội môn mô - phôi học giáo trình thực hành Mô học ( sách dùng cho sinh viên) Hà Nội - 2011 Tr-ờng đại học Y Hà nội môn mô - phôi học giáo trình thực hành Mô học ( sách dùng cho sinh viên) Hà Nội - 2011 chủ biên pgS.TS Nguyễn Thị Bình THAM GIA BIÊN SOạN pgS.TS Nguyễn Thị Bình ts Nguyễn Khang Sơn ts Ngô Duy Thìn bs L-u Đình Mùi THS Trịnh Sinh Tiên THS Đào Thị Thúy Ph-ợng THS Lê Thị Hồng Nhung Th- ký bi ên soạn bs L-u Đình Mùi H-ớng dẫn dùng sách Mô học môn học hình thái Việc xem tiêu tế bào, mô, quan d-íi kÝnh hiĨn vi sÏ gióp sinh viªn dƠ dàng hiểu nhớ cấu trúc đà đ-ợc mô tả giảng lý thuyết giảng đường Cuốn Thực tập Mô học soạn thảo nhằm góp phần xây dựng phong cách học tập chủ động qua nâng cáo chất l-ợng học tập sinh viên học môn Mô học - Phôi thai học Về nội dung, sách gồm hai phần: phần mở đầu phần h-ớng dẫn đọc tiêu Phần mở đầu: Phần mở đầu giới thiệu khái quát mục đích, yêu cầu việc xem tiêu mô học, sơ l-ợc kỹ thuật làm tiêu thông th-ờng trình bày nét chủ yếu cấu tạo sử dụng kính hiển vi quang học để đọc tiêu mô học Phần h-ớng dẫn đọc tiêu bản: 2.1 Phần lời bao gồm yêu cầu, nội dung trình tự h-ớng dẫn sinh viên đọc tiêu Tr-ớc đọc tiêu sinh viên phải đọc kỹ phần 2.2 Những ảnh minh hoạ cho phần lời: hình ảnh điển hình nhất, sinh viên vào chi tiết đ-ợc thích ảnh để tìm tiêu xem d-ới kính hiển vi 2.3 Vẽ hình: sau sinh viên nhận biết tiêu học mô nào, quan nào, kính hiển vi cấu trức đà nêu yêu cầu tiêu bản, sinh viên phải vẽ lại hình đà quan sát vào phần hình vẽ Mở đầu Mục đích, yêu cầu thực tập đọc tiêu mô học: - Minh hoạ nội dung đà trình bầy giảng lý thuyết - Nhận biết cấu trúc thành phần cấu tạo bình th-ờng tế bào, mô quan thể ng-ời động vật mức độ hiển vi - Chẩn đoán đ-ợc tế bào, mô quan qua tiêu vi thể Kỹ thuật làm tiêu mô học: Trình tự làm b-ớc nh- sau: ã Trích thủ mô, quan cần nghiên cứu ã Cố định mảnh mô, quan loại thuốc cố định thích hợp ã Thực loạt kỹ thuật để nến (paraffine) ngấm vào mảnh mô, mảnh quan Sau đúc khối nến (hay khối colloidine khối chất dẻo) vùi mảnh mô hay mảnh quan vào khối ã Cắt thành lát mỏng mảnh mô hay quan vùi khối nến máy cắt lát Độ dầy lát cắt khoảng từ 4-7m Dán lát cắt lên phiến kính ã Nhuộm lát cắt đà dán phiến kính theo ph-ơng pháp nhuộm thích hợp với yêu cầu nghiên cứu Với tiêu mô học thông th-ờng, để nhuộm nhân tế bào th-ờng dùng hematoxylin, nhân bắt mầu xanh tím.Để nhuộm bào t-ơng tế bào th-ờng sử dụng eozin, bào t-ơng bắt mầu đỏ hồng Ngoài ra, số tiêu đ-ợc nhuộm ph-ơng pháp đặc biệt khác ã Dán kính lên phiến kính để bảo để bảo vệ lát cắt đà nhuộm mầu KÝnh hiÓn vi quang häc KÝnh hiÓn vi quang học loại ph-ơng tiện th-ờng xuyên đ-ợc sử dụng để quan sát tiêu mô học 3.1 Cấu tạo Kính hiển vi quang học Thị kính; Giá để gắn vật kính; Các vật kính; Nóm ®iỊu chØnh lín; Nóm ®iỊu chØnh nhá; Mâm kính; H thng ốn, g-ơng; Tụ quang; Bộ phận di chuyển tiêu 3.2 Cách sử dụng ã Đặt kính ngắn tr-ớc mặt, vừa tầm mắt ã Đ-a vật kính có độ phóng đại nhỏ (x10) vào vị trí (đúng luồng ánh sáng truyền từ d-ới lên qua lỗ mâm kính) Hạ tụ quang xuống thấp ã Đặt tiêu lên mâm kính (mặt có dán kính phía trên) Di chuyển tiêu để lát cắt vào vị trí quan sát đ-ợc ã Quan sát tiêu Việc đọc tiêu bắt đầu vật kính có độ phóng đại nhỏ (th-ờng vật kính x10) Độ phóng đại cho phép xác định đ-ợc khu vực thành phần cấu trúc mô, quan Vật kính có độ phóng đại lớn (x40; x60) dùng để quan sát phạm vi tế bào cấu trúc chi tiết vùng nhỏ mô, quan - Dùng vật kính nhỏ: + Sau đà đặt vật kính nhỏ vị trí, mắt nhìn qua thị kính, vặn ốc điều chỉnh lớn ốc điều chỉnh nhỏ để nâng hạ vật kính thấy rõ chi tiết vi tr-ờng Điều chỉnh kính động tác tế nhị, cần thận trọng, tiến hành nhẹ nhàng, không vội vàng, cẩu thả Không ý việc điều chỉnh kính dẫn đến hậu tai hại làm dập, vỡ tiêu (do hạ vật kính xuống thấp Vật kính chạm vào tiêu bản, xử dụng vật kính có độ phóng đại lớn) để tránh làm dập, vỡ tiêu bản, nên tiến hành điều chỉnh kính nh- sau: + Vặn ốc điều chỉnh lớn cho vật kính hạ gần sát tiêu Khi vặn ốc điều chỉnh phải theo dõi khoảng cách vật kính tiêu + Muốn quan sát vùng khác tiêu bản, phải di chuyển tiêu sang trái, phải, tiến tr-ớc,lùi lại sau Trong di chuyển tiêu bản, hình ảnh vi tr-ờng bị mờ đi, cần điều chỉnh lại cho rõ cách xoay ốc điều chỉnh nhỏ theo chiều ng-ợc chiều kim đồng hồ - Dùng vËt kÝnh lín: + Mn quan s¸t chi tiÕt c¸c thành phần cấu tạo tế bào, mô, phải đ-a vật kính lớn vào vị trí, nghĩa đ-a vào luồng ánh sáng từ d-ới mâm kính lên, đồng thời làm tăng c-ờng nguồn sáng cách nâng tụ quang lên + Tr-ớc đ-a vật kính có độ phóng đại lớn vào vị trí cần kiểm tra xem tiêu đà đặt chiều ch-a (mặt dán kính phía trên) Đặt không chiều gây dập, vỡ tiêu + Xoay ốc điều chỉnh nhỏ làm cho vật kính rời xa mặt tiêu Nếu thấy hình ảnh tiêu mờ đi, từ từ vặn ốc theo chiều ng-ợc lại hình ảnh rõ TiêU số 1: biểu mô vuông đơn Trích thủ từ: Thận chó Ph-ơng pháp nhuộm: Hematoxylin- Eosin (H.E): Nhân bắt màu tím Bào t-ơng bắt màu đỏ Yêu cầu: Nhận biết đ-ợc đặc điểm cấu tạo biểu mô vuông đơn lợp thành ống góp nằm vùng tuỷ (th¸p Malpighi) cđa thËn C¸ch quan s¸t: VËt kÝnh x10: Tìm đ-ợc vùng tuỷ (tháp Malpighi) thận vùng nhạt màu, gồm toàn ống cắt ngang ống lớn, thành dày gồm hàng tế bào có ranh giới rõ ràng, lòng rộng ống góp Vật kính x40: Quan sát thành ống góp thấy đ-ợc hàng tế bào hình khối vuông, ranh giới rõ ràng Bào t-ơng sáng Nhân tròn, nằm tÕ bµo Vïng tủ cđa thËn èng gãp; Biểu mô vuông đơn Hình vẽ TiêU số 2: biểu mô lát đơn Trích thủ từ: Thận chó Ph-ơng pháp nhuộm: H.E Yêu cầu: Nhận biết đ-ợc đặc điểm cấu tạo biểu mô lát đơn gồm hàng tế bào dẹt Cách quan sát: Vật kính x10: Tìm đ-ợc vùng vỏ thận vùng màu hồng thẫm, có khối hình tròn, đ-ợc bao quanh khoang sáng khoang Bowman tiểu cầu thận Biểu mô lát đơn lợp phía bao Bowman Vật kính x40: Quan sát đặc điểm cấu tạo biểu mô lát đơn: Đó lớp mỏng tạo ranh giới khoang Bowman cấu trúc xung quanh Những tế bào biểu mô dẹt Nhân hình gậy, thẫm màu lồi vào khoang Bowman Bào t-ơng mỏng Vïng vá cđa thËn TiĨu cÇu thËn BiĨu mô lát đơn Hình vẽ Hình vẽ TiêU số 3: biểu mô trụ đơn Trích thủ từ: Tá tràng chó Ph-ơng pháp nhuộm: H.E Yêu cầu: - Nhận biết đ-ợc biểu mô phủ nhung mao ruột biểu mô trụ đơn - Phân biệt đ-ợc loại tế bào biểu mô trụ đơn tế bào trụ mâm khía tế bào hình đài Cách quan sát: Vật kính x10: Tìm nhung mao ruột: Mỗi nhung mao khối hình ngón tay lồi vào lòng ruột gồm phần: - Trục liên kết nằm nhung mao đ-ợc cấu tạo mô liên kết - Lợp phía trục liên kết biểu mô trụ đơn Vật kính x40: - Xác định biểu mô trụ đơn: Biểu mô đ-ợc cấu tạo hàng tế bào trụ cao, ranh giới không rõ ràng Nhân tế bào hình trứng nằm phía đáy, phần nhiều bào t-ơng màu hồng - Phân biệt loại tế bào: + Tế bào mâm khía: Chiếm đa số, tế bào cực có đ-ờng viền màu hồng bóng + Tế bào hình đài: Nằm rải rác, xen tế bào trụ mâm khía cực có hốc sáng (đó không bào chứa chất nhầy không bắt màu thuốc nhuộm) Niêm mạc ruột non 1.Trục liên kết nhung mao Biểu mô trụ đơn Tế bào hấp thu Tế bào hình đài