Giáo trình Thực hành Mô học

- Nhận biết cấu trúc và thành phần cấu tạo bình th-ờng của tế bào, của các mô và các cơ quan trong cơ thể ng-ời và động vật ở mức độ hiển vi.. Yêu cầu: Nhận biết đ-ợc đặc điểm cấu tạo củ

tr-ờng đại học Y Hà nội

Tr-ờng đại học Y Hà nội

chñ biªn

pgS.TS NguyÔn ThÞ B×nh

THAM GIA BI£N SO¹N

pgS.TS NguyÔn ThÞ B×nh

ts NguyÔn Khang S¬n

ts Ng« Duy Th×n

bs L-u §×nh Mïi THS TrÞnh Sinh Tiªn THS §µo ThÞ Thóy Ph-îng THS Lª ThÞ Hång Nhung

Th- ký bi ªn so¹n

bs L-u §×nh Mïi

H-ớng dẫn dùng sách

Mô học là một môn học về hình thái Việc xem tiêu bản các tế bào, các mô, các cơ quan d-ới kính hiển vi sẽ giúp sinh viên dễ dàng hiểu và nhớ những cấu trúc đã đ-ợc mô tả trong các bài giảng lý thuyết trên giảng đường Cuốn “Thực tập Mô học” được soạn thảo nhằm góp phần xây dựng phong cách học tập chủ động và qua đó nâng cáo chất l-ợng học tập của sinh viên học môn Mô học - Phôi thai học

Về nội dung, cuốn sách gồm hai phần: phần mở đầu và phần h-ớng dẫn đọc tiêu bản

1 Phần mở đầu: Phần mở đầu giới thiệu khái quát mục đích, yêu cầu của việc xem

các tiêu bản mô học, sơ l-ợc về kỹ thuật làm các tiêu bản thông th-ờng và trình bày những nét chủ yếu về cấu tạo và sử dụng kính hiển vi quang học để đọc các tiêu bản mô học

2.3 Vẽ hình: sau khi sinh viên có thể nhận biết đúng tiêu bản đang học là của mô nào, cơ quan nào, chỉ đúng trên kính hiển vi những cấu trức đã nêu trong yêu cầu mỗi tiêu bản, sinh viên phải vẽ lại hình đã quan sát được vào phần “ hình vẽ”

Mở đầu

1 Mục đích, yêu cầu thực tập đọc tiêu bản mô học:

- Minh hoạ những nội dung đã trình bầy trong các bài giảng lý thuyết

- Nhận biết cấu trúc và thành phần cấu tạo bình th-ờng của tế bào, của các mô và các cơ quan trong cơ thể ng-ời và động vật ở mức độ hiển vi

- Chẩn đoán đ-ợc các tế bào, mô và cơ quan qua các tiêu bản vi thể

2 Kỹ thuật làm tiêu bản mô học:

Trình tự làm các b-ớc nh- sau:

• Trích thủ mô, cơ quan cần nghiên cứu

• Cố định các mảnh mô, cơ quan bằng các loại thuốc cố định thích hợp

• Thực hiện một loạt kỹ thuật để nến (paraffine) ngấm vào mảnh mô, mảnh cơ quan Sau đó đúc các khối nến (hay khối colloidine hoặc khối chất dẻo) và vùi các mảnh mô hay mảnh cơ quan vào trong các khối đó

• Cắt thành lát mỏng các mảnh mô hay cơ quan vùi trong khối nến bằng máy cắt lát Độ dầy lát cắt khoảng từ 4-7m Dán lát cắt lên phiến kính

• Nhuộm lát cắt đã dán trên phiến kính theo các ph-ơng pháp nhuộm thích hợp với yêu cầu nghiên cứu Với những tiêu bản mô học thông th-ờng, để nhuộm nhân tế bào th-ờng dùng hematoxylin, nhân sẽ bắt mầu xanh tím.Để nhuộm bào t-ơng của

tế bào th-ờng sử dụng eozin, bào t-ơng bắt mầu đỏ hồng Ngoài ra, một số tiêu bản

+ Sau khi đã đặt vật kính nhỏ đúng vị trí, mắt nhìn qua thị kính, vặn ốc điều chỉnh

lớn hoặc ốc điều chỉnh nhỏ để nâng hoặc hạ vật kính cho đến khi thấy rõ nhất các

chi tiết trong vi tr-ờng

Điều chỉnh kính là một động tác rất tế nhị, cần hết sức thận trọng, tiến

hành nhẹ nhàng, không vội vàng, cẩu thả Không chú ý trong việc điều chỉnh kính

sẽ dẫn đến hậu quả tai hại là có thể làm dập, vỡ tiêu bản (do hạ vật kính xuống quá

thấp Vật kính chạm vào tiêu bản, nhất là khi xử dụng vật kính có độ phóng đại

lớn) để tránh làm dập, vỡ tiêu bản, nên tiến hành điều chỉnh kính nh- sau:

+ Vặn ốc điều chỉnh lớn sao cho vật kính hạ gần sát tiêu bản Khi vặn ốc điều chỉnh

phải theo dõi khoảng cách giữa vật kính và tiêu bản

+ Muốn quan sát các vùng khác nhau của tiêu bản, phải di chuyển tiêu bản sang

trái, phải, tiến ra tr-ớc,lùi lại sau Trong khi di chuyển tiêu bản, hình ảnh trong vi

tr-ờng có thể bị mờ đi, cần điều chỉnh lại cho rõ bằng cách xoay ốc điều chỉnh nhỏ

theo chiều hoặc ng-ợc chiều kim đồng hồ

- Dùng vật kính lớn:

+ Muốn quan sát chi tiết các thành phần cấu tạo tế bào, mô, phải đ-a vật kính lớn

vào đúng vị trí, nghĩa là đ-a vào đúng luồng ánh sáng từ d-ới mâm kính đi lên,

đồng thời làm tăng c-ờng nguồn sáng bằng cách nâng tụ quang lên

+ Tr-ớc khi đ-a vật kính có độ phóng đại lớn vào vị trí cần kiểm tra xem tiêu bản

đã đặt đúng chiều ch-a (mặt dán lá kính ở phía trên) Đặt không đúng chiều bao giờ

cũng gây dập, vỡ tiêu bản

+ Xoay ốc điều chỉnh nhỏ làm cho vật kính rời xa mặt tiêu bản Nếu thấy hình ảnh

trên tiêu bản càng mờ đi, từ từ vặn ốc này theo chiều ng-ợc lại cho đến khi hình

ảnh hiện rõ

TiêU bản số 1: biểu mô vuông đơn

TiêU bản số 3: biểu mô trụ đơn

Trích thủ từ: Tá tràng của chó

Ph-ơng pháp nhuộm: H.E

Yêu cầu:

- Nhận biết đ-ợc biểu mô phủ trên các nhung mao ruột là biểu mô trụ đơn

- Phân biệt đ-ợc 2 loại tế bào trong biểu mô trụ đơn là tế bào trụ mâm khía và tế bào hình đài

Cách quan sát:

1 Vật kính x10:

Tìm các nhung mao ruột: Mỗi nhung mao là 1 khối hình ngón tay lồi vào trong lòng ruột gồm 2 phần:

- Trục liên kết nằm giữa nhung mao đ-ợc cấu tạo bởi mô liên kết

- Lợp phía ngoài trục liên kết là biểu mô trụ đơn

2 Vật kính x40:

- Xác định biểu mô trụ đơn: Biểu mô đ-ợc cấu tạo bởi 1 hàng tế bào trụ cao, ranh giới không rõ ràng Nhân tế bào hình trứng nằm ở phía đáy, phần ngọn nhiều bào t-ơng màu hồng

- Phân biệt 2 loại tế bào:

+ Tế bào mâm khía: Chiếm đa số, là những tế bào ở cực ngọn có 1 đ-ờng viền màu hồng bóng

+ Tế bào hình đài: Nằm rải rác, xen giữa các tế bào trụ mâm khía ở cực ngọn có 1 hốc sáng (đó là 1 không bào chứa chất nhầy không bắt màu thuốc nhuộm)

1

2

3 4

Niêm mạc ruột non

1.Trục liên kết của nhung mao

H×nh vÏ

TiªU b¶n sè 4: biÓu m« trô gi¶ tÇng cã l«ng chuyÓn

TiêU bản số 5: biểu mô lát tầng sừng hóa (Biểu bì )

1 Vật kính x10: Tìm biểu mô lát tầng:Là một lớp khá dày, thẫm màu, gồm nhiều hàng

tế bào nằm chồng lên nhau tạo thành một dải ngoằn ngoèo, d-ới biẻu mô là mô liên kết

2 Vật kính x40: Quan sát cấu tạo biểu bì gồm 4 lớp (từ d-ới lên trên)

- Lớp sinh sản (lớp đáy): Là lớp d-ới cùng của biểu mô gồm một hàng tế bào hình

khối vuông hoặc trụ, ranh giới không rõ ràng, nhân tròn hoặc hình trứng thẫm màu, nằm

sát nhau

- Lớp sợi (lớp Malpighi): Khá dày, nằm ngay phía trên lớp sinh sản, gồm nhiều

hàng tế bào đa diện, nhân hình cầu, bào t-ơng hồng nhạt, ranh giới tế bào không rõ

- Lớp hạt: Mỏng, gồm 2-3 hàng tế bào hình thoi, nhân hình cầu, sáng màu, bào

H×nh vÏ

TiêU bản số 6: biểu mô lát tầng không sừng hóa

(biểu mô lát tầng kiểu malpighi)

2 Vật kính x40:

Quan sát cấu tạo của biểu mô lát tầng không sừng hoá gồm 3 lớp:

- Lớp sinh sản (lớp đáy): Nằm trên màng đáy, sát với mô liên kết của lớp đệm, đó

là một hàng tế bào hình khối vuông hoặc trụ, ranh giới không rõ ràng, nhân hình tròn hoặc hình trứng, sẫm màu

- Lớp Malpighi: Là lớp khá dày, nằm ngay phía trong lớp sinh sản, gồm những tế bào có hình đa diện, nhân hình cầu, bào t-ơng màu hồng nhạt, ranh giới tế bào không rõ

- Lớp những tế bào dẹp: Lớp này gồm nhiều hàng tế bào dẹt dần, có nhân dẹt, những tế bào bong ra vẫn có nhân

1

3

2

H×nh vÏ

TiªU b¶n sè 7: tÕ bµo sîi, tÕ bµo néi m«, tÕ bµo mì

- TÕ bµo néi m«: Lµ nh÷ng tÕ bµo dÑt, lãt mÆt trong thµnh mao m¹ch, bµo t-¬ng

máng, mµu hång tiÕp víi bµo t-¬ng cña c¸c tÕ bµo l©n cËn t¹o nªn thµnh mao m¹ch

TiªU b¶n sè 8: T-¬ng bµo vµ lympho bµo

M« quan s¸t: M« liªn kÕt viªm m¹n tÝnh ë ng-êi

TiêU bản số 9: sợi chun và sợi collagen

Mô quan sát: Mạc treo ruột thỏ

Ph-ơng pháp nhuộm: orcein- eosin

Yêu cầu:

1 Nhận biết đ-ợc đặc điểm cấu tạo của sợi chun và sợi collagen

2 Phân biệt đ-ợc 2 loại sợi đó

Phân biệt 2 loại sợi:

- Sợi collagen: Lớn, màu hồng, bắt chéo nhau, không chia nhánh

- Sợi chun: Nhỏ hơn sợi collagen, bắt màu nâu sẫm, chia nhánh, nối với nhau thành l-ới

TiêU bản số 10: sợi võng

Mô quan sát: Hạch bạch huyết

Ph-ơng pháp nhuộm: Ngấm muối bạc (AgNO3)

Yêu cầu:

1 Nhận biết đ-ợc đặc điểm cấu tạo của sợi võng

2 Phân biệt đ-ợc sợi võng với sợi chun và sợi collagen

TiªU b¶n sè 11: Sôn trong

M« quan s¸t: Sôn khÝ qu¶n (chã)

Sôn ngãn tay (thai ng-êi)

Ph-¬ng ph¸p nhuém: H.E

Yªu cÇu:

NhËn biÕt c¸c thµnh phÇn cña sôn trong: Mµng sôn, chÊt c¨n b¶n sôn, tÕ bµo sôn

vµ c¸ch ph¸t triÓn cña sôn

- ChÊt c¨n b¶n: Mµu tÝm nh¹t, mÞn, cã nhiÒu hèc s¸ng h×nh cÇu, h×nh trøng lµ æ sôn

- TÕ bµo sôn: Cã nh©n h×nh cÇu, mµu tÝm n»m trong æ sôn, xung quanh nh©n cã mét Ýt bµo t-¬ng mµu hång (cã æ sôn chøa 2 hoÆc 3 tÕ bµo sôn)

- Sù ph¸t triÓn cña sôn:

• TËp ®oµn tÕ bµo cïng dßng kiÓu trôc: TÕ bµo sôn xÕp thµnh hµng däc

• TËp ®oµn tÕ bµo cïng dßng kiÓu vßng: TÕ bµo sôn xÕp thµnh vßng trßn

Sôn ngãn tay thai ng-êi

1 M« sôn trong; 2 C¸c tÕ bµo sôn trong æ sôn;

3 ChÊt c¨n b¶n sôn; 4 Vïng cèt ho¸; 5 Mµng sôn; 6 X-¬ng cèt m¹c

H×nh vÏ

Sôn trong

1 Mµng sôn (líp ngoµi); 2 Mµng sôn (líp trong); 3 ChÊt c¨n b¶n sôn; 4 TËp ®oµn tÕ bµo sôn

cïng dßng kiÓu vßng; 5 TËp ®oµn tÕ bµo sôn cïng dßng kiÓu trôc

- Hệ thống Havers trung gian: Xen kẽ giữa hệ thống Havers điển hình, gồm những lá x-ơng hình cung, không có ống Havers

- Hệ thống cốt mạc trung gian: Gồm hệ thống những lá x-ơng nằm gần nhau nh- song song với nhau (th-ờng thấy rõ ở vùng ngoại vi thân x-ơng, nằm xen kẽ giữa những

1 ống Havers; 2 Các lá x-ơng đồng tâm của hệ thống Havers điển hình;

3 Tế bào x-ơng trong ổ x-ơng; 4 Hệ thống Havers trung gian; 5 Hệ thống cốt mạc trung gian

H×nh vÏ

TiªU b¶n sè 13: X-¬ng Havers Xèp

TrÝch thñ tõ: §Çu x-¬ng dµi (ng-êi hoÆc bß)

Ph-¬ng ph¸p nhuém: H.E (sau khi khö calci)

3 TÕ bµo nh©n khæng lå;

4 T¹o cèt bµo

Quan sát cấu trúc của cơ trơn

- Lớp cơ cắt dọc: Các sợi cơ có hình thoi, mỗi sợi cơ có một nhân hơi dài nằm ở giữa phần phình của tế bào, theo chiều dài của sợi cơ Những sợi cơ nằm t-ơng đối sát nhau, đầu nhọn của sợi cơ nọ ép vào phần phình của sợi cơ kia, tạo thành mô cơ trơn

- Lớp cơ cắt ngang: Các sợi cơ là những khối hơi tròn, màu đỏ t-ơi, kích th-ớc không đều nhau Có thể thấy nhân nằm ở giữa nếu sợi cơ đó bị cắt ngang qua nhân

TiêU bản số 15: cơ Vân

Trích thủ từ: L-ỡi chuột

Ph-ơng pháp nhuộm: H.E

Yêu cầu:

1 Nhận biết đ-ợc đặc điểm, cấu trúc của các sợi cơ vân cắt dọc và cắt ngang

2 Nhận biết đ-ợc cách cấu tạo của mô cơ vân

Cách quan sát:

1 Vật kính x10:

Tìm tầng cơ của l-ỡi chuột có màu đỏ t-ơi

- Những bó sợi cơ cắt dọc: Những sợi cơ dài, bị cắt đoan, xếp song song với nhau Mỗi sợi cơ chứa nhiều nhân, nhân hơi dài, nằm ở ngoại vi sát với màng bào t-ơng

và nằm theo chiều dài của sợi cơ

- Những bó sợi cơ cắt ngang: Mỗi sợi cơ là một khối tròn hay đa diện, đ-ờng kính khá lớn, có thể thấy nhân nằm ở phần ngoại vi của sợi cơ, nếu sợi đó bị cắt ngang qua nhân

2.Vật kính x40:

Quan sát cấu trúc của sợi cơ, đặc biệt là những vân ngang

- Sợi cơ cắt dọc: để nhìn rõ những vân ngang của sợi cơ cần điều chỉnh ốc vi cấp

sẽ thấy xuất hiện những vạch nhỏ hơi thẫm mầu, nằm song song với nhau vắt ngang qua sợi cơ

- Sợi cơ cắt ngang: Giống nh- xem ở vật kính x10 nh-ng chi tiết rõ hơn

1

cơ vân

A Tế bào cơ vân cắt dọc; B Tế bào cơ vân cắt ngang

1 Nhân tế bào cơ vân cắt ngang

H×nh vÏ

TiêU bản số 16: cơ Tim

Trích thủ từ: Chó hoặc thỏ

Ph-ơng pháp nhuộm: H.E

Yêu cầu:

1 Nhận biết đ-ợc cấu tạo của sợi cơ tim và mô cơ tim

2 Nhận biết đ-ợc các tế bào mô nút của tim

Cách quan sát:

1 Vật kính x10:

- Sợi cơ tim cắt dọc: Hình trụ dài, bào t-ơng bắt màu đỏ Có một nhân nằm giữa sợi cơ Sợi cơ có vân ngang nh-ng không rõ

- Sợi cơ tim cắt ngang: Hình tròn hoặc đa giác Có một nhân ở giữa sợi cơ

- Mô cơ tim: Những sợi cơ tim nối với nhau thành l-ới, trong các lỗ l-ới chứa mô liên kết và mạch

- Mô nút và các tế bào của mô nút:

+ Là những nhóm tế bào bắt mầu hồng nhạt

+ Kích th-ớc của những nhóm này không giống nhau

+ Kích th-ớc tế bào của mô nút lớn hơn sợi cơ tim

Tiªu b¶n sè 17 : mao m¹ch m¸u

Tiêu bản số 18 : động mạch cơ và tĩnh mạch cơ

Trích thủ từ: Chó

Ph-ơng pháp nhuộm: H.E

Yêu cầu:

1 Phân biệt 3 tầng áo của động mạch và phân biệt 3 lớp của áo trong động mạch

2 Phân biệt những điểm giống và khác nhau về cấu tạo giữa động mạch cơ và tĩnh mạch cơ cùng cỡ

Cách quan sát:

1 Vật kính x10: Động mạch cơ và tĩnh mạch cơ đều là những ống lớn Động mạch có

thành dày, lòng tròn đều Tĩnh mạch có thành mỏng, lòng rộng và không đều

2 Vật kính x 40:

a) Thành động mạch: Từ trong lòng mạch ra ngoài phân biệt 3 tầng áo:

- áo trong: + Nội mô ở trong cùng, thể hiện bằng một hàng nhân màu tím đậm, lồi vào lòng mạch

+ Mô liên kết d-ới nội mô: Mỏng, màu hồng nhạt

+ Màng ngăn chun trong là đ-ờng ngoằn ngoèo, màu hồng bóng

- áo giữa: Dày, cấu tạo chủ yếu bởi những sợi cơ trơn nằm sát nhau, xếp theo h-ớng vòng quanh lòng mạch; xen kẽ với cơ trơn là một ít sợi collagen và sợi chun nhỏ màu hồng bóng

- áo ngoài: Là mô liên kết chứa nhiều sợi chun lớn, những mạch máu nhỏ và một

bó sợi thần kinh

b) Thành tĩnh mạch: 3 tầng áo không biệt rõ

- áo trong: + Lớp nội mô thể hiện rõ

+ Lớp mô liên kết d-ới nội mô khó nhận vì rất mỏng và lẫn với mô liên kết của áo giữa

Hình vẽ

động mạch cơ

1 áo trong; 2 áo giữa; 3 áo ngoài

Tế bào nội mô Màng ngăn chun trong

Tiêu bản số 20: Hạch bạch huyết

Trích thủ từ: Chó

Ph-ơng pháp nhuộm: H.E

Yêu cầu:

1 Nhận biết cấu tạo và vị trí mô chống đỡ hạch

2 Nhận biết cấu tạo và vị trí các thành phần nhu mô hạch

+ Vỏ xơ bao quanh hạch, mặt ngoài có thể có mô mỡ

+ Vách xơ từ vỏ xơ tiến vào trong hạch

- Những trung tâm sinh sản (nang bạch huyết):

Là những đám tế bào khá lớn, hình cầu, gồm 2 vùng:

+ Trung tâm sáng

+ Ngoại vi bắt màu tím thẫm

- Những xoang d-ới vỏ và xoang trung gian (xoang quanh nang):

Là những khe sáng nhỏ, nằm xen giữa nang bạch huyết và vỏ xơ hoặc vách xơ

Là những đám tế bào, dài, màu tím thẫm

ở nhiều nơi chúng nối với nhau tạo thành một l-ới dây tế bào

- Những xoang tuỷ:

Là những hốc sáng nằm xen giữa dây tuỷ và dây xơ

2 Vật kính x40:

a) Trung tâm sáng của nang bạch huyết:

Phần lớn những tế bào là những nguyên bào lympho, nhân sáng và thấy rõ bào t-ơng

Ngoài ra có thể thấy t-ơng bào, bạch cầu đơn nhân lớn, tế bào võng

b) Ngoại vi của các nang bạch huyết và các dây tuỷ:

Đa số các tế bào là lympho bào

Các loại tế bào khác khó phân biệt

c) Những xoang d-ới vỏ xoang quanh nang và xoang tuỷ:

Là những mao mạch bạch huyết kiểu xoang

Thành của chúng chỉ có lớp tế bào nội mô, trong lòng có những tế bào võng và

H×nh vÏ

Tiêu bản số 21 : Lách

Trích thủ từ: Ng-ời hoặc chó

Ph-ơng pháp nhuộm: H.E

Yêu cầu:

1 Nhận biết cấu tạo và vị trí của các thành phần chống đỡ lách

2 Nhận biết cấu tạo của nhu mô lách

- Vách xơ: Từ vỏ xơ tiến vào nh- mô lách, có hình dáng khác nhau

- Dây xơ: Nằm xen giữa các thành phần của nhu mô lách

b) Tuỷ trắng:

Gồm những tiểu thể Malpighi Đó là những trung tâm sinh sản chứa 1, 2 hoặc 3 tiểu động mạch trung tâm Những tiểu thể Malpighi nằm rải rác khắp nhu mô lách

c) Tuỷ đỏ:

ở khắp nhu mô lách (trừ những nơi có tiểu thể Malpighi) Tuỷ đỏ gồm:

- Những dây Billroth: Là những dây tế bào, nối với nhau thành l-ới

- Những xoang tĩnh mạch: Là những khe sáng hẹp xen giữa các dây Billroth ở vật kính x40 có thể thấy đ-ợc tế bào nội mô lợp thành mạch và huyết cầu trong xoang tĩnh mạch