Xây dựng quy trình định lượng citral trong tinh dầu xả chanh bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao ghép đầu dò dãy diod

KHOA Y DƯỢC dP ======  ====== rm ac y, VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI ne an NGUYỄN THỊ HUÊ ed ici XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG M CITRAL TRONG TINH DẦU SẢ CHANH BẰNG of PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG Sc ho ol CAO GHÉP ĐẦU DÒ DÃY DIOD NGÀNH DƯỢC HỌC Co py rig ht @ KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC HÀ NỘI - 2019 dP rm ac y, VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC ======  ====== an NGUYỄN THỊ HUÊ ici ne XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ed CITRAL TRONG TINH DẦU SẢ CHANH BẰNG M PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG ol of CAO GHÉP ĐẦU DÒ DÃY DIOD NGÀNH DƯỢC HỌC KHOÁ: QHY.2014 rig ht @ Sc ho KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Co py NGƯỜI HƯỚNG DẪN: TS NGUYỄN THỊ THANH BÌNH HÀ NỘI - 2019 rm ac y, VN U LỜI CẢM ƠN Trước tiên, xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới Tiến sĩ Nguyễn Thị Thanh Bình – Bộ mơn Hố Dược Kiểm nghiệm thuốc, Khoa Y - Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, người tận tình hướng dẫn, bảo giúp đỡ tơi suốt q trình thực khóa luận Tôi xin cảm ơn thầy Bộ môn Hoá Dược Kiểm nghiệm thuốc, Khoa Y - Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, tạo điều kiện để tơi thực khóa luận an dP Tôi xin gửi lời cảm ơn tới Ban Chủ nhiệm, Phòng ban Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội tồn thể thầy giáo Khoa cho kiến thức quý báu suốt năm học tập, sinh hoạt rèn luyện Khoa Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ici ne Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình bạn bè bên cạnh, động viên lúc khó khăn q trình thực khóa luận Hà Nội, tháng 05 năm 2019 Sinh viên Nguyễn Thị Huê rm ac y, VN U CHỮ VIẾT TẮT Acetonitril BP Dược điển Anh Quốc (British Pharmacopoeia) DAD Máy đo quang (Diode Array Detector) EP Dược điển châu Âu (European pharmacopoeia) GC Sắc ký khí (Gas Chromatography) HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High - performance liquid chromatography) dP ACN Hội nghị quốc tế hài hồ hố thủ tục đăng ký dược phẩm sử dụng cho người (International conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human use) LOD Giới hạn phát (Limit of detection) LOQ Giới hạn định lượng (Limit of quantitation) MS Phương pháp khối phổ (Phương pháp khối phổ) NIR Quang phổ cận hồng ngoại RSD Độ lệch chuẩn tương đối (Relative standard deviation) USP Dược điển Hoa Kỳ (United States Pharmacopoeia) Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ici ne an ICH Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod rm ac y, VN U MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG - TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chung sả chanh 1.2 Giới thiệu chung citral 1.2.1 Nguồn gốc 1.2.2 Cấu trúc tính chất dP 1.2.3 Công dụng 1.2.4 Các phương pháp định lượng citral an 1.3 Thẩm định quy trình phân tích ne 1.3.1 Tính đặc hiệu ici 1.3.2 Miền giá trị 10 ed 1.3.3 Tính tuyến tính 10 M 1.3.4 Giới hạn phát 11 of 1.3.5 Giới hạn định lượng 11 1.3.6 Độ 12 ol 1.3.7 Độ xác 13 Sc ho CHƯƠNG - NGUYÊN VẬT LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Nguyên vật liệu, trang thiết bị 14 @ 2.1.1 Dung môi, hoá chất 14 ht 2.1.2 Trang thiết bị 14 rig 2.2 Phương pháp nghiên cứu 14 py 2.2.1 Tối ưu hoá điều kiện sắc ký 14 Co 2.2.2 Thẩm định tính đặc hiệu 15 2.2.3 Thẩm định tính tuyến tính xác định miền giá trị 15 Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod 2.2.4 Xác định giới hạn phát giới hạn định lượng 15 rm ac y, VN U 2.2.5 Thẩm định độ 15 2.2.6 Thẩm định độ xác 15 2.2.7 Định lượng citral tinh dầu sả chanh 16 CHƯƠNG - KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 17 3.1 Xác định điều kiện phân tích 17 3.1.1 Khảo sát hệ dung môi 17 3.1.2 Xác định bước sóng hấp thụ 19 dP 3.1.3 Điều kiện sắc ký 20 an 3.2 Tính đặc hiệu 21 ne 3.3 Tính tuyến tính miền giá trị 23 ici 3.3.1 Đối với đồng phân neral 23 3.3.2 Đối với đồng phân geranial 24 ed 3.4 Giới hạn phát giới hạn định lượng 26 M 3.5 Độ 26 of 3.5.1 Đối với đồng phân neral 26 ol 7.5.2 Đối với đồng phân geranial 27 Sc ho 3.6 Độ lặp lại 27 3.6.1 Đối với đồng phân neral 28 @ 3.6.2 Đối với đồng phân geranial 29 3.7 Độ xác trung gian 29 rig ht 3.7.1 Đối với đồng phân neral 30 3.7.2 Đối với đồng phân geranial 31 py 3.8 Định lượng citral số mẫu tinh dầu sả chanh 31 Co 3.8.1 Sản phẩm A 31 3.8.2 Sản phẩm B 32 Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod 3.8.3 Sản phẩm C 33 rm ac y, VN U 3.8 Bàn luận 35 CHƯƠNG - KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 38 4.1 Kết luận 38 4.2 Kiến nghị 39 Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ici ne an dP TÀI LIỆU THAM KHẢO Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod rm ac y, VN U DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo Neral (A) Geranial (B) Hình 3.1 Sắc ký đồ dung dịch citral chuẩn nồng độ 25 µg/ml bước sóng 233 nm, hệ dung môi ACN : H2O = 70 : 30 (v/v/v) 17 Hình 3.2 Sắc ký đồ dung dịch citral chuẩn nồng độ 25 µg/ml bước sóng phát 233 nm với hệ dung môi ACN : MeOH : H2O = 47 : 10 : 43 (v/v/v) 18 Hình 3.3 Phổ hấp thụ UV-VIS Neral (A) Geranial (B) 19 an dP Hình 3.4 Sắc ký đồ dung dịch citral chuẩn nồng độ 25 µg/ml điều kiện sắc ký lựa chọn 20 Hình 3.5 Phổ hấp thụ cực đại UV-VIS geraniol 21 ici ne Hình 3.6 Sắc ký đồ dung dịch chứa 20 µg/ml citral µg/ml geraniol bước sóng phát 200 nm 21 M ed Hình 3.7 Sắc ký đồ dung dịch chứa 20 µg/ml citral µg/ml geraniol bước sóng phát 242 nm 22 of Hình 3.8 Đồ thị biểu diễn tương quang nồng độ dung dịch diện tích pic đồng phân neral 24 Sc ho ol Hình 3.9 Đồ thị biểu diễn tương quang nồng độ dung dịch diện tích pic đồng phân geranial 25 Hình 3.10 Kết xác định độ lặp lại phương pháp đồng phân neral 28 32 Hình 3.12 Sắc ký đồ dung dịch mẫu B nồng độ 100 µg/ml 33 Hình 3.13 Sắc ký đồ dung dịch mẫu C nồng độ 50 µg/ml 34 Co py rig ht @ Hình 3.11 Sắc ký đồ dung dịch mẫu A nồng độ 100 µg/ml Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod rm ac y, VN U DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Tên gọi sả chanh số nước Bảng 1.2 Hàm lượng citral số loại tinh dầu Bảng 3.1 Thông số pic dung dịch citral chuẩn nồng độ 25 µg/ml bước sóng phát 233 nm với hệ dung môi ACN : H2O = 70 : 30 (v/v) 18 Bảng 3.2 Thông số pic dung dịch citral chuẩn nồng độ 25 µg/ml bước sóng phát 233 nm với hệ dung mơi ACN : MeOH : H2O = 47 : 10 : 43 (v/v/v) 19 20 an dP Bảng 3.3 Thông số pic dung dịch citral chuẩn nồng độ 25 µg/ml điều kiện sắc ký lựa chọn ne Bảng 3.4 Thông số pic dung dịch citral 20 µg/ml dung dịch geraniol µg/ml bước sóng phát 200 nm 22 ed ici Bảng 3.5 Kết phân tích hồi quy mối tương quan nồng độ dung dịch diện tích pic đồng phân neral 23 M Bảng 3.6 Kết phân tích hồi quy mối tương quan nồng độ dung dịch diện tích pic đồng phân geranial 25 26 Bảng 3.8 Kết xác định tỷ lệ phục hồi đồng phân geranial 27 ol of Bảng 3.7 Kết xác định tỷ lệ phục hồi đồng phân neral Sc ho Bảng 3.9 Kết xác định độ lặp lại phương pháp đồng phân geranial 29 @ Bảng 3.10 Kết xác định độ xác trung gian phương pháp đồng phân neral 30 35 Bảng 4.1 Các yêu cầu đảm bảo quy trình định lượng neral 38 Bảng 4.2 Các yêu cầu đảm bảo quy trình định lượng geranial 39 Co py rig ht Bảng 3.11 So sánh số phương pháp định lượng citral Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ici ne an dP rm ac y, VN U Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod 3.7.1 Đối với đồng phân neral 20 15,94 15,20 16,10 6,34 5,98 of 10 1,97 2,05 Sc ho 3,05 6,16 0,18 2,92 2,04 0,06 3,00 dP 2,09 0,48 15,75 6,17 ol RSD (%) M SD Diện tích pic trung bình (mAU.min) an 50 Diện tích pic (mAU.min) ne Ngày ici Nồng độ dung dịch (µg/ml) ed STT rm ac y, VN U Bảng 3.10 Kết xác định độ xác trung gian phương pháp đồng phân neral Co py rig ht @ Kết cho thấy giá trị RSD neral nhỏ 3,05% 30 Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod 3.7.2 Đối với đồng phân geranial 20 28,29 28,98 29,01 8,97 8,47 of 10 3,12 2,98 Sc ho 1,42 8,77 0,27 3,06 3,05 0,07 2,31 dP 3,04 0,41 28,76 8,89 ol RSD (%) M SD Diện tích pic trung bình (mAU.min) an 50 Diện tích pic (mAU.min) ne Ngày ici Nồng độ dung dịch (µg/ml) ed STT rm ac y, VN U Bảng Kết xác định độ xác trung gian phương pháp đồng phân geranial Kết cho thấy giá trị RSD geranial nhỏ 3,05% @ 3.8 Định lượng citral số mẫu tinh dầu sả chanh ht 3.8.1 Sản phẩm A Co py rig Pha loãng dung dịch mẹ 125 lần dung môi ACN : H2O (60:40, v/v) thu dung dịch có nồng độ tinh dầu 100 µg/ml Sắc ký dung dịch Kết thể hình 3.11: 31 Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod dP rm ac y, VN U Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod an Hình 3.11 Sắc ký đồ dung dịch mẫu A nồng độ 100 µg/ml ne Trên sắc ký đồ ghi nhận xuất pic: Sc ho ol of M ed ici Pic có thời gian lưu trùng với thời gian lưu neral Diện tích pic 8,231 mAU.min tương ứng với nồng độ 24,85 µg/ml Như mẫu A chứa 24,85% neral Pic có thời gian lưu trùng với thời gian lưu geranial Diện tích pic 10,138 mAU.min tương ứng với nồng độ 21,54 µg/ml Như mẫu A chứa 21,54% geranial Như tổng hàm lượng citral mẫu A 46,39 µg/ml, tương đương với 46,39% 3.8.2 Sản phẩm B Co py rig ht @ Pha loãng dung dịch mẹ 125 lần dung môi ACN : H2O (60:40, v/v) thu dung dịch có nồng độ tinh dầu 100 µg/ml Sắc ký dung dịch Kết thể hình 3.12: 32 Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod dP rm ac y, VN U Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod an Hình 3.12 Sắc ký đồ dung dịch mẫu B nồng độ 100 µg/ml ne Trên sắc ký đồ ghi nhận xuất pic: Sc ho ol of M ed ici Pic có thời gian lưu trùng với thời gian lưu neral Diện tích pic 12,793 mAU.min tương ứng với nồng độ 37,35 µg/ml Như mẫu B chứa 37,35% neral Pic có thời gian lưu trùng với thời gian lưu geranial Diện tích pic 17,738 mAU.min tương ứng với nồng độ 35,96 µg/ml Như mẫu B chứa 35,96% geranial Như tổng hàm lượng citral mẫu B 73,31 µg/ml, tương đương với 73,31% 3.8.3 Sản phẩm C Co py rig ht @ Pha loãng dung dịch mẹ 150 lần dung môi ACN : H2O (60:40, v/v) thu dung dịch có nồng độ tinh dầu 50 µg/ml Sắc ký dung dịch điều kiện chọn Kết thể hình 3.13: 33 Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod dP rm ac y, VN U Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod an Hình 3.13 Sắc ký đồ dung dịch mẫu C nồng độ 50 µg/ml ne Trên sắc ký đồ ghi nhận xuất pic: Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ici Pic có thời gian lưu trùng với thời gian lưu neral Diện tích pic 6,017 mAU.min tương ứng với nồng độ 18,78 µg/ml Như mẫu C chứa 37,56% neral Pic có thời gian lưu trùng với thời gian lưu geranial Diện tích pic 8,795 mAU.min tương ứng với nồng độ 18,69 µg/ml Như mẫu C chứa 37,38% geranial Như tổng hàm lượng citral mẫu C 36,47 µg/ml, tương đương với 74,94% 34 Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod 3.8 Bàn luận rm ac y, VN U So sánh phương pháp xây dựng với số phương pháp định lượng citral Bảng 3.11 So sánh số phương pháp định lượng citral R2 Thông số Tỷ lệ phục RSD RSD độ hồi độ lặp lại xác trung gian (%) LOQ (µg/ml) (µg/ml) (%) LOD NIR [17] Pha thuận [50] _ ≤ 1,00 _ _ ≤ 1,37 _ _ _ 0,062 0,205 0,059 0,198 M ed 0,99 100±2 ≤ 1,74 ≤ 1,93 of ml/phút, thể tích tiêm mẫu 15 µl, bước sóng phát 233nm, miền giá trị 3-100 µg/ml citral [49] Neral 100±2 (RSD %) ici 0,99 Pha đảo, sử dụng hệ dung môi ACN : H2O = 70 : 30, tốc độ dòng 100±2 ne _ an dP Phương pháp 0,99 Neral 0,99 _ _ _ _ _ Geranial 0,99 _ _ _ _ _ HPLC Sc ho ol Geranial @ Pha đảo, hệ dung môi ACN : H2O : ht CH3OH=47:43:10 , tốc độ dịng 1,4 Co py rig ml/phút, thể tích tiêm mẫu 15 µl , bước sóng phát 240 nm, miền giá trị 50-90 35 Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod rm ac y, VN U µg/ml citral [51] Neral 0,99 100±2 ≤ 2,34 dung môi ACN : H2O:CH3OH = 47 : 43 :10 , tốc độ dòng ml/phút, thể tích tiêm mẫu 10 µl , bước sóng Geranial 0,99 100±2 ≤ 2,48 ≤ 3,05 Phương pháp xây dựng: pha đảo, hệ 0,33 0,30 1,00 dP ≤ 3,06 0,10 ici Chú thích: ( - ) chưa xác định ne an phát 240 nm, miền giá trị 10 - 100 µg/ml citral M ed Từ bảng kết so sánh cho thấy phương pháp xây dựng có độ xác, độ lặp lại thấp so với phương pháp khác Tuy nhiên phương pháp xây dựng lại có ưu điểm vượt trội như: Sc ho ol of - So với phương pháp NIR: phương pháp xây dựng đại hơn, có khả định lượng đồng thời đồng phân citral tiến hành xác định thêm thông số (độ lặp lại, LOD LOQ) @ - So với phương pháp HPLC pha thuận: phương pháp xây dựng có khả định lượng đồng thời đồng phân citral có tính đặc hiệu hơn, tiến hành xác định thêm thơng số (độ xác trung gian, LOD LOQ) Co py rig ht - So với phương pháp HPLC pha đảo khác: phương pháp xây dựng xác định đầy đủ thông số (tỷ lệ phục hồi, độ xác trung gian, độ lặp lại, LOD, LOQ) có miền giá trị rộng 36 Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Chất lượng mẫu tinh dầu sả chanh rm ac y, VN U Như phương pháp xây dựng có ưu điểm bật: có khả tách chất hồn tồn nên tính đặc hiệu cao, độ xác cao nhạy với nồng độ nhỏ Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ici ne an dP Qua kết định lượng citral ba sản phẩm tinh dầu sả chanh thị trường Kết xác định hàm lượng citral sản phẩm tương đương với hàm lượng citral ghi nhãn bao bì sản phẩm Sản phẩm A B có hàm lượng citral 73,31% 74,94%, đạt yêu cầu chất lượng hàm lượng citral tinh dầu sả chanh Sản phẩm C có hàm lượng citral thấp (46,39%), khơng đạt yêu cầu chất lượng hàm lượng citral tinh dầu sả chanh 37 Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod rm ac y, VN U CHƯƠNG - KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận dP Dựa tài liệu thẩm định quy trình phân tích ICH, nghiên cứu xây dựng thẩm định thành công quy trình định lượng đồng thời hai đồng phân hình học citral hệ thống HPLC - DAD với thông số: pha tĩnh silicagel C18 cột μm, 4,6×250 mm, pha động nước : acetonitril : nước : methanol tỷ lệ 43 : 47 : 10, thể tích tiêm mẫu 10 µl, thời gian sắc ký 25 phút, tốc độ dòng ml/phút, đầu dò DAD bước sóng 242 nm ne an Bằng trình thực nghiệm chứng tỏ quy trình định lượng đồng thời hai đồng phân hình học citral đạt yêu cầu tính đặc hiệu, tính tuyến tính, độ độ xác (bảng 4.1 bảng 4.2) theo hướng dẫn chung ICH ici - Đối với neral ed Bảng 4.1 Các yêu cầu đảm bảo quy trình định lượng neral M Miền giá trị Độ lặp lại 100±2% Sc ho Độ 0,9989 ol Hệ số tương quan R2 y = 0,3619x - 0,7782 of Tính tuyến tính – 50 µg/ml RSD ≤ 2,34% RSD ≤ 3,05% @ Độ xác trung gian 0,369823 Co py rig ht Độ lệch chuẩn S 38 Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod - Đối với geranial rm ac y, VN U Bảng 4.2 Các yêu cầu đảm bảo quy trình định lượng geranial – 50 µg/ml Miền giá trị y = 0,5153x - 0,838 Tính tuyến tính 0,9996 Hệ số tương quan R2 100±2% Độ RSD ≤ 2,48% Độ lặp lại RSD ≤ 3,06% dP Độ xác trung gian 0,420443 an Độ lệch chuẩn S ne Phương pháp ứng dụng để định lượng citral mẫu tinh dầu sả chanh thị trường ici 4.2 Kiến nghị Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed Ứng dụng phương pháp để góp phần vào việc kiểm sốt chất lượng tinh dầu sả chanh thị trường Phương pháp sở để lựa chọn nguyên liệu bào chế sản phẩm chống côn trùng từ tinh dầu sả chanh 39 Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ici ne an dP rm ac y, VN U Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Tiếng Việt [1] Bộ Y tế (2012), Kiểm nghiệm thuốc (dùng cho đào tạo dược sĩ đai học), Nhà xuất giáo dục Việt Nam, pp.135-184 [2] rm ac y, VN U TÀI LIỆU THAM KHẢO Viện kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm (2010), Thẩm định phương pháp phân tích hố học vi sinh vật, NXB Khoa học Kỹ thuật,pp.10-59 Vụ khoa học đào tạo – Bộ Y tế (2005), Kiểm nghiệm dược phẩm, [3] dP NXB Y học, pp.68-84 Tiếng anh Adams, R Identification of Essential Oils Compounds by Gas an [4] Chromatography – Mass Spectroscopy Allured Publishing Co : IL, 1997 Barbier; Bouveault Comp Rend 1894, 118, 983, 1050 ; 1895, 121, ne [5] Bassolé, I H., A Lamien-Meda, B Bayala, L.C Obame, A J Ilboudo, ed [6] ici 1159; 1896, 122, 293 18(12): 1070-1074 Bermejo, P.; Abad, M.; Silvon Sen, A.; Sonchez Contreras, S.; Diaz of [7] M C Franz, J Novak, R C Nebié, M H Dicko, 2011 Phytomedicine, lanza, A Life Sci 1998, 63, 1147- 1156 Bertram Schimmel’s Report 1888, 17 [9] Bilal Yilmaz, Emrah Alkan (2015), “Spectrofluorometric and Sc ho ol [8] Spectrofluorometric and UV Spectrofluorometric Methods for the [10] Chenghan Mei, Bin Li, et al (2015), "Liquid chromatography-tandem @ mass spectrometry for the quantification of flurbiprofen in human ht plasma and its application in a study of bioequivalence", Journal of rig Chromatography B, 993-994, pp.69-74 py [11] Determination of Flurbiprofen in Pharmaceutical Preparations”, Journal of Pharmaceutical Analysis, 4(4) Co [12] Dodge Amer Chem J 1890, 12, 553 Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod [13] Epstein, W.; McGee, L.; Poulter,C.; Marsh, J Chem Eng Data 1976, rm ac y, VN U 21, 500 [14] European Medicines Agency (2011), Guideline on bioanalytical method validation, pp.9-10 [15] Fenaroli, G., Furia, T.E., Bellanca, N., Handbook of Flavor Ingredients, ISBN 0-87819-532-7 [16] Gbenou, J D., J F Ahounou, H B Akakpo, A Laleye, E Yayi, F Gbaguidi, L BabaMoussa, R Darboux, P Dansou, M Moudachirou, S O Kotchoni, 2013 Molecular Biology Reports, 40 (2): 1127-1134 dP [17] Hattori, T.; Ito, M.; Suzuki, Y Nippon Yakurigaku Zasshi 1991, 97, 13-21 [18] Husek, P.; Mack, K J Chromatgr 1975, 133, 139-230 an [19] Jennings, W.; Shibamoto, T Qualitative Analysis of Flavor and Fragrance Volatile by Capillary Gas Chromatography ne Press: New York, 1980 ici [20] Joulain, D.; Konig, A.; Verlag, E Academic The Atlas of Spectral Data of ed Sesquiterpene Hydrocarbons Hamburg, Germany, 1998 [21] Khan, M S., I Ahmad, 2012 Journal of Ethnopharmacology, 140 (2): 416-423 M [22] Kokane Vikrant , Naik Sonali (2014), “Formulation and evaluation of of topical flurbiprofen gel using different gelling agents”, World Journal ol of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 3(9),pp 654-663 [23] Kruger; Stiehl; Tiemann J Pr Chem 1898, 58, 51; 1899, 59, 497 Sc ho [24] Kuwahara, Y., Suzuki, H., Matsumoto, K & Wada, Y (1983) “Pheromone study on acarid mites XI Function of mite body as geometrical isomerization and reduction of citral (the alarm @ pheromone) Carpoglyphus lactis” Appl Entomol Zool 18: 30–39 ht [25] Lawless, J., The Illustrated Encyclopedia of Essential Oils, ISBN 1- rig 85230-661-0 [26] Libbey, L.; Essent, J Oil Res 1991, 3, 192 Co py [27] Maíra Maciel Mattos de Oliveiraa, Danilo Florisvaldo Brugneraa, Maria das Graỗas Cardosob, Eduardo Alvesc and Roberta Hilsdorf Piccoli, 2010 Food Control, 2010 21(4): 549-553 Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod [28] Motoo, Y.; Sawabu, N Cancer Lett 1994, 86, 91-95 rm ac y, VN U [29] Murray, Kermit K., et al (2013), "Definitions of terms relating to mass spectrometry (IUPAC Recommendations 2013)", Pure and Applied Chemistry, 85(7),1515-1609 [30] Onawunmi, G.O (1989) “Evaluation of the antimicrobial activity of citral” Lett Appl Microbial (3): 105–108 [31] Pala-Paul, J.; Perez-Alonso, M.; Velasco-Negueruela, A.; Sanz, J “Analysis by Gas Chromatography – Mass Spectroscopy of the Volatile Components of Ageratina Adenophora Spreng., Growing in dP the Canary Islands.” J of Chromatography 2002, 947, 327-331 [32] Parry, E.J The Chemistry of Essential Oils and Artificial Perfumes an 4th Ed.; Scott, Greenwood and Son: London, UK, 1921; Vol 1, pp 63, 270, 71-73, 270 ne [33] Robacker, D.C & Hendry, L.B (1977) “Neral and geranial: ici components of the sex pheromone of the parasitic wasp, Itoplectis ed conquisitor” J Chem Ecol (5): 563–577 M [34] Schimelpfenig, C.W J Chem Ed 1978, 55, 306 [35] Semmler, F W Ber Dtsch Chem Ges 1891, 24, 201 of [36] Semmler, F.W Ber Dtsch Chem Ges 1890, 23, 2965-3556 ol [37] Simonsen, J.L The Terpenes 2nd Ed Cambridge University Press: Cambridge, 1947; Vol 1, pp 42 - 45, 70 - 85 Sc ho [38] Singh, P., R Shukla, A Kumar, B Prakash, S Singh, N K Dubey, 2010 Mycopathologia, 170(3): 195-202 [39] Sofowora, A Medicinal Plants and Traditional Medicine in Africa @ John Wiley & Sons Inc : New York, 1982; pp 71-72 ht [40] Survey and health assessment of chemical substances in massage oils rig Archived 28 June 2007 at the Wayback Machine [41] Swinger, A.; Silverstein, R Aldrich Chemical Co Milwaukee, WI, 1981 Co py [42] The Europaean Pharmacopieal Commission (2010), Pharmacopoeia Europaea 7th Edition vol 2, pp.2056-2057 Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod Xay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diodXay.dung.quy.trinh.dinh.luong.citral.trong.tinh.dau.xa.chanh.bang.phuong.phap.sac.ky.long.hieu.nang.cao.ghep.dau.do.day.diod