Khổ sâm bắc là dược liệu được sử dụng từ lâu trong y học cổ truyền phương đông, để chữa nhiều bệnh như chống loạn nhịp, các chứng viêm, xuất huyết tiêu hoá, lỵ và ký sinh trùng1-4.. trồn
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINHBỘ Y TẾ PHAN NGUYỄN TRƯỜNG THẮNG TIÊU CHUẨN HÓA DƯỢC LIỆU, CAO ALKALOID VÀ CAO FLAVONOID TỪ KHỔ SÂM BẮC (Sophora flavescens Ait.) TRỒNG TẠI ĐẮK NÔNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ Y TẾ PHAN NGUYỄN TRƯỜNG THẮNG TIÊU CHUẨN HÓA DƯỢC LIỆU, CAO ALKALOID VÀ CAO FLAVONOID TỪ KHỔ SÂM BẮC (Sophora flavescens Ait.) TRỒNG TẠI ĐẮK NÔNG NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 62.72.04.10 LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS NGUYỄN NGỌC VINH PGS.TS TRẦN ANH VŨ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2023 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận án trung thực, khách quan chưa công bố nơi Tác giả luận án i MỤC LỤC Trang Tổng quan thực vật học Khổ sâm bắc Tổng quan thành phần hóa học Khổ sâm bắc Chiết xuất phân lập thành phần flavonoid alkaloid từ Khổ sâm bắc 13 Các phương pháp phân tích flavonoid alkaloid Khổ sâm bắc 27 Tác dụng dược lý công dụng Khổ sâm bắc 33 Chuẩn hóa dược liệu yêu cầu chất lượng Khổ sâm bắc theo Dược điển hành 39 Giới thiệu cao dược liệu .43 Thiết kế nghiên cứu 48 Đối tượng nghiên cứu 49 Thời gian địa điểm nghiên cứu .49 Cỡ mẫu nghiên cứu .49 Xác định biến số độc lập phụ thuộc .50 Phương pháp công cụ đo lường, thu thập số liệu 50 Quy trình nghiên cứu 53 Phương pháp phân tích liệu 75 ii Xây dựng quy trình chiết xuất, phân lập tinh chế alkaloid, flavonoid từ rễ Khổ sâm bắc 76 Thiết lập chất đối chiếu 104 Xây dựng quy trình định tính, định lượng alkaloid, flavonoid rễ Khổ sâm bắc, cao chiết từ rễ Khổ sâm bắc .114 Đánh giá tác dụng sinh học cao toàn phần, cao alkaloid, cao flavonoid chất phân lập .133 Tiêu chuẩn hóa cao chiết dược liệu Khổ sâm bắc 138 Xây dựng quy trình chiết xuất, phân lập tinh chế từ Khổ sâm bắc 142 Đánh giá chất đối chiếu 149 Xây dựng quy trình định tính, định lượng alkaloid, flavonoid rễ Khổ sâm bắc, cao chiết từ rễ Khổ sâm bắc .150 Đánh giá tác dụng sinh cao chiết hoạt chất từ Khổ sâm bắc 157 Tiêu chuẩn hóa cao chiết dược liệu Khổ sâm bắc 161 iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ THUẬT NGỮ ANH – VIỆT Ký hiệu, chữ Nghĩa tiếng Việt Từ nguyên viết tắt AChE Acetylcholinesterase Acetylcholinesterase CL Chloroform Cloroform 13 Carbon nuclear magnetic resonance Phổ carbon DEPT Distortionless Enhancement by C-NMR Polarization Transfer DMEM Dulbecco's modified Eagle's DMEM DPPH 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl EA Ethyl acetate Ethyl acetat EC50 Half maximal effective concentration Nồng độ hiệu tối đa nửa EMA European Medicines Agency Cơ quan Quản lý thuốc Châu Âu ESI Electrospray Ionization Ion hóa phun điện FeCl3 Ferric Chloride Sắt (III) clorid H2SO4 Sulfuric acid Acid sulfuric HKCMMS The Hong Kong Chinese Materia Tiêu chuẩn dược liệu Hồng Kông Medica Standards Trung Quốc Proton nuclear magnetic resonance Phổ proton High Performance Liquid Sắc ký lỏng hiệu cao H-NMR HPLC Chromatography HSQC Hetetonuclear Single Quantum Coherence HTCO Hoạt tính chống oxi hóa Hoạt tính chống oxi hóa iv Ký hiệu, chữ Từ nguyên Nghĩa tiếng Việt viết tắt IC50 The half-maximal inhibitory Nồng độ tối đa ức chế nửa concentration IUPAC International Union of Pure and Hiệp hội Quốc tế Hóa học Applied Chemistry túy ứng dụng LC Liquid Chromatography Sắc ký lỏng MDA Malondialdehyd Malondialdehyd MS Mass Spectrometry Khối phổ MTT 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyl tetrazolium bromid) diphenyl tetrazolium bromid) N Number of therical plates Số đĩa lý thuyết NA Not analysis Không phân tích NH3 Amoniac Amoniac RSD Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tương đối Rt Retention time Thời gian lưu tương đối SD Standard Deviation Độ lệch chuẩn SDH Succinat dehydrogenase succinat dehydrogenase SKLM Sắc ký lớp mỏng Sắc ký lớp mỏng SPE Solid Phase Extraction Chiết pha rắn Tf, As Tailing factor, Asymmetry Hệ số kéo đuôi, hệ số bất đối xứng UV Ultraviolet Ánh sáng tử ngoại v DANH MỤC CÁC BẢNG Trang vi vii 161 IC50 8,11 μM gợi ý nhóm lavadulyl đóng vai trò chủ chốt tác động ức chế enzym cholinesterase hợp chất101 Nghiên cứu Hyun Ah Jung cộng (2011) cho thấy sophoflavescenol, icaritin, demethylanhydro-icaritin, 8-C lavadulrylkaempferol, kaempferol phân lập từ Khổ sâm bắc thể khả ức chế enzym acetylcholinesterase với giá trị IC50 8,37; 6,47; 6,67; 5,16 3,31 μM.102 Những báo cáo cho thấy khả ức chế enzym BACE1 cao chiết chất phân lập từ rễ Khổ sâm bắc100, 101, 102 Như vậy, với kết thu từ đề tài gợi ý tiềm cao chiết Khổ sâm bắc phòng và/hoặc điều trị bệnh sa sút trí tuệ cần thực thêm nghiên cứu vai trị, chế tác động chất có rễ Khổ sâm bắc tác động để có sở khoa học cách đầy đủ Tiêu chuẩn hóa cao chiết dược liệu Khổ sâm bắc Việc kiểm tra chất lượng dược liệu ưu tiên hàng đầu ngành sản xuất thuốc từ dược liệu sở điều trị dược liệu Ở Trung Quốc, chuyên luận Sophora flavescens từ lâu xuất ấn Dược điển Cộng hòa Nhân dân Trung Hoa từ năm 1977, hay Dược điển Hàn Quốc năm 2012 Dược điển Hồng Kông xuất năm 2012, Dược điển Nhật ấn 16 mà chất đánh dấu kiểm soát chất lượng alkaloid gồm: matrin, sophoridin oxymatrin Đây tiền đề để luận án đề xuất đưa chuyên luận vào Dược điển Việt Nam VI dược liệu sử dụng ngày nhiều Tổng lượng matrin, oxymatrin sophoridin đề xuất không 1,9 % tương đương với Dược điển Hồng Kông cao Dược điển Trung Quốc việc kiểm soát thêm hàm lượng sophoridin Bản đề xuất vào dược điển Việt Nam VI có thêm phần kiểm soát chất lượng hàm lượng flavonoid gồm hoạt chất isoxanthohumol, kurarinon sophorafalavnon G với mức kiểm sốt khơng vượt q giới hạn tổng kurarinon sophorafalavnon G, chất ảnh hưởng trực tiếp đến sức khỏe người sử dụng Hàm lượng độc người 1,16 mg/kg người kurarinon 0,60 mg/kg 162 người sophoraflavanon G Nếu chọn trọng lượng người bình thường 50 kg, liều an tồn sử dụng Khổ sâm bắc tương ứng 58 mg kurarinon 30 mg sophoraflavanon G Với kết theo dõi động thái tích lũy kurarinon khoảng 2,1 %, sophoraflavanon G khoảng 0,8 % Để đảm bảo ngưỡng an toàn, luận án đề xuất mức không 3,0 % cho kurarinon không 1,0 % cho sophoraflavanon G Đồng thời, chuyên luận đề xuất nói rõ cấu tạo vi phẫu soi bột rễ Khổ sâm bắc Chỉ tiêu hàm lượng chất chiết nước đề xuất để kiểm soát hoạt chất tan nước alkaloid, polysacharid, phenolic acid chất tan khác, luận án đề xuất mức chất lượng khơng 24,0 % Đồng thời, đề tài đề xuất chất chiết ethanol để kiểm soát hoạt chất flavonoid, kumarin, lignin, dầu béo, … mức đề xuất khơng 20,0 % Hai tiêu này, luận án đề xuất tương tự theo dược điển Hồng Kông chuyên luận Sophora flavescens Hiện tại, Dược điển Việt Nam V có chuyên luận Khổ sâm (Sophora tonkinensis Gagnep) họ Thầu dầu, có phận sử dụng cành phơi sấy khô Công dụng chủ yếu nhiệt, tiêu độc, sát trùng Để tránh nhầm lẫn với chuyên luận đề xuất, luận án đề nghị tên gọi rễ Sophora flavescens chuyên luận Dược điển Việt Nam dược liệu Khổ sâm bắc Khổ sâm cho rễ 163 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Đề tài thực số tính sau: - Đã thiết lập chất đối chiếu chứng minh có hoạt tính sinh học: matrin, oxymatrin, kurarinon, isoxanthohumol, sophoraflavanon G - Đã xây dựng thẩm định quy trình định tính, định lượng đồng thời flavonoid: isoxanthohumol, kurarinon, sophoraflavanon G rễ Khổ sâm bắc, cao flavonoid phương pháp HPLC với đầu dò PDA - Bước đầu xây dựng, tiêu chuẩn hóa dược liệu Khổ sâm bắc, cao alkaloid cao flavonoid từ dược liệu Khổ sâm bắc làm sở để đưa vào Dược điển Việt Nam sau Mục tiêu 1: Xây dựng quy trình chiết xuất, phân lập, tinh chế đánh giá chất đối chiếu alkaloid, flavonoid từ rễ Khổ sâm bắc Luận án phân lập xác định cấu trúc hóa học alkaloid flavonoid từ rễ Khổ sâm bắc 04 alkaloid thuộc kiểu cấu trúc alkaloid quinolizidin 03 chất khung kiểu matrin matrin, oxymatrin sophoridin; chất khung kiểu sophocarpin oxysophocarpin 04 flavonoid thuộc phân nhóm flavanon chalcon có chất thuộc phân nhóm flavonol kurarinon, (2S)-2’methoxykurarinon, sophoraflavanon G, 01 hợp chất phân nhóm chalcon isoxanthohumol Các chất có độ tinh khiết 95 % Luận án góp phần xây dựng liệu phổ học gồm phổ UV, IR, MS, NMR hợp chất phân lập Đây sở liệu phổ học quan trọng cho cơng trình nghiên cứu thành phần hóa học Khổ sâm bắc (Sophora flavescens Ait.), họ Fabaceae Luận án thiết lập 03 alkaloid (matrin, oxymatrin sophoridin) 03 flavonoid (kurarinon, isoxanthohumol, sophoraflavanon G) đạt yêu cầu CĐC hóa học thứ cấp với liệu chuẩn bao gồm hàm ẩm, phổ UV, IR, MS, NMR Mục tiêu 2: Xây dựng quy trình định tính, định lượng alkaloid, flavonoid rễ Khổ sâm, cao chiết từ rễ Khổ sâm bắc Ứng dụng theo dõi động thái tích lũy hồn thiện quy trình chiết xuất cao từ rễ Khổ sâm bắc 164 Luận án xây dựng thẩm định nhóm phương pháp theo ICH gồm - Qui trình định tính, định lượng đồng thời 03 alkaloid cao toàn phần, cao alkaloid dược liệu Khổ sâm bắc phương pháp HPLC-PDA - Qui trình định tính, định lượng đồng thời 03 flavonoid cao toàn phần, cao flavonoid dược liệu Khổ sâm bắc phương pháp HPLC-PDA Đã ứng dụng quy trình thẩm định để ứng dụng theo dõi lô dược liệu thời gian 1,5 tháng, 3,5 tháng, tháng, 12 tháng 24 tháng Đồng thời ứng dụng hồn chỉnh quy trình chiết xuất cao alkaloid cao flavonoid Mục tiêu 3: Nghiên cứu thử tác dụng sinh học cao chiết chất phân lập từ rễ Khổ sâm bắc Luận án tiến hành đánh giá hoạt tính chống oxy hóa phương pháp DPPH MDA; hoạt tính độc tế bào ung thư vú in vitro tế bào ung thư vú người MBAMB-231; hoạt tính ức chế enzyme acetycholinesterase 09 mẫu gồm hoạt chất: matrin, oxymatrin, sophoridin, isoxanthohumol, kurarinon, sophoraflavanon G 03 cao dược liệu: cao toàn phần Khổ sâm bắc, cao alkaloid, cao flavonoid thu số kết khả quan cao toàn phần ức chế 69,22% hoạt tính enzym AchE; isoxanthohumol, kurarinon sophoraflavanon G thể hoạt tính độc tế bào ung thư vú in vitro dòng tế bào ung thư vú người MDA-MB-231 sau 72 xử lý; Cao flavonoid thể hoạt tính chống oxy hóa in vitro khảo sát phương pháp MDA với EC50 720,57 ± 8,71 µg/ml; Cao toàn phần, cao flavonoid Sophoraflavanon G thể hoạt tính chống oxy hóa in vitro khảo sát phương pháp DPPH với giá trị EC50 254,48 ± 6,43 µg/ml; 139,57 ± 6,47 µg/ml 691,58 ± 20,83 µg/ml Mục tiêu 4: Tiêu chuẩn hóa cao chiết dược liệu Khổ sâm bắc, đề xuất bổ sung chuyên luận dược liệu Khổ sâm bắc vào dược điển Việt Nam Luận án đề xuất đưa dự thảo chuyên luận dược liệu Khổ sâm bắc vào Dược điển Việt Nam VI bao gồm phần mô tả, định tính (vi học, sắc ký), độ tinh khiết (độ ẩm, tạp chất, tro), hàm lượng chất chiết (nước, ethanol) định lượng Trong quan 165 trọng phần định lượng, luận án đề xuất kiểm soát tổng hàm lượng kurarinon sophora flavanone G để hạn chế nguy độc gan người sử dụng Đồng thời để tài đề xuất tiêu chuẩn chất lượng cho cao chiết cao toàn phần, cao alkaloid, cao flavonoid Khổ sâm bắc Kiến nghị Các kết đạt nêu sở khoa học để thực hướng nghiên cứu cho dược liệu Khổ sâm bắc: Tiến hành nghiên cứu chuyên sâu vùng trồng thêm - vùng trồng để xác định hàm lượng nhóm alkaloid flavonoid Khổ sâm bắc để thức đề xuất chuyên luận dược liệu vào Dược điển Việt nam VI Tiến hành hồn chỉnh quy trình chiết xuất cao tồn phần, cao alkaloid, cao flavonoid quy mơ cơng nghiệp Tiến hành đánh giá thêm độc tính cấp, độc tính bán trường diễn số tác dụng sinh học sâu như: bảo vệ tim mạch, bảo vệ thần kinh cho cao toàn phần, cao alkaloid, cao flavonoid dược liệu Khổ sâm bắc DANH MỤC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CỦA TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Các tác giả (2019), “Phân lập ba flavonoid rễ khổ sâm bắc (Sophora flavescens Ait.)”, Tạp chí Dược học, 524, tr 34- 39 Các tác giả (2021), “Nghiên cứu xây dựng phương pháp điều chế cao định chuẩn giàu alkaloid từ khổ sâm bắc (Sophora flavescens Ait.)”, Tạp chí y dược học, 13, tr 7479 Các tác giả (2022), “Nghiên cứu xây dựng phương pháp điều chế cao định chuẩn giàu flavonoid từ khổ sâm bắc (Sophora flavescens Ait.)”, Tạp chí y dược học, 40, tr 4048 Tác giả/Các tác giả (2022), “Determination of Antioxidant, Cytotoxicity, and Acetylcholinesterase Inhibitory Activities of Alkaloids Isolated from Sophora flavescens Ait Grown in Dak Nong, Vietnam”, tạp chí MDPI pharmaceuticals, 15, tr 1384 TÀI LIỆU THAM KHẢO Đỗ Huy Bích Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam Nhà xuất Khoa học kỹ thuật; 2004 [1] [2] Xirui He, Jiacheng Fang, Linhong Huang, Jinhui Wang and Xiaoqiang Huang Sophora flavescens Ait.: Traditional usage, phytochemistry and pharmacology of an important traditional Chinese medicine Journal of ethnopharmacology 2015; 172: 10-29 [3] Kazuaki Kyogoku, Katsuo Hatayama and MANKI KOMATSU Constituents of Chinese crude drug" Kushen"(the root of Sophora flavescens Ait.) Isolation of five new flavonoids and formononetin Chemical and Pharmaceutical Bulletin 1973; 21 (12): 2733-2738 [4] Shi Yong Ryu, Seong-Kie Kim, Zaesung No and Jong Woong Ahn A novel flavonoid from Sophora flavescens Planta medica 1996; 62 (04): 361-363 Chinese Pharmacopoeis Commission The Pharmacopoeia of the People's Republic of China China Medical Science Press; 2010 [5] [6] cmd.gov.hk.Sophora flavescentis Radix.Journa.2017; [7] Rong Huang, Yi Liu, Lin-Lin Zhao, et al A new flavonoid from Sophora flavescens Ait Natural Product Research 2017; 31 (19): 2228-2232 [8] Kanako Sasaki, Kouji Mito, Kazuaki Ohara, Hirobumi Yamamoto and Kazufumi Yazaki Cloning and characterization of naringenin 8-prenyltransferase, a flavonoid-specific prenyltransferase of Sophora flavescens Plant Physiology 2008; 146 (3): 1075-1084 [9] Li Chen, Xiaofang Cheng, Wenyuan Shi, et al Inhibition of growth of Streptococcus mutans, methicillin-resistant Staphylococcus aureus, and vancomycin-resistant enterococci by kurarinone, a bioactive flavonoid isolated from Sophora flavescens Journal of Clinical Microbiology 2005; 43 (7): 3574 [10] Dong Wook Kim, Yeon Sook Chi, Kun Ho Son, et al Effects of sophoraflavanone G, a prenylated flavonoid from Sophora flavescens, on cyclooxygenase-2 and in vivo inflammatory response Archives of pharmacal research 2002; 25: 329-335 [11] S Chen, X Peng and J Liu Effect of Sophora flavescens Ait on cultured beating myocardial cells of Coxsackie B3 virus infected newborn rat Zhonghua shi yan he lin Chuang Bing du xue za zhi= Zhonghua Shiyan he Linchuang Bingduxue Zazhi= Chinese Journal of Experimental and Clinical Virology 2000; 14 (2): 137-140 [12] Tran Hong Quang, Nguyen Xuan Nhiem, Hoang Le Tuan Anh, et al Flavonoids from the roots of Sophora flavescens Vietnam Journal of Chemistry 2015; 53 (2e): 77-81 Takhtajan Armen Flowering Plants Springer Science & Business MediaSpringer Science & Business Media; 2009 [13] [14] Võ Văn Chi Từ điển thuốc Việt Nam Nhà xuất Y học; 1997 [15] Ze Lin, Chang‐Fa Huang, Xiao‐Shan Liu and Jikai Jiang In vitro anti‐tumour activities of quinolizidine alkaloids derived from Sophora flavescens Ait Basic & clinical pharmacology & toxicology 2011; 108 (5): 304-309 [16] Qianqian Yu, Nengneng Cheng and Xiaojun Ni Identifying prenylflavanones as potential hepatotoxic compounds in the ethanol extract of Sophora flavescens Journal of food science 2013; 78 (11): T1830-T1834 [17] MANKI Komatsu, T Tomimori, K Hatayama and N Mikuriya Studies on the constituents of Sophora species IV Constituents of the root of Sophora angustifolia Sieb et Zucc Yakugaku zasshi: Journal of the Pharmaceutical Society of Japan 1970; 90 (4): 463-468 [18] Shi Yong Ryu, Sang Un Choi, Seong‐Kie Kim, et al In vitro antitumour activity of flavonoids from Sophora flavescens Phytotherapy Research 1997; 11 (1): 51-53 [19] Sook Kyung Hyun, Won-Hee Lee, Da Mi Jeong, Youngsoo Kim and Jae Sue Choi Inhibitory effects of kurarinol, kuraridinol, and trifolirhizin from Sophora flavescens on tyrosinase and melanin synthesis Biological and Pharmaceutical Bulletin 2008; 31 (1): 154158 [20] Hyung-Jun Kwon, Jae-Ho Jeong, Seung Woong Lee, et al In vitro anti-reovirus activity of kuraridin isolated from Sophora flavescens against viral replication and hemagglutination Journal of Pharmacological Sciences 2015; 128 (4): 159-169 [21] Chang-Won Kang, Nan-Hee Kim, Huyn Ah Jung, et al Desmethylanhydroicaritin isolated from Sophora flavescens, shows antitumor activities in U87MG cells via inhibiting the proliferation, migration and invasion Environmental Toxicology and Pharmacology 2016; 43: 140-148 [22] Cheng Chang, Shao‑Ping Liu, Chun‑Hua Fang, et al Effects of matrine on the proliferation of HT29 human colon cancer cells and its antitumor mechanism Oncology letters 2013; (3): 699-704 [23] Soo Jin Kim, Kun Ho Son, Hyun Wook Chang, Sam Sik Kang and Hyun Pyo Kim Tyrosinase inhibitory prenylated flavonoids from Sophora flavescens Biological and Pharmaceutical Bulletin 2003; 26 (9): 1348-1350 [24] Jin Hyo Kim, Young Bae Ryu, Nam Suk Kang, et al Glycosidase inhibitory flavonoids from Sophora flavescens Biological and Pharmaceutical Bulletin 2006; 29 (2): 302-305 [25] Hai-Wei Yan, Hui Zhu, Xiang Yuan, et al Eight new biflavonoids with lavandulyl units from the roots of Sophora flavescens and their inhibitory effect on PTP1B Bioorganic Chemistry 2019; 86: 679-685 [26] Trần Hùng Phương pháp nghiên cứu dược liệu 2012 [27] Shigenobu Okuda, Isamu Murakoshi, Hiromitsu Kamata, et al Studies on lupin alkaloids I The minor alkaloids of Japanese Sophora flavescens Chemical and Pharmaceutical Bulletin 1965; 13 (4): 482-487 [28] Fuquan Yang, Jiang Quan, Tianyou Zhang and Yoichiro Ito Preparative separation of alkaloids from the root of Sophora flavescens Ait by pH-zone-refining counter-current chromatography Journal of Chromatography A 1998; 822 (2): 316-320 [29] Jia-Ping Lai, Xi-Wen He, Yue Jiang and Feng Chen Preparative separation and determination of matrine from the Chinese medicinal plant Sophora flavescens Ait by molecularly imprinted solid-phase extraction Analytical and bioanalytical chemistry 2003; 375: 264-269 [30] Jian Ya Ling, Guo Ying Zhang, Zhao Jie Cui and Chang Kai Zhang Supercritical fluid extraction of quinolizidine alkaloids from Sophora flavescens Ait and purification by high-speed counter-current chromatography Journal of Chromatography A 2007; 1145 (1-2): 123-127 [31] Yong An Jung, Xiaolong Wan, Hongyuan Yan and Kyung Ho Row Determination of matrine and oxymatrine in Sophora flavescens ait Via high performance liquid chromatography Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies® 2008; 31 (18): 2752-2761 Zenghua Xia Hua alkaloids.Journa.2008; [32] Bai.Process for the purification of sophora [33] Xiu-Jin Liu, Mei-Ai Cao, Wen-Hai Li, et al Alkaloids from Sophora flavescens Aition Fitoterapia 2010; 81 (6): 524-527 [34] Wentao Bi, Minglei Tian and Kyung Ho Row Selective extraction and separation of oxymatrine from Sophora flavescens Ait extract by silica-confined ionic liquid Journal of Chromatography B 2012; 880: 108-113 [35] Kebin Zheng, Chunhui Li, Xiaosong Shan, et al Study on isolation of chemical constituents from Sophora flavescens ait and their anti-glioma effects African Journal of Traditional, Complementary and Alternative Medicines 2014; 11 (1): 156-160 [36] Haohao Chen, Shaojian Luo, Xikang Zheng and Huajun Fan Separation of matrine and oxymatrine from extract through cation exchange resin coupled with macroporous absorption resin Polish Journal of Chemical Technology 2016; 18 (2): 31-39 [37] Sheng‐Yuan Zhang, Wen Li, Hua Nie, et al Five new alkaloids from the roots of Sophora flavescens Chemistry & biodiversity 2018; 15 (3): e1700577 [38] Xi Chen, Changqing Yi, Xiaoqing Yang and Xiaoru Wang Liquid chromatography of active principles in Sophora flavescens root Journal of Chromatography B 2004; 812 (1-2): 149-163 [39] Liping Qu and Jinyong Peng Single‐step preparative isolation and separation of three flavonones from Sophora flavescens using high‐speed countercurrent chromatography with stepwise increase in the mobile phase flow rate Journal of liquid chromatography & related technologies 2006; 29 (6): 913-924 [40] Lei Zhang, Liang Xu, Shan-Shan Xiao, et al Characterization of flavonoids in the extract of Sophora flavescens Ait by high-performance liquid chromatography coupled with diode-array detector and electrospray ionization mass spectrometry Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 2007; 44 (5): 1019-1028 [41] Chao Xu, Lijun Zhu, Bin Liu and Renbing Shi HPLC determination of contents of four flavonoids in different samples of Sophora flavescens Ait in the market Traditional Chinese Drug Research & Clinical Pharmacology 1993: [42] Xinzhou Yang, Igor Baburin, Inken Plitzko, Steffen Hering and Matthias Hamburger HPLC-based activity profiling for GABA A receptor modulators from the traditional Chinese herbal drug Kushen (Sophora flavescens root) Molecular diversity 2011; 15: 361-372 [43] Chi Zhang, Yan‐Min Wang, Feng‐Chun Zhao, et al Phenolic metabolites from the stems and leaves of sophora flavescens Helvetica Chimica Acta 2014; 97 (11): 1516-1525 [44] Zebin Weng, Fei Zeng, Zhenhua Zhu, et al Comparative analysis of sixteen flavonoids from different parts of Sophora flavescens Ait by ultra high-performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 2018; 156: 214-220 [45] Soo Sung Kim, Seonju Park, Nanyoung Kim and Seung Hyun Kim Quantitative Analysis of Flavonoid Glycosides in Sophora japonica and Sophora flavescens by HPLC-DAD Natural Product Sciences 2021; 27 (4): 284-292 [46] Chunchao Han and Jianyou Guo Antibacterial and anti-inflammatory activity of traditional Chinese herb pairs, Angelica sinensis and Sophora flavescens Inflammation 2012; 35: 913-919 [47] Hongyan Ma, Qi Huang, Wenshan Qu, et al In vivo and in vitro anti-inflammatory effects of Sophora flavescens residues Journal of ethnopharmacology 2018; 224: 497-503 [48] Jong-Min Han, Yue-Yan Jin, Hoi Young Kim, et al Lavandulyl flavonoids from Sophora flavescens suppress lipopolysaccharide-induced activation of nuclear factor-κB and mitogen- activated protein kinases in RAW264 cells Biological and Pharmaceutical Bulletin 2010; 33 (6): 1019-1023 [49] Motahare Boozari, Saba Soltani and Mehrdad Iranshahi Biologically active prenylated flavonoids from the genus Sophora and their structure–activity relationship—A review Phytotherapy Research 2019; 33 (3): 546-560 [50] Jeong Ho Jin, Ju Sun Kim, Sam Sik Kang, et al Anti-inflammatory and anti-arthritic activity of total flavonoids of the roots of Sophora flavescens Journal of ethnopharmacology 2010; 127 (3): 589-595 [51] Hee-Young Kim, Hyongjun Jeon, Hyungwoo Kim, Sungtae Koo and Seungtae Kim Sophora flavescens Aiton decreases MPP+-induced mitochondrial dysfunction in SH-SY5Y cells Frontiers in aging neuroscience 2018; 10: 119 [52] Qingfei Liu, Walter Luyten, Klaartje Pellens, et al Antifungal activity in plants from Chinese traditional and folk medicine Journal of ethnopharmacology 2012; 143 (3): 772-778 [53] Youn Chul Kim, Hye-Sook Kim, Yusuke Wataya, et al Antimalarial activity of lavandulyl flavanones isolated from the roots of Sophora flavescens Biological and Pharmaceutical Bulletin 2004; 27 (5): 748-750 [54] Kenji Matsuo, Michiho Ito, Gisho Honda, Tran Kim Qui and Fumiyuki Kiuchi Trypanocidal flavonoids from Sophora flavescens Natural Medicines 2003; 57 (6): 253-255 [55] Dehua Liu, Ben Chung-Lap Chan, Ling Cheng, et al Sophora flavescens protects against mycobacterial trehalose dimycolate-induced lung granuloma by inhibiting inflammation and infiltration of macrophages Scientific Reports 2018; (1): 1-14 [56] Tai-Hyun Kang, Sei-Joon Jeong, Won-Gil Ko, et al Cytotoxic lavandulyl flavanones from Sophora f lavescens Journal of Natural Products 2000; 63 (5): 680-681 [57] WG Ko, TH Kang, NY Kim, et al Lavandulylflavonoids: a new class of in vitro apoptogenic agents from Sophora flavescens Toxicology in vitro 2000; 14 (5): 429-433 [58] Sam Sik Kang, Ju Sun Kim, Kun Ho Son, Hyun Wook Chang and Hyeun Pyo Kim A new prenylated flavanone from the roots of Sophora flavescens Fitoterapia 2000; 71 (5): 511515 [59] Hideki Nakashima, Sk Mahapatra, Kumkum Ganguly, Sujata G Dastidar and AC Barty In vitro biological activity of prenylflavanones Anticancer research 2001; 21: 275-280 [60] Azhar Rasul, Bo Yu, Long-Fei Yang, et al Induction of mitochondria-mediated apoptosis in human gastric adenocarcinoma SGC-7901 cells by kuraridin and Nor-kurarinone isolated from Sophora flavescens Asian Pac J Cancer Prev 2011; 12 (10): 2499-2504 [61] Guangwen Shu, Jing Yang, Wenhao Zhao, et al Kurarinol induces hepatocellular carcinoma cell apoptosis through suppressing cellular signal transducer and activator of transcription signaling Toxicology and applied pharmacology 2014; 281 (2): 157-165 [62] Xinzhou Yang, Jing Yang, Chan Xu, et al Antidiabetic effects of flavonoids from Sophora flavescens EtOAc extract in type diabetic KK-ay mice Journal of ethnopharmacology 2015; 171: 161-170 [63] Mi Yeon Chung, Mun-Chual Rho, Jeong Suk Ko, et al In vitro inhibition of diacylglycerol acyltransferase by prenylflavonoids from Sophora flavescens Planta medica 2004; 70 (03): 258-260 [64] Alan M Birch, Linda K Buckett and Andrew V Turnbull DGAT1 inhibitors as antiobesity and anti-diabetic agents Current opinion in drug discovery & development 2010; 13 (4): 489-496 [65] Hyun Ah Jung, Takako Yokozawa, Byung-Woo Kim, Jee H Jung and Jae Sue Choi Selective inhibition of prenylated flavonoids from Sophora flavescens against BACE1 and cholinesterases The American journal of Chinese medicine 2010; 38 (02): 415-429 [66] Sojung Lee, Jae Sue Choi and Chul-Seung Park Direct activation of the largeconductance calcium-activated potassium channel by flavonoids isolated from Sophora flavescens Biological and Pharmaceutical Bulletin 2018; 41 (8): 1295-1298 [67] Xianjiao Cao and Qingqing He Anti-tumor activities of bioactive phytochemicals in Sophora flavescens for breast cancer Cancer management and research 2020; 12: 1457 [68] Pei-Lan Ding, Zhi-Xin Liao, Hai Huang, Pei Zhou and Dao-Feng Chen (+)-12αHydroxysophocarpine, a new quinolizidine alkaloid and related anti-HBV alkaloids from Sophora flavescens Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2006; 16 (5): 1231-1235 [69] Yuhong Zhou, Yun Wu, Lin Deng, et al The alkaloid matrine of the root of Sophora flavescens prevents arrhythmogenic effect of ouabain Phytomedicine 2014; 21 (7): 931-935 [70] Qing-Luan Zhu, Yu-Xiang Li, Ru Zhou, et al Neuroprotective effects of oxysophocarpine on neonatal rat primary cultured hippocampal neurons injured by oxygenglucose deprivation and reperfusion Pharmaceutical biology 2014; 52 (8): 1052-1059 [71] Tingting Xu, Yuxiang Li, Haiyan Wang, et al Oxysophocarpine induces anti-nociception and increases the expression of GABAAα1 receptors in mice Molecular medicine reports 2013; (6): 1819-1825 [72] Zhengtao Yang, Ronglan Yin, Yunfeng Cong, et al Oxymatrine lightened the inflammatory response of LPS-induced mastitis in mice through affecting NF-κB and MAPKs signaling pathways Inflammation 2014; 37: 2047-2055 [73] Wei-Ping Tai, Hui Yue and Hong-Zhen Zhai Zhixue capsule caused seven cases of drug induced hepatitis Hepato-gastroenterology 2010; 57 (99-100): 571-572 [74] Hui Chen, Jianhong Zhang, Jiang Luo, et al Antiangiogenic effects of oxymatrine on pancreatic cancer by inhibition of the NF-κB-mediated VEGF signaling pathway Oncology reports 2013; 30 (2): 589-595 [75] Peng Jiang, Xiuwen Zhang, Yutong Huang, Nengneng Cheng and Yueming Ma Hepatotoxicity induced by Sophora flavescens and hepatic accumulation of kurarinone, a major hepatotoxic constituent of Sophora flavescens in rats Molecules 2017; 22 (11): 1809 [76] Council of Europe Europe pharmacopiea 11.0 2023 [77] The Bristish Pharmacopeia Commission Bristh Pharmacopeia 2023 Q Yu et al (2013) Identifying prenylflavanones as potential hepatotoxic compounds in the ethanol extract of Sophora flavescens J Food Sci, 78(11): 1830-1834 [78] [79] Agnieszka Bartmańska, Tomasz Tronina and Jarosław Popłoński Biotransformation of a major beer prenylflavonoid–isoxanthohumol Zeitschrift für Naturforschung C 2019; 74 (1-2): 1-7 [80] Wang Lei, Wu Xing-De, He Juan, et al A new quinolizidine alkaloid from Sophora flavescens Chemistry of natural compounds 2014; 50: 876-879 [81] Paulo J Magalhaes, Luís F Guido, Jose M Cruz and Aquiles A Barros Analysis of xanthohumol and isoxanthohumol in different hop products by liquid chromatography-diode array detection-electrospray ionization tandem mass spectrometry Journal of Chromatography A 2007; 1150 (1-2): 295-301 [82] Zhixin Yang, Wenjun Zhang, Xia Li, et al Determination of sophoraflavanone G and kurarinone in rat plasma by UHPLC–MS/MS and its application to a pharmacokinetic study Journal of separation science 2016; 39 (22): 4344-4353 [83] Yaqian Dong, Guoxiang Jia, Jingwen Hu, et al Determination of Alkaloids and Flavonoids in Sophora flavescens by UHPLC-Q-TOF/MS Journal of analytical methods in chemistry 2021; 2021: [84] Mi Hyeon Park, Seong Mi Lee, Sung-Kyun Ko, et al Analysis of active metabolites of Sophora flavescens for indoleamine 2, 3-dioxygenase and monoamine oxidases using ultraperformance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry Natural Product Communications 2018; 13 (12): 1934578X1801301220 [85] Liu P Hong G., Oxysophocarpine anh its salt preparing method Journa.2006; [86] G-Y Bai, D-Q Wang, C-H Ye and M-L Liu 1H and13C chemical shift assignments and stereochemistry of matrine and oxymatrine Applied Magnetic Resonance 2002; 23 (2): 113121 [87] Xiang-Lan Piao, Xiang Shu Piao, Sung Woo Kim, et al Identification and characterization of antioxidants from Sophora flavescens Biological and Pharmaceutical Bulletin 2006; 29 (9): 1911-1915 [88] Tae-Sook Jeong, Young Bae Ryu, Hoi Young Kim, et al Low density lipoprotein (LDL)antioxidant flavonoids from roots of Sophora flavescens Biological and Pharmaceutical Bulletin 2008; 31 (11): 2097-2102 [89] Jyh-Ferng Yang, Cheng-Hong Yang, Chi-Chun Wu and Li-Yeh Chuang Antioxidant and antimicrobial activities of the extracts from Sophora flavescens Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry 2015; (6): 26-31 [90] Xiao-Bin Huang, Luo-Wei Yuan, Jing Shao, et al Cytotoxic effects of flavonoids from root of Sophora flavescens in cancer cells Natural Product Research 2021; 35 (22): 4317-4322 [91] An De Naeyer, Wim Vanden Berghe, Victoria Pocock, et al Estrogenic and Anticarcinogenic Properties of Kurarinone, a Lavandulyl Flavanone from the Roots of Sophora f lavescens Journal of natural products 2004; 67 (11): 1829-1832 [92] 김순진, 최재수 and 김군도 Induction of Apoptosis via Autophagy on SK-Hep1 Human Hepatocellular Carcinoma Cells by Kurarinone Isolated from Sophora flavescens 대한암예방학회지 2012; 17 (2): 87-94 [93] Jie Yang, Hao Chen, Qiang Wang, et al Inhibitory effect of kurarinone on growth of human non-small cell lung cancer: An experimental study both in vitro and in vivo studies Frontiers in pharmacology 2018; 9: 252 [94] Ting-Wen Chung, Chi-Chien Lin, Shih-Chao Lin, Hong-Lin Chan and Ching-Chieh Yang Antitumor effect of kurarinone and underlying mechanism in small cell lung carcinoma cells OncoTargets and therapy 2019; 12: 6119 [95] Katsuo Hatayama and Manki Komatsu Studies on the constituents of Sophora species V Constituents of the root of Sophora angustifolia Sieb Et Zucc.(2) Chemical and Pharmaceutical Bulletin 1971; 19 (10): 2126-2131 [96] Wen-Chung Huang, Pei-Yu Gu, Li-Wen Fang, et al Sophoraflavanone G from Sophora flavescens induces apoptosis in triple-negative breast cancer cells Phytomedicine 2019; 61: 152852 [97] Jeong-Dan Cha, Mi-Ran Jeong, Young-Eun Lee and Kyung-Yeol Lee Induction of apoptosis in human oral epidermoid carcinoma cells by sophoraflavanone G from Sophora flavescens Food Science and Biotechnology 2007; 16 (4): 537-542 [98] Xiaozhuo LIU, Kwok LEUNG and Kwok FUNG Anticancer activities of Sophoraflavanone G on human myeloid leukemia cells Cancer Research 2008; 68 (9_Supplement): 3347-3347 [99] Jun-Qiang Zhang, Yu-Min Li, Tao Liu, et al Antitumor effect of matrine in human hepatoma G2 cells by inducing apoptosis and autophagy World journal of gastroenterology: WJG 2010; 16 (34): 4281 [100] Cunzao Wu, Weiping Huang, Yong Guo, et al Oxymatrine inhibits the proliferation of prostate cancer cells in vitro and in vivo Molecular medicine reports 2015; 11 (6): 4129-4134 [101] Yu Jie Zhou, Ya Jie Guo, Xiao Li Yang and Zhou Luo Ou Anti-cervical cancer role of matrine, oxymatrine and sophora flavescens alkaloid gels and its mechanism Journal of Cancer 2018; (8): 1357 [102] Lei Liang, Xiao-Yan Wang, Xu-Hui Zhang, et al Sophoridine exerts an anti-colorectal carcinoma effect through apoptosis induction in vitro and in vivo Life sciences 2012; 91 (2526): 1295-1303