Luận án tiến sĩ dược học nghiên cứu xác định vết một số ma túy tổng hợp nhóm kích thích thần kinh loại amphetamin và ketamin trong tóc và nước tiểu bằng sắc ký khí khối phổ

TỔNG QUAN

SƠ LƢỢC VỀ MA TÚY

Cho đến nay, chưa có một định nghĩa thống nhất về "ma túy" hay "chất ma túy" trên toàn cầu Theo Công ước quốc tế về các chất ma túy, việc phân loại và quản lý các loại chất này vẫn còn nhiều tranh cãi và khác biệt giữa các quốc gia.

Năm 1961, theo Nghị định thư 1972 sửa đổi Công ước thống nhất về các chất ma túy, ma túy được định nghĩa là bất kỳ chất nào, tự nhiên hoặc tổng hợp, được quy định trong các phụ lục I và II của Công ước.

Theo Tổ chức Y tế thế giới (WHO): Ma túy là các chất khi đƣa vào cơ thể sẽ làm thay đổi chức năng của các cơ quan nội tạng [142]

Luật phòng, chống ma túy Việt Nam số 23/2000/QH10 và Luật sửa đổi, bổ sung số 16/2008/QH12 quy định rằng chất ma túy bao gồm các chất gây nghiện và chất hướng thần, được liệt kê trong các danh mục do Chính phủ ban hành.

Theo Nghị định số 82/2013/NĐ-CP ban hành ngày 19 tháng 7 năm 2013, Chính phủ đã công bố danh mục 235 chất ma túy, được chia thành 3 danh mục và 41 tiền chất Đến ngày 29 tháng 12 năm 2015, Nghị định số 126/2015/NĐ-CP đã được ban hành để sửa đổi và bổ sung danh mục các chất ma túy và tiền chất theo Nghị định số 82/2013/NĐ-CP.

2013 bổ xung thêm 15 chất ma túy và 12 tiền chất [6]

Ma túy, theo gốc Hán Việt, có nghĩa là "Làm mê mẩn" và trước đây thường chỉ các chất từ cây thuốc phiện, giúp giảm đau và an thần Hiện nay, thuật ngữ này được sử dụng để chỉ tất cả các hợp chất tự nhiên và tổng hợp có khả năng gây nghiện.

Ma túy là những chất được chiết xuất từ tự nhiên hoặc tổng hợp, có khả năng làm biến đổi tâm trạng và ý thức của con người khi xâm nhập vào cơ thể.

Luận án tiến sĩ Dược học

4 trí tuệ, làm cho con người bị lệ thuộc vào ma túy gây nên những tổn thương cho cá nhân và cộng đồng [18], [120]

Các chất ma túy có thể được phân loại theo nhiều tiêu chí khác nhau, bao gồm nguồn gốc, phương pháp sử dụng, tác dụng dược lý và cấu trúc hóa học.

1.1.2.1 Phân loại theo nguồn gốc

Theo cách phân loại này, ma túy đƣợc phân thành 3 loại [18], [105]

 Chất ma túy có nguồn gốc tự nhiên: Thuốc phiện, cần sa, nấm thần…

 Chất ma túy bán tổng hợp: Heroin, buprenorphin

 Chất ma túy tổng hợp hoàn toàn: AM, MA, MDMA,…

1.1.2.2 Phân loại theo tác dụng với hệ thần kinh trung ương

Theo cách phân loại này, ma túy đƣợc phân thành 3 loại [18], [105]

Các chất kích thích hệ thần kinh trung ương giúp tăng cường sinh lực, tạo cảm giác phấn khích, khiến người dùng nói nhiều hơn và tăng cường hoạt động thể chất Chúng cũng làm tăng nhịp tim và nhịp thở, góp phần vào sự năng động của cơ thể.

+ Nhóm ATS: AM, MA, MDMA, MDA, MDEA, dexamphetamin…

 Các chất ức chế hệ thần kinh trung ương: Tác động chủ yếu khi sử dụng là buồn ngủ, an thần, yên dịu, giảm nhịp tim, giảm hô hấp…

+ Nhóm benzodiazepin: Diazepam, Serapax, benzotran, rivotril,

+ Thuốc giảm đau thuộc nhóm á phiện: Thuốc phiện, morphin, pethidin, codein, heroin, codein

+ Cần sa ở liều lƣợng nhẹ

Nhóm gây ảo giác là những chất làm thay đổi nhận thức, khiến người dùng có thể nhìn thấy, nghe thấy và cảm nhận những sự việc không có thật, dẫn đến hiện tượng ảo giác và ảo thị.

Nó làm thay đổi cảm nhận của người sử dụng về hiện tại, về môi trường xung quanh

+ MDMA (ecstasy, thuốc lắc) ở liều lƣợng mạnh

+ Cần sa ở liều lƣợng mạnh

1.1.2.3 Phân loại theo công thức hóa học Đây là cách phân loại đƣợc sử dụng phổ biến trong việc triển khai xây dựng các phương pháp phân tích, vì các ma túy có cấu tạo tương tự thường có tính chất giống nhau do đó phương pháp chiết và phân tích cũng giống nhau Theo cách phân loại này một số nhóm ma túy chính nhƣ sau [36], [38]

 Các chất ma túy nhóm opiat

 Các chất ma túy nhóm cần sa

 Các chất ma túy nhóm ATS

1.1.3 Tình hình sử dụng ma túy

1.1.3.1 Tình hình sử dụng ma túy trên thế giới

Theo Cơ quan phòng chống ma túy và tội phạm của Liên Hiệp Quốc, hiện có khoảng 250 triệu người trên toàn cầu thường xuyên sử dụng ma túy Số lượng người dùng ma túy này đang gia tăng hàng năm.

Trên toàn cầu, có khoảng 27 triệu người gặp vấn đề với rối loạn và lệ thuộc vào ma túy, trong đó 37 triệu người lạm dụng ma túy tổng hợp ATS, với 60% đến từ khu vực Đông và Đông Nam Á Sự gia tăng sử dụng ma túy không chỉ ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe cá nhân và cộng đồng mà còn gây ra những hệ lụy xã hội như trộm cắp, cướp giật và sự lây lan của các bệnh truyền nhiễm như HIV/AIDS và viêm gan C Theo thống kê, cứ 10 người sử dụng ma túy thì có một người phải đối mặt với các vấn đề sức khỏe nghiêm trọng và lệ thuộc vào chất gây nghiện.

Trên toàn cầu, khoảng 27 triệu người đang gặp vấn đề về sức khỏe do sử dụng ma túy Mỗi năm, ước tính có khoảng 187.100 trường hợp tử vong liên quan đến ma túy, chủ yếu do quá liều hoặc sốc thuốc.

Các quốc gia và vùng miền có xu hướng sử dụng ma túy khác nhau Ở

Mỹ và Châu Âu chủ yếu tiêu thụ cần sa và heroin, trong khi một số quốc gia Đông Bắc Á và Đông Nam Á lại có xu hướng sử dụng ma túy tổng hợp (ATS) Khu vực Châu Mỹ Latin và Caribe vẫn chủ yếu sử dụng cocaine Tại Mỹ, nguồn cocaine chủ yếu được nhập khẩu từ Trung Mỹ và Mexico.

Theo thống kê, 87% nguồn ma túy ở Mỹ đến từ các khu vực khác, trong khi chỉ có khoảng 13% từ vùng biển Caribe Ở một số bang như California, Maine, Massachusetts và Nevada, việc sử dụng cần sa cho mục đích phi y tế đã trở thành hợp pháp và phổ biến Đáng chú ý, số trường hợp tử vong do sử dụng ma túy quá liều ở Mỹ đã gần như tăng gấp đôi trong giai đoạn 2013-2014.

THÀNH PHẦN CẤU TẠO VÀ LIÊN KẾT THUỐC TRONG TÓC 26 1 Giới thiệu chung

Phân tích tóc là một phương pháp hiệu quả để phát hiện việc sử dụng thuốc trong khoảng thời gian từ vài tuần đến vài tháng, tùy thuộc vào chiều dài mẫu tóc và độ ổn định của thuốc Kỹ thuật này có thể bổ sung cho phân tích nước tiểu và máu, giúp chỉ ra mối liên hệ với việc sử dụng thuốc Thông tin từ tóc cung cấp cái nhìn về tình trạng nghiện thuốc cấp tính và mãn tính, tuy nhiên, thời gian chính xác của việc dùng thuốc không thể xác định từ mẫu tóc Thay vào đó, thời gian sử dụng thuốc chỉ có thể ước đoán trong khoảng vài tháng, dựa trên tỷ lệ mọc tóc và vị trí của thuốc trên sợi tóc.

Hợp chất độc đầu tiên được phát hiện trong tóc là arsen, được xác định bởi Casper vào năm 1875 Đến năm 1979, morphin lần đầu tiên được báo cáo tìm thấy trong tóc thông qua kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang.

Giám định tóc trong độc chất đã được thảo luận rộng rãi trong cộng đồng khoa học, đặc biệt là giữa các nhà độc chất học Năm 2004, việc xác định thuốc trong tóc đã được đề xuất như một phương pháp hiệu quả Phân tích tóc mang lại nhiều lợi ích vượt trội so với các mẫu sinh học thông thường.

+ Việc thu thập mẫu tóc dễ dàng, không nhất thiết phải là nhân viên y tế, không ảnh hưởng đến sự riêng tư, không phải giám sát trực tiếp

+ Mẫu ít bị xâm nhập, khó bị pha trộn

Sau khi lấy mẫu, máu và nước tiểu cần được làm lạnh hoặc đông lạnh để bảo quản chất lượng, trong khi tóc có thể bảo quản ở nhiệt độ phòng trong thời gian dài Ngoài ra, tóc không yêu cầu dụng cụ chuyên dụng để đóng gói, giúp việc vận chuyển trở nên dễ dàng hơn.

+ Cửa sổ phát hiện rộng, có thể từ vài tuần đến vài tháng hoặc hàng năm sau khi sử dụng ma túy

Trong những năm gần đây, nghiên cứu phân tích ma túy trong tóc đã thu hút sự quan tâm của các nhà khoa học Trong giám định pháp y, ngoài việc xác định chất ma túy trong dịch sinh học, việc phân tích mẫu tóc, lông và móng cũng rất quan trọng Phân tích ma túy trong tóc mang lại lợi ích về việc lấy mẫu dễ dàng và thuận tiện, không cần dụng cụ chuyên dụng hay người có chuyên môn Đặc biệt, trong các trường hợp nạn nhân tử vong lâu ngày mà không thể lấy mẫu dịch sinh học, tóc trở thành lựa chọn tối ưu.

1.2.2 Giải phẫu và chức năng sinh lý của tóc

Hiểu biết về sinh lý tóc, bao gồm giải phẫu, sinh lý, sinh hóa và vòng phát triển, là cần thiết để giải thích khoa học chính xác kết quả phân tích thuốc trong tóc.

Tóc có hình dạng sợi trụ, phát triển từ nang tóc, bao gồm nhiều lớp tế bào Lớp biểu bì là lớp ngoài cùng, giúp tóc bám chặt vào nang và bảo vệ các phần bên trong Biểu bì gồm các tế bào hình thoi xếp khít nhau và không có màu, với độ dày mỗi tế bào từ 0,5 đến 1,0 μm.

Nhiệt độ và ánh sáng có thể gây hại hoặc phá hủy lớp biểu bì của tóc Khi lớp biểu bì bị tổn thương, thuốc sẽ dễ dàng thoát ra từ bên trong tóc ra bên ngoài, dẫn đến sự mất mát hiệu quả của sản phẩm.

Phần lõi tóc là cấu trúc chính của sợi tóc, bao gồm nhiều tế bào keratin và hạt melanin, quyết định màu sắc của tóc Bên trong lõi tóc có một khoảng trống nhỏ chứa khí và nước.

Tủy tóc nằm ở phần bên trong của sợi tóc, bao gồm nhiều tế bào keratin và có chứa không khí Ngoài ra, tủy tóc cũng chứa hạt melanin, chất quyết định màu sắc của tóc, gắn liền với protein.

Cấu trúc của tóc đƣợc thể hiện ở Hình 1.9

Hình 1.9 Cấu trúc của sợi tóc

1.2.2.2 Thành phần cấu tạo của tóc

Tóc người được cấu tạo từ các lớp keratin xếp chặt, tạo thành sợi dài và cấu trúc ổn định Keratin chứa nhiều lưu huỳnh, và thành phần của tóc bao gồm protein (65-95%), nước (15-35%), lipid (1-9%), và muối khoáng (0,25-0,95%) Tỉ lệ các thành phần này thay đổi theo độ ẩm của tóc, và các nguyên tố vi lượng cũng như kim loại nặng có thể được tìm thấy trong tủy tóc.

Nang tóc là một phần nhỏ bao quanh chân tóc Chúng thường nằm từ 3-

Nằm cách 4 mm dưới da đầu, nang tóc được kết nối chặt chẽ với lớp biểu bì Bã nhờn và tuyến tiết xung quanh nang tóc có thể dẫn đến sự thải trừ của các chất từ những tuyến này vào nang tóc, góp phần tạo ra sự hiện diện của thuốc trong tóc.

Có ba vùng chính ở chân tóc: vùng sâu nhất là nơi sinh tổng hợp tế bào tóc, tiếp theo là vùng keratin hóa, nơi tóc cứng lại, và vùng xa nhất là vùng giữ lại lâu, nơi diễn ra quá trình dehydrat hóa tạo sợi tóc dài.

1.2.2.3 Chu trình phát triển của tóc

Tóc phát triển qua ba giai đoạn, trong đó giai đoạn đầu tiên là pha phát triển Trong giai đoạn này, hoạt động chuyển hóa của các tế bào diễn ra mạnh mẽ, dẫn đến sự hình thành và phát triển của tóc bên trong nang tóc Quá trình keratin hóa cũng diễn ra trong giai đoạn này, kéo dài từ 2 đến 3 năm, với tốc độ phát triển phụ thuộc vào cấu trúc giải phẫu của từng vùng Các chất dinh dưỡng và thuốc được cung cấp bởi mao mạch máu sẽ được chuyển vào tóc trong giai đoạn này.

Giai đoạn thứ hai, hay pha chuyển tiếp, diễn ra trong khoảng 4 - 6 tuần, đánh dấu thời kỳ biến đổi giữa giai đoạn phát triển và giai đoạn nghỉ Trong thời gian này, sự hình thành chân tóc diễn ra.

30 keratin hóa hoàn toàn và tạo ra hình dáng cuối cùng khi tách ra từ bầu tóc của chân tóc

PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH MA TÚY NHÓM ATS VÀ KETAMIN

Có nhiều phương pháp để xác định chất ma túy trong tóc, bao gồm các giai đoạn làm sạch, xử lý mẫu, chiết xuất, tạo dẫn xuất và phân tích Trong giai đoạn đầu, các chất ma túy được tách ra khỏi mẫu tóc vào một dịch chiết thích hợp Tiếp theo, một kỹ thuật phân tích phù hợp được sử dụng để xác định hàm lượng chất ma túy trong dịch chiết, từ đó tính toán hàm lượng trong mẫu ban đầu Các quy trình này đặc biệt hiệu quả cho việc phân tích các chất ma túy nhóm ATS và đã được áp dụng thành công để phân tích ATS và ketamin trong tóc.

1.3.1 Phương pháp xử lý mẫu tóc

Phân tích ma túy trong các mẫu dịch sinh học và tóc gặp nhiều khó khăn do sự khác biệt về thành phần của từng loại mẫu Do đó, mục tiêu chính của quá trình xử lý mẫu không chỉ là tối đa hóa hiệu suất chiết xuất mà còn là giảm thiểu tạp chất một cách hiệu quả.

Các phương pháp thường được sử dụng làm sạch tóc để phân tích các chất ma túy là sử dụng các dung môi, dung dịch như nước cất, methanol,

33 aceton, dichloromethan, 1% natri dodecyl sulfat (SDS) [83], [121], [146],

[147] Bước làm sạch để loại trừ các chất bẩn, dầu mỡ và các chất ma túy nhiễm bên ngoài tóc

Việc xử lý tóc để loại bỏ các thành phần phức tạp là rất quan trọng nhằm tránh gây nhiễu cho chất cần phân tích Do chất cần phân tích thường có hàm lượng rất nhỏ trong mẫu, nên quá trình chiết tách cần được thực hiện một cách thận trọng và áp dụng phương pháp hợp lý để đạt hiệu suất chiết tối đa, đồng thời giảm thiểu tạp chất.

Có rất nhiều kỹ thuật xử lý mẫu tóc đã đƣợc sử dụng bao gồm xử lý mẫu bằng kiềm, acid, enzym, methanol… [32], [102], [104], [136], [143]

+ Xử lí bằng kiềm: Tóc đƣợc ngâm trong dung dịch NaOH 1 M

+Xử lí bằng β-glucuronidase: Tóc đƣợc ủ với dung dịch đệm phosphat pH 6,0 cùng với dung dịch β-glucuronidase ở 45 o C

+ Xử lí bằng MeOH: Tóc đƣợc ngâm trong MeOH chứa 1% HCl + Xử lí bằng acid: Tóc đƣợc ngâm trong dung dịch acid HCl 0,1 M

+ Xử lý bằng dung dịch đệm: dùng một số đệm nhƣ đệm acetat, đệm phosphat…

Chiết lỏng là quá trình tách các chất dựa trên sự hòa tan trong hai dung môi không hòa tan vào nhau Thực tế, người ta thường sử dụng cân bằng nước và các dung môi hữu cơ như diethyl ether, n-hexan, cloroform để tách và tinh chế chất phân tích Hiệu suất chiết phụ thuộc vào độ tan của hoạt chất trong dung môi, pH của pha nước, tính phân cực của dung môi chiết, và hệ số phân bố của hoạt chất giữa hai pha Để nâng cao hiệu suất chiết, có một số giải pháp đã được áp dụng.

- Điều chỉnh pH hoặc chiết tạo cặp ion nếu chất phân tích ở dạng ion hay có khả năng ion hóa

- Thay đổi dung môi hữu cơ, kết hợp với các dung môi hữu cơ khác, tăng thể tích dung môi

Sử dụng ion kim loại để tạo phức kỵ nước với chất phân tích giúp nâng cao hiệu suất chiết xuất bằng dung môi hữu cơ.

- Chiết nhiều lần, chiết liên tục…

Chiết lỏng - lỏng là một kỹ thuật đơn giản và dễ thực hiện, phù hợp với hầu hết các phòng thí nghiệm, giúp thu được chất phân tích tương đối sạch và có khả năng làm giàu mẫu Tuy nhiên, phương pháp này có nhược điểm như việc sử dụng nhiều dung môi chiết có thể ảnh hưởng đến sức khỏe và môi trường, mất nhiều thời gian khi chiết nhiều mẫu cùng lúc, dễ bị nhũ hóa, và dung dịch chiết có thể lẫn nước, ảnh hưởng đến quá trình bay hơi và kết quả phân tích Đối với ATS và ketamin, việc điều chỉnh pH của pha nước giúp chuyển đổi giữa dạng acid và base, hỗ trợ trong quá trình chiết và làm sạch với dung môi hữu cơ Hiện nay, chiết lỏng - lỏng được sử dụng phổ biến để chiết các chất ma túy trong dịch sinh học và tóc.

Chiết pha rắn (SPE) là phương pháp chiết xuất dựa trên sự phân bố của chất phân tích giữa hai pha lỏng và rắn, trong đó chất được chiết từ pha lỏng vào pha rắn Pha rắn thường là các hạt nhỏ, xốp được chứa trong ống nhỏ, cho phép pha lỏng chảy qua Các chất phân tích tương tác với pha rắn sẽ được giữ lại, và sau đó được rửa giải bằng một dung môi khác Thể tích dung môi rửa giải thường nhỏ hơn nhiều so với thể tích dịch ban đầu, giúp không chỉ làm sạch mà còn làm giàu mẫu hiệu quả.

Phương pháp SPE sử dụng các lực như Van der Waals, liên kết hydro, tương tác phân cực và điện tích để giữ lại các chất phân tích trên cột chiết Mỗi loại cột chiết được thiết kế với nhóm chất mang đặc trưng nhằm giải quyết các vấn đề cụ thể trong quá trình xử lý mẫu.

Cột chiết pha đảo sử dụng các dẫn chất như C18, C8, C2, cyclohexyl và phenyl làm nguyên liệu cho pha rắn Tương tác giữa chất phân tích và pha liên kết chủ yếu là lực Van der Waals có năng lượng thấp, khiến chất phân tích có tính kị nước có xu hướng giữ lại trên pha liên kết Để thực hiện quá trình rửa giải, chỉ cần một dung môi ít phân cực đủ mạnh để phá vỡ các liên kết này, với các dung môi thường được sử dụng như methanol, acetonitril và ethyl acetat.

Cột chiết pha thuận sử dụng nguyên liệu như dẫn chất cyano, amino, diol và silicagel Tương tác lưu giữ chất phân tích trên pha thuận và pha phân cực chủ yếu dựa vào các yếu tố như liên kết hydro, liên kết π-π và tương tác lưỡng cực-lưỡng cực.

Cột trao đổi ion sử dụng nguyên liệu chiết pha rắn, thường được gắn thêm các nhóm trao đổi cation hoặc anion Lực tương tác giữa chất phân tích và pha liên kết chủ yếu là lực hút tĩnh điện Quá trình trao đổi ion diễn ra giữa chất hấp phụ và chất phân tích có lực ion yếu hoặc các mẫu hữu cơ mang điện tích trái dấu.

Cột chiết pha rắn hỗn hợp (mixed-mode) được tạo ra từ sự kết hợp của pha đảo (C8 hoặc C18) và các nhóm trao đổi cation mạnh Trong chế độ này, chất phân tích liên kết với pha rắn thông qua hai loại tương tác chính: tương tác Van der Waals và tương tác tĩnh điện Đồng thời, các chất gây nhiễu chủ yếu tham gia vào tương tác Van der Waals và có thể được loại bỏ bằng cách sử dụng một dung môi rửa phù hợp.

Để tách 36 nhiễu, các liên kết Van der Waals cần được cắt đứt, sau đó chất phân tích còn lại trên cột sẽ được rửa giải bằng các dung môi phù hợp.

Cơ chế phân tách và cô lập chất phân tích diễn ra qua bốn bước chính: hoạt hóa cột, nạp mẫu, loại tạp và rửa giải Quá trình xử lý mẫu bằng SPE được mô tả chi tiết trong hình 1.11.

Hình 1.11.Quá trình xử lý mẫu bằng SPE

Phương pháp chiết pha rắn (SPE) hiện nay đã được phát triển và ứng dụng rộng rãi, đặc biệt trong phân tích dược chất và chất chuyển hóa trong các dịch sinh học như máu và nước tiểu Phương pháp này cho phép chiết xuất đồng thời nhiều mẫu, với một số thiết bị có khả năng thực hiện chiết tự động hoặc kết nối trực tuyến với hệ thống sắc ký Ứng dụng của chiết pha rắn trong phân tích ma túy đang ngày càng trở nên quan trọng.

ĐỐI TƯỢNG, THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU

2.1.1 Ma túy nhóm ATS và ketamin Đối tƣợng nghiên cứu gồm 09 chất ma túy nhóm ATS, ketamin, norketamin và 02 chất chuẩn nội methamphetamin-d 5 và ketamin-d 4 (Bảng 2.1)

Bảng 2.1 Các chất ma túy dùng trong nghiên cứu [32], [109]

Công thức phân tử (khối lƣợng mol) Cấu trúc hóa học

Mẫu nước tiểu và mẫu tóc trắng, không nhiễm ATS và ketamin, của nhân viên Khoa Hóa pháp - Viện pháp y Quốc gia, được sử dụng để khảo sát và phát triển phương pháp nghiên cứu.

Nghiên cứu đã tiến hành phân tích 51 mẫu nước tiểu và 51 mẫu tóc của bệnh nhân sử dụng ma túy nhóm ATS hoặc ketamin tại Bệnh viện Tâm thần Hà Nội Các mẫu này được thu thập, mã hóa và bảo quản ở nhiệt độ 2-4 độ C để đảm bảo độ chính xác trong việc xác định các chất ma túy.

THIẾT BỊ, DUNG MÔI, HÓA CHẤT

Các hóa chất sử dụng trong nghiên cứu thuộc loại tinh khiết phân tích bao gồm:

- Methanol dùng cho HPLC của Merck, Đức

- Ethyl acetat dùng cho HPLC của Merck, Đức

- Ethanol dùng cho HPLC của Merck, Đức

- Kali dihydrophosphat (KH 2 PO 4 ) của Merck, Đức

- Dikali hydrophosphat (K 2 HPO 4 ) của Merck, Đức

- Acid hydrochloric của Merck, Đức

- Natri hydroxyt của Merck, Đức

- Heptafluorobutyric anhydrid (HFBA) của Sigma-Aldrich

- Trifluoroacetic anhydrid (TFAA) của Sigma-Aldrich

- Pentafluoropropionic anhydrid (PFPA) của Sigma-Aldrich

Các chất chuẩn ATS, ketamin và chuẩn nội của hãng Certilliant – Mỹ nhƣ ở Bảng 2.2

Bảng 2.2 Thông tin về các chất chuẩn sử dụng trong nghiên cứu

Chất chuẩn Hãng cung cấp Nồng độ Mã sản phẩm Số lô

AM Cerilliant – Mỹ 1,00 mg/ml MeOH A-007 FE050614-06

Cerilliant offers a range of high-quality chemical solutions, including MA, PMA, MDA, MDMA, MDEA, DOB, KET, and NKT, each at a concentration of 1.00 mg/ml in methanol (MeOH) The specific product codes for these solutions are M-009, P-050, M-012, M-013, M-065, D-101, K-002, and N-036, respectively, with corresponding lot numbers FE0-1710-02, FE102912-05, FE071612-02, FE012111-07, FE091411-01, FE070813-01, FE012110-01, and FN043014-04 These products are essential for various analytical applications in research and development.

- MA-d 5 ; 1,00 mg/ml MeOH, mã sản phẩm M-023, số lô FE042012-02 của Cerilliant – Mỹ

- KET-d 4 ; 100 àg/ml MeOH, mó sản phẩm K-003, số lụ FE041414-01 của Cerilliant – Mỹ

 Chuẩn bị dung dịch chuẩn

Dung dịch chuẩn gốc 10 àg/ml được tạo ra bằng cách lấy 1 ml dung dịch chuẩn 1,00 mg/ml của mỗi chất và cho vào bình định mức 100 ml, sau đó bổ sung methanol đến vạch Các dung dịch chuẩn này cần được bảo quản ở nhiệt độ từ 2 đến 4 độ C để đảm bảo tính ổn định và hiệu quả.

Dung dịch chuẩn hỗn hợp trung gian 1 àg/ml được tạo ra bằng cách lấy chính xác 1 ml dung dịch chuẩn gốc của mỗi chất và cho vào bình định mức 10 ml, sau đó bổ sung methanol đến vạch (kí hiệu A11) Dung dịch này cần được bảo quản ở nhiệt độ từ 2 - 4 độ C để đảm bảo độ ổn định và hiệu quả.

Dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp làm việc với nồng độ 5, 10, 20, 50, 100, 200, và 400 ng/ml được pha từ dung dịch chuẩn hỗn hợp trung gian A 11 trong methanol hoặc nền mẫu trắng Các dung dịch này chỉ nên được pha khi sử dụng để đảm bảo tính chính xác và hiệu quả trong quá trình phân tích.

Dung dịch chuẩn nội gốc 10 àg/ml được tạo ra bằng cách pha 1 ml dung dịch chuẩn MA-d 5 (1,00 mg/ml) vào bình định mức 100 ml và bổ sung methanol đến vạch Đồng thời, 1 ml dung dịch chuẩn KET-d 4 (100 àg/ml) được cho vào bình định mức 10 ml và cũng bổ sung methanol đến vạch (được ký hiệu là B 01 và B 02) Các dung dịch chuẩn nội gốc này cần được bảo quản ở nhiệt độ 2 - 4 oC để đảm bảo tính ổn định.

Dung dịch chuẩn nội hỗn hợp trung gian 1 àg/ml được tạo ra bằng cách lấy chính xác 1 ml dung dịch chuẩn nội gốc của mỗi chất và cho vào bình định mức 10 ml, sau đó bổ sung methanol đến vạch Dung dịch này cần được bảo quản ở nhiệt độ 2 - 4 độ C để đảm bảo tính ổn định và hiệu quả.

2.2.3 Thiết bị, dụng cụ phân tích

- Máy sắc ký khí khối phổ Agilent Technologies 6980N, detector MS 5975C của Agilent (Mỹ)

- Hệ thống chiết pha rắn Agilent (Mỹ)

- Cân phân tích CP 224S d = 0,1 mg (Thụy sĩ)

- Máy li tâm EBA21 Hettich (Đức)

- Máy lắc vortex IKA Genius (Trung Quốc)

- Máy lắc siêu âm Branton 5200 (Đức)

- Hệ thống làm khô bằng Nitơ Rapidvap Vertex (Đức)

- Máy khuấy từ Hotstir Wealtec (Đức)

- Cột sắc ký khớ HP5-MS (30 m ì 250 àm ì 0,25àm)

- Các loại cột chiết: AccuBond II Evidex (200 mg, 3 ml); Bond Elute C18 (200 mg, 3 ml); Bond Elute Certify (200 mg, 3 ml)

- Micropipet điều chỉnh đƣợc thể tớch: 10 -100 àl, 100 -1000 àl

- Bình định mức với các thể tích khác nhau từ 5 – 100 ml

- Ống ly tâm Teflon 20 ml, có nắp kín

- Ống nghiệm thủy tinh 10 ml, có nắp kín

- Lọ đựng mẫu loại 1,8 ml, dùng cho tiêm mẫu GC

- Các dụng cụ khác: cốc thủy tinh, ống đong, phễu, giấy lọc…

Tất cả các thiết bị đều đƣợc kiểm tra, hiệu chuẩn định kỳ đáp ứng tiêu chuẩn ISO-IEC 17025

Hình 2.1 Thiết bị sắc ký khí khối phổ tại Khoa Hóa pháp,

NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.3.1 Nghiên cứu thiết lập chương trình GC-MS và điều kiện dẫn xuất

2.3.1.1 Điều kiện sắc ký khí khối phổ

 Máy sắc ký khí GC 6980N của Agilent với các điều kiện phân tích nhƣ sau:

- Cột sắc ký: HP5-MS (30 m x 250 μm; 0,25 μm) của Agilent

- Nhiệt độ buồng tiêm mẫu: 250 o C

- Thể tớch tiờm mẫu 1 àl với bộ tiờm mẫu tự động

- Chế độ tiêm mẫu không chia dòng (splitless)

- Khí mang heli, tốc độ dòng 1 ml/phút

- Chương trình nhiệt độ: 80 o C giữ trong 3 phút, tăng lên 40 o C/phút đến 200 o C và giữ trong 1 phút, tiếp tục tăng 10 o C/phút đến 290 o C và giữ trong 6 phút

- Nhiệt độ bộ phận kết nối sắc ký và khối phổ: 280 o C

 Khối phổ MS 5975C của Agilent

- Nguồn ion hóa: EI 70 eV

2.3.1.2 Khảo sát lựa chọn dẫn xuất

Dựa trên tài liệu tham khảo và đặc tính lý hóa của các chất ma túy nhóm ATS và ketamin, nhóm amin của các hợp chất này thường được dẫn xuất với các chất như TFAA, PFPA, HFBA, và MBTFA Nghiên cứu đã tiến hành khảo sát các chất TFAA, PFPA, HFBA như tác nhân dẫn xuất, từ đó lựa chọn tác nhân dẫn xuất phù hợp cho nghiên cứu tiếp theo.

2.3.1.3 Khảo sát chương trình nhiệt độ sắc ký

Khảo sát chương trình nhiệt độ sắc ký nhằm điều chỉnh điều kiện tăng nhiệt của lò, từ đó lựa chọn chương trình tối ưu cho quá trình sắc ký.

 Chương trình 1: Bắt đầu 80 o C giữ 1 phút, tăng 20 o C/phút đến 290 o C giữ 19 phút Tổng thời gian 30 phút

 Chương trình 2: Bắt đầu 60 o C giữ 4 phút, tăng 40 o C/phút đến 180 o C giữ 2 phút, tăng 10 o C/phút đến 210 o C giữ 2 phút, tăng 3 o C đến 290 o C giữ 5 phút Tổng thời gian 45 phút

 Chương trình 3: Bắt đầu 80 o C giữ 1 phút, tăng 10 o C/phút đến 290 o C giữ 10 phút Tổng thời gian 32 phút

 Chương trình 4: Bắt đầu 80 o C, giữ trong 3 phút, tăng lên 40 o C/phút đến 200 o C và giữ trong 1 phút, tiếp tục tăng 10 o C/phút đến 290 o C và giữ trong 6 phút Tổng thời gian 22 phút

2.3.1.4 Khảo sát phổ khối của ATS và ketamin

Sử dụng dung dịch chuẩn đơn chất phân tích 100 ng/ml, chuẩn nội 100 ng/ml và chuẩn hỗn hợp 100 ng/ml, chúng tôi tạo dẫn xuất và thực hiện phân tích trên GC-MS ở chế độ quét toàn phổ để khảo sát mảnh phổ đặc trưng của từng chất Dựa trên kết quả khảo sát, nhằm tăng độ đặc hiệu, độ nhạy và giảm nhiễu đường nền, chúng tôi tiến hành khảo sát các mẫu ở chế độ chọn lọc ion (SIM) với mảnh phổ đặc trưng của các chất Từ đó, lựa chọn các mảnh phổ phù hợp cho phân tích định lượng.

2.3.1.5 Nghiên cứu tối ưu hóa dẫn xuất

Khảo sát tỉ lệ chất tạo dẫn xuất, nhiệt độ tạo dẫn xuất, thời gian tạo dẫn xuất với ATS và ketamin

Khảo sát tỉ lệ chất tạo dẫn xuất HFBA với dung môi EtOAc được thực hiện với ba tỉ lệ 1:2, 1:1 và 2:1 (v/v) Nhiệt độ tạo dẫn xuất được điều chỉnh ở các mức 60°C, 70°C, 80°C, 90°C và 100°C Thời gian tạo dẫn xuất cũng được khảo sát với các khoảng thời gian 20 phút, 30 phút và 40 phút.

Trong 50 phút, dựa trên kết quả khảo sát, chúng tôi đã lựa chọn các điều kiện tối ưu để tạo ra dẫn xuất phù hợp của các chất phân tích với HFBA, phục vụ cho quá trình phân tích bằng GC-MS.

2.3.2 Nghiên cứu phương pháp xử lý và chiết xuất

Nghiên cứu này dựa trên các tài liệu tham khảo và khảo sát xử lý mẫu tóc bằng ba phương pháp: dung dịch kiềm natri hydroxyt 1 M, dung dịch acid hydrocloric 0,1 M và dung dịch MeOH chứa 1% HCl Mỗi phương pháp xử lý được thực hiện với 10 mg tóc và tiến hành theo các phương pháp đã được chỉ định trong tài liệu [37], [50], [103].

 Phương pháp xử lý bằng dung dịch NaOH

Cân chính xác 10 mg tóc vào mỗi ống nghiệm và rửa bằng nước cất 2 lần, mỗi lần 5 ml, sau đó rửa bằng methanol 2 lần, mỗi lần 5 ml Cắt tóc thành đoạn khoảng 1 mm, thêm 1 ml dung dịch natri hydroxyt 1 M, thêm chuẩn nội và ủ ở 90 oC trong 10 phút Để mẫu nguội ở nhiệt độ phòng, ly tâm để thu dịch Dịch thu được sẽ được chiết LLE hoặc điều chỉnh pH bằng 1 ml dung dịch acid hydrocloric 1M đến trung tính, sau đó thêm 3 ml dung dịch đệm phosphat 0,1M; pH 6,0 và tiến hành chiết SPE.

 Phương pháp xử lý bằng dung dịch acid HCl 0,1 M

Cân chính xác khoảng 10 mg tóc vào mỗi ống nghiệm và rửa bằng nước cất hai lần, mỗi lần 5 ml, sau đó rửa bằng methanol hai lần, mỗi lần 5 ml Tóc được cắt thành đoạn khoảng 1mm, sau đó thêm 1 ml dung dịch acid hydrocloric 0,1 M và chuẩn nội, ủ ở 45°C trong 12 giờ Mẫu được làm nguội ở nhiệt độ phòng và ly tâm để thu dịch, sau đó điều chỉnh pH của dịch thu được tới 10.

Sử dụng 11 ml dung dịch natri hydroxyt 1 M, tiến hành chiết LLE hoặc điều chỉnh pH về trung tính bằng 1 ml dung dịch natri hydroxyt 0,1 M Sau đó, thêm 3 ml dung dịch đệm phosphat 0,1 M với pH 6,0 và thực hiện chiết SPE.

 Phương pháp xử lý bằng MeOH chứa 1% HCl

Cân 10 mg tóc vào mỗi ống nghiệm và rửa bằng nước cất hai lần, mỗi lần 5 ml, sau đó rửa bằng methanol hai lần, mỗi lần 5 ml Cắt tóc thành từng đoạn khoảng 1mm và thêm 1 ml dung dịch MeOH chứa 1% HCl cùng với chuẩn nội, ủ trong 18 giờ ở nhiệt độ phòng Sau đó, ly tâm mẫu để thu dịch và làm khô dịch thu được bằng khí nitơ đến cặn Cặn này sẽ được hòa tan trong

Sử dụng 3 ml nước cất và điều chỉnh pH đến 10 - 11 bằng dung dịch natri hydroxyt 1 M, sau đó tiến hành chiết tách lỏng-lỏng (LLE) Hoặc có thể hòa tan bằng 3 ml dung dịch đệm phosphat 0,1M, pH 6,0 và tiến hành chiết tách pha rắn (SPE).

2.3.2.2 Xử lý mẫu nước tiểu

Lấy chính xác 1,0 ml nước tiểu vào ống nghiệm, thêm 3ml dung dịch đệm phosphat 0,1 M; pH 6,0, thêm chuẩn nội, ly tâm lấy dịch để tiến chiết

SPE hoặc chỉnh đến pH 10 bằng dung dịch natri hydroxyt 1 M, thêm chuẩn nội, ly tâm lấy dịch để tiến hành chiết LLE

2.3.2.3 Nghiên cứu phương pháp chiết

Sau khi tham khảo tài liệu, chúng tôi đã tiến hành khảo sát chiết bằng phương pháp LLE với dung môi ethyl acetat và SPE trên các loại cột chiết khác nhau như cột chiết pha đảo (C18), cột chiết trao đổi cation (SCX) và cột chiết hỗn hợp giữa pha đảo và trao đổi cation (Evidex) Mục tiêu là đánh giá khả năng thu hồi của các chất thông qua các quy trình chiết xuất được thực hiện theo các phương pháp đã nêu.

Hoạt hóa cột lần lượt bằng methanol và dung dịch đệm phosphat 0,1M, pH 6,0 với mỗi loại 3 ml và tốc độ 2 ml/phút Nạp mẫu vào cột cũng với tốc độ 2 ml/phút Sau đó, rửa cột bằng 10 ml nước cất và 5 ml dung dịch acid hydrochloric 0,1 M với tốc độ 5 ml/phút Tiếp theo, rửa cột bằng 5 ml methanol với tốc độ 2 ml/phút và hút khô cột trong 1 phút Cuối cùng, rửa giải bằng 5 ml hỗn hợp ethyl acetat, methanol và amoniac (80:18:2) với tốc độ 2 ml/phút, sau đó thu dịch rửa giải và thêm 50 µl dung dịch MeOH chứa 1% HCl, và làm khô bằng khí nitơ đến cặn.

Hoạt hóa cột với 3 ml methanol và 3 ml dung dịch đệm phosphat 0,1M, pH 6,0, thực hiện với tốc độ 2 ml/phút Nạp mẫu vào cột cũng với tốc độ 2 ml/phút Tiến hành rửa cột bằng 5 ml hỗn hợp MeOH : H2O (1:9) với tốc độ 3 ml/phút, sau đó hút khô cột trong 1 phút Rửa giải cột bằng 3 ml MeOH với tốc độ 2 ml/phút, và thêm 50 µl dung dịch MeOH chứa 1% HCl, sau đó làm khụ dịch bằng khí nitơ đến cạn.

Hoạt hóa cột bằng dung dịch MeOH chứa 1% HCl và nước cất, mỗi loại 3 ml với tốc độ 2 ml/phút Nạp mẫu vào cột cũng với tốc độ 2 ml/phút và tiến hành rửa cột.

56 cột với 5 ml nước cất và 3 ml dung dịch MeOH tốc độ 2 ml/phút Hút khô cột

KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI MA TÚY NHÓM ATS VÀ KETAMIN

3.1.1 Xây dựng các điều kiện sắc ký khí khối phổ Để phân tích bằng sắc ký khí khối phổ (GC-MS), cần khảo sát các điều kiện tách bằng GC và xác định bằng MS

3.1.1.1 Lựa chọn các điều kiện tách của GC

Cột sắc ký HP5-MS (30 m x 250 μm; 0,25 μm) của Agilent, Mỹ, với pha tĩnh 5% Phenyl-methylpolysiloxan, là một lựa chọn phổ biến trong nghiên cứu nhờ vào tính chất phân cực trung bình đến yếu, phù hợp với nhiều loại ma túy khác nhau Sự linh hoạt của cột này cho phép ứng dụng rộng rãi, không chỉ ở Việt Nam mà còn trên toàn thế giới, và các loại cột có bản chất tương tự cũng có thể được sử dụng để đạt hiệu quả tương đương.

- Khí mang: Khí mang sử dụng là khí heli có độ tinh khiết 99,999 %, với tốc độ dòng là 1 ml/phút

Hệ thống sắc ký khí hiện nay trang bị bộ tiêm mẫu với hai chế độ: chia dòng và không chia dòng Mặc dù chế độ tiêm mẫu chia dòng tạo ra hình dạng píc đẹp hơn, nhưng độ nhạy lại giảm do lượng chất phân tích được chia nhỏ Vì vậy, nghiên cứu này lựa chọn sử dụng chế độ tiêm mẫu không chia dòng, với nhiệt độ buồng tiêm mẫu được thiết lập ở 250 o C.

Với sắc ký khí, thể tích tiêm mẫu thường dao động từ 1-5 µl Khi thể tích tiêm lớn hơn 1 µl, độ nhạy của thiết bị sẽ tăng lên, tuy nhiên có thể xuất hiện hiện tượng kéo đuôi do một số chất không bay hơi hoàn toàn Do đó, trong nghiên cứu này, thể tích tiêm mẫu được cố định ở mức 1 µl bằng cách sử dụng bộ tiêm mẫu tự động.

3.1.1.2 Lựa chọn các điều kiện xác định bằng MS

Trong nghiên cứu này, chế độ ion hóa dương với nguồn ion hóa bằng va chạm điện tử (Electron Impact - EI) được áp dụng để xác định thời gian lưu của các chất ATS và ketamin Chế độ quét (full scan) với năng lượng ion hóa 70 eV được sử dụng, cho phép tạo ra nhiều ion sản phẩm khác nhau từ ion phân tử Các ion sản phẩm có tín hiệu lớn và ổn định được dùng làm ion định lượng, trong khi các ion còn lại được sử dụng để xác nhận và thực hiện ở chế độ SIM (selected ion monitoring).

3.1.2 Khảo sát phổ của các chất ma túy nhóm ATS và ketamin Để phân tích các chất bằng phương pháp sắc ký khí khối phổ thì phải xác định đƣợc ion sản phẩm của chúng Với kỹ thuật ion hóa bằng va chạm điện tử EI, các ion sản phẩm đƣợc tạo thành thông qua sự bắn phá các ion phân tử Mặt khác, mẫu phải đƣợc chuyển thành dạng hơi ở điều kiện nhiệt độ làm việc của thiết bị Tuy nhiên ATS và ketamin là những chất phân cực, khi xác định trực tiếp bằng GC-MS, chúng thường bị hấp phụ trong buồng tiêm mẫu, trong cột sắc ký hoặc bị phân hủy, gây nên píc sắc ký bị kéo đuôi và ảnh hưởng tới độ nhạy Vậy, để phân tích được các chất này bằng phương pháp GC-MS thì chúng cần đƣợc tạo dẫn xuất thành amid dễ bay hơi và bền với nhiệt độ cao Các tác nhân dẫn xuất đƣợc sử dụng để khảo sát phổ khối gồm

AA, TFAA, PFPA, HFBA, MBSTFA [28]

3.1.2.1 Khảo sát lựa chọn tác nhân dẫn xuất

Các tác nhân dẫn xuất phổ biến hiện nay để tạo dẫn xuất với nhóm amin của ma túy tổng hợp và ketamin bao gồm AA, TFAA, PFPA, HFBA, và MBSTFA Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã sử dụng các tác nhân dẫn xuất TFAA, PFPA và HFBA.

Lấy 100 µl dung dịch chuẩn hỗn hợp làm việc có nồng độ 1 µg/ml và 100 µl dung dịch hỗn hợp chuẩn nội chứa 1 µg/ml vào ống nghiệm Sau đó, thêm 50 µl dung dịch MeOH có chứa 1% HCl Cuối cùng, bay hơi dung môi bằng khí nitơ dưới điều kiện nhiệt độ thích hợp.

Tại nhiệt độ 63 độ C, tiến hành phản ứng cắn với 100 µl các chất PFPA, TFAA, HFBA trong 40 phút ở 80 độ C Sau đó, dẫn xuất được làm nguội ở nhiệt độ phòng và khử bằng nitơ cho đến khô Dẫn xuất khô được hòa tan trong 100 µl ethyl acetat và tiếp tục thực hiện sắc ký theo điều kiện đã nêu trong mục 3.1.1 Điều kiện gradient nhiệt độ được lựa chọn như sau: nhiệt độ ban đầu.

80 o C giữ trong 3 phút, tăng lên 40 o C/phút đến 200 o C và giữ trong 1 phút, tiếp tục tăng 10 o C/phút đến 290 o C và giữ trong 6 phút

Sắc đồ của các chất phân tích dẫn xuất với TFAA, PFPA và HFBA được trình bày trong Hình 3.1, Hình 3.2 và Hình 3.3, dựa trên các điều kiện sắc ký và dẫn xuất đã nêu.

Hình 3.1 Sắc đồ Scan (a) và SIM (b) của các chất nhóm ATS và ketamin dẫn xuất với TFAA

Hình 3.2 Sắc đồ Scan (a) và SIM (b) của các chất nhóm ATS và ketamin dẫn xuất với PFPA

Hình 3.3 Sắc đồ Scan (a) và SIM (b) của các chất nhóm ATS và ketamin dẫn xuất với HFBA

Tất cả các sắc đồ đều hiển thị pic rõ ràng và sắc nét Sắc đồ dẫn xuất với TFAA cho thấy các pic không đồng đều về chiều cao và thời gian lưu, với một số pic thấp và không cân đối Trong khi đó, sắc đồ dẫn xuất với PFPA cho pic cân đối và đã tạo dẫn xuất với 07 chất nhóm ATS, nhưng kém hiệu quả với ketamin và norketamin Sắc đồ dẫn xuất với HFBA thể hiện pic cân đối, tách rời nhau và tín hiệu rõ ràng, tạo dẫn xuất với tất cả 09 chất nghiên cứu, bao gồm cả nhóm ATS, ketamin và norketamin.

Vậy HFBA đƣợc lựa chọn để làm tác nhân dẫn xuất trong các nghiên cứu tiếp theo trong luận án

3.1.2.2 Khảo sát phổ khối của nhóm ATS và ketamin dẫn xuất HFBA

Phổ khối, thời gian lưu của các chất ma túy nhóm ATS và ketamin với dẫn xuất HFBA đƣợc khảo sát nhƣ sau:

Lấy 100 µl dung dịch chuẩn hỗn hợp 1 µg/ml và 100 µl dung dịch hỗn hợp chuẩn nội 1 µg/ml vào ống nghiệm, sau đó thêm 50 µl dung dịch MeOH chứa 1% HCl Bay hơi dung môi bằng khí nitơ ở nhiệt độ phòng Sau đó, tạo dẫn xuất bằng cách thêm 100 µl HFBA và 100 µl ethyl acetate ở nhiệt độ 80°C trong 40 phút Dẫn xuất được làm nguội ở nhiệt độ phòng và được làm khô bằng khí nitơ Cuối cùng, hòa tan trong 100 µl ethyl acetate và tiến hành sắc ký ở chế độ quét phổ full scan Phân tích lặp lại được thực hiện để đảm bảo độ chính xác.

Mỗi ion phân tử đƣợc bắn phá để thu lấy các ion sản phẩm

Sắc đồ ion thành phần và phổ khối lƣợng của các chất phân tích với tác nhân dẫn xuất HFBA đƣợc trình bày ở Hình 3.4 và Phụ lục 3

Sắc đồ ion và phổ khối lượng của các hợp chất AM-HFBA, KET-HFBA, MA-d 5 -HFBA và KET-d 4 -HFBA được trình bày trong bài viết Cụ thể, các sắc đồ ion cho thấy thành phần của từng hợp chất, trong khi phổ khối lượng cung cấp thông tin chi tiết về khối lượng phân tử của chúng Hình 3.4 minh họa rõ nét sự tương quan giữa sắc đồ ion và phổ khối của chuẩn và chuẩn nội, góp phần quan trọng trong việc phân tích và nhận diện các hợp chất này trong nghiên cứu.

Dựa trên phổ khối của các chất phân tích, các ion thành phần đƣợc thể hiện trong Bảng 3.1

Bảng 3.1 Mảnh ion mẹ và ion thành phần của các chất nghiên cứu

Chất phân tích dẫn xuất với HFBA

Trên phổ đồ, các chất khác nhau tạo ra các ion thành phần khác nhau, với thời gian lưu của các chất phân tích từ 6,4 đến 10,4 phút Thời gian này phù hợp cho việc phân tích toàn bộ các chất khảo sát, đồng thời cho phép phân tích đồng thời các chất ATS và ketamin trong một lần chạy sắc ký.

Mục tiêu của nghiên cứu là nâng cao tính đặc hiệu và độ nhạy của phương pháp phân tích, đồng thời giảm thiểu nhiễu nền Để đạt được điều này, chế độ phân tích chọn lọc ion (SIM) được lựa chọn để phân tích các chất có ion thành phần đặc trưng với tín hiệu cao và ổn định Các ion được gạch chân trong Bảng 3.1 sẽ được sử dụng làm ion định lượng.

Sắc đồ của các chất nghiên cứu ở chế độ SIM và ion định lƣợng của các chất phân tích đƣợc thể hiện ở Hình 3.5

Hình 3.5 Sắc đồ chế độ SIM và các ion định lượng của các chất phân tích

3.1.2.3 Nghiên cứu khảo sát chương trình nhiệt độ

NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH XỬ LÝ, CHIẾT XUẤT CÁC CHẤT MA TÚY NHÓM ATS VÀ KETAMIN TỪ TÓC VÀ NƯỚC TIỂU

3.2.1 Nghiên cứu quy trình xử lý và chiết mẫu

Xử lý mẫu là yếu tố quan trọng trong phân tích ma túy trong tóc và dịch sinh học, đặc biệt là trong việc xử lý mẫu tóc do cấu trúc rắn và bền chắc của sợi tóc Việc này trở nên phức tạp hơn vì các chất ma túy thường chỉ có hàm lượng rất nhỏ trong tóc và không tan trong dung môi Kỹ thuật xử lý mẫu cần đảm bảo thu hồi hoạt chất với hiệu suất cao, lặp lại và quy trình phải đơn giản, hiệu quả, an toàn, đồng thời loại bỏ ảnh hưởng từ các yếu tố bên ngoài.

AM MA PMA MDA MDMA

Nghiên cứu này nhằm khảo sát ảnh hưởng của nền mẫu đến phương pháp phân tích, tập trung vào việc xử lý mẫu tóc và chiết xuất đồng thời các chất nhóm ATS và ketamin từ tóc và nước tiểu Các phương pháp xử lý mẫu được thực hiện trong môi trường kiềm, acid, và MeOH có chứa 1% HCl Đồng thời, nghiên cứu cũng xem xét các phương pháp chiết LLE với EtOAc và chiết SPE sử dụng các loại cột chiết C18, SCX, và Evidex.

Với mẫu tóc: Cân chính xác khoảng 10 mg tóc, rửa lần lượt bằng nước cất và methanol mỗi thứ 2 lần Tóc đƣợc cắt ngắn khoảng 1 mm và đƣợc thêm

Để tiến hành khảo sát, sử dụng 100 ml dung dịch chuẩn hỗn hợp với nồng độ 1 µg/ml Các mẫu sẽ được xử lý theo phương pháp đã nêu trong mục 2.3.2.1 và thực hiện phương pháp chiết xuất theo hướng dẫn trong mục 2.3.2.3 Sau quá trình chiết xuất, 100 ng chuẩn nội sẽ được bổ sung vào dịch chiết.

Để tiến hành khảo sát phương pháp chiết, lấy chính xác 1 ml nước tiểu cho vào ống nghiệm, sau đó thêm 100 µl dung dịch chuẩn hỗn hợp làm việc 1 µg/ml và 3 ml dung dịch đệm phosphat 0,1M với pH 6,0 Tiến hành ly tâm và sử dụng dịch thu được cho quá trình khảo sát Cuối cùng, thêm 100 ng chuẩn nội vào dịch chiết sau khi hoàn tất quá trình chiết xuất.

Với mẫu chuẩn: Lấy 100 àl dung dịch chuẩn hỗn hợp làm việc 1 àg/ml và 100 àl dung dịch chuẩn nội hỗn hợp làm việc 1 àg/ml vào ống nghiệm

Tất cả các dịch chiết và dung dịch chuẩn được thêm 50 µl dung dịch MeOH chứa 1% HCl Sau đó, dung môi được bay hơi bằng khí nitơ cho đến cạn Cặn thu được được tạo dẫn xuất với 100 µl HFBA trong 40 phút Sau khi tạo dẫn xuất và thổi khô, cặn được hòa tan trong 100 µl ethyl acetat và tiến hành sắc ký ở chế độ SIM Mỗi thử nghiệm được thực hiện 5 lần (n = 5).

Khả năng thu hồi của các phương pháp xử lý mẫu và chiết xuất được xác định thông qua việc so sánh tỉ lệ diện tích píc của chất phân tích trong mẫu trắng thêm chuẩn đã qua xử lý và chiết xuất với tỉ lệ diện tích píc của mẫu chuẩn và chuẩn nội không qua xử lý Kết quả chi tiết được trình bày trong Bảng 3.5 - 3.8 và Hình 3.10 - 3.14.

Bảng 3.5 Độ thu hồi của chất phân tích trong tóc xử lý bằng kiềm và chiết bằng các phương pháp

Chất phân tích dẫn xuất với

MA 84,53 6,45 63,58 5,69 86,14 3,30 88,89 3,55 PMA 84,14 9,59 76,31 9,04 84,21 10,24 83,58 6,47 MDA 85,63 6,11 58,49 6,50 82,92 8,58 87,34 2,38 MDMA 83,37 6,27 62,61 10,18 83,98 3,97 86,17 1,24 MDEA 79,77 8,32 48,74 8,23 83,84 5,56 74,09 5,05 DOB 81,36 9,24 47,57 7,05 78,96 9,84 87,43 6,66 KET 72,88 6,55 64,48 7,16 76,62 6,12 78,63 4,64 NKT 82,68 3,49 58,41 7,37 79,34 8,55 83,40 2,31

Hình 3.10 So sánh các phương pháp chiết khi xử lý mẫu bằng NaOH 1M

AM MA PMA MDA MDMA MDEA DOB KET NKT Độ thu hồi (%)

Mẫu tóc xử lý bằng NaOH 1M

Bảng 3.6 Độ thu hồi của chất phân tích trong tóc xử lý bằng acid và chiết bằng các phương pháp

Hình 3.11 So sánh các phương pháp chiết khi xử lý mẫu bằng HCl 0,1M

Mẫu tóc xử lý bằng HCl 0,1M

Bảng 3.7 Độ thu hồi của chất phân tích trong tóc xử lý bằng MeOH chứa 1%

HCl và chiết bằng các phương pháp

Hình 3.12 So sánh các phương pháp chiết khi xử lý mẫu bằng MeOH chứa 1 % HCl

Mẫu tóc xử lý bằng MeOH chứa 1% HCl

Bảng 3.8 Độ thu hồi của chất phân tích trong nước tiểu và chiết bằng các phương pháp

Hình 3.13 So sánh các phương pháp chiết nước tiểu

81 a Chiết bằng LLE b Chiết bằng cột C18 c Chiết bằng cột SCX d Chiết bằng cột Evidex Hình 3.14 Sắc đồ khảo sát phương pháp chiết trong tóc

Các phương pháp xử lý tóc bằng dung dịch kiềm, dung dịch acid và MeOH đạt độ thu hồi tốt cho chiết LLE và cột chiết Evidex Trong khi đó, chiết bằng cột C18 cho tỷ lệ thu hồi chất phân tích thấp nhất (36 - 76%) so với ba phương pháp xử lý mẫu và nước tiểu Các phương pháp chiết LLE và SPE với cột chiết SCX và Evidex đều cho tỷ lệ thu hồi cao, khoảng 70% đến 90% Tuy nhiên, chiết bằng EtOAc và SPE cột SCX tạo ra sắc đồ với nhiều píc không xác định và nhiễu đường nền cao, trong khi cột chiết Evidex cho sắc đồ ít nhiễu và ít píc không xác định hơn.

Dựa trên kết quả khảo sát, luận án đã sử dụng phương pháp xử lý tóc bằng MeOH chứa 1% acid HCl kết hợp với cột chiết Evidex để chiết xuất các chất ATS và ketamin.

3.2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng của pH đối với độ thu hồi ATS và ketamin

Các dung dịch chiết xuất bằng SPE ở các pH khác nhau cho hiệu suất chiết khác nhau Để đánh giá độ thu hồi chất phân tích, mẫu tóc được xử lý bằng methanol có 1% acid hydrochloric, trong khi mẫu nước tiểu được xử lý theo phương pháp riêng Sau khi xử lý, các mẫu được điều chỉnh pH về 4,0; 5,0; 6,0; 7,0 và 8,0, sau đó tiến hành chiết xuất bằng cột Evidex Dung dịch chuẩn nội 100 ng/ml được thêm vào tất cả các mẫu đã xử lý và chiết xuất Mỗi thử nghiệm được thực hiện 5 lần (n = 5) Đánh giá độ thu hồi dựa trên tỉ lệ diện tích pic của chất phân tích trong mẫu trắng thêm chuẩn so với mẫu chuẩn và nội chuẩn không qua xử lý.

Kết quả độ thu hồi các chất phân tích trong tóc và nước tiểu tại các pH khác nhau đƣợc thể hiện trong Bảng 3.9 - 3.10 và Hình 3.15 - 3.16

Bảng 3.9 Độ thu hồi chất phân tích trong tóc tại các pH khác nhau

Chất phân tích dẫn xuất với HFBA pH

MA 76,74 5,30 81,34 2,57 84,39 5,48 75,92 3,31 67,25 2,71 PMA 80,95 8,18 83,19 9,68 85,04 4,84 77,76 5,90 69,44 3,15 MDA 78,28 4,84 83,26 4,90 84,99 5,32 80,36 6,47 74,34 1,58 MDMA 71,42 7,04 81,84 4,65 88,23 3,24 77,74 2,47 64,50 7,51 MDEA 64,24 7,83 77,08 5,82 80,50 4,00 78,49 6,79 66,62 4,21 DOB 73,24 7,29 79,42 3,71 82,58 7,16 76,16 7,72 66,05 3,85 KET 75,98 5,36 77,93 3,14 79,99 7,63 74,94 2,91 66,67 3,73 NKT 69,29 3,09 80,11 3,08 89,30 4,25 75,22 7,30 69,12 5,62

Hình 3.15 So sánh độ thu hồi chất phân tích trong tóc tại pH khác nhau

MA PMA MDA MDMA MDEA DOB KET NKT

Bảng 3.10 Độ thu hồi chất phân tích trong nước tiểu tại các pH khác nhau

Chất phân tích dẫn xuất với HFBA pH

MA 64,26 3,18 80,57 2,93 82,60 4,12 76,32 3,87 69,26 4,71 PMA 77,44 8,92 82,89 7,92 84,66 4,76 80,81 9,40 73,42 9,31 MDA 72,03 3,74 77,58 8,52 79,80 3,33 77,32 4,72 56,67 5,01 MDMA 67,17 5,91 78,43 8,29 82,33 5,83 66,80 9,20 55,94 5,11 MDEA 61,89 3,59 79,11 3,38 82,91 4,59 66,67 3,41 57,69 3,04 DOB 65,92 3,53 80,74 3,12 84,35 4,43 68,16 9,11 54,49 6,76 KET 64,71 5,70 70,54 4,05 74,67 5,21 66,59 6,95 57,43 7,31 NKT 67,59 7,03 77,85 5,89 88,43 9,33 71,61 3,58 65,14 5,30

Hình 3.16 So sánh độ thu hồi chất phân tích trong nước tiểu tại pH khác nhau

MA PMA MDA MDMA MDEA DOB KET NKT

Nhận xét: Kết quả thể hiện trong các Bảng 3.9 - 3.10 và các Hình 3.15 -

3.16 cho thấy độ thu hồi các chất phân tích tăng khi pH tăng từ pH 4,0 - pH 6,0 và đạt cao nhất tại pH 6,0 (từ 78 - 90 % đối với mẫu tóc và từ 74 - 89 % đối với mẫu nước tiểu) Khi tăng tiếp pH lên đến pH 7,0 và pH 8,0 độ thu hồi các chất phân tích lại giảm dần và thấp nhất tại pH 8 (từ 64 - 75 % đối với mẫu tóc và từ 54 - 74 % đối với mẫu nước tiểu) Vậy mẫu tóc và nước tiểu sau khi xử lý sẽ đƣợc điều chỉnh tới pH 6,0 để tiến hành chiết suất bằng SPE với cột Evidex trong luận án

3.2.3 Đánh giá độ thu hồi của phương pháp Độ thu hồi của phương pháp được xác định và tính toán tại hàm lượng thấp, trung bình và cao đối với mỗi chất phân tích bằng tỉ số trung bình của tỉ lệ diện tích píc của chất phân tích và chuẩn nội trong mẫu tóc, nước tiểu qua quá trình xử lý và chiết xuất với tỉ lệ diện tích píc của chất chuẩn và chuẩn nội không qua quá trình xử lý và chiết xuất

Chuẩn bị mẫu tóc chứa các chất chuẩn với hàm lƣợng 10, 100 và 400 ng/10 mg tóc Mẫu nước tiểu được chuẩn bị với hàm lượng các chất chuẩn là

20, 100 và 400 ng/ml Các mẫu tóc đƣợc xử lý bằng dung dịch methanol chứa

Nước tiểu được xử lý với 1% acid hydrochloric theo mục 2.3.2.1 và chiết xuất bằng phương pháp chiết pha rắn với cột Evidex theo mục 2.3.2.2 và 2.3.2.3 Sắc ký được thực hiện theo điều kiện đã chọn ở mục 3.1.1 Dung dịch chuẩn nội 100 ng/ml được thêm vào tất cả các mẫu sau khi xử lý và chiết xuất Mỗi thử nghiệm được thực hiện 5 lần (n = 5).

Kết quả xác định tỷ lệ thu hồi hoạt chất của phương pháp được trình bày ở Bảng 3.11 và Bảng 3.12

Bảng 3.11 Độ thu hồi của chất phân tích trong tóc

Tỉ lệ diện tích píc (TB)

CV (%) Độ thu hồi Chiết K chiết Chiết K chiết (%)

Bảng 3.12 Độ thu hồi của chất phân tích trong nước tiểu

Tỉ lệ diện tích píc (TB)

CV (%) Độ thu hồi Chiết K chiết Chiết K chiết (%)

Nhận xét: Kết quả độ thu hồi các chất phân tích ATS và ketamin trong tóc ở các hàm lƣợng thấp, trung bình và cao đều đạt trong khoảng từ 75 - 90

% với CV < 15 % và độ thu hồi các chất phân tích ATS và ketamin trong nước tiểu ở các hàm lượng thấp, trung bình và cao đều đạt trong khoảng từ 72

- 90 % với CV < 15 % Như vậy phương pháp có độ thu hồi cao và lặp lại

3.2.4 Đánh giá ảnh hưởng của nền mẫu

Nước tiểu và tóc chứa nhiều chất như muối và các ion, do đó việc xử lý mẫu không đúng cách có thể ảnh hưởng đến kết quả phân tích bằng GC-MS Nghiên cứu này nhằm đánh giá ảnh hưởng của nền mẫu để đảm bảo rằng quá trình phân tích không bị tác động hoặc chỉ bị ảnh hưởng ở mức chấp nhận được Để thực hiện đánh giá này, chúng tôi đã khảo sát 6 mẫu tóc trắng với các chuẩn 10 ng, 100 ng, 400 ng và 6 mẫu nước tiểu trắng cũng được thêm chuẩn tương ứng.

Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã chuẩn bị 6 mẫu chuẩn với hàm lượng 20 ng, 100 ng và 400 ng trong 1 ml dung dịch đệm phosphat 0,1 M, pH 6,0 Các mẫu tóc được xử lý bằng dung dịch methanol chứa 1% acid hydrochloric, trong khi mẫu nước tiểu được xử lý theo phương pháp riêng Quá trình chiết xuất được thực hiện bằng chiết pha rắn với cột Evidex, và sắc ký được tiến hành theo các điều kiện đã chọn Dung dịch chuẩn nội 100 ng/ml được thêm vào tất cả các mẫu sau khi xử lý và chiết xuất Ảnh hưởng của nền mẫu đến các chất phân tích được trình bày chi tiết trong các bảng và hình ảnh tương ứng.

Bảng 3.13 Ảnh hưởng của nền mẫu tóc đến các chất ATS và Ketamin

Lƣợng thêm vào (ng/ml)

Bảng 3.14 Ảnh hưởng của nền mẫu nước tiểu đến các chất ATS và Ketamin

Lƣợng thêm vào (ng/ml)

Nước tiểu Ảnh hưởng nền

Hình 3.17 Ảnh hưởng nền với mẫu tóc ở hàm lượng các chất ma túy 10 ng/10 mg

Hình 3.18 Ảnh hưởng nền với mẫu nước tiểu ở hàm lượng các chất ma túy 20 ng/ml

AM MA PMA MDA MDMA MDEA DOB KET NKT

Chất ma túy dẫn xuất với HFBA

AM MA PMA MDA MDMA MDEA DOB KET NKT

Chất ma túy dẫn xuất với HFBA

Kết quả khảo sát cho thấy, hàm lượng các chất trong tóc và nước tiểu ở ba mức thấp, trung bình và cao có ảnh hưởng nền mẫu từ -13,52% đến 6,28% (trong khoảng ±15%), với giá trị CV từ 2,56% đến 9,33% (nhỏ hơn 15%) Điều này cho thấy phương pháp xử lý mẫu là phù hợp và ảnh hưởng của nền mẫu đến kết quả phân tích các chất ATS và ketamin trong tóc và nước tiểu là chấp nhận được.

3.2.5 Tổng hợp quy tình xử lý, chiết xuất và phân tích các chất ATS và ketamin bằng GC-MS

BÀN LUẬN

MẪU NGHIÊN CỨU VÀ ĐIỀU KIỆN DẪN XUẤT

4.1.1 Lựa chọn đối tƣợng nghiên cứu

Để xác định người có sử dụng ma túy hay không, các mẫu dịch sinh học như máu, nước tiểu, nước bọt, mồ hôi, lông, tóc hoặc móng thường được sử dụng để phân tích giám định Trong các xét nghiệm, mẫu nước tiểu và máu thường được ưa chuộng do liên quan đến khả năng hấp thu và chuyển hóa của các chất ma túy trong cơ thể.

Phân tích giám định ma túy trong dịch sinh học và tóc là một công việc phức tạp do sự đa dạng của các loại ma túy bất hợp pháp trên thế giới Mỗi nhóm chất ma túy yêu cầu quy trình phân tích riêng biệt, trong khi hàm lượng của chúng trong dịch sinh học và tóc thường rất thấp và khác nhau Hơn nữa, sự hiện diện của nhiều thành phần phức tạp trong dịch sinh học và tóc có thể ảnh hưởng đến các chất phân tích, do đó cần thiết phải có quy trình chiết xuất thích hợp để tối đa hóa việc thu nhận các chất ma túy mà không làm ảnh hưởng đến kết quả phân tích.

Luận án sử dụng mẫu tóc và nước tiểu để phân tích do tính dễ thu thập và không yêu cầu kỹ thuật lấy mẫu phức tạp Phân tích tóc có khả năng phát hiện thuốc đã sử dụng từ vài tuần đến vài tháng, tùy thuộc vào chiều dài mẫu tóc và sự ổn định của thuốc trong đó.

Phân tích tóc là một yếu tố quan trọng trong giám định pháp y, đặc biệt trong các trường hợp tử vong lâu ngày khi mẫu dịch sinh học không khả thi Nếu không thể thu thập mẫu nước tiểu hoặc tóc do đối tượng không có tóc hoặc tóc quá ngắn, các mẫu như râu, lông nách hoặc lông mu có thể được sử dụng thay thế Mẫu nước tiểu cũng giúp đánh giá khả năng sử dụng ma túy.

Mẫu tóc có khả năng đánh giá việc sử dụng ma túy của đối tượng trong khoảng thời gian dài, lên đến vài tháng trước ngày lấy mẫu Điều này cho phép phát hiện tình trạng sử dụng ma túy một cách chính xác hơn so với các phương pháp khác.

Sự kết hợp giữa phân tích ma túy trong nước tiểu và tóc giúp đánh giá chính xác mức độ và tần suất sử dụng ma túy của người dùng Điều này rất hữu ích cho công tác phòng chống và điều trị ma túy, hỗ trợ hiệu quả trong việc quản lý các đối tượng sử dụng.

Nghiên cứu này đánh giá mẫu tóc và nước tiểu của nhóm bệnh nhân sử dụng ma túy nhóm ATS hoặc ketamin, được điều trị tại Bệnh viện Tâm thần Hà Nội.

4.1.1.2 Các chất ma túy được dùng cho nghiên cứu

Tình hình sản xuất, buôn bán, tàng trữ và sử dụng ma túy tại Việt Nam hiện nay đang trở nên phức tạp hơn bao giờ hết Gần đây, xu hướng sử dụng ma túy tổng hợp (ATS) và các loại ma túy hỗn hợp ngày càng gia tăng Do đó, một số chất ma túy thuộc nhóm ATS và ketamin được lựa chọn để phân tích trong nghiên cứu này.

- Các chất ATS: amphetamin (AM), methamphetamin (MA), para- methoxyamphetamin (PMA), methylenedioxyamphetamin (MDA), methylenedioxymethamphetamin (MDMA), bromo-dimethoxyamphetamin (DOB), methylenedioxyethylamphetamin (MDEA)

Các chất ma túy được lựa chọn trong nghiên cứu này rất phổ biến trên toàn cầu và thu hút sự quan tâm của các nhà nghiên cứu trong lĩnh vực dịch sinh học và tóc Trước đây, nhiều nghiên cứu chủ yếu tập trung vào một số chất trong nhóm ATS như MA, AM, MDA và MDMA, cùng với ketamin và norketamin Mặc dù có nhiều chất khác trong nhóm ATS, nhưng do chúng không được sử dụng phổ biến tại Việt Nam, nghiên cứu này chỉ chọn 07 chất thuộc nhóm ATS và 02 chất ketamin để khảo sát Ngoài 09 chất ma túy này, phương pháp nghiên cứu cũng được chú trọng.

124 phân tích xây dựng đƣợc có thể áp dụng để phân tích đồng thời nhiều chất ma túy nhóm ATS và ketamin khác

- Chuẩn nội: Methamphetamin - d 5 và ketamin - d 4

Phương pháp GC-MS không thể xác định trực tiếp các chất ma túy trong dịch sinh học và tóc; do đó, các chất này cần được xử lý và chiết tách khỏi mẫu Quá trình này bao gồm nhiều công đoạn, và tỷ lệ thu hồi hoạt chất phụ thuộc vào nhiều yếu tố khác nhau Để giảm thiểu sai số, việc sử dụng chất chuẩn nội trong suốt quá trình xử lý, chiết xuất và phân tích sắc ký là rất quan trọng.

Trong sắc ký khối phổ, chuẩn nội tốt nhất là đồng vị của từng chất, giúp đảm bảo rằng chất phân tích và chuẩn nội có tính chất hóa lý tương đồng nhưng khác biệt về số khối Điều này dẫn đến hiệu suất thu hồi của chúng gần như tương đương khi áp dụng quy trình xử lý mẫu giống nhau Trong nghiên cứu này, MA-d5 (đồng vị của MA) và KET-d4 (đồng vị của KET) được chọn làm chuẩn nội cho hai nhóm ma túy ATS và ketamin.

Trong nghiên cứu luận án, thời gian lưu của các chất phân tích được tách biệt rõ ràng Tuy nhiên, thời gian lưu của chuẩn nội MA-d 5 và MA, cũng như KET-d 4 và KET lại trùng nhau Dù vậy, việc phân tích bằng GC-MS cho phép xác định các chất có thời gian lưu trùng nhau mà không bị ảnh hưởng, nhờ vào khối phổ phân tích dựa trên các mảnh phổ đặc trưng của từng chất và so sánh với thư viện phổ cài sẵn trong máy.

4.1.2 Về khảo sát dẫn xuất

4.1.2.1 Về khảo sát lựa chọn dẫn xuất

Trong phân tích các chất ATS và ketamin bằng phương pháp GC-MS, việc tạo dẫn xuất là bước quan trọng nhằm nâng cao độ nhạy và khả năng bay hơi của chất phân tích, đồng thời giúp chất này bền vững với nhiệt độ trong quá trình sắc ký Các tác nhân dẫn xuất cần phải dễ dàng sử dụng và không được tạo ra phân tử quá lớn so với chất phân tích để đảm bảo hiệu quả tối ưu.

Phân tích đồng thời các chất ATS và ketamin có thể thực hiện bằng phương pháp GC-MS, yêu cầu tạo dẫn xuất cho tất cả các chất phân tích Việc này cho phép xác định 125 thể phân tích khác nhau trong một lần phân tích sắc ký.

Kỹ thuật dẫn xuất hóa không chỉ làm tăng khả năng bay hơi của mẫu mà còn được áp dụng hiệu quả để phân tích các chất có hàm lượng thấp Phương pháp này giúp nâng cao độ phát hiện các chất trong mẫu, đồng thời cải thiện tính bền vững với nhiệt Sau khi tạo dẫn xuất, mẫu trở nên tương thích tốt hơn với thiết bị sắc ký và detector, dẫn đến việc tạo ra các píc cân đối hơn.

PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ VÀ CHIẾT XUẤT MẪU

4.2.1.Thu thập mẫu và lƣợng mẫu

Mẫu tóc từ vùng xoáy trên đỉnh đầu được ưu tiên thu thập hơn so với các vùng khác do tính dễ thu thập và bảo quản, đồng thời thuận tiện cho việc giám định Tóc được cắt sát da đầu và tại nhiều điểm khác nhau nhằm đảm bảo tính khách quan về thời gian sử dụng ma túy cũng như thẩm mỹ cho người được xét nghiệm.

Để giảm thiểu thời gian xử lý mẫu và lượng dung môi, luận án sử dụng khoảng 10 mg mẫu tóc Việc giảm lượng mẫu yêu cầu quy trình xử lý và chiết xuất phải được tối ưu hóa để đảm bảo đủ lượng chất phân tích có thể phát hiện bằng các phương pháp hiện đại, đồng thời đại diện cho mẫu phân tích Mục tiêu là đảm bảo chiết xuất và phân tích ATS và ketamin trong tóc bằng phương pháp GC.

MS, lƣợng mẫu khoảng 10 mg tóc đƣợc rửa để loại bụi bẩn, dầu mỡ và đƣợc

Các phương pháp phân tích ATS và ketamin thường yêu cầu khoảng 20 - 50 mg tóc, với một số tác giả như Dong Liang Lin sử dụng đến 75 mg Mặc dù lượng tóc sử dụng lớn, nhưng LOD (giới hạn phát hiện) của các chất chỉ từ 0,01-0,4 ng/mg, không thấp hơn LOD trong nghiên cứu của chúng tôi, nơi sử dụng khoảng 10 mg tóc.

4.2.2 Xử lý và chiết xuất mẫu

Để phát triển và đánh giá phương pháp phân tích thuốc trong các mẫu dịch sinh học, việc tạo mẫu nhiễm bằng cách thêm chất chuẩn vào mẫu trắng là cần thiết, nhưng điều này gặp khó khăn đặc biệt với mẫu tóc Hiện tại, chưa có hướng dẫn cụ thể nào cho việc tạo mẫu tóc nhiễm đồng nhất với mẫu trắng, và cũng chưa có phương pháp khả thi nào cho phép đưa chất phân tích vào sợi tóc với hàm lượng xác định.

Việc tạo mẫu tóc nhiễm ma túy thông qua người tình nguyện gặp khó khăn do vấn đề pháp lý Hơn nữa, mối liên hệ giữa thuốc và tóc vẫn chưa được hiểu rõ, và vẫn còn nhiều tranh cãi về mối quan hệ giữa lượng thuốc sử dụng và hàm lượng thuốc trong tóc.

Trong các hướng dẫn về thẩm định phương pháp phân tích tóc của UNODC và Hiệp hội phân tích tóc Châu Âu, không có chỉ dẫn cụ thể về cách tạo mẫu nhiễm để thẩm định và đánh giá phương pháp Thay vào đó, các hướng dẫn chỉ tập trung vào chỉ tiêu thẩm định, phương pháp lấy mẫu, xử lý, chiết xuất và phân tích mẫu Do đó, hầu hết các nghiên cứu trên thế giới liên quan đến phân tích thuốc trong tóc đều sử dụng mẫu tóc trắng thêm chuẩn để xây dựng và thẩm định phương pháp, mặc dù việc tạo mẫu nhiễm này không được đề cập.

Quá trình chiết xuất các chất phân tích trong tóc được thực hiện qua một quy trình xử lý mẫu hoàn chỉnh Luận án nghiên cứu dựa trên các hướng dẫn của UNODC và Hiệp hội phân tích tóc Châu Âu, đồng thời tham khảo các công trình nghiên cứu quốc tế về phân tích ma túy trong tóc Mục tiêu là xây dựng và thẩm định phương pháp phân tích các chất ATS và ketamin trong tóc, sử dụng mẫu nhiễm được tạo thành dựa trên nguyên tắc thêm chuẩn vào mẫu trắng.

Xử lý mẫu tóc là một bước quan trọng trong việc xác định các chất ma túy như ATS và ketamin Phương pháp GC được sử dụng để phân tích và phát hiện sự hiện diện của những chất này trong tóc, đảm bảo độ chính xác và tin cậy trong quá trình xét nghiệm.

Để chiết xuất các chất như ATS và ketamin từ tóc, trước tiên cần xử lý tóc do tính chất rắn và phức tạp của nó Các chất này liên kết với tóc ở mức rất nhỏ, khiến các phương pháp chiết xuất thông thường không hiệu quả Do đó, cần áp dụng các phương pháp xử lý đặc biệt và hợp lý Trước khi tiến hành chiết xuất, tóc cần được rửa sạch bụi bẩn và dầu mỡ bám bên ngoài, sau đó cắt ngắn để dễ dàng xử lý.

Trong nghiên cứu này, các phương pháp xử lý mẫu được sử dụng bao gồm: xử lý mẫu bằng dung dịch MeOH chứa 1% HCl, bằng dung dịch NaOH

Xử lý bằng methanol (MeOH) có chứa 1% HCl cho phép hòa tan hiệu quả các hợp chất trung tính cũng như các hợp chất có tính thân nước và thân dầu ở mức trung bình.

Methanol có khả năng thẩm thấu cao vào tóc, giúp làm trương nở và phá vỡ các liên kết của chất ma túy trong tóc, từ đó giải phóng chúng Việc sử dụng khuấy từ trong quá trình ngâm tóc với methanol sẽ tăng cường hiệu quả chiết xuất các chất này ra khỏi tóc.

Phương pháp chiết này hiệu quả trong việc chiết xuất hầu hết các loại ma túy, đặc biệt là các hợp chất thân nước và thân dầu trung bình Sau khi chiết, mẫu có thể được bơm trực tiếp vào hệ thống sắc ký Việc sử dụng hỗn hợp methanol và dung dịch acid giúp tăng cường hiệu suất chiết xuất các chất ma túy.

131 cũng bị chiết khỏi tóc bằng methanol nên ảnh hưởng tới quá trình phân tích

Do vậy cần thiết phải sử dụng bước chiết xuất tiếp theo để làm sạch mẫu trước khi phân tích trên các thiết bị

Xử lý tóc bằng dung dịch acid hydrochloric 0,1 M ở nhiệt độ 60 °C mang lại dịch chiết sạch hơn so với methanol Tuy nhiên, quá trình này cũng dẫn đến sự thủy phân một số chất, ví dụ như cocain chuyển thành benzoylecgonin và heroin chuyển thành morphin.

 Xử lý bằng dung dịch NaOH 1 M: Tóc đƣợc xử lý bằng dung dịch

NaOH 1 M ở 90 °C Phương pháp này chỉ thích hợp cho những loại thuốc ổn định trong môi trường kiềm Xử lý bằng dung dịch kiềm có độ thu hồi cao; có thể đƣợc sử dụng kết hợp với vi chiết pha rắn không gian hơi (HS-SPME) để phát hiện các hợp chất có thể bay hơi (các chất dẫn xuất phencyclidin, amphetamin, barbiturat, ketamin, methadon…) Tuy vậy không phù hợp với thuốc không ổn định trong điều kiện kiềm (cocain, benzodiazepin) và dịch chiết bẩn do hòa tan một phần hoặc hoàn toàn của nền mẫu tóc [131]

Mẫu nước tiểu được xử lý bằng dung dịch đệm phosphat 0,1 M với pH 6,0, sau đó ly tâm để loại bỏ cặn Dịch thu được sẽ được chiết xuất bằng phương pháp SPE Để thực hiện chiết xuất LLE, mẫu nước tiểu được điều chỉnh pH lên 10 bằng dung dịch natri hydroxyt 1 M.

Tóc và nước tiểu sau khi xử lý xong, tiến hành chiết xuất ma túy bằng các phương pháp chiết LLE và SPE

THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ATS VÀ KETAMIN

Dịch sinh học và tóc chứa nhiều tạp chất, với hàm lượng hoạt chất có thể rất thấp, chỉ ở mức nanogam, do đó cần phương pháp phân tích nhạy cao để xác định các chất ma túy Các chất ma túy nhóm ATS và ketamin có cấu trúc hóa học và khả năng chiết xuất khác nhau, gây khó khăn trong việc phân tích đồng thời chúng Hiện nay, số lượng phương pháp phân tích đồng thời ATS và ketamin còn hạn chế, phần lớn là các phương pháp phân tích riêng lẻ Mặc dù một số phương pháp đã được công bố cho phân tích đồng thời trong tóc hoặc nước tiểu, nhưng chúng vẫn chưa đáp ứng đầy đủ các điều kiện tối ưu và chưa được thẩm định theo quy định.

Kết hợp nguyên lý chiết xuất các chất ma túy dạng base bằng SPE và tạo dẫn xuất với HFBA, phương pháp GC-MS đã được áp dụng trong nghiên cứu của luận án, cho phép phân tích đồng thời các chất ma túy ATS và ketamin trong tóc và nước tiểu với độ nhạy, độ chọn lọc và độ đặc hiệu cao Phương pháp này đạt được LOD thấp tới hàng nanogam và có độ chính xác cao, vượt trội so với phương pháp của Hei Hwa Lee.

136 và cs [75] chiết ATS và ketamin trong nước tiểu có LOD từ 15 ng - 65 ng/ml, phương pháp được nghiên cứu trong luận án có LOD thấp hơn nhiều

Phương pháp GC-MS là một kỹ thuật phân tích có độ đặc hiệu và chọn lọc cao, cho phép xác định sự hiện diện của các chất ma túy thông qua phổ khối của các ion được bắn phá Mỗi chất phân tích có hai ion sản phẩm để định tính và một ion sản phẩm để định lượng, giúp củng cố thêm sự hiện diện của các chất khảo sát nhờ vào tỷ lệ các ion Mỗi chất có tỷ lệ ion thành phần đặc trưng riêng, và việc kết hợp phổ các ion này với thư viện phổ Wiley, chứa hơn 796.000 phổ và trên 667.000 chất với tên và cấu trúc hóa học, cho phép xác định chính xác tên và cấu trúc hóa học của chất phân tích.

Bảng 4.1 Tỉ lệ ion xác nhận và ion định lượng của các chất ma túy

STT Chất phân tích tạo dẫn xuất với HFBA

Ion xác nhận 1 Ion xác nhận 2 Mảnh ion

So với phương pháp của Apichai Phonchai sử dụng GC-FID với LLOQ cho MA, AM và MDMA trong nước tiểu là 1 µg/ml, nghiên cứu của Huei-Ru Lin và cộng sự áp dụng GC-NPD để phân tích KET và NKT, đạt được LOD cho KET và NKT lần lượt là 5,0 và 5,6 ng/ml, trong khi phương pháp GC-MS cho LOD thấp hơn Các phương pháp GC-FID và GC-NPD thường chỉ dựa vào thời gian lưu để xác định chất phân tích, dẫn đến khả năng gặp khó khăn khi có sự hiện diện của các hợp chất khác đồng rửa giải.

Sử dụng phương pháp GC-MS với các tiêu chí về thời gian lưu và mảnh khối đồng thời giúp đảm bảo độ chính xác của kết quả, khắc phục sai số có thể xảy ra khi các mẫu có cùng khoảng thời gian lưu.

Trong khoảng hàm lƣợng đã khảo sát ( từ 5 ng đến 400 ng/10 mg tóc và

Nghiên cứu cho thấy các chất phân tích ATS và ketamin trong nước tiểu có độ tuyến tính đạt yêu cầu với nồng độ từ 10 ng đến 400 ng/ml Đường chuẩn phân tích được xây dựng dựa trên mẫu tóc và nước tiểu nhằm loại trừ ảnh hưởng của nền mẫu.

Giới hạn phát hiện và định lượng trong nghiên cứu này tương đối thấp, với giới hạn phát hiện các chất trong tóc từ 0,02 ng đến 0,1 ng/mg Đối với nước tiểu, giới hạn phát hiện dao động từ 0,77 ng đến 4,29 ng/ml Đặc biệt, giới hạn định lượng ketamin trong nước tiểu là 14,14 ng/ml, cao hơn điểm cuối trong đường chuẩn, dẫn đến việc điểm 10 ng/ml bị loại bỏ và đường chuẩn ketamin được xây dựng từ 20 ng đến 400 ng/ml.

So với các nghiên cứu trong và ngoài nước, đề tài này cho thấy giới hạn định tính trong nước tiểu thấp hơn nhiều Lee Hei Hwa và cộng sự đã chiết xuất SPE và dẫn xuất ATS cùng ketamin với HFBA ở nhiệt độ 65 - 70 độ C, đạt LOD từ 10 – 60 ng/ml Adrienn Dobos và cộng sự sử dụng phương pháp chiết nước tiểu bằng dicloromethan, với LOD của các chất từ 16 - 31 ng/ml Huei Ru Lin và Ahai Chang Lua cùng cộng sự chiết ATS và ketamin trong nước tiểu bằng dicloromethan và dẫn xuất bằng TFAA, cho LOD của NKT và KET là 1-2 ng/ml, trong khi nhóm ATS đạt từ 11 – 19 ng/ml Leong H.S và cộng sự chiết ketamin bằng C18 và xác định LOD là 0,4 ng/mg tóc.

Giới hạn phát hiện ATS và ketamin trong tóc trong nghiên cứu này tương đồng với các nghiên cứu quốc tế Cụ thể, tác giả Ya-Hsueh Wu và cộng sự sử dụng phương pháp chiết pha rắn kết hợp với dẫn xuất HFBA, đạt LOD từ 0,03 - 0,08 ng/mg Tương tự, tác giả Villamor J L và cộng sự áp dụng 50 mg tóc và phương pháp chiết LLE với dẫn xuất PFPA, cho LOD của các chất ATS từ 0,007 - 0,045 ng/mg Ngoài ra, Jin Young Kim và cộng sự cũng đã xác định ATS và ketamin trong móng.

138 tay cho kết quả LOD từ 0,019 - 0,094 ng/mg Villamor J L và cs [137] nghiên cứu 5 chất ma túy ATS trong nước tiểu, dẫn xuất với PFPA cho LOD từ 0,56

Phương pháp GC-MS cho phép xác định hàm lượng chất ATS và ketamin trong tóc và nước tiểu, ngay cả khi đã xa thời điểm sử dụng ma túy Điều này làm cho nó trở thành công cụ hữu ích trong phân tích vết ma túy, hỗ trợ công tác phòng chống ma túy và ứng dụng trong lĩnh vực pháp y.

Kết quả nghiên cứu cho thấy độ chính xác và độ đúng của phương pháp phân tích trên mẫu tóc và nước tiểu tại các hàm lượng LQC (10 ng/10 mg, 20 ng/ml), MQC (100 ng/10 mg; 100 ng/ml) và HQC (400 ng/10 mg; 400 ng/ml) đáp ứng yêu cầu, tương đồng với các nghiên cứu quốc tế Bảng 4.2 trình bày sự so sánh về độ đúng (CV %) và độ chính xác (R %) của phương pháp nghiên cứu với một số nghiên cứu gần đây sử dụng cùng kỹ thuật phân tích, cho thấy kết quả đạt được tương tự với các nghiên cứu trước đây trên thế giới.

Bảng 4.2 So sánh độ đúng và độ chính xác với các nghiên cứu khác

Phương pháp Nền mẫu Các kết quả

Nghiên cứu GC-MS Tóc 93 - 112 < 10

Recent studies utilizing GC-MS analysis have revealed varying concentrations of substances in urine and hair samples For urine, the measured values ranged from 73 to 110, with most studies reporting levels below 10 Notably, Lee Hei Hwa and colleagues found urine concentrations between 95 and 110, while Zengping Huang's team reported a range of 96 to 108 Similarly, Han Eunyoung's research indicated urine levels from 73 to 104.6 In terms of hair samples, Lee Sooyeun's study showed concentrations between 95 and 104, and Lin Dong-liang found values ranging from 101.2 to 116.4, with both studies reporting levels typically below 15 Overall, these findings highlight the significance of GC-MS in assessing substance levels in biological samples.

Phương pháp phân tích GC-MS được sử dụng trong luận án đã được thẩm định theo các tiêu chuẩn của FDA, Châu Âu, UNODC và nhiều hướng dẫn khác liên quan đến việc thẩm định các chất ma túy trong tóc và dịch sinh học.

Phương pháp thẩm định có giá trị LOD thấp (0,02 ng – 0,1 ng/mg tóc và 0,77 ng - 4,29 ng/ml nước tiểu) cho thấy khả năng phân tích vết ma túy hiệu quả, với khoảng hàm lượng tuyến tính lớn (5 ng - 400 ng/10 mg tóc và 10 ng - 400 ng/ml nước tiểu) Độ đúng và độ chính xác của phương pháp nằm trong khoảng cho phép, cùng với khả năng thu hồi hoạt chất cao, chứng tỏ đây là phương pháp ưu việt trong việc phân tích các chất ma túy nhóm ATS và ketamin trong tóc và dịch sinh học, phù hợp với mục tiêu của luận án.

Theo hướng dẫn của FDA và UNODC, việc đánh giá độ ổn định của mẫu sinh học trong thời gian dài bảo quản là rất quan trọng Đối với mẫu rắn như tóc, hiện chưa có hướng dẫn cụ thể về việc này Tuy nhiên, dựa trên các hướng dẫn hiện có, mẫu tóc và nước tiểu đã được khảo sát để đánh giá độ ổn định của hoạt chất Kết quả cho thấy các chất nghiên cứu không có sự thay đổi đáng kể trong thời gian dài khi bảo quản ở nhiệt độ 2 - 4 độ C, điều này cho thấy tính khả thi trong việc lưu mẫu để giám định.

PHÂN TÍCH ATS VÀ KETAMIN TRONG TÓC VÀ NƯỚC TIỂU 140 4.5 ĐÓNG GÓP MỚI CỦA ĐỀ TÀI 144 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC

Bệnh viện Tâm thần Hà Nội được chọn làm địa điểm thu thập mẫu, nơi điều trị cho bệnh nhân rối loạn tâm thần do ma túy Đối tượng giám định là những bệnh nhân có nghi ngờ rối loạn tâm thần do sử dụng ma túy nhóm ATS, giúp tăng khả năng phát hiện các chất khảo sát trong mẫu phân tích Do đó, việc khảo sát này phù hợp để xác định các loại ma túy tổng hợp ATS và ketamin đang phổ biến trong cộng đồng hiện nay.

Phân tích 51 mẫu tóc gửi đến Viện Pháp y Quốc gia cho thấy tất cả các mẫu đều dương tính với MA, đạt tỷ lệ 100% Trong số đó, 47 mẫu dương tính với AM, tương ứng với tỷ lệ 92,16% Đặc biệt, 37 mẫu cũng cho kết quả dương tính với MDMA, chiếm tỷ lệ 72,55%.

Trong nghiên cứu về tình trạng sử dụng ma túy, chỉ có 2 mẫu tóc dương tính với MDEA, chiếm tỷ lệ 3,92%, là mức thấp nhất trong số các chất khảo sát Kết quả này cho thấy tất cả các bệnh nhân được giám định đều đã sử dụng ma túy tổng hợp ATS trước đó, có thể từ vài tuần đến vài tháng.

Trong nghiên cứu về mẫu nước tiểu, có 44 mẫu (tỉ lệ 86,27%) dương tính với AM, 45 mẫu (tỉ lệ 88,24%) với MA, và 32 mẫu (tỉ lệ 62,75%) với MDMA Đặc biệt, chỉ có 07 mẫu dương tính với MDEA và không có mẫu nào dương tính với DOB Kết quả cho thấy các bệnh nhân đã sử dụng ma túy ATS trong vài ngày trước khi nhập viện.

KET đã được phát hiện trong 12 mẫu tóc và 16 mẫu nước tiểu, với tất cả các mẫu đều cho thấy sự hiện diện của các chất ATS (M3, M6, M8, M17…) Điều này cho thấy rằng bệnh nhân trong quá trình sử dụng ma túy không chỉ sử dụng KET mà còn kết hợp với các chất ATS, hoặc sử dụng các loại ma túy có chứa thành phần hỗn hợp cả ATS và KET.

Tất cả các mẫu tìm thấy AM đều tìm thấy MA; mẫu tìm thấy MDA đều tìm thấy MDMA và mẫu tìm thấy NKT đều tìm thấy KET Kết quả này cho thấy rằng khi vào cơ thể, các chất MA, MDMA và KET sẽ chuyển hóa thành các chất tương ứng là AM, MDA và NKT Hơn nữa, các chất ma túy trên thị trường thường không tinh khiết và có thể chứa nhiều loại ma túy khác nhau, dẫn đến việc người sử dụng có thể dương tính với nhiều loại ma túy cùng lúc.

Trong khảo sát, một số mẫu cho thấy hàm lượng ma túy rất cao, cho thấy bệnh nhân có thể sử dụng với liều lượng lớn hoặc liên tục trong thời gian dài Một số mẫu dương tính với hầu hết các chất ma túy được khảo sát, cho thấy khả năng bệnh nhân sử dụng ma túy có thành phần hỗn hợp hoặc không nguyên chất, lẫn tạp chất khác.

Các mẫu nước tiểu dương tính với ma túy chỉ xác định việc sử dụng trong vài ngày trước khi giám định, trong khi mẫu tóc cho thấy việc sử dụng có thể từ vài tuần đến vài tháng trước Hàm lượng ma túy trong tóc và nước tiểu không tương ứng với liều sử dụng tại thời điểm giám định, dẫn đến việc không thể đánh giá mối quan hệ giữa hai loại mẫu Phân tích cho thấy nhiều mẫu nước tiểu phát hiện ma túy nhưng mẫu tóc lại âm tính và ngược lại, thể hiện tính độc lập của các chất phân tích Cả tóc và nước tiểu đều có tỉ lệ và hàm lượng cao hơn đối với các chất AM, MA và MDMA so với các chất khác Hầu hết các mẫu nước tiểu có hàm lượng ma túy cao cũng cho thấy hàm lượng tương ứng trong tóc cao, điều này có thể do bệnh nhân sử dụng ma túy liều cao hoặc thường xuyên.

Nghiên cứu cho thấy 142 lượng ma túy cao trong nước tiểu (M18, M22, M26…) cho thấy bệnh nhân đã sử dụng ma túy liều cao chỉ vài ngày trước khi lấy mẫu Ngoài ra, một số mẫu tóc có nồng độ MA và MDMA rất cao (M6, M21), cho thấy các bệnh nhân này có thói quen sử dụng ma túy đá (MA) và thuốc lắc (MDMA) trong thời gian dài.

Nước tiểu của bệnh nhân M29 không phát hiện ma túy, cho thấy bệnh nhân không sử dụng chất này trong khoảng 3 - 5 ngày trước khi lấy mẫu Mẫu tóc của bệnh nhân cho thấy có MA với hàm lượng thấp (0,55 ng/mg), có thể do bệnh nhân đã sử dụng ma túy từ lâu hoặc chỉ sử dụng với liều thấp và không thường xuyên.

Trong giám định pháp y, việc xác định liệu đối tượng có sử dụng ma túy hay không là rất quan trọng, với kết quả giám định chủ yếu là phát hiện ma túy trong mẫu sinh học Bên cạnh đó, việc định lượng ma túy giúp đánh giá mức độ và tần suất sử dụng của bệnh nhân, từ đó hỗ trợ cho quá trình đánh giá và điều trị hiệu quả nhất.

Bảng 4.3 Tần suất phát hiện ATS và ketamin trong tóc và nước tiểu

Mẫu tóc Mẫu nước tiểu

Tỉ lệ các chất MA và MDMA cao hơn hẳn các chất khác trong khảo sát cho thấy chúng là những loại ma túy phổ biến nhất hiện nay Các chất MDEA, PMA và DOB có mặt với hàm lượng thấp hơn nhiều so với MA và MDMA Điều này phản ánh thực tế rằng ma túy đá (MA) và thuốc lắc Ecstasy (MDMA) là những loại được giới trẻ ưa chuộng Ngoài ra, KET và NKT cũng được phát hiện trong nhiều mẫu phân tích, chứng tỏ KET đang bị sử dụng bất hợp pháp trong giới trẻ hiện nay.

Kết quả phân tích cho thấy sự tương đồng với nghiên cứu của Villamor J.L và cộng sự, khi khảo sát 5 chất ma túy nhóm ATS trên 24 người sử dụng, cho thấy MA và MDMA là hai chất phổ biến nhất, với hàm lượng trung bình lần lượt là 10,14 ng/mg và 8,87 ng/mg Mẫu có hàm lượng MA và MDMA cao nhất lần lượt đạt 43,65 ng/mg và 84,95 ng/mg Nghiên cứu của Han Eunyoung và cộng sự cũng chỉ ra hàm lượng MA trên 26 mẫu tóc ở các đoạn 1 cm, 3 cm và toàn bộ chiều dài tóc, với kết quả lần lượt là 1,03 ng/mg.

- 184,98 (trung bình 22,01); 2,26 - 89,33 (trung bình 18,71); 0,91 - 124,49 (trung bình 15,24) ng/mg

Trong một nghiên cứu gần đây, 51 bệnh nhân đã được đưa vào điều trị tại Bệnh viện Tâm thần Hà Nội Những bệnh nhân này đã trải qua quá trình giám định ma túy thông qua mẫu tóc và nước tiểu để xác định tình trạng sử dụng chất kích thích.

Trong khoảng thời gian từ 31/3/2015 đến 22/7/2015, có một số lượng đáng kể người sử dụng ma túy tổng hợp ATS và ketamin trong xã hội Tất cả các bệnh nhân được giám định đều cho kết quả dương tính với ma túy, với hầu hết đều dương tính ở cả mẫu tóc và nước tiểu Điều này cho thấy họ đã sử dụng ma túy nhóm ATS và ketamin trong thời gian dài và hiện vẫn đang tiếp tục sử dụng, lý giải nguyên nhân họ được đưa vào điều trị rối loạn tâm thần tại Bệnh viện Tâm thần Đặc biệt, các bệnh nhân chủ yếu là người trẻ tuổi, trong đó có nhiều người sinh từ năm 1980 trở về sau, và có những bệnh nhân chưa đến 20 tuổi.

Tiêu đề	Nghiên Cứu Xác Định Vết Một Số Ma Túy Tổng Hợp Nhóm Kích Thích Thần Kinh Loại Amphetamin Và Ketamin Trong Tóc Và Nước Tiểu Bằng Sắc Ký Khí Khối Phổ
Tác giả	Phạm Quốc Chinh
Người hướng dẫn	PGS.TS. Trần Việt Hùng, PGS.TS. Nguyễn Tiến Vững
Trường học	Trường Đại Học Dược Hà Nội
Chuyên ngành	Kiểm Nghiệm Thuốc Và Độc Chất
Thể loại	luận án
Năm xuất bản	2018
Thành phố	Hà Nội

Định dạng
Số trang	227
Dung lượng	6,4 MB