Phạm vi nghiên cứu: nghiên cứu này được thực hiện với quy mô phòng thí nghiệm.3.1 Nội dung nguyên cứu Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng vanillin 20 ÷160% w/w đến cấu trúc hóa học và tín
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGÀNH CƠNG NGHỆ KỸ THUẬT HĨA HỌC ĐIỀU CHẾ VÀ KHẢO SÁT TÍNH CHẤT HYDROGEL TỰ LÀNH TỪ CHITOSAN VÀ VANILIN GVHD: PGS.TS NGUYỄN VINH TIẾN SVTH : TRẦN THỊ HOA SKL008806 Tp Hồ Chí Minh, tháng 8/2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT TP HỒ CHÍ MINH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC ĐIỀU CHẾ VÀ KHẢO SÁT TÍNH CHẤT HYDROGEL TỰ LÀNH TỪ CHITOSAN VÀ VANILIN SVTH: TRẦN THỊ HOA MSSV:18128017 GVHD: PGS.TS NGUYỄN VINH TIẾN Tp Hồ Chí Minh, tháng 08 năm 2022 TĨM TẮT Hydrogel mạng lưới ba chiều (3D) gồm polyme ưa nước trương nở nước giữ lượng lớn nước trì cấu trúc liên kết ngang hóa học vật lý chuỗi polyme riêng lẻ Hiện hydrogel có nhiều ứng dụng, từ lĩnh vực thực phẩm, nông nghiệp, công nghiệp y học Yêu cầu đặt phải đảm bảo ứng dụng tốt lẫn giá thành mức hợp lý Ở đề tài này, nguồn nguyên liệu để tạo hydrogel phân hủy sinh học có nguồn gốc chủ yếu chitosan vanilin Chitosan vật liệu từ tự nhiên, phân hủy sinh học có nhiều ứng dụng tính chất khơng trội tính kháng khuẩn yếu Để cải thiện tính chất bổ sung thêm vanillin vừa làm chất kháng khuẩn tự nhiên vừa phản ứng với chitosan để tạo thành dạng gel Ngoài hydrogel chitosan-vanilin tự lành hình thành liên kết liên kết cũ bị phá vỡ Nhờ cấu trúc hydrogel với lực hút tĩnh điện thúc đẩy hình thành liên kết thơng qua liên kết base schiff thuận nghịch Trong nghiên cứu hydrogel chitosan–vanilin điều chế với khối lượng vanilin khác khối lượng chitosan không đổi, khảo sát với khối lượng chitosan khối lượng vanilin tăng lên dẫn đến khả chịu nén tăng, độ ẩm, độ tan độ trương có xu hướng giảm Vì tạo liên kết base schiff liên kết hydro, tăng khối lượng vanilin liên kết ngang nhiều kiểm chứng qua phép đo FTIR SEM Tốc độ khuếch tán vanilin nước tăng theo thời gian, hydrogel đục có màu trắng vàng ánh sáng truyền qua dần tăng nồng độ Qua thực nghiệm quan sát hiển vi hydrogel tự lành tốt tỉ lệ khối lượng chiếm 26%, với thời gian gel hóa 12 với độ ẩm gấp 15 lần độ trương gấp 90 lần so với khối lượng khơ, diện tích lỗ xốp khoảng 6000µm2, lượng vanilin giải phóng khoảng 57% vịng 150 phút 370C Trong mơi trường acid hydrogel trương nhiều so với mơi trường trung tính hay mơi trường base Có tính chất hydrogel phù hợp có việc băng vết thương để điều trị vết thương hở i 3.7 Độ tan theo nhiệt độ Tính chất khảo sát khả tan hydrogel dung dịch acid acetic 1% (tan môi trường axit)[44] theo nhiệt độ yếu tố khảo sát quan trọng để ứng dụng làm băng dán vết thương da người.Hydrogel có liên kết hydro nên nhạy với nhiệt độ, dễ dàng bị phá hủy phân tử nhỏ phân cực axit ethanol nhiệt độ cao Mặc dù liên kết Schiff-base không bền axit axetic tốc độ hịa tan phản ánh “độ ổn định” tương đối mạng hydrogel 800 Thời gian( phút) 700 600 500 400 300 200 100 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 Khối lượng vanilin(g)/10g dd chitosan 5% 37℃ 40℃ 50℃ 60℃ 70℃ 80℃ Hình 3.12 Độ tan theo nhiệt độ(0C) Qua đồ thị khảo sát độ tan mơi trường axit cho ta thấy ta tăng khối lượng vanilin lên hydrogel khó tan dần tăng dần lên có phản ứng tạo nhiều liên kết ngang làm cho hydrogel liên kết chặt chẽ khó tan Khi khối lượng vanilin nhiệt độ tăng dần hydrogel tan nhanh ta cung cấp nhiệt làm phá vỡ liên kết ngang chitosan vanilin 3.8 Độ trương theo pH Độ trương độ tan pH khác đặc điểm quan trọng, hydrogel xác định ứng dụng chúng đặc biệt sử dụng thể người cần ý Trong nghiên cứu này, khả trương nở khảo sát ba môi trường pH khác nhau: 7,4 pH sinh lý; 5,5 đặc trưng cho lớp hạ bì 9.0 cho lớp bị nhiễm trùng mô 42 Bảng Phần trăm độ trương nở theo pH 370C pH 0.1 0.11 0.12 0.13 0.14 0.15 0.16 0.2 0.4 0.6 0.8 %SR 7.4 1157.99 1125.71 1053.88 1079.91 1058.53 1053.19 1019.07 865.69 734.69 689.73 658.11 1094.04 1276.06 1241.67 1213.21 1131.52 1126.32 1110.89 984.26 821.00 754.37 713.31 5.5 2542.48 2424.34 2541.58 2346.14 1950.79 2198.20 2170.14 1752.89 1141.81 914.9 769.39 %SR 3000 2500 2000 1500 1000 500 0.1 0.11 0.12 0.13 0.14 0.15 0.16 0.2 0.4 0.6 0.8 Khối lượng vanilin(g)/10g dd chitosan 5% ph=9.0 ph=7.4 ph=5.5 Hình 3.13 Độ trương theo pH 370C Theo Bảng 3.5 Hình 3.14 cho ta thấy độ trương có xu hướng giảm dần tăng khối lượng vanilin trương cao mơi trường axit Trong mơi trường axit hàm lượng vanilin từ 0,1 đến 0,2 độ trương cao proton hóa cao nhóm NH2 tự chitosan môi trường axit, gây lực đẩy tĩnh điện điện tích dương phá vỡ liên kết H Do đó, mạng lưới 43 mở rộng nhiều nước khuếch tán vào hydrogel [46] Còn hàm lượng từ 0,4 đến 0,8 lực đẩy tĩnh điện khơng đủ lớn để thắng lại liên kết Hydro Trong môi trường pH 7.4 mơi trường pH độ trương thấp cho thấy hình dạng hydrogel khơng thay đổi, qua kết cho thấy nhóm NH2 tự không tác động vào tạo thuận lợi cho tương tác liên kết H bền vững làm giảm khả trương nở Theo nghiên cứu C Pardo-Castaño G Bolaños 2019[44] cho thấy chitosan tan thay đổi môi trường pH tăng dần 3.9 SEM Để có nhìn rõ bề mặt hydrogel, hình ảnh lỗ trống hydrogel phản ứng thu thập kính hiển vi điện tử quét (SEM) Hitachi gia tốc kV 0.8 0.6 Hình 3.14 Một số hình SEM hàm lượng vanilin khác 44 Sau có hình cho thấy lỗ xốp bề mặt hydrogel đo kích thước lỗ trống hydrogel thể Hình 3.16 80000 Diện tích lỗ trống(µm2) 70000 60000 50000 40000 30000 20000 10000 0.1 0.11 0.12 0.13 0.14 0.15 0.16 0.2 0.4 0.6 0.8 Khối lượng vanilin(g)/10g dd chitosan 5% Hình 3.15 Diện tích lỗ trống hydrogel Hình ảnh SEM cho thấy có nhiều lỗ xốp có hình dạng bất thường, cấu trúc xốp dạng sợi, hàm lượng vanilin tăng lên cho thấy khoảng cách lớp xếp chồng lên nhỏ dần 3.10 Quan sát tự lành 3.10.1 Quan sát thực nghiệm Q trình kết dính hydrogel dựa vào tạo thành liên kết base schiff cộng hóa trị thuận nghịch, thuận lợi cho trình tự phục hồi [47] Để chứng minh khả tự phục hồi hydrogel chỗ cắt, hydrogel bị cắt chuẩn bị sẵn (Hình a) tiếp xúc trực tiếp (Hình b) 45 a c b a) hydrogel bị cắt chuẩn bị sẵn b) tiếp xúc trực tiếp, c) hydrogel sau ngày Hình 3.16 Q trình kết dính hydrogel Hình 3.17 Sơ đồ minh họa trình tự lành (C Xu cộng 2018) Qua hình cho thấy hàm lượng tự phục hồi hydrogel tốt ( tỉ lệ 0,13g vanilin 10g dung dịch chitosan 5%) khả tự phục hồi vượt trội hydrogel chỗ cắt sau ngày hydrogel chúng trở nên dính nâng đỡ khối lượng nâng nhíp (Hình c), nhận định rõ ràng bề mặt cắt hàn gắn lại với thông qua việc tái tạo lại liên kết bazơ Schiff thuận nghịch, liên kết hydro lực Van der Waals 46 3.10.2 Quan sát hiển vi Để chứng minh thêm hành vi tự lành hydrogel ta quan sát hiển vi cho thấy tự lành theo gian chắn hydrogel tự lành mà khơng có tác động ngoại lực từ bên ngồi Mới cắt 12h 24h 48h Hình 3.18 Quá trình tự lành mẫu 0.13g vanilin Sau khoảng thời gian vết nứt chữa lành nhiệt độ phòng đường cắt chữa lành gần dính sau ngày Mặc dù vết nứt khơng biến hồn tồn thời gian quan sát, vết nứt mờ dần theo thời gian cho việc tái tạo lại cấu trúc mạng 3D Theo nghiên cứu C Xu cộng 2018[32] cho thấy hydrogel từ chitosan vanilin có tự lành Hàm lượng vanilin tự lành tốt nghiên cứu C Xu cộng 2018[32] vanilin chiếm 60% khối lượng nhiên theo khảo sát tự lành tốt hàm lượng vanilin đạt 26% 47 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Qua nghiên cứu kết thu cho thấy: Khả chịu nén hydrogel tăng hàm lượng vanilin tăng Độ ẩm, độ tan độ trương có xu hướng giảm hàm lượng vanilin tăng Độ truyền quang cho thấy hàm lượng vanilin tăng khả hấp thụ tăng hydrogel đục có màu trắng vàng Tốc độ khuếch tán vanilin nước tăng theo thời gian Phổ FTIR, SEM cho thấy phản ứng nhóm amine chitosan aldehyde vanilin tạo liên kết base schiff làm cho cấu trúc chặt chẽ tăng khối lượng vanilin Hydrogel có cấu trúc xốp độ trương tốt môi trường khác (ví dụ: pH sinh lý, pH mô bị nhiễm bệnh pH lớp hạ bì) cho thấy thẩm thấu oxy tốt dịch tiết Nghiên cứu cho thấy hydrogel chitosan tự phục hồi liên kết base Schiff thuận nghịch Và tỉ lệ đạt phục hồi tốt 0,26 g/g với thời gian sau ngày, thời gian gel hóa 12 với độ ẩm gấp 15 lần độ trương gấp gần 90 lần so với khối lượng khơ, diện tích lỗ xốp khoảng 6000µm2 lượng vanilin giải phóng khoảng 57% vịng 150 phút 370C 4.2 Kiến nghị Vì kiến thức, thời gian thiết bị hạn chế nên khảo sát số tính chất nhiên hồn thiện đề tài em có số kiến nghị sau: Khảo sát tự phân hủy enzyme Khảo sát hydrogel in vivo để có nhìn rõ hydrogel có tính chất chữa lành vết thương, bên cạnh khảo sát thêm tính chất kháng nấm ví dụ nấm C.albicans 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] X Zhao, H Wu, B Guo, R Dong, Y Qiu, and P X Ma, "Antibacterial antioxidant electroactive injectable hydrogel as self-healing wound dressing with hemostasis and adhesiveness for cutaneous wound healing," Biomaterials, vol 122, pp 34-47, 2017 [2] M A Matica, F L Aachmann, A Tøndervik, H Sletta, and V Ostafe, "Chitosan as a wound dressing starting material: Antimicrobial properties and mode of action," International journal of molecular sciences, vol 20, no 23, p 5889, 2019 [3] P Hubner, N Donati, L K de Menezes Quines, I C Tessaro, and N R Marcilio, "Gelatin-based films containing clinoptilolite-Ag for application as wound dressing," Materials Science and Engineering: C, vol 107, p 110215, 2020 [4] A Anisiei, I Rosca, A.-I Sandu, A Bele, X Cheng, and L Marin, "Imination of Microporous Chitosan Fibers—A Route to Biomaterials with “On Demand” Antimicrobial Activity and Biodegradation for Wound Dressings," Pharmaceutics, vol 14, no 1, p 117, 2022 [5] J Su, J Li, J Liang, K Zhang, and J Li, "Hydrogel preparation methods and biomaterials for wound dressing," Life, vol 11, no 10, p 1016, 2021 [6] Z Hussain, H E Thu, A N Shuid, H Katas, and F Hussain, "Recent advances in polymer-based wound dressings for the treatment of diabetic foot ulcer: an overview of state-of-the-art," Current drug targets, vol 19, no 5, pp 527-550, 2018 [7] A Zhang, Y Liu, D Qin, M Sun, T Wang, and X Chen, "Research status of self-healing hydrogel for wound management: A review," International Journal of Biological Macromolecules, vol 164, pp 2108-2123, 2020 [8] S P Ndlovu, K Ngece, S Alven, and B A Aderibigbe, "Gelatin-based hybrid scaffolds: promising wound dressings," Polymers, vol 13, no 17, p 2959, 2021 [9] J Jagur‐Grodzinski, "Polymeric gels and hydrogels for biomedical and pharmaceutical applications," Polymers for Advanced Technologies, vol 21, no 1, pp 27-47, 2010 [10] J Kopeček, "Hydrogel biomaterials: a smart future?," Biomaterials, vol 28, no 34, pp 5185-5192, 2007 49 [11] Z Bagher et al., "Wound healing with alginate/chitosan hydrogel containing hesperidin in rat model," Journal of Drug Delivery Science and Technology, vol 55, p 101379, 2020 [12] M Bahram, N Mohseni, and M Moghtader, "An introduction to hydrogels and some recent applications," in Emerging concepts in analysis and applications of hydrogels: IntechOpen, 2016 [13] C T Nguyễn, V P Võ, and T Đ T Phạm, "Vật liệu hydrogel-Tính chất tiềm ứng dụng lĩnh vực y sinh," Bản B Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Việt Nam, vol 61, no 11, 2019 [14] N T H Đức and V Q Ánh, "Vận chuyển thuốc qua da kỹ thuật điện di ion: ưu, nhược điểm phát từ nghiên cứu," Bản B Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Việt Nam, vol 63, no 9, 2021 [15] H Shoukat, K Buksh, S Noreen, F Pervaiz, and I Maqbool, "Hydrogels as potential drug-delivery systems: Network design and applications," Therapeutic Delivery, vol 12, no 5, pp 375-396, 2021 [16] A Gupta, M Kowalczuk, W Heaselgrave, S T Britland, C Martin, and I Radecka, "The production and application of hydrogels for wound management: A review," European Polymer Journal, vol 111, pp 134-151, 2019 [17] S Alven and B A Aderibigbe, "Chitosan and Cellulose-Based Hydrogels for Wound Management," (in eng), Int J Mol Sci, vol 21, no 24, Dec 18 2020, doi: 10.3390/ijms21249656 [18] M.-M Iftime, I Rosca, A.-I Sandu, and L Marin, "Chitosan crosslinking with a vanillin isomer toward self-healing hydrogels with antifungal activity," International Journal of Biological Macromolecules, vol 205, pp 574-586, 2022 [19] G Umachitra, "Disposable baby diaper a threat to the health and environment," Journal of environmental science & engineering, vol 54, no 3, pp 447-452, 2012 [20] Y Liu and S H Hsu, "Synthesis and Biomedical Applications of Self-healing Hydrogels," (in eng), Front Chem, vol 6, p 449, 2018, doi: 10.3389/fchem.2018.00449 [21] Y Zhang, L Tao, S Li, and Y Wei, "Synthesis of multiresponsive and dynamic chitosan-based hydrogels for controlled release of bioactive molecules," Biomacromolecules, vol 12, no 8, pp 2894-2901, 2011 50 [22] Y Li, X Wang, Y.-n Fu, Y Wei, L Zhao, and L Tao, "Self-adapting hydrogel to improve the therapeutic effect in wound-healing," ACS applied materials & interfaces, vol 10, no 31, pp 26046-26055, 2018 [23] F.-Y Hsieh, L Tao, Y Wei, and S.-h Hsu, "A novel biodegradable selfhealing hydrogel to induce blood capillary formation," Npg Asia Materials, vol 9, no 3, pp e363-e363, 2017 [24] A M Craciun, S Morariu, and L Marin, "Self-Healing Chitosan Hydrogels: Preparation and Rheological Characterization," (in eng), Polymers (Basel), vol 14, no 13, Jun 24 2022, doi: 10.3390/polym14132570 [25] M M Iftime, S Morariu, and L Marin, "Salicyl-imine-chitosan hydrogels: Supramolecular architecturing as a crosslinking method toward multifunctional hydrogels," (in eng), Carbohydr Polym, vol 165, pp 39-50, Jun 2017, doi: 10.1016/j.carbpol.2017.02.027 [26] A Rasool, S Ata, and A Islam, "Stimuli responsive biopolymer (chitosan) based blend hydrogels for wound healing application," (in eng), Carbohydr Polym, vol 203, pp 423-429, Jan 2019, doi: 10.1016/j.carbpol.2018.09.083 [27] H Xue et al., "Quaternized chitosan-Matrigel-polyacrylamide hydrogels as wound dressing for wound repair and regeneration," (in eng), Carbohydr Polym, vol 226, p 115302, Dec 15 2019, doi: 10.1016/j.carbpol.2019.115302 [28] M T Khorasani, A Joorabloo, H Adeli, Z Mansoori-Moghadam, and A Moghaddam, "Design and optimization of process parameters of polyvinyl (alcohol)/chitosan/nano zinc oxide hydrogels as wound healing materials," (in eng), Carbohydr Polym, vol 207, pp 542-554, Mar 2019, doi: 10.1016/j.carbpol.2018.12.021 [29] N Zhang et al., "Modulating cationicity of chitosan hydrogel to prevent hypertrophic scar formation during wound healing," (in eng), Int J Biol Macromol, vol 154, pp 835-843, Jul 2020, doi: 10.1016/j.ijbiomac.2020.03.161 [30] N Masood et al., "Silver nanoparticle impregnated chitosan-PEG hydrogel enhances wound healing in diabetes induced rabbits," (in eng), Int J Pharm, vol 559, pp 23-36, Mar 25 2019, doi: 10.1016/j.ijpharm.2019.01.019 [31] S Gong, H Tu, H Zheng, H Xu, and Y Yin, "Chitosan-g-PAA hydrogels for colon-specific drug delivery: Preparation, swelling behavior and in vitro degradability," Journal of Wuhan University of Technology-Mater Sci Ed., vol 25, no 2, pp 248-251, 2010 51 [32] C Xu, W Zhan, X Tang, F Mo, L Fu, and B Lin, "Self-healing chitosan/vanillin hydrogels based on Schiff-base bond/hydrogen bond hybrid linkages," Polymer testing, vol 66, pp 155-163, 2018 [33] B Tomadoni, A Ponce, M Pereda, and M R Ansorena, "Vanillin as a natural cross-linking agent in chitosan-based films: Optimizing formulation by response surface methodology," Polymer Testing, vol 78, p 105935, 2019 [34] M Stroescu et al., "Chitosan-vanillin composites with antimicrobial properties," Food Hydrocolloids, vol 48, pp 62-71, 2015 [35] S Thomas, A Pius, and S Gopi, Handbook of Chitin and Chitosan: Volume 2: Composites and Nanocomposites from Chitin and Chitosan, Manufacturing and Characterisations Elsevier, 2020 [36] S Ahmed and S Ikram, Chitosan: derivatives, composites and applications John Wiley & Sons, 2017 [37] P Dutta, K Rinki, and J Dutta, "Chitosan: a promising biomaterial for tissue engineering scaffolds," Chitosan for biomaterials II, pp 45-79, 2011 [38] Q Li, E Dunn, E Grandmaison, and M F Goosen, "Applications and properties of chitosan," in Applications of chitin and chitosan: CRC Press, 2020, pp 3-29 [39] D Havkin-Frenkel and F C Belanger, Handbook of vanilla science and technology John Wiley & Sons, 2018 [40] J Singh and P Dutta, "Preparation, circular dichroism induced helical conformation and optical property of chitosan acid salt complexes for biomedical applications," International journal of biological macromolecules, vol 45, no 4, pp 384-392, 2009 [41] M F Queiroz, K R Teodosio Melo, D A Sabry, G L Sassaki, and H A O Rocha, "Does the use of chitosan contribute to oxalate kidney stone formation?," Marine drugs, vol 13, no 1, pp 141-158, 2014 [42] M.-M Iftime, S Morariu, and L Marin, "Salicyl-imine-chitosan hydrogels: Supramolecular architecturing as a crosslinking method toward multifunctional hydrogels," Carbohydrate polymers, vol 165, pp 39-50, 2017 [43] D T M Quyen and P Rachtanapun, "Effects of antimicrobial agentscarbendazim and vanillin on chitosan/methyl cellulose films properties," J Biotechnol, vol 14, pp 503-508, 2016 52 [44] C Pardo-Castaño and G Bolaños, "Solubility of chitosan in aqueous acetic acid and pressurized carbon dioxide-water: Experimental equilibrium and solubilization kinetics," The Journal of Supercritical Fluids, vol 151, pp 6374, 2019 [45] N J Vickers, "Animal communication: when i’m calling you, will you answer too?," Current biology, vol 27, no 14, pp R713-R715, 2017 [46] G M S Uddin, S Saha, S Karmaker, and T K Saha, "Adsorption of cefixime trihydrate onto chitosan 10b from aqueous solution: kinetic, equilibrium and thermodynamic studies," adsorption, vol 6, p 9, 2021 [47] Y Liang, J He, and B Guo, "Functional Hydrogels as Wound Dressing to Enhance Wound Healing," (in eng), ACS Nano, Aug 10 2021, doi: 10.1021/acsnano.1c04206 53 PHỤ LỤC Phụ lục Số liệu diện tích kích thước lỗ hydrogel Diện tích lỗ trống(µm2) 73620,83 72712,17 69059,48 61627,35 49455,61 4645,17 35214.7 22338.59 20514.21 18847,84 16612.06 Tỉ lệ vanilin(g) 0.1 0.11 0.12 0.13 0.14 0.15 0.16 0.2 0.4 0.6 0.8 Phụ lục Độ hấp thụ vanilin 150 phút Thời gian (phút) 30 60 90 120 150 1.228 2.128 2.882 3.007 3.106 0.11 0.12 1.248 1.341 2.221 2.340 2.894 2.911 3.094 3.108 3.124 3.128 0.13 0.14 1.996 2.27 2.741 2.773 3.044 3.014 3.099 3.064 3.134 3.139 0.15 0.16 2.568 2.683 2.852 3.033 3.006 3.061 3.068 3.072 3.090 3.089 0.2 0.4 2.999 3.068 3.064 3.079 3.076 3.098 3.103 3.107 3.108 3.112 0.6 0.8 3.089 3.110 3.106 3.126 3.108 3.132 3.115 3.134 3.133 3.135 Khối lượng vanilin(g) 0.1 54 Phụ lục Thời gian tan theo nhiệt độ Khối lượng vanilin (g) 0.1 0.11 0.12 0.13 0.14 0.15 0.16 0.2 0.4 0.6 0.8 37 270 340 380 400 420 425 570 600 650 695 780 40 265 325 330 365 373 375 385 402 478 530 590 50 157 160 170 190 195 220 225 227 230 400 450 60 145 150 155 165 175 180 185 186 205 348 355 70 60 65 65 70 85 95 100 110 120 155 190 80 60 70 72 82 85 85 87 87 100 145 160 Nhiệt độ(0C) 55 S K L 0