Tóm tắt luận văn Thạc sĩ Khoa học: Nghiên cứu lựa chọn quy trình chiết tách phẩm màu annatto từ hạt điều nhuộm

1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TỐNG THỊ VIỆT HÀ NGHIÊN CỨU LỰA CHỌN QUY TRÌNH CHIẾT TÁCH PHẨM MÀU ANNATTO TỪ HẠT ĐIỀU NHUỘM Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 60 44 27 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Đà Nẵng - Năm 2011 Cơng trình hồn thành ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Đào Hùng Cường Phản biện 1: GS.TSKH Trần Văn Sung Phản biện 2: PGS.TS Phạm Cẩm Nam Luận văn ñược bảo vệ Hội ñồng bảo vệ chấm Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khoa học họp Đại học Đà Nẵng vào ngày 30 tháng 12 năm 2011 Có thể tìm hiểu luận văn tại: - Trung tâm thơng tin - Học liệu - Đại học Đà Nẵng - Thư viện trường Đại học Sư Phạm, Đại học Đà Nẵng MỞ ĐẦU Lý chọn ñề tài Ngày nay, chất màu thực phẩm ñang vấn ñề ñược quan tâm ứng dụng to lớn ngành công nghệ thực phẩm Nhuộm màu cho loại thực phẩm nhằm làm tăng giá trị thực phẩm Tuy nhiên nỗi ám ảnh người tiêu dùng phẩm màu tổng hợp ñộc hại ngày gia tăng Do việc lựa chọn phẩm màu thiên nhiên vốn khơng có độc tính xu hướng thích hợp cho cơng nghiệp thực phẩm Ở Việt Nam, dạng phẩm màu chưa ñược khai thác hiệu Chính thế, nghiên cứu chất màu thực phẩm có giá trị quan trọng cơng cơng nghiệp hóa đất nước nói chung, cơng nghiệp phẩm màu thực phẩm nói riêng Trên giới, chất màu thực phẩm ñược ứng dụng rộng rãi nhu cầu sử dụng to lớn Một loại phẩm màu ñược sử dụng phổ biến chất màu annatto ñược lấy từ hạt ñiều nhuộm Phẩm màu annatto chiết từ ñiều nhuộm loại phẩm màu tự nhiên ñược CODEX ñưa vào danh mục sử dụng an toàn thực phẩm, dược phẩm, đem lại tính hấp dẫn nâng cao giá trị cho sản phẩm Loại phẩm màu có hoạt tính sinh học cao, có giá trị sử dụng giá trị kinh tế cao Ở Việt Nam, ñiều nhuộm ñược trồng chủ yếu Nam Tây Nguyên Việc nghiên cứu quy trình tách chiết chất màu annatto lựa chọn ñược quy trình ổn định, đơn giản, có hiệu suất cao có ý nghĩa lớn nhằm đưa chất màu tự nhiên annatto vào ứng dụng rộng rãi quy mô công nghiệp, góp phần tích cực vào cơng phát triển cơng nghiệp nước ta Trong phạm vi tìm hiểu chúng tơi, Việt Nam có nhiều phương pháp chiết phẩm màu annatto khác Trong phương pháp chưa có đề tài, cơng trình mang tính khoa học cơng nghệ để chiết phẩm màu thích hợp Do chúng tơi tiến hành nghiên cứu cụ thể phẩm màu hạt ñiều nhuộm với nội dung “Nghiên cứu lựa chọn quy trình chiết tách phẩm màu annatto từ hạt ñiều nhuộm” Mục tiêu nghiên cứu - Nghiên cứu khảo sát quy trình chiết tách phẩm màu tự nhiên annatto từ hạt điều nhuộm, lựa chọn quy trình chiết tách hiệu kiểm tra lại quy trình lựa chọn Đối tượng phạm vi nghiên cứu - Đối tượng: hạt ñiều nhuộm - Phạm vi nghiên cứu: Q trình thực nghiệm tiến hành phịng thí nghiệm Hóa học, trường Đại học Sư Phạm Đà Nẵng Phương pháp nghiên cứu Phương pháp chiết chưng ninh chiết soxlet Phương pháp khối lượng, phương pháp ño quang UV – VIS, AAS Phương pháp xác ñịnh tiêu vật lý – hóa lý Nội dung nghiên cứu Nghiên cứu lý thuyết - Cây ñiều nhuộm: Mơ tả, đặc điểm sinh thái - Phẩm màu annatto: Nguồn gốc, thành phần hóa học, ứng dụng - Các phương pháp chiết tách: Chưng cất, chưng ninh, hòa tan dung môi, kết tinh - Phương pháp hấp thụ phân tử UV – VIS - Phương pháp xác ñịnh tiêu vật lý – hóa lý: Xác ñịnh ñộ ẩm toàn phần, hàm lượng chất hữu cơ, vô cơ… Nghiên cứu thực nghiệm - Xử lý mẫu: Thu thập, phân loại, rửa, sấy… - Xác ñịnh ñộ ẩm tồn phần, hàm lượng tro mẫu điều nhuộm nghiên cứu - Xác ñịnh hàm lượng kim loại nặng hạt điều nhm bàng phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử AAS - Chiết tách phẩm màu annatto dung môi NaOH, nước, etanol, etyl axetat - Dùng phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử UV-VIS ñể khảo sát bước sóng hấp thụ, dựa vào ñộ hấp thụ ñể nghiên cứu khảo sát tối ưu ñiều kiện chiết - Định tính, ñịnh lượng dịch chiết loại dung môi - Xây dựng, lựa chọn quy trình chiết tách đạt hiệu suất cao - Kiểm tra, đánh giá lại quy trình chọn Ý nghĩa khoa học thực tiễn ñề tài - Cung cấp thông tin khoa học quy trình tách chiết phẩm màu annatto hạt điều nhuộm, nghiên cứu lựa chọn quy trình hiệu - Ứng dụng kết nghiên cứu vào thực tế sản xuất phẩm màu annatto từ hạt ñiều nhuộm CHƯƠNG - TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu ñiều nhuộm 1.1.1 Đặc ñiểm sinh thái ñiều nhuộm Cây điều nhộm cịn gọi điều màu, sâm phụng, chầm phù, cà ri Tên Khoa học: Bixa orellana L 1.1.2 Thành phần hóa học hạt màu ñiều nhuộm Tinh dầu Annatto ñược chiết xuất từ hạt nguồn chất nhộm màu có tên bixin norbixin, bixin chất tạo màu ñỏ chiếm tỉ lệ 80% norbixin chất tạo màu vàng 1.1.3 Phẩm màu annatto 1.1.4 Tính chất hóa học phẩm màu annatto 1.1.5 Ứng dụng phẩm màu annatto 1.1.5.1 Tác dụng dược học Các thành phần ñiều nhuộm ñã ñược người sử dụng từ nhiều kỷ trước Hạt có tác dụng thu liễm thối nhiệt Hoa có tác dụng bổ huyết trừ lỵ, có tác dụng hạ nhiệt 1.1.5.2 Phẩm màu thực phẩm Annatto (cam): gồm bixin norbixin Phẩm màu bixin tan dầu: dùng cho sản phẩm chất béo sữa, phô mai, bơ, margarin, lạp xưởng,mì tơm, kem, đồ tráng miệng, thực phẩm nướng bánh snack Phẩm màu norbixin tan nước: dùng cho bánh kẹo, phô mai, kem sản phẩm sữa, ñồ tráng miệng, sản phẩm ngũ cốc bánh mì (phần ruột bánh), tạo màu cho ñồ uống 1.1.5.3 Thuốc nhuộm màu tự nhiên 1.2 Chất màu tự nhiên 1.2.1 Khái niệm 1.2.2 Phân loại 1.2.2.1 Clorophyl 1.2.2.2 Carotenoid 1.2.2.3 Flavonoit 1.2.3 Ứng dụng chất màu tự nhiên 1.3 Phương pháp chiết tách phẩm màu 1.3.1 Phương pháp chiết 1.3.2.Phương pháp kết tinh 1.3.3 Phương pháp hồ tan dung mơi hữu 1.4 Phương pháp ño quang phổ hấp thụ nguyên tử AAS 1.4.1 Giới thiệu phương pháp 1.4.2 Nguyên tắc phép đo 1.4.3 Quy trình phép đo AAS 1.5 Phương pháp ño quang phổ hấp thụ phân tử UV-VIS 1.5.1 Giới thiệu phương pháp 1.5.2 Cơ sơ lý thuyết phương pháp 1.5.3 Các ñiều kiện tối ưu cho phương pháp phân tích 1.5.3.1 Ánh sáng đơn sắc 1.5.3.2 Phổ hấp thụ 1.5.3.3 Ảnh hưởng nồng ñộ 1.5.3.4 Ảnh hưởng pH môi trường 1.5.3.5 Ảnh hưởng ion lạ 1.5.3.6 Ảnh hưởng thời gian 1.5.4 Máy ño quang phổ hấp thụ phân tử UV-VIS CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu, dụng cụ, hoá chất 2.1.1 Thu gom nguyên liệu Ngun liệu thu mua ngẫu nhiên chợ Hịa Khánh, Thành phố Đà Nẵng, có nguồn gốc chủ yếu Quảng Nam, thường ñược gọi hạt cari Hạt ñiều nhuộm thu mua thường loại hạt già, khô, có màu đỏ sẫm Hình 2.1 Hạt điều nhuộm khơ 2.1.2 Xử lí ngun liệu Ngun liệu thu mua ngẫu nhiên cần loại bỏ hạt lép, rác sau rửa sạch, phơi khơ Bảo quản hạt điều lọ kín 2.1.3 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 2.1.3.1.Thiết bị - dụng cụ 2.1.3.2 Hóa chất Các dung mơi hữu cơ: n-hexan, etanol, etylaxetat Hố chất vơ cơ: dung dịch axit đậm đặc lỗng HCl, HNO3, H2SO4, dung dịch kiềm NaOH, nước cất 2.2 Sơ ñồ quy trình nghiên cứu Hạt Điều Nhuộm Làm Sấy khơ Kiểm tra: độ ẩm, hàm lượng tro, Xử lý nguyên liệu Khảo sát quy trình chiết tách phẩm màu annatto Lựa chọn quy trình chiết tách hiệu Chiết dung môi nước Chiết kiềm lỗng Chiết dung mơi etyl axetat Chiết dung mơi cồn Tiến hành quy trình chọn Sấy khơ Phẩm màu Đánh giá chất lượng phẩm màu Định tính: Cảm quan, ñộ tan, phổ Độ tinh khiết: Hàm lượng As, Pb, Hg Định lượng tổng chất màu 10 2.3 Các phương pháp xác định tiêu hóa lí 2.3.1 Xác ñịnh ñộ ẩm 2.3.2 Xác ñịnh hàm lượng tro phương pháp tro hóa mẫu 2.3.3 Xác định hàm lượng số kim loại hạt ñiều nhuộm, cao annatto phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử 2.4 Phương pháp chiết khảo sát ñiều kiện chiết annatto từ hạt ñiều nhuộm 2.4.1 Phương pháp chiết 2.4.1.1 Phương pháp chưng ninh 2.4.1.2 Phương pháp soxhlet 2.4.2 Khảo sát ñiều kiện chiết 2.4.2.1 Khảo sát ñiều kiện chưng ninh 2.4.2.2 Khảo sát ñiều kiện chiết soxhlet 2.5 Kiểm tra, ñánh giá chất lượng phẩm màu annatto 2.6 Phương pháp ñịnh lượng tổng phẩm màu Hàm lượng Tổng chất màu khơng thấp 35% (tính theo norbixin) Định lượng tổng chất màu phương pháp quang phổ JECFA monograph 1-Vol - quy trình 1: % chất màu = 100 x (A/A1%1cm) x (F/W) Trong ñó: A mật ñộ quang dung dịch mẫu phân tích, A1%1cm mật độ quang dung dịch chuẩn a hệ số hấp thụ ánh sáng dung dịch chuẩn (g-cm) F hệ số pha loãng (F = V dd pha lỗng/ V dd pha chuẩn) 12 Bảng 3.4 Mật ñộ quang dịch chiết nồng ñộ dung dịch NaOH khác λ nm Mật ñộ quang D M1 M2 M3 M4 CNaOH (0,1M) (0,5M) (1M) (1,2M) 453 2,013 2,284 2,348 2,261 480 1,161 1,832 1,913 1,722 Đỉnh hấp thụ bước sóng λ = 453 nm ñặc trưng chất màu norbixin rõ ràng, cịn đỉnh hấp thụ λ = 480 đặc trưng cho bixin khơng rõ Điều chứng tỏ phẩm màu annatto chiết từ hạt ñiều nhuộm có thành phần màu chủ yếu norbixin, bixin ñã bị kiềm hóa chuyển thành dạng muối norbixin Đuổi dung môi dịch chiết bếp cách thủy nhiệt ñộ 60 C, thu ñược cao mềm annatto, sấy nhiều tủ sấy nhiệt ñộ 550C khơ Cân khối lượng cao màu thu tính hiệu suất q trình chiết tách Từ kết thực nghiệm bảng 3.4 ta thấy nồng độ dung mơi NaOH 1M đạt giá trị mật ñộ quang D cao nhất, tức hàm lượng thành phần màu dịch chiết lớn Vậy nồng ñộ chiết tối ưu NaOH 1M, ñạt hiệu suất chiết 24,75% 3.2.2 Khảo sát thời gian chiết tối ưu Lấy mẫu với 10g hạt ñiều/ 200ml dung mơi NaOH 1M, đánh số thứ tự mẫu, chưng ninh khoảng thời gian: Mẫu 1: 4h; Mẫu 2: 6h; Mẫu 3: 8h; Mẫu 4: 10h Hút 1ml dịch chiết thu đem pha lỗng xác bình định mức 100 ml, đo UV – VIS thu ñược kết bảng 3.6 13 Bảng 3.6 Mật ñộ quang dịch chiết dung dịch NaOH thời gian chiết khác λ nm Mật ñộ quang D Mẫu M1 M2 M3 M4 452 0,487 0,887 1,395 0,586 481 0,306 0,687 0,983 0,392 Đuổi dung mơi dịch chiết thu kết hiệu suất q trình chiết tách bảng 3.7 Bảng 3.7 Ảnh hưởng thời gian ñến hàm lượng phẩm màu dung dịch NaOH STT Thời gian M0 M1 m2 m % chất màu 10,003 62,003 64,228 2,225 22,24 10,026 61,173 64,188 2,715 27,08 10,001 61,062 64,074 3,102 31,02 10 10,030 60,908 63,815 2,907 28,98 Sự kéo dài thêm thời gian không làm tăng hiệu chiết Hiệu suất chiết tốt chưng ninh 10g hạt ñiều 200ml dung dịch NaOH 1M với thời gian ñạt 31,02% 3.2.3 Khảo sát tỷ lệ rắn – lỏng tối ưu Chuẩn bị mẫu, cho vào bình cầu lượng hạt điều, thay đổi thể tích dung mơi tiến hành chưng ninh thời gian tối ưu tiếng: Lọc dịch chiết, pha lỗng 100 lần, đo UV – VIS với mẫu trống dung dịch NaOH 1M 14 Bảng 3.8 Mật ñộ quang dịch chiết dung dịch NaOH tỷ lệ R/L khác λ nm Mật ñộ quang (D) Mẫu M1 M2 M3 M4 M5 452 0,385 0,448 0,567 1,087 0,698 481 0,278 0,304 0,396 0,791 0,504 Đuổi dung mơi thu hiệu suất chiết tách sau: Bảng 3.9 Ảnh hưởng tỷ lệ R/L ñến hàm lượng phẩm màu dung dịch NaOH STT Thể tích NaOH m0 m1 m2 m % chất màu 150 10,003 61,065 62,891 1,826 18,25 200 10,006 62,030 64,606 2,576 25,74 250 10,012 60,910 63,863 2,953 29,49 280 10,005 61,175 64,429 3,254 32,52 300 10,008 62,001 65,252 3,251 32,48 Kết thực nghiệm bảng cho thấy với tỷ lệ khối lượng hạt điều nhuộm (10,005g)/thể tích dung dịch NaOH (280ml), tức tỷ lệ R/L khoảng 1/28 cho hiệu suất chiết phẩm màu hạt ñiều nhuộm tốt 32,52% 3.3 Xây dựng quy trình chiết annatto từ hạt điều nhuộm dung môi nước 3.3.1 Khảo sát thời gian chiết tối ưu Chuẩn bị bình cầu 500ml sạch, cho vào 300 ml dung mơi nước, sau cho vào bình cầu 30g hạt điều tiến hành chưng ninh 1000C thời gian khác 15 Bảng 3.10 Mật ñộ quang dịch chiết dung môi nước thời gian chiết khác λ nm Mật ñộ quang D M1 M2 M3 M4 16h 20h 24h 28h 456 1,758 2,195 2,091 1,813 487 1,515 1,952 1,821 1,535 Thời gian Từ kết thực nghiệm ta thấy, thời gian chiết 20h khả hấp thụ màu dịch chiết tốt nhất, tức hàm lượng màu dịch chiết cao 3.3.2 Khảo sát tỷ rắn – lỏng Các mẫu đem chưng ninh có khối lương hạt điều/ thể tích dung môi tương ứng sau: Mẫu 1: 10,021g/300ml (tỷ lệ 1/30), Mẫu 2: 12,013g/300ml (1/25), Mẫu 3: 15,009g/300ml (tỷ lệ 1/20), Mẫu 4: 20, 015g/300ml (tỷ lệ 1/15) Chưng ninh khoảng thời gian tối ưu vừa khảo sát 20 Kết thể phổ hấp thụ hình 3.5, bảng 3.11 Bảng 3.11 Mật độ quang dịch chiết dung môi nước tỷ lệ R/L khác λ nm Mật ñộ quang D Mẫu M1 M2 M3 M4 456 1,504 2,256 2,540 1,739 487 1,292 2,195 2,447 1,533 Tỷ lệ khối lượng hạt điều nhuộm (15,009g)/thể tích dung mơi nước (300ml), tức tỷ lệ R/L khoảng 1/20 giá trị mật độ quang D lớn nhất, tức hàm lượng màu dịch chiết mẫu lớn 3.4 Xây dựng quy trình chiết tách phẩm màu annatto dung mơi etanol 16 3.4.1 Khảo sát ñộ cồn chiết tối ưu Pha dung dịch cồn 500, 600, 700, 800, 900 Tiến hành chiết mẫu 10g hạt ñiều 150 ml dung mơi độ cồn khác Bảng 3.12 Mật ñộ quang D dịch chiết cácñộ cồn khác λ nm Mật ñộ quang (D) Mẫu M1 M2 M3 M4 M5 456 2,361 2,381 2,512 2,856 2,715 485 1,708 1,734 1,854 3,025 2,812 Đuổi dung mơi bếp đun cách thủy, cân khối lượng phẩm màu tính hiệu suất q trình chiết tách Bảng 3.13 Ảnh hưởng ñộ cồn ñến hàm lượng phẩm màu dung môi cồn Độ m1 m0 m2 m % Chất cồn (gam) (gam) (gam) (gam) màu 50 10.008 54.626 54.979 0.353 3.53 60 10.009 50.365 50.736 0.371 3.71 70 10.012 33.558 34.036 0.478 4.77 80 10.019 53.189 53.842 0.653 6.52 90 10.013 56.54 57.012 0.472 4.71 STT Từ kết qủa thực nghiệm cho thấy ñộ cồn 800 cho hiệu suất chiết cao ñạt 6,52%, mật ñộ quang dịch chiết ñạt giá trị tối ưu Vậy ta chọn dung mơi cồn 800 cho q trình chiết tách 3.4.2 Khảo sát thời gian chiết tối ưu Chiết soxhlet thời gian chiết khác với dung môi cồn 800 17 Thời gian chiết là: Mẫu 1: giờ, Mẫu 2: giờ, Mẫu 3: giờ, Mẫu 4: 10 Dịch chiết thu đem pha lỗng 25 lần, ño UV – VIS với mẫu trống dung mơi cồn Đuổi dung mơi bếp cách thủy, tính hiệu suất q trình chiết tách Bảng 3.14 Mật độ quang dịch chiết dung môi cồn thời gian chiết khác λ nm Mật ñộ quang D Mẫu M1 M2 M3 M4 457 2,613 2,665 2,762 2,774 487 2,268 2,332 2,653 2,722 Bảng 3.15 Ảnh hưởng thời gian ñến hàm lượng phẩm màu cồn Thời gian m1 m0 m2 m % Chất (giờ) (gam) (gam) (gam) (gam) màu 10.018 56.145 56.571 0.426 4.25 10.005 52.024 52.536 0.512 5.12 10.017 54.626 55.261 0.635 6.34 10 10.018 51.467 52.079 0.612 6.11 STT Từ kết thực nghiệm bảng 3.14, bảng 3.15 cho thấy thời gian chiết 8h, cho hiệu suất chiết tốt 6,34% 3.4.3 Khảo sát tỷ lệ rắn – lỏng chiết tối ưu Tiến hành chiết soxhlet mẫu điều nhuộm với dung mơi cồn 80 , thời gian chiết tiếng, giữ nguyên khối lượng hạt ñiều thay ñổi thể tích dung mơi chiết để khảo sát tỷ lệ rắn – lỏng tối ưu 18 Mẫu 1: 10,008g/250ml; Mẫu 2: 10,012g/200ml; Mẫu 3: 10,019g/180ml; Mẫu 4: 10,016g/150ml Bảng 3.16 Mật độ quang dịch chiết dung mơi cồn tỷ lệ R/L khác λ nm Mật ñộ quang D Mẫu 456 M1 M2 M3 M4 2,431 2,673 1,675 1,721 486 2,014 2,882 1,303 1,312 Bảng 3.17 Ảnh hưởng tỷ lệ R/L ñến hiệu suất trình chiết cồn STT V (ml) m1 (gam) m0 (gam) m2 (gam) m (gam) % Chất màu 250 10.017 50.365 50.945 0.58 5.79 200 10.019 53.673 54.467 0.794 7.92 180 10.012 51.259 51.819 0.56 5.59 150 10.015 56.163 56.653 0.49 4.89 Từ kết thực nghiệm ta thấy trình chiết phẩm màu dung môi cồn với thời gian chiết giờ, tỷ lệ R/L 1/20 trình chiết tách xảy triệt ñể ñạt hiệu suất chiết 7,92% 3.5 Xây dựng quy trình chiết tách phẩm màu annatto dung môi etyl axetat 3.5.1 Khảo sát thời gian chiết tối ưu Tiến hành chiết soxhlet mẫu ñiều nhuộm thời gian chiết khác với dung mơi etyl axetat Dịch chiết thu đem 19 pha lỗng 25 lần, đo UV – VIS với mẫu trống dung mơi etyl axetat Bảng 3.18 Mật độ quang dịch chiết dung môi etyl axetat thời gian chiết khác λ nm Mật ñộ quang (D) Mẫu 487 M1 M2 2,621 2,688 M3 2,675 M4 M5 2,712 2,643 Đuổi dung môi bếp cách thủy ta có bảng kết hiệu suất q trình chiết Bảng 3.19 Ảnh hưởng thời gian ñến hàm lượng phẩm màu etyl axetat Thời gian M1 m0 m2 m % Chất (giờ) (gam) (gam) (gam) (gam) màu 10.012 50.365 50.711 0.346 3.46 10.015 54.626 55.087 0.461 4.46 10.009 53.189 53.641 0.452 4.52 10 10.016 56.540 56.966 0.426 4.25 12 10.013 33.558 33.833 0.275 2.75 STT Từ bảng kết thực nghiệm ta thấy thời gian chiết tối ưu 6h ñạt hiệu suất chiết 4,46%, tăng thời gian chiết không làm tăng giá trị hiệu suất phẩm màu thu ñược Khi tthời gian chiết dài hiệu suất chiết tách giảm, thời gian gia nhiệt lâu làm phá vỡ hệ thống nối đơi cách hợp chất màu hạt ñiều nhuộm 3.5.2 Khảo sát tỷ lệ rắn – lỏng chiết tối ưu 20 Tiến hành chiết soxhlet mẫu điều nhuộm với dung mơi cồn etyl axetat, thời gian chiết tiếng, giữ ngun khối lượng hạt điều thay đổi thể tích dung môi chiết Chuẩn bị mẫu với tỷ lệ khối lượng hạt điều nhuộm/ thể tích dung mơi etyl axetat sau: Mẫu 1: 10,009g/100ml; Mẫu 2: 10,015g/150ml; Mẫu 3: 10,018g/180ml; Mẫu 4: 10,016g/200ml; Mẫu 5: 10,023g/250ml Bảng 3.20 Mật độ quang dịch chiết dung mơi etyl axetat tỷ lệ R/L khác λ nm Mật ñộ quang (D) Mẫu 482 M1 M2 M3 M4 M5 2,778 2,821 2,863 2, 834 2,829 Bảng 3.21 Ảnh hưởng tỷ lệ R/L ñến hàm lượng phẩm màu etyl axetat V m1 m0 m2 m % Chất (ml) (gam) (gam) (gam) (gam) màu 100 10.009 52.476 53.017 0541 5.41 150 10.015 50.867 51.47 0.603 6.02 180 10.018 56.431 57.287 0.856 8.54 200 10.016 58.215 58.989 0.774 7.73 250 10.023 51.953 52.57 0.617 6.16 STT 21 Vậy với thời gian chiết 6h tỷ lệ khối lượng hạt điều/ thể tích dung mơi etyl axetat chiết 1/18 q trình chiết đạt hiệu suất cao 8,54% 3.6 Lựa chọn quy trình chiết tách annatto hiệu Thực quy trình chiết annatto dung mơi khác Kết hiệu suất chiết thể bảng 3.22 Bảng 3.22 Kết hiệu suất chiết tách phẩm màu quy trình Thơi gian Dung mơi m1 (g) V (ml) M2 (g) NaOH 1M 10,042 280 3,237 8h 32,24 Nước 20,012 400 0,433 20h 2,15 Cồn 80 10,023 200 0,871 8h 8,69 Etyl axetat 10,015 180 0,972 6h 9,71 chiết H% Các quy trình tiến hành điều kiện phịng thí nghiệm B4 – Đại học Sư phạm – Đà Nẵng Từ kết ta thấy, hiệu suất quy trình chiết tách phẩm màu annatto dung môi kiềm NaOH cao Sản phẩm cao màu annatto thu ñược bảo quản dễ dàng, thành phần chủ yếu norbixin (đã trung hịa) nên dễ tan nước Dung mơi kiềm phản lấy hai thành phần phẩm màu annatto bixin norbixin nên hiệu suất thu ñược cao Phương pháp chiết chưng ninh nên dễ thực với khối lượng hạt ñiều lớn, khả ứng dụng thực tế cao Sản phẩm cao màu chiết dung mơi nước khó bảo quản, dễ bị mốc có nhiều thành phần hữu khác thực vật như: protein, xenlulo,… Hiệu suất quy trình thấp dung mơi nước chiết ñược norbixin Tuy nhiên hạt ñiều thu mua chợ chủ 22 yếu hạt ñiều già, hàm lượng norbixin thấp nên phải chiết với lượng hạt ñiều lớn thu ñược phẩm màu Thời gian thực trình chiết tách cao nhiều so với quy trình khác Cao màu chiết dung mơi cồn có màu sắc ñẹp, thành phần chủ yếu bixin, hiệu suất trình chiết tách so với dung môi nước cao Dung môi cồn dễ bay hơi, đuổi dung mơi cần gia nhiệt 600C ÷ 800C nên không làm phân hủy thành phần mang màu Mặt khác dung môi cồn giá thành cao, dễ bay hơi, sử dụng phương pháp chiết soxhlet nên khó thực với khối lượng hạt điều lớn Cao màu chiết dung mơi etyl axetat có màu sắc ñẹp, thành phần chủ yếu bixin, không tan nước nên khả ứng dụng hạn chế Hiệu suất trình chiết tách cao so với chiết dung mơi cồn khả tách bixin tốt hơn, nhiên so với chiết dung môi kiềm hiệu suất thấp Dung mơi etyl axetat giá thành cao, dễ bay hơi, sử dụng phương pháp chiết soxhlet nên khó thực với khối lượng hạt ñiều lớn Từ nhận ñịnh quy trình chiết tách ta thấy quy trình chiết tách phẩm màu annatto dung môi kiềm hiệu Sơ đồ nghiên cứu quy trình chiết tách phẩm màu annatto 23 Hạt Điều Nhuộm Đã làm Dung môi NaOH 1M Thực chưng ninh theo ñiều kiện ñã khảo sát Thời gian chiết 6h Lọc nóng Tỷ lệ R/L 1/28 Dịch chiết kiềm Trung hịa HCl đặc Dịch chiết trung hịa Chiết nhiều lần với n-hexan Cao màu annatto khô Sấy tủ sấy nhiệt ñộ 50 – 600C Dịch chiết Đuổi dung môi bếp cách thủy 600C Cao màu annatto dạng sệt 3.7 Kết kiểm tra, ñánh giá chất lượng phẩm màu annatto 3.7.1 Kiểm tra ñịnh tính Kiểm tra cao màu annatto thu quy trình chiết tách với dung mơi kiềm NaOH theo thơng tư Bộ Y Tế ban hành “Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia phụ gia thực phẩm - Phẩm màu” Cảm quan: Bột màu ñỏ nâu sẫm ñến ñỏ tím 24 Ta thấy cao màu thu có màu nâu sẫm, chiếu sáng ánh tím Độ tan: Tan dung dịch kiềm, tan ethanol Hấp thụ UV-VIS Dung dịch mẫu thử 0,5% dung dịch kali hydroxyd Có cực đại hấp thụ khoảng 453 482 nm Hình 3.14 : Phổ hấp thụ UV –VIS cao màu annatto Độ tinh khiết Bảng 3.23 Bảng hàm lượng số kim loại cao annatto Kim loại Hàm lượng (mg/kg hạt ñiều nhuộm) TCVN (mg/kg) As Hg Pb 0,182 0,074 0,162 3,000 1,000 2,000 Hàm lượng kim loại nặng phẩm màu thu ñược vùng an tồn, phù hợp với quy định Bộ y tế, ñược phép sử dụng sản phẩm thực phẩm mà không gây hại tới sức khỏe người 3.7.2 Định lượng tổng phẩm màu Tiến hành theo quy trình chun luận định lượng tổng chất màu phương pháp quang phổ JECFA monograph 1Vol - quy trình với điều kiện sau: Dung mơi: dung dịch KOH 0,5% 25 Đo độ hấp thụ quang λmax ~ 482 nm Độ hấp thụ riêng A1%1cm = 2.870 Kết ño UV – Vis λmax mẫu cao annatto là: 0, 3171 Áp dụng cơng thức tính tổng phẩm màu: % chất màu = 100.(A/A1%1cm) (F/W) Mẫu cao annatto tiến hành ño có hệ số pha lỗng F = Ta có: % chất màu = 100 x 0,3171 x 2,870 x 0,25 = 44,2% Vậy cao màu annatto ñiều chế theo quy trình chiết tách mơi trường kiềm ñã lựa chọn thỏa mãn ñiều kiện hàm lượng tổng chất màu khơng thấp 35% (tính theo norbixin) KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ I KẾT LUẬN Qua q trình nghiên cứu thực nghiệm, chúng tơi rút số kết luận sau: Hạt ñiều nhuộm khơ có: độ ẩm trung bình 10,097%; hàm lượng tro 5,045% Hàm lượng kim loại nặng (Zn2+: 11,82mg/kg; Cu2+: 12,74mg/kg; Pb2+: 0,2mg/kg) phù hợp với tiêu chuẩn Việt Nam cho an toàn vệ sinh thực phẩm Đã khảo sát xác định điều kiện thích hợp ñể chiết phẩm màu annatto từ hạt ñiều nhuộm dung mơi NaOH, nước, cồn etyl axetat: • Với dung dịch kiềm NaOH: Nồng ñộ NaOH 1M, tỉ lệ R/L 1/20, thời gian chiết Hiệu suất chiết ñiều kiện tối ưu đạt H1 = 32,24% • Với dung mơi nước: Tỉ lệ R/L 1/20, thời gian chiết 20h Hiệu suất chiết ñiều kiện tối ưu ñạt H2 = 2,15% 26 • Với dung mơi cồn: Độ cồn 800, tỉ lệ R/L 10/20, thời gian chiết Hiệu suất chiết ñiều kiện tối ưu đạt H3 = 8,69% • Với dung môi etyl axetat: tỉ lệ R/L 1/18, thời gian chiết Hiệu suất chiết ñiều kiện tối ưu ñạt H4 = 9,71% Đã lựa chọn xây dựng sơ đồ quy trình cơng nghệ chiết tách phẩm màu annatto dung dịch kiềm với hiệu suất cao H = 32,24% Đã kiểm tra, ñánh giá ñược chất lượng phẩm màu annatto chiết tách: Cảm quan màu đỏ tím, tan tốt nước, tan ethanol, có cực đại hấp thụ UV - VIS khoảng 453 482 nm Định lượng ñược tổng phẩm màu cao annatto chiết ñược từ quy trình 44,2%, đạt u cầu lớn 35% theo thông tư Bộ Y Tế ban hành “Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia phụ gia thực phẩm - Phẩm màu” II KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu theo hướng sâu hơn: chạy sắc kí mỏng ñể phân lập ñược cấu tử tinh khiết từ dịch chiết hạt điều nhuộm Đo sắc kí lỏng ghép khối phổ HPLC - MS ñể xác ñịnh cấu trúc, thành phần hợp chất có dịch chiết hạt điều nhuộm Làm giàu cấu tử chính, thử hoạt tính sinh học nghiên cứu phản ứng chuyển hóa chúng Cần nghiên cứu với khối lượng hạt điều lớn để đưa quy trình cơng nghệ ứng dụng sản xuất quy mô công nghiệp