TỔNG QUAN
XÁC ĐỊNH TÍNH AN TOÀN CỦA THUỐC Ở GIAI ĐOẠN TIỀN LÂM SÀNG
1.1.1 Xác định độc tính cấp
Thuốc phải đảm bảo an toàn và hiệu lực, trong đó tính an toàn là yếu tố quan trọng hơn Độc tính là vấn đề hàng đầu trong nghiên cứu thuốc, và để chứng minh tính an toàn, cần thực hiện nghiên cứu độc tính Thử độc tính tiền lâm sàng là một phần thiết yếu trong phát triển dược phẩm, với thông tin về độc tính phải được cung cấp trước khi tiến hành thử nghiệm trên người Tại Việt Nam, việc nghiên cứu độc tính và độ an toàn của thuốc được quy định bởi Bộ Y tế, yêu cầu thử nghiệm độc tính cấp và bán trường diễn đối với tất cả các chế phẩm y học cổ truyền không phải bài thuốc cổ phương.
Vào năm 1927, JW Trevan đã nghiên cứu để ước tính hiệu lực ngộ độc tương đối của các loại thuốc và hóa chất thời bấy giờ Ông phát triển thử nghiệm LD50, cho phép so sánh các hóa chất độc hại bằng cách sử dụng cái chết làm "mục tiêu", từ đó giúp đánh giá mức độ nguy hiểm của chúng đối với cơ thể.
Kể từ khi tác phẩm đầu tay của Trevan, các nhà khoa học đã phát triển nhiều phương pháp tiếp cận mới nhằm thử nghiệm LD50 một cách trực tiếp và nhanh chóng hơn.
LD, viết tắt của "Lethal Dose", chỉ liều lượng hóa chất gây tử vong cho 50% nhóm động vật thử nghiệm LD50 là chỉ số đo lường khả năng ngộ độc ngắn hạn (độc tính cấp tính) của hóa chất, phản ánh tác động xấu xảy ra sớm sau khi tiếp xúc, bao gồm cả việc uống hoặc tiếp xúc liên tục trong 4 giờ với hóa chất trong không khí.
"Tương đối sớm" được hiểu là khoảng thời gian từ vài phút đến 24 giờ hoặc khoảng 2 tuần, và hiếm khi kéo dài hơn Do đó, giá trị của LD50 trở nên cần thiết và có ý nghĩa khoa học.
Thử độc tính cấp là phương pháp quan trọng nhằm cung cấp thông tin cho việc xếp loại mức độ độc của thuốc, hỗ trợ điều trị ngộ độc cấp, và thiết lập mức liều cho các thử nghiệm độc tính tiếp theo Do đó, việc xác định các phép thử độc tính cấp là cần thiết.
- Liều dung nạp tối đa;
- Liều gây ra độc tính có thể quan sát được;
- Liều thấp nhất có thể gây chết động vật thí nghiệm (nếu có);
- Liều LD50 gần đúng (nếu có thể xác định được);
Dưới đây là một số định nghĩa cụ thể:
Độc tính của thuốc là tính chất thể hiện qua các tác dụng không mong muốn và có hại cho cơ thể, có thể từ nhẹ như thay đổi hành vi, buồn nôn, mẩn ngứa đến nặng nề, thậm chí gây tử vong.
Độc tính cấp của thuốc là mức độ độc hại xảy ra sau khi sử dụng thuốc một lần hoặc trong vài lần trong ngày Nghiên cứu độc tính cấp trên động vật thí nghiệm nhằm xác định liều chết trung bình (LD50), tức là liều lượng gây tử vong cho 50% số động vật trong điều kiện nhất định.
Liều chết, hay còn gọi là LD (lethal dose), là liều lượng thuốc gây tử vong cho động vật Thông tin về liều chết chỉ được thử nghiệm trên các con vật thí nghiệm và không áp dụng cho con người.
Liều chết tuyệt đối, viết tắt là ALD (absolute lethal dose) hay còn gọi là LD100, là liều nhỏ nhất có khả năng gây tử vong cho 100% các con vật thí nghiệm Nếu sử dụng liều cao hơn LD100, tất cả các con vật sẽ đều tử vong.
Liều chết trung bình, hay còn gọi là MLD (mean lethal dose) và thường được ký hiệu là LD50, là liều lượng gây tử vong cho 50% số lượng động vật thí nghiệm.
Liều chết tối thiểu (LD) được xác định dựa trên số lượng động vật thử nghiệm và tỷ lệ tử vong Nếu trong một thử nghiệm trên 20 con, có 1 con chết, thì liều đó tương ứng với LD5, tức là liều gây chết 5% Tương tự, nếu có 2 con chết, thì liều tương ứng sẽ là LD10, gây chết 10% Trong trường hợp thử nghiệm chỉ có 4 con và 1 con chết, thì liều chết tối thiểu sẽ là LD25, tương ứng với tỷ lệ tử vong 25%.
Liều dưới liều chết (ILD), hay còn gọi là liều dung nạp tối đa (MTD), được ký hiệu là LD0, là liều cao nhất mà không gây tử vong cho động vật Mặc dù liều MTD có thể gây ra các tác động độc hại từ nhẹ đến nặng, nhưng nó vẫn không dẫn đến cái chết của con vật.
- Liều an toàn: là mức liều cao nhất mà không gây ra bất kỳ tai biến nào có thể quan sát được (NOAEL: no obsered adverse effect level)
Những triệu chứng ngộ độc điển hình có thể quan sát được trên động vật và khả năng hồi phục (nếu có) [6]
1.1.1.2 Độ ng v ậ t th ự c nghi ệ m Động vật nghiên cứu: thử ít nhất trên 2 loài động vật có vú, trong đó có một loài không gặm nhấm Tùy điều kiện, có thể chấp nhận thử độc tính cấp trên một loài động vật
- Loài gặm nhấm thường sử dụng là chuột nhắt, chuột cống
- Loài không gặm nhấm có thể dùng là chó hoặc khỉ
Nên sử dụng số lượng động vật thí nghiệm nhỏ nhất, tùy theo mô hình áp dụng (thường là 3 đến 5 con/mức liều) [7]
Có thể sử dụng thuốc qua nhiều đường khác nhau như uống, tiêm bắp, tiêm dưới da, tiêm phúc mạc và tiêm tĩnh mạch Đường dùng tốt nhất là đường dự kiến sẽ áp dụng cho người trong lâm sàng sau này Khi cho uống qua ống xông, cần chú ý tránh để thuốc vào khí quản, vì điều này có thể khiến chuột chết mà không phải do tác dụng độc của thuốc.
TỔNG QUAN VỀ CÁC MÔ HÌNH NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG GIẢM ĐAU
Để nghiên cứu tác dụng giảm đau trên động vật thực nghiệm, có nhiều phương pháp khác nhau Tùy thuộc vào mục đích nghiên cứu, người thực hiện thí nghiệm sẽ chọn mô hình phù hợp Dưới đây là một số mô hình nghiên cứu về tác dụng giảm đau đang được áp dụng trong nghiên cứu thực nghiệm.
1.2.1 Nghiên cứu tác dụng giảm đau trung ương
Nghiên cứu tác dụng giảm đau trên mô hình gây đau bởi phiến nóng (Hotplate)
Nghiên cứu dựa trên phương pháp của Baker và cộng sự [16] đã chia chuột nhắt trắng thành 4 lô ngẫu nhiên để uống thuốc và thuốc thử Thí nghiệm được thực hiện tại hai thời điểm: trước và sau 5 ngày khi chuột uống thuốc thử Vào ngày thứ 5, sau khi chuột uống thuốc 1 giờ, chúng được đặt lên mâm nóng có nhiệt độ ổn định 56°C của Máy đo đau bản nóng, lạnh Thời gian chịu đau được tính từ lúc chuột đặt chân vào mâm nóng đến khi chúng liếm chân sau, và tác dụng giảm đau được đánh giá qua mức tăng thời gian chịu đau của chuột.
So sánh các lô với nhau bao gồm việc tính toán phần trăm kéo dài và thời gian đáp ứng Khi thực hiện thí nghiệm, cần tiến hành vào thời điểm trước khi uống thuốc, đồng thời loại bỏ những chuột có phản ứng trước 8 giây và sau đó.
1.2.2 Nghiên cứu tác dụng giảm ngoại biên a Nghiên cứu tác dụng giảm đau tại tổ chức viêm (Randall - Selitto Test)
Nghiên cứu được thực hiện dựa trên phương pháp của Randall và Selitto, với sự điều chỉnh của Winter và cộng sự Chuột cống trắng được chia thành 4 lô ngẫu nhiên, mỗi lô nhận nước cất, Diclofenac sodium liều 20 mg/kg, và hai loại thuốc nghiên cứu Chuột uống thuốc hoặc nước cất liên tục trong 5 ngày trước khi gây viêm Vào ngày thứ 5, phù viêm cấp được gây ra bằng cách tiêm Carrageenin 1% dưới da gan bàn chân chuột Sau 3 giờ, chuột tiếp tục nhận thuốc hoặc nước cất với thể tích 5 ml/kg Ngưỡng đau của chuột được đo bằng máy đo giảm đau áp lực bàn chân tại các thời điểm 30, 60, 90 và 120 phút sau khi dùng thuốc Cuối cùng, ngưỡng đau giữa các lô được so sánh, đồng thời nghiên cứu tác dụng giảm đau qua mô hình gây đau quặn bằng acid acetic.
Theo phương pháp nghiên cứu của Koster và cs (1959) [17] Chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên làm 4 lô, mỗi lô được uống lần lượt nước cất, Diclofenac sodium liều
20 mg/kg, thuốc nghiên cứu liều dự kiến có tác dụng, thuốc nghiên cứu gấp đôi liều
1 Chuột được uống thuốc thử hoặc nước cất 5 ngày liên tục Ngày thứ 5, sau khi dùng thuốc 60 phút, tiến hành gây đau quặn bằng cách tiêm phúc mạc bằng dung dịch acid acetic 0,6% liều 0,1 ml/10g thể trọng Sau khi tiêm acid acetic vào ổ bụng, ở tất cả các chuột đều có những cơn đau quặn với biểu hiện thóp bụng lại, áp bụng xuống sàn, duỗi dài thân và chân sau Thời gian xuất hiện đau (tính từ lúc tiêm acid acetic đến khi có cơn đau quặn đầu tiên) và đếm số cơn đau quặn trong từng khoảng thời gian 5 phút cho đến kết thúc 20 phút sau tiêm acid acetic được ghi lại đối với từng chuột trong mỗi lô So sánh kết quả giữa các lô nghiên cứu, tính % ức chế đau quặn theo công thức:
Tỷ lệ giảm số cơn đau quặn của lô thử thuốc được biểu thị bằng A%, trong đó Dc là số cơn đau quặn của lô chứng sinh lý và Dt là số cơn đau quặn của lô thử thuốc.
Trong phạm vi và giới hạn của đề tài, chúng tôi lựa chọn mô hình Randall -
Selitto Test do tính đơn giản, dễ tiến hành và có tính chính xác cao.
ĐAU THEO Y HỌC HIỆN ĐẠI VÀ Y HỌC CỔ TRUYỀN
1.3.1 Đau theo y học hiện đại
Theo Hiệp hội Quốc tế Nghiên cứu về Đau (IASP), đau được định nghĩa là cảm nhận giác quan và xúc cảm do tổn thương ở các mô, có thể là hiện tại hoặc tiềm tàng, và mức độ đau phụ thuộc vào mức độ nghiêm trọng của tổn thương Cảm giác đau có thể phát sinh từ bất kỳ điểm nào trong hệ thống dẫn truyền đau.
Đau theo sinh lý học thần kinh, theo Geissner và Wurtele, là một khái niệm trừu tượng phụ thuộc vào các yếu tố như cơ địa, cảm xúc và mức độ chịu đựng khác nhau của từng bệnh nhân.
Cảm giác đau là một trải nghiệm phức tạp, khác biệt với các cảm giác khác, thông báo cho não về các kích thích có hại cho cơ thể Đau được định nghĩa là cảm giác khó chịu liên quan đến tổn thương thực tế hoặc tiềm tàng, mang tính chủ quan và bị ảnh hưởng bởi nhiều yếu tố như truyền thống, văn hóa và tôn giáo Đau có thể xuất hiện ở nhiều vị trí trong cơ thể với các đặc điểm khác nhau như đau nông, đau sâu, đau âm ỉ, đau chói, và đau đột ngột Đây là triệu chứng phổ biến trong nhiều bệnh lý, và tính chất của đau có thể hỗ trợ trong việc chẩn đoán bệnh.
Cảm giác đau cấp được truyền qua các sợi Aγ có myelin với tốc độ 6 - 30 mét/giây, trong khi cảm giác đau mạn được truyền qua sợi C không có myelin với tốc độ 0,5 - 2 mét/giây Việc ức chế sợi Aγ sẽ làm mất cảm giác đau cấp, trong khi ức chế sợi C bằng thuốc tê tại chỗ sẽ làm mất cảm giác đau chậm Trong tủy sống, các nơron này có thể đi lên hoặc xuống từ 1 đến 3 đốt tủy và kết thúc tại chất xám sừng sau Nơron thứ hai sẽ bắt chéo sang cột trắng trước - bên đối diện và tiếp tục lên não qua nhiều đường khác nhau, bao gồm bó tủy sống.
Đồi thị và bó tuỷ sống có cấu tạo lưới tận cùng tại hành não, cầu não và não giữa ở cả hai bên Từ cấu tạo lưới này, nhiều nơron kết nối tới các nhân của đồi thị và một số vùng ở nền não, đồng thời có những sợi thần kinh đi lên để kích hoạt vỏ não.
Nơron thứ ba từ đồi thị lên nhiều vùng ở nền não và vùng cảm giác đau ở vỏ não [19]
1.3.1.3 Trung tâm nhậ n th ứ c c ảm giác đau Đường dẫn truyền cảm giác đau tận cùng ở cấu trúc lưới của thân não, trung tâm dưới vỏ như nhân lá trong của đồi thị và vùng S-I, S-II, vùng đỉnh, vùng trán của vỏ não Kích thích vào những vùng này gây cảm giác đau
Cấu trúc lưới và trung tâm dưới vỏ vừa có chức năng nhận thức đau vừa tạo ra các đáp ứng về tâm lý khi đau
Vỏ não có chức năng phân tích cảm giác đau tinh vi, phân biệt vị trí, đánh giá mức độ đau [19]
1.3.1.4 Phân loại đau a Theo cơ chế gây đau:
- Đau cảm thụ: là đau do tổn thương tổ chức (cơ, da, nội tạng…) gây kích thích vượt ngưỡng đau [20] Đau cảm thụ có 2 loại:
+ Đau thân thể: là đau do tổn thương mô da, cơ, khớp…
+ Đau nội tạng: là đau do tổn thương nội tạng
- Đau thần kinh: là chứng đau do những thương tổn nguyên phát hoặc những rối loạn chức trong hệ thần kinh gây nên Đau thần kinh chia 2 loại:
Đau thần kinh ngoại vi là tình trạng đau do tổn thương các dây thần kinh hoặc rễ thần kinh, thường gặp trong các trường hợp như đau sau herpes, đau dây V, và bệnh thần kinh ngoại vi do đái tháo đường.
+ Đau thần kinh trung ương: do tổn thương não hoặc tuỷ sống
Đau hỗn hợp là sự kết hợp giữa đau cảm thụ và đau thần kinh Đau cấp tính là loại đau mới xuất hiện với cường độ mạnh mẽ, thường được xem là dấu hiệu cảnh báo hữu ích Thời gian đau cấp tính kéo dài dưới 3 tháng và đóng vai trò quan trọng trong việc chẩn đoán, giúp xác định liệu chứng đau có nguồn gốc thực thể hay không Các loại đau cấp tính bao gồm nhiều hình thức khác nhau.
- Đau mạn tính: là chứng đau dai dẳng tái đi tái lại nhiều lần
+ Đau khung chậu mạn tính
+ Đau do nguyên nhân thần kinh… [21], [22], [23]
1.3.1.5 Cơ chế đau do viêm
Viêm là phản ứng tự nhiên của cơ thể tại mô liên kết, xuất hiện ở mọi cơ quan, nhằm loại trừ tác nhân gây viêm và sửa chữa tổn thương Quá trình viêm luôn đi kèm với sự thay đổi mạch máu và sự tham gia của hệ thần kinh, giúp đưa các tế bào thực bào đến vị trí viêm Mặc dù viêm là cơ chế bảo vệ cơ thể chống lại yếu tố gây bệnh, nhưng nó cũng có thể dẫn đến tổn thương, hoại tử và rối loạn chức năng cơ quan, gây ra những hậu quả nghiêm trọng.
Hiện nay, viêm có thể được phân loại theo nhiều cách khác nhau, mỗi cách mang lại những lợi ích riêng Các phân loại phổ biến bao gồm viêm khớp nhiễm khuẩn và viêm khớp vô khuẩn dựa vào nguyên nhân; viêm nông và viêm sâu dựa vào vị trí; và viêm thanh dịch, viêm tự huyết, viêm mủ dựa vào tính chất dịch rỉ viêm.
Viêm có thể được phân loại thành hai loại chính dựa trên tính chất: viêm đặc hiệu và viêm không đặc hiệu Viêm đặc hiệu thường xảy ra do phản ứng miễn dịch không tốt, trong khi viêm không đặc hiệu có nguyên nhân khác Mặc dù hai loại này có cơ chế gây viêm khác nhau, nhưng về bản chất, chúng không có sự khác biệt đáng kể.
Viêm được phân loại thành hai loại chính: viêm cấp và viêm mạn Viêm cấp xảy ra trong thời gian ngắn, từ vài phút đến vài ngày, với đặc điểm là dịch tiết chứa nhiều protein huyết tương và sự xuất hiện của bạch cầu đa nhân trung tính Ngược lại, viêm mạn diễn ra trong khoảng thời gian dài hơn, từ vài ngày đến nhiều tháng hoặc năm, và có biểu hiện mô học đặc trưng như sự xâm nhập của lympho-bào và đại thực bào, cùng với tổn thương và quá trình sửa chữa, bao gồm sự tăng sinh của mạch máu và mô xơ.
Trong viêm cấp, phản ứng nhanh chóng xảy ra để đối phó với tổn thương, với vai trò chính là huy động bạch cầu đến vị trí tổn thương nhằm làm sạch vi khuẩn và các tác nhân gây viêm khác, đồng thời tiêu hủy mô hoại tử Tuy nhiên, bạch cầu cũng có thể kéo dài viêm và gây tổn thương mô do giải phóng enzym, chất trung gian hóa học và các gốc oxy độc hại Viêm cấp có ba hiện tượng chính: làm dãn mạch để tăng lưu lượng máu đến ổ viêm, thay đổi cấu trúc mạch máu cho phép protein huyết tương thoát ra, và di tản bạch cầu từ vi tuần hoàn đến vị trí tổn thương Các triệu chứng như sưng, nóng, đỏ xuất hiện sớm, trong khi đau và rối loạn chức năng cơ quan thường xuất hiện muộn hơn do tác động của hóa chất trung gian và bạch cầu thực bào Các hóa chất trung gian trong viêm bao gồm các chất gây viêm như LPS của vi khuẩn và TNF.
IL -1, IL -6, IL – 8, PG, NO, những chất này là nguyên nhân dẫn đến đau trong viêm nói chung và viêm khớp nói riêng [24]
1.3.1.6 Thu ố c gi ảm đau a Thuốc giảm đau trung ương
Các opioid hoạt động bằng cách gắn vào các receptor opioid (μ, κ, δ), kích thích chúng thông qua việc cặp đôi với protein Gi Khi các receptor này được kích thích, chúng ức chế adenylcyclase, giảm mở kênh Ca2+ và tăng hoạt động của kênh K+, dẫn đến tình trạng ưu cực Kết quả là, sự giải phóng các chất dẫn truyền thần kinh như chất P và acid glutamic bị ức chế, ngăn cản quá trình dẫn truyền xung động thần kinh.
* Các thuốc trong nhóm thuốc giảm đau trung ương
- Thuốc chủ vận trên receptor opioid:
+ Các opioid tự nhiên: morphin, codein,…
+ Các opioid tổng hợp: pethidin, methadon,
- Thuốc chủ vận - đối kháng hỗn hợp và chủ vận từng phần trên receptor opioid: pentazocin, nalorphin,, nalbuphil, butorphanol,… [25]
- Thuốc đối kháng đơn thuần trên receptor opioid: naloxon, naltrexon b Thuốc giảm đau ngoại vi
Thuốc hoạt động bằng cách giảm tổng hợp prostaglandin F2, từ đó làm giảm độ nhạy của các dây thần kinh cảm thụ đối với các chất gây đau trong phản ứng viêm như bradykinin và serotonin.
Các thuốc trong nhóm: paracetamol, ibuprofel, indomethacin, diclofenac,…
TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU THUỐC Y HỌC CỔ TRUYỀN CÓ TÁC DỤNG GIẢM ĐAU TRÊN THẾ GIỚI VÀ TRONG NƯỚC
DỤNG GIẢM ĐAU TRÊN THẾ GIỚI VÀ TRONG NƯỚC
1.4.1 Tình hình nghiên cứu thuốc y học cổ truyền có tác dụng giảm đau trên thế giới
Một nghiên cứu năm 2008 đã xác định sáu hợp chất hoạt tính sinh học trong Cốt khí củ (Rhizoma et Radix Polygoni Cuspidati) thông qua phương pháp sắc ký, bao gồm polydatin, resveratrol, rhein, emodin, chrysophanol và Physcion Radix Polygoni cuspidaii có nhiều tác dụng dược lý, như kháng khuẩn, kháng virus, chống viêm, giảm đau, bảo vệ hệ tim mạch, bảo vệ gan, chống khối u và cải thiện miễn dịch.
Năm 2009, Devbhuti D và cộng sự đã thực hiện nghiên cứu về độc tính cấp tính của các chất chiết xuất từ Dây đau xương trên chuột nhắt và chuột cống Kết quả cho thấy LD50 trong 24 giờ của methanol và chất chiết xuất từ nước cho thấy các chất này không độc khi sử dụng đường uống với liều lượng lên đến 3,5 g/kg ở cả hai loại chuột.
Năm 2019, Hui Xiong và cộng sự đã nghiên cứu tác dụng của Kuan-Jin-Teng (Dây đau xương) trong việc chống viêm khớp ở chuột bị viêm khớp do collagen Nghiên cứu cho thấy Dây đau xương có khả năng ức chế sản xuất các cytokine tiền viêm như NO, TNF-α, IL-1β, và IL-17, đồng thời điều hòa đường truyền tín hiệu MAPK, từ đó cho thấy hiệu quả chống viêm khớp của nó.
- 6 và điều chỉnh giảm con đường tín hiệu MAPK [30]
Năm 2019, nghiên cứu của Yang J.-L và cộng sự đã chỉ ra tác dụng chống viêm của các hoạt chất trong Thiên niên kiện Họ đã phân lập 19 sesquiterpenoids với cấu trúc cacbocyclic khác nhau và đánh giá tác dụng ức chế của chúng đối với mRNA COX-2 và biểu hiện protein COX-2, xác nhận hiệu quả chống viêm của Thiên niên kiện.
1.4.2 Tình hình nghiên cứu thuốc y học cổ truyền có tác dụng giảm đau trong nước
Năm 2011, nghiên cứu của Hoàng Thị Quế, Nguyễn Nhược Kim và Nguyễn Trần Thị Giáng Hương đã chỉ ra tác dụng của bài thuốc Tam tý thang gia giảm trong điều trị viêm khớp dạng thấp (VKDT) Bài thuốc bao gồm các thành phần như độc hoạt, phòng phong, tần giao, bạch thược, xuyên khung, ngưu tất, quế chi, cam thảo, đương quy, hoàng kỳ, tục đoạn, đẳng sâm, phục linh, thục địa, tế tân và đỗ trọng Kết quả nghiên cứu thực nghiệm cho thấy bài thuốc này có tính an toàn cao và có tác dụng giảm đau qua cơ chế trung ương và ngoại vi.
Năm 2014, Phan Phước Hiền và cộng sự đã nghiên cứu độc tính bán trường diễn và tác dụng kháng viêm, giảm đau của cao phối hợp Thiên niên kiện và Bách bệnh Kết quả cho thấy cao phối hợp này có hoạt tính ức chế peroxid hóa lipid với IC50 là 751,5 µg/ml Độc tính cấp đường uống trên chuột nhắt trắng được xác định với liều LD0 = 21,5g cao/kg thể trọng Sau 2 tháng sử dụng liều 2,15 g/kg (tương đương 1/10 LD0), không có biểu hiện bất thường nào về độc tính Các chỉ số huyết học và sinh hóa liên quan đến chức năng gan - thận đều nằm trong giới hạn bình thường Ngoài ra, cao phối hợp ở hai liều 1,075 g/kg và 2,15 g/kg có tác dụng giảm đau.
Năm 2017, Nguyễn Ngọc Thược và cộng sự đã tiến hành nghiên cứu đề tài
Nghiên cứu về độc tính cấp và tác dụng chống viêm, giảm đau của Cao lỏng TK1 cho thấy không xác định được LD50 khi sử dụng đường uống trên chuột nhắt trắng Liều tối đa an toàn cho chuột là 300,0g dược liệu khô/kg thể trọng trong 24 giờ mà không gây độc tính Cao lỏng TK1 thể hiện khả năng chống viêm hiệu quả đối với cả viêm cấp và viêm mạn, đồng thời có tác dụng chống viêm tương tự như corticoid Ngoài ra, nghiên cứu cũng chỉ ra rằng Cao lỏng TK1 có khả năng giảm đau hiệu quả ở cả mức độ ngoại vi và trung ương.
Năm 2018, nghiên cứu của Nguyễn Thị Như Qúy và cộng sự đã chỉ ra rằng bài thuốc “Thái Bình HV” có tác dụng chống viêm hiệu quả trên động vật thực nghiệm Cụ thể, Cao lỏng “Thái Bình HV” ở liều 11,9g/kg/ngày và 23,8g/kg/ngày cho thấy khả năng điều trị viêm khớp do tá chất Freund trên chuột cống trắng Ngoài ra, bài thuốc này còn thể hiện tác dụng chống viêm cấp tốt trong mô hình gây phù chân chuột cống trắng bằng Carragenan và tác dụng chống viêm mạn tốt trong mô hình gây u hạt trên chuột cống trắng.
GIỚI THIỆU BÀI THUỐC “THÁI BÌNH HV”
1.5.1 Đặc điểm của bài thuốc
Bài thuốc "Thái Bình HV" được phát triển từ bài thuốc Nam Thái Bình, một phương pháp điều trị truyền thống của Việt Nam Thông tin về bài thuốc này được ghi chép trong cuốn "Toa thuốc Đông y cổ truyền Việt Nam" của Bác sĩ Nguyễn Văn Hưởng (1906-1998) Nguyễn Thị Như Quý đã tiến hành nghiên cứu và đánh giá sơ bộ về hiệu quả của "Thái Bình HV".
Bài thuốc này, với tác dụng chống viêm và giảm đau trên động vật thực nghiệm, đã được sử dụng trong dân gian từ lâu để điều trị đợt cấp của viêm khớp Người bệnh thường sắc uống mỗi ngày một thang để đạt hiệu quả tốt nhất.
Bài thuốc “Thái Bình HV” [36] gồm các vị thuốc của bài Thái Bình bỏ đi vị Phòng kỷ, gia thêm vị Cốt khí củ
Ngũ gia bì chân chim Cortex Schefflera heptaphyllae 10g
Dây đau xương Caulis Tinosporae tomentosae 10g
Cốt khí củ Radix Polygoni cuspidaii 10g
Cam thảo dây Herba Abri precatorii 05g
Cà gai leo Radix et Ramulus Solani 10g
Củ khúc khắc Rhizoma Smilacis glabrae 10g
Thiên niên kiện Rhizoma Homalomenae 10g
- Công năng: khu phong trừ thấp, thông kinh hoạt lạc, mạnh gân cốt, bổ can, thận
- Ứng dụng: điều trị viêm khớp, thoái hóa khớp, giải độc…
Bài thuốc Thái Bình HV kết hợp nhiều thành phần có tác dụng hiệu quả trong việc thanh nhiệt, giải độc và trừ phong thấp Củ khúc khắc có vị ngọt, tính bình, giúp tiêu viêm và giảm đau, trong khi Cẩu tích và Thiên niên kiện bổ can thận, mạnh gân xương Dây đau xương cùng với Củ khúc khắc và Thiên niên kiện hỗ trợ khu phong, giúp thư cân hoạt lạc Ngũ gia bì chân chim, hay Sâm nam, không chỉ khứ phong thấp mà còn bồi bổ cơ thể, tăng sinh lực Cốt khí củ có vị ngọt, đắng, tính mát, có tác dụng khu phong, trừ thấp và giảm đau Tỳ giải giúp giải độc và trị các bệnh liên quan đến phong thấp Cà gai leo có tác dụng trừ phong thấp và giảm đau, trong khi Cam thảo Nam bồi bổ tỳ và hòa hoãn các vị thuốc khác Tất cả các thành phần này kết hợp lại mang lại hiệu quả trong việc trừ phong thấp, thư cân hoạt lạc, giảm đau, và bồi bổ can thận.
Về tác dụng dược lý của bài thuốc “Thái Bình HV”, bài thuốc được cấu tạo bởi bốn nhóm thuốc sau:
Nhóm một bao gồm các vị thuốc chống viêm, giảm đau mà không gây tăng cường cảm giác đau khi mới sử dụng, như Độc hoạt, Thương truật, Hoàng nàn và Mã tiền Các vị thuốc này bao gồm Cẩu tích, Tỳ giải, Củ khúc khắc, Thiên niên kiện và Dây đau xương (khoan cân đằng).
- Nhóm hai gồm các vị thuốc trừ thấp, giảm đau tiêu viêm như Cẩu tích, Tỳ giải,
Củ khúc khắc, Cốt khí củ
- Nhóm ba gồm các vị thuốc giải độc, giảm đau như Cà gai leo, Cam thảo dây,
Củ khúc khắc Ngoài ra, Cam thảo dây còn giảm đau theo kiểu co thắt cơ, cùng với
Củ khúc khắc có tác dụng tiêu viêm giảm đau kiểu corticoid
Nhóm bốn vị thuốc bổ can thận và mạnh gân cốt, bao gồm Cẩu tích, Thiên niên kiện, và Ngũ gia bì chân chim, có tác dụng hiệu quả trong việc giảm đau do thoái hóa xương khớp, phì đại đĩa đệm, và gai đôi cột sống.
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
CHẤT LIỆU ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU
Cao nước chiết xuất từ bài thuốc “Thái Bình HV” (TBHV) theo tỉ lệ 1:1 (1ml dịch chiết tương đương 1g dược liệu của bài thuốc)
Bảng 2.1 Thành phần của bài thuốc “Thái Bình HV” (01 thang)
STT Tên dược liệu Tên khoa học Số lượng
3 Ngũ gia bì chân chim Cortex Schefflera heptaphyllae 10g
4 Dây đau xương Caulis Tinosporae tomentosae 10g
5 Cốt khí củ Radix Polygoni cuspidaii 10g
6 Cam thảo dây Herba Abri precatorii 05g
7 Cà gai leo Radix et Ramulus Solani 10g
8 Củ khúc khắc Rhizoma Smilacis glabrae 10g
9 Thiên niên kiện Rhizoma Homalomenae 10g
Các dược liệu trong bài thuốc được dùng dưới dạng dược liệu khô và đạt tiêu chuẩn trong Dược điển Việt Nam V [37]
Cao nước từ bài thuốc “TBHV” được chiết xuất với tỉ lệ 1:1, trong đó 1ml dịch chiết tương đương với 1g dược liệu Quá trình chiết xuất được thực hiện tự động tại khoa Dược của Bệnh viện Tuệ Tĩnh.
Thuốc được chiết xuất với tỷ lệ 1:1, cô đặc thành cao có độ ẩm từ 15-20% để cho chuột uống Liều dùng được tính theo gam dược liệu khô, với bài thuốc “TBHV” tổng cộng 85g dược liệu khô, dự kiến dùng cho một người nặng 50kg trong một ngày Tính toán cho thấy liều dùng trên người là 1,70g/kg/24h, tương đương với liều dự kiến có tác dụng ở chuột cống trắng là 11,90g/kg/24h và ở chuột nhắt trắng là 20,4g/kg/24h.
Chuột nhắt trắng chủng Swiss, cả 2 giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 18 – 22g do Ban chăn nuôi - Học viện Quân Y cung cấp
Chuột được nuôi trong phòng thí nghiệm của Ban chăn nuôi động vật thí nghiệm – Học viện Quân Y từ 5-10 ngày trước khi tiến hành nghiên cứu Trong suốt quá trình nghiên cứu, chuột được cung cấp thức ăn chuẩn dành riêng cho chuột do Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương cung cấp, và có quyền uống nước đun sôi để nguội tự do.
2.1.2.2 Độc tính bán trườ ng di ễ n
Chuột cống trắng chủng Wistar, với trọng lượng 180 ± 20 g, được cung cấp bởi Ban chăn nuôi – Học viện Quân Y Để đảm bảo đáp ứng nhu cầu thí nghiệm, động vật được nuôi dưỡng trong phòng thí nghiệm ít nhất một tuần trước khi tiến hành Chúng được cho ăn theo tiêu chuẩn thức ăn cho động vật nghiên cứu và uống nước sạch đã đun sôi để nguội Hàng ngày, quá trình quan sát và theo dõi kết quả thí nghiệm được ghi chép cẩn thận, với số lượng động vật mỗi loại được trình bày rõ ràng trong phần phương pháp nghiên cứu.
2.1.2.3 Mô hình giảm đau tạ i t ổ ch ức viêm (Randall -Selitto Test)
Chuột cống trắng chủng Wistar trọng lượng 180g - 200g do Ban chăn nuôi – Học viện Quân Y cung cấp Chuột được nhịn đói 18h trước khi uống thuốc để tiến hành thí nghiệm.
ĐỊA ĐIỂM VÀ THỜI GIAN TIẾN HÀNH NGHIÊN CỨU
Bộ môn Dược lý – Học viện Quân Y
PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu thực nghiệm, có đối chiếu với nhóm chứng
Nghiên cứu xác định LD50 của thuốc “TBHV” trên chuột nhắt trắng được thực hiện bằng phương pháp Litchfield - Wilcoxon, theo hướng dẫn của WHO Trong thí nghiệm, chuột nhắt trắng được chia thành 6 lô, mỗi lô gồm 10 con.
Trong thí nghiệm, chuột được cho uống cao đặc “Thái Bình HV” với liều lượng tăng dần, cụ thể là 0,2ml/10g/lần, 3 lần trong 24 giờ, cách nhau 8 giờ Chuột được chăm sóc kỹ lưỡng và theo dõi tình trạng tổng quát như vận động, ăn uống, lông, da, niêm mạc và chất tiết Tỷ lệ chuột chết trong 72 giờ được ghi nhận cho từng lô sau khi uống thuốc Sau đó, chuột tiếp tục được theo dõi trong 7 ngày Cuối cùng, tiến hành phẫu tích để quan sát tình trạng các tạng ngay sau khi chuột chết và tất cả chuột còn sống sau khi kết thúc thí nghiệm nhằm xác định nguyên nhân gây độc.
Để tính toán LD50, cần xác định khoảng cách giữa mức liều cao nhất chưa gây chết chuột và mức liều thấp nhất gây chết 100% số chuột Số chuột chết trong các lô thử nghiệm ở các mức liều này sẽ được sử dụng để tính toán LD50 được tính bằng phần mềm Excel và được kiểm tra lại bằng phương pháp Litchfield-Wilcoxon.
Sơ đồ 2.1 Sơ đồ nghiên cứu độc tính cấp
Uống cao đặc “Thái Bình HV” liều tăng dần trong cùng một thể tích Liều thấp nhất gây chết 100% chuột
Cao đặc “Thái Bình HV”
Liều cao nhất không có chuột chết
Theo dõi tình trạng chung, biểu hiện nhiễm độc trong 72 giờ và7 ngày sau khi uống thuốc.
- Phẫu tích đánh giá tất cả chuột chết (nếu có) Tính toán xác định
Các chỉ tiêu theo dõi trước, trong và sau quá trình nghiên cứ u:
* Số chuột chết/có biểu hiện bất thường trong suốt 7 ngày và tỷ lệ chết trong vòng 72 giờ sau khi uống thuốc
* Các chỉ số liên quan đến tình trạng chung của chuột: ăn, ngủ, vận động, bài tiết…
* Các chỉ số liên quan đến dấu hiệu nhiễm độc: nôn, co giật, kích động, bài tiết
2.3.2 Độc tính bán trường diễn
Nghiên cứu độc tính bán trường diễn trên chuột cống theo đường uống theo hướng dẫn của WHO đối với thuốc y học cổ truyền [39]
Chuột được chia làm 3 lô, mỗi lô 10 con, mỗi con nhốt riêng một chuồng:
- Lô 1 (n = 10): uống dung môi pha thuốc (nước cất) 3ml/kg/ngày
- Lô 2 (n = 10): uống cao đặc “TBHV” liều 11,9g/kg/ngày (tương đương liều có tác dụng trên người, tính theo hệ số 7)
- Lô 3 (n = 10): uống cao đặc “TBHV” liều 35,7g/kg/ngày (liều gấp 3 lần lô trị 1) Chuột được uống nước hoặc thuốc thử trong 1 tháng, mỗi ngày một lần vào buổi sáng
Sơ đồ 2.2 Sơ đồ nghiên cứu độc tính bán trường diễn
Các chỉ tiêu theo dõi trước, trong và sau quá trình nghiên cứ u:
HV” Lô 1: uống nước cất
Lô 2: uống liều 11,9g dược liệu /kg/ngày × 1 lần (sáng) × 01 tháng
Lô 3: uống liều 35,7g dược liệu /kg/ngày × 1 lần (sáng) × 01 tháng
- Mức độ hủy hoại tế bào gan
* Tình trạng chung, thể trọng của chuột cống
* Đánh giá chức phận tạo máu: thông qua số lượng hồng cầu, hàm lượng hemoglobin, số lượng bạch cầu, số lượng tiểu cầu
* Đánh giá chức năng gan: Thông qua định lượng một số enzym và chất chuyển hoá trong máu: ALT, AST, bilirubin toàn phần, albumin và cholesterol toàn phần
* Đánh giá chức năng thận: Thông qua định lượng nồng độ creatinin huyết thanh
Thời gian nghiên cứu: 1 tháng
Các thông số theo dõi được kiểm tra vào trước lúc uống thuốc, sau 2 tuần và sau 4 tuần uống thuốc
* Đánh giá mô bệnh học:
- Sau 30 ngày uống thuốc, chuột cống được mổ để quan sát đại thể toàn bộ các cơ quan
- Kiểm tra ngẫu nhiên cấu trúc vi thể gan, thận của 30% số chuột cống ở mỗi lô
2.3.3 Nghiên cứu tác dụng giảm đau (Randall-Selitto Test)
Based on the modified research method by Randall and Selitto, as revised by Winter et al in 1962, this information is presented in the publication "Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays" by Springer.
Chuột cống trắng được chia ngẫu nhiên thành 4 lô, mỗi lô 10 con Các chuột được nhịn đói 18h trước khi uống thuốc
Chuột được điều trị bằng thuốc trong 3 ngày liên tiếp trước khi gây phù viêm Vào ngày thứ 4, tiến hành gây phù viêm cấp bằng cách tiêm 0,1 ml hỗn dịch Carrageenin 1% (pha chế ngay trước khi tiêm) vào dưới da gan bàn chân chuột Sau 3 giờ kể từ khi tiêm Carrageenin, chuột sẽ được cho uống thuốc hoặc nước cất với thể tích 5 ml/kg trọng lượng cơ thể.
+ Lô 1 (chứng sinh lý): uống nước cất
+ Lô 2 (thuốc tham chiếu): uống Diclofenac sodium liều 15mg/kg
Lô 3 sử dụng cao đặc Thái Bình HV với liều 11,9g/kg, trong khi lô 4 sử dụng liều 23,8g/kg Để đo ngưỡng đau bàn chân gây phù viêm ở chuột, chúng tôi sử dụng máy đo giảm đau áp lực bàn chân chuột (Paw Pressure Analgesy Meter) tại các thời điểm 30 phút và 60 phút sau khi uống.
90 phút và 120 phút sau dùng thuốc So sánh ngưỡng đau bàn chân chuột giữa các lô với nhau
Sơ đồ 2.3 Sơ đồ nghiên cứu đánh giá tác dụng giảm đau
CÔNG CỤ VÀ PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU
2.4.1 Thuốc và hoá chất dùng trong nghiên cứu
Kít định lượng enzym và chất chuyển hoá trong máu bao gồm ALT, AST, bilirubin toàn phần, albumin, cholesterol toàn phần và creatinin của hãng Erba Các chỉ số này được định lượng trên máy sinh hóa bán tự động Erba từ Ấn Độ, giúp đảm bảo độ chính xác và tin cậy trong các xét nghiệm y tế.
- Các dung dịch xét nghiệm máu của hãng Horiba ABX, định lượng trên máy Horiba ABX Micros của Pháp
- Các hoá chất xét nghiệm và làm tiêu bản mô bệnh học
Cao đặc “Thái Bình HV”
Lô 2: uống Diclofenac sodium liều
Lô 3: uống cao đặc Thái Bình HV liều
Nghiên cứu đo ngưỡng đau bàn chân gây phù viêm của chuột với giá trị 11,9g/kg tại các thời điểm 30 phút, 60 phút, 90 phút và 120 phút sau khi sử dụng thuốc Kết quả cho thấy sự khác biệt trong ngưỡng đau bàn chân giữa các lô chuột được so sánh.
Lô 4: uống cao đặc Thái Bình HV liều
- Chuột uống thuốc 3 ngày liên tục, ngày 4 gây phù viêm, sau 3 giờ uống thuốc hoặc nước cất với cùng thể tích 5 ml/kg cân nặng
- Carrageenin 1%, Diclofenac sodium liều 15mg/kg (Số lô: KV692, ngày sản xuất: 3/2020, hạn sử dụng: 2/2022)
2.4.2 Máy móc và dụng cụ phục vụ nghiên cứu
- Cân điện tử của Nhật, độ chính xác 0,001gam
- Kim đầu tù cho chuột uống thuốc
- Cốc chia vạch, bơm kim tiêm 1ml
- Máy đo giảm đau áp lực bàn chân chuột Paw Pressure Analgesy Meter.
XỬ LÝ SỐ LIỆU
Tất cả số liệu thu được đã được xử lý bằng phần mềm SPSS 20.0, sử dụng thuật toán ONE-WAY ANOVA để so sánh giá trị trung bình, với hậu kiểm bằng phương pháp LSD.
Số liệu được trình bày dưới dạng MEAN ± SD Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê khi p < 0,05.
SAI SỐ VÀ CÁCH KHỐNG CHẾ SAI SỐ
- Sai số các phương pháp thu thập số liệu
Để hạn chế tối đa các sai số trong quá trình thu thập, phân tích và xử lý số liệu, cần áp dụng nhiều phương pháp khác nhau Những phương pháp này bao gồm việc sử dụng công cụ đo lường chính xác, thực hiện kiểm tra chất lượng dữ liệu thường xuyên, và áp dụng các kỹ thuật phân tích thống kê phù hợp Bên cạnh đó, việc đào tạo nhân viên về quy trình thu thập và xử lý số liệu cũng đóng vai trò quan trọng trong việc giảm thiểu sai số Cuối cùng, việc thường xuyên xem xét và cập nhật các phương pháp này sẽ giúp nâng cao độ tin cậy của dữ liệu thu thập được.
+ Động vật nghiên cứu được lựa chọn tương đối đồng đều, khỏe mạnh, không có dị tật hay dấu hiệu bất thường
+ Thời gian thực hiện các bước thí nghiệm giữa các lô chuột là thống nhất cùng một thời điểm
Các số liệu được thu thập một cách cẩn thận và chính xác thông qua các thiết bị, máy móc trong phòng thí nghiệm đạt tiêu chuẩn và có độ chính xác cao.
+ Xử lý số liệu bằng phần mềm chuyên dụng trên máy tính
+ Các tiêu chuẩn và chỉ tiêu rõ ràng để đưa ra kết quả chính xác và sát với mục tiêu
+ Lưu trữ số liệu, thông tin bằng sổ ghi chép, chụp ảnh.
ĐẠO ĐỨC TRONG NGHIÊN CỨU
Nghiên cứu được tiến hành trên chuột cống trắng với số lượng động vật sử dụng trong các mô hình thí nghiệm được giới hạn ở mức tối thiểu, nhằm đảm bảo tính tin cậy của kết quả và đủ để thực hiện các phân tích thống kê.
Những chuột chết trong quá trình làm thí nghiệm (nếu có) và số chuột sau khi thí nghiệm hoàn thành đều được xử lý theo đúng quy định
Việc lựa chọn động vật thí nghiệm và điều kiện nuôi dưỡng, chăm sóc đều phải tuân thủ nghiêm ngặt theo “Hướng dẫn nội dung cơ bản thẩm định kết quả nghiên cứu tiền lâm sàng” của Bộ Y tế, bao gồm thuốc tân dược, thuốc cổ truyền, vắc xin và sinh phẩm y tế.
KẾT QUẢ
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG GIẢM ĐAU CỦA CAO ĐẶC THÁI BÌNH HV TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM
4.1 Về độc tính cấp và bán trường diễn của bài thuốc Thái Bình HV
4.1.1 V ề độ c tính cấ p c ủa bài thuốc Thái Bình HV
Theo hướng dẫn của Tổ chức Y tế Thế giới, tất cả các loại thuốc có nguồn gốc từ dược liệu, ngoại trừ những bài thuốc cổ truyền được chiết xuất theo phương pháp truyền thống, đều cần phải trải qua đánh giá độc tính cấp tính và bán trường diễn trên động vật thực nghiệm trước khi tiến hành thử nghiệm trên người.
3 Theo định nghĩa của Hệ thống hòa hợp toàn cầu (Globally Harmonised System
Độc tính cấp (GHS) đề cập đến các tác dụng không mong muốn xảy ra trong vòng 24 giờ sau khi sử dụng một chất Trong các nghiên cứu, động vật, thường là chuột, được cho dùng thuốc trong 24 giờ và được theo dõi trong 1 tuần để xác định các triệu chứng độc hại Các chuột nghiên cứu bao gồm cả chuột đực và chuột cái, do đó kết quả nghiên cứu phản ánh đầy đủ cả hai giới tính Đường đưa thuốc được sử dụng là đường uống, phù hợp với cách sử dụng dự kiến trên người.
4 Kết quả nghiên cứu không xác định được LD50 của Bài thuốc Thái Bình HV theo đường uống trên chuột nhắt trắng Với mức liều cao nhất có thể cho chuột uống trong 24h là
375 g/kg thể trọng không xuất hiện độc tính cấp
5 Liều dự kiến có tác dụng trên chuột nhắt là chuột nhắt trắng là 20,4g/kg/24h Chuột đã uống đến liều 375 g/kg, gấp 18,38 lần liều dự kiến có tác dụng mà chuột không có con nào chết, cũng như không thấy có biểu hiện bất thường nào Kết quả này chứng tỏ Bài thuốc Thái Bình HV có tính an toàn trong nghiên cứu đánh giá độc tính cấp trên đường uống ở chuột nhắt trắng
4.1.2 V ề độc tính bán trườ ng di ễ n c ủa bài thuốc Thái Bình HV
6 Nghiên cứu độc tính bán trường diễn được thực hiện bằng cách cho động vật thí nghiệm uống thuốc thử hàng ngày liên tục trong một khoảng thời gian nhất định Độc tính bán trường diễn của Bài thuốc Thái Bình HV được thực hiện trên chuột cống trắng, số lượng chuột mỗi lô là 10, và gồm 3 lô: một lô chứng sinh lý; một lô dùng thuốc với mức liều tương đương mức liều dự kiến điều trị (quy đổi theo hệ số liều ở
BÀN LUẬN
4.1 Về độc tính cấp và bán trường diễn của bài thuốc Thái Bình HV
4.1.1 V ề độ c tính cấ p c ủa bài thuốc Thái Bình HV
Theo hướng dẫn của Tổ chức Y tế Thế giới, mọi loại thuốc từ dược liệu, trừ các bài thuốc cổ phương chiết xuất theo phương pháp truyền thống, đều cần phải được đánh giá về độc tính cấp tính và bán trường diễn trên động vật thực nghiệm trước khi tiến hành thử nghiệm trên người.
3 Theo định nghĩa của Hệ thống hòa hợp toàn cầu (Globally Harmonised System
Độc tính cấp tính (GHS) đề cập đến các tác dụng không mong muốn xảy ra sau khi sử dụng một chất trong vòng 24 giờ Trong các nghiên cứu, động vật, thường là chuột, được cho dùng thuốc trong 24 giờ và theo dõi trong một tuần để xác định các triệu chứng độc hại Nghiên cứu bao gồm cả chuột đực và cái, đảm bảo kết quả phản ánh đầy đủ cho cả hai giới Đường đưa thuốc được sử dụng là đường uống, phù hợp với cách sử dụng dự kiến trên người.
Nghiên cứu không xác định được giá trị LD50 của Bài thuốc Thái Bình HV khi sử dụng đường uống trên chuột nhắt trắng Liều cao nhất có thể cho chuột uống trong 24 giờ đã được ghi nhận.
375 g/kg thể trọng không xuất hiện độc tính cấp
Liều dự kiến có tác dụng trên chuột nhắt trắng là 20,4g/kg/24h Trong nghiên cứu, chuột đã uống liều lên đến 375 g/kg, gấp 18,38 lần liều dự kiến mà không có trường hợp tử vong hay biểu hiện bất thường nào Kết quả này chứng tỏ rằng Bài thuốc Thái Bình HV có tính an toàn khi đánh giá độc tính cấp trên đường uống ở chuột nhắt trắng.
4.1.2 V ề độc tính bán trườ ng di ễ n c ủa bài thuốc Thái Bình HV
Nghiên cứu độc tính bán trường diễn được thực hiện bằng cách cho động vật thí nghiệm uống thuốc thử hàng ngày trong 30 ngày Độc tính bán trường diễn của Bài thuốc Thái Bình HV được thực hiện trên 30 chuột cống trắng, chia thành 3 lô: một lô chứng sinh lý, một lô dùng thuốc với liều tương đương liều điều trị dự kiến (7 lần liều ở người), và một lô dùng liều gấp 3 lần liều 1 Thiết kế này đảm bảo độ tin cậy và tuân thủ quy định của Bộ Y tế về đánh giá tính an toàn của thuốc, giúp xác định tính an toàn của chế phẩm trong các giai đoạn lâm sàng I, II.
Để đánh giá độc tính bán trường diễn, cần xem xét các chỉ tiêu như tình trạng chung, thay đổi thể trọng, các chỉ số huyết học, chỉ số sinh hóa chức năng gan và thận, cùng với đặc điểm giải phẫu bệnh của gan, lách và thận Kết quả nghiên cứu độc tính bán trường diễn trên chuột cống trắng sau 30 ngày cho thấy những thay đổi đáng kể trong các chỉ tiêu này.
8 * Tình trạng chung và sự thay đổi thể trọng
Tình trạng sức khỏe và cân nặng của động vật thí nghiệm là các chỉ số quan trọng cần được theo dõi trước và trong quá trình sử dụng thuốc Trong suốt nghiên cứu, chuột ở cả ba lô cho thấy hoạt động bình thường, lông mượt, da niêm mạc khỏe mạnh, ăn uống đều đặn và phân thành khuôn Sự phát triển cân nặng của chuột trong các lô cũng diễn ra bình thường.
* Ảnh hưởng của Bài thuốc Thái Bình HV đến chỉ số huyết học toàn phần (công thức máu ngoại vi)
Công thức máu ngoại vi là một xét nghiệm quan trọng để đánh giá sức khỏe, giúp phát hiện các biến đổi có thể phản ánh độc tính của thuốc lên tuỷ xương và các tế bào máu như hồng cầu, bạch cầu, và tiểu cầu Nghiên cứu cho thấy không có sự khác biệt có ý nghĩa giữa các chỉ số hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, thể tích trung bình hồng cầu, hematocrit và huyết sắc tố trước và sau khi dùng thuốc (p > 0,05) Kết quả này khẳng định chưa thấy có độc tính trên tuỷ xương và các tế bào máu ngoại vi.
11 * Ảnh hưởng của Bài thuốc Thái Bình HV đến gan, lách, thận
12 Gan, thận là những cơ quan dễ bị tổn thương trong quá trình dùng thuốc, do liên quan nhiều đến quá trình chuển hoá, thải trừ của thuốc
13 Khi đưa thuốc vào cơ thể, thuốc có thể gây độc với gan, làm tổn thương gan
Tổn thương tế bào gan dẫn đến sự gia tăng hoạt động của một số enzym gan trong huyết thanh, trong đó hai enzym quan trọng nhất là Alanin transaminase (ALT) và Aspartat transaminase (AST).
Aspartat transaminase (AST) và alanine transaminase (ALT) là hai enzym quan trọng trong việc đánh giá sức khỏe gan ALT chủ yếu tập trung ở gan và tăng cao trong máu khi có tổn thương tế bào gan, trong khi 2/3 AST nằm trong ty thể và chỉ một phần nhỏ ở bào tương Khi gan bị tổn thương, cả AST và ALT đều tăng, nhưng ALT thường tăng cao hơn và sớm hơn Nghiên cứu cho thấy hoạt độ ALT và AST trong máu chuột uống Bài thuốc Thái Bình HV không có sự khác biệt đáng kể so với nhóm chứng, cho thấy thuốc không gây tổn thương tế bào gan Kết quả mô bệnh học cũng xác nhận rằng cấu trúc tế bào gan ở cả hai nhóm uống thuốc đều bình thường, không có dấu hiệu tổn thương vi thể.
Albumin là protein quan trọng nhất trong huyết thanh, chịu trách nhiệm duy trì 70-80% áp lực thẩm thấu huyết tương và vận chuyển các chất nhỏ như bilirubin, acid béo và thuốc trong máu Khi gan bị tổn thương, chức năng tổng hợp protein giảm, dẫn đến sự hấp thụ dinh dưỡng không hiệu quả và tổng hợp Albumin kém Do đó, xét nghiệm nồng độ Albumin trong máu có giá trị trong việc đánh giá tổn thương chức năng gan Nghiên cứu cho thấy Bài thuốc Thái Bình HV, ở cả hai liều dùng trong 30 ngày, không ảnh hưởng đến chỉ số Albumin máu chuột, chứng tỏ chế phẩm này không độc hại với gan và không làm giảm chức năng tổng hợp Albumin của gan.
Bilirubin là sản phẩm thoái hóa của hemoglobin, được hình thành chủ yếu ở gan, lách và tuỷ xương Nghiên cứu này đánh giá chỉ số bilirubin toàn phần trong máu để xác định độc tính của thuốc đối với gan, bao gồm khả năng gây hủy hoại tế bào gan, tắc mật và suy giảm chức năng liên hợp Ngoài ra, chỉ số này còn giúp đánh giá ảnh hưởng của thuốc đến đời sống hồng cầu, vì độc tính có thể dẫn đến hiện tượng tan máu và tăng bilirubin Kết quả cho thấy chỉ số bilirubin trong máu ở mức bình thường, chứng tỏ chế phẩm không gây độc với gan và không ảnh hưởng đến đời sống hồng cầu.
Chỉ số cholesterol là một thành phần quan trọng của lipid máu, có vai trò thiết yếu trong hoạt động của cơ thể, bao gồm chức năng của tế bào thần kinh và sản xuất hormone Cholesterol chủ yếu được tổng hợp ở gan (75%) và tế bào thành ruột, và là yếu tố quan trọng trong việc phát hiện nguy cơ vữa xơ động mạch cũng như chẩn đoán và theo dõi điều trị các bệnh liên quan đến cholesterol và rối loạn chuyển hóa lipid Nghiên cứu cho thấy bài thuốc Thái Bình HV không làm thay đổi chỉ số cholesterol toàn phần trong máu chuột thí nghiệm.
Thận là cơ quan dễ bị tổn thương khi sử dụng thuốc do vai trò thải trừ các chất qua nước tiểu Creatinin là chỉ số chính để đánh giá chức năng thận, vì nó ổn định và phụ thuộc vào khả năng đào thải của thận Khi cầu thận bị tổn thương, nồng độ creatinin trong máu sẽ tăng lên Trong nghiên cứu, kết quả định lượng creatinin trong máu chuột sau khi uống Bài thuốc Thái Bình HV không cho thấy sự khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng, cả ở hai thời điểm 15 và 30 ngày (p > 0,05) Quan sát vi thể và đại thể thận cho thấy cấu trúc thận của chuột uống Bài thuốc Thái Bình HV vẫn bình thường, tương tự như lô chứng.
Lách không chỉ có vai trò trong chức năng miễn dịch mà còn phá hủy các tế bào máu già cỗi Những độc tính từ thuốc ảnh hưởng đến huyết học và miễn dịch thường dễ nhận thấy ở lách Qua quan sát đại thể và cấu trúc vi thể lách của chuột thực nghiệm sau khi uống Bài thuốc Thái Bình HV, kết quả cho thấy không có sự khác biệt so với lô chứng.